THỬ NGHIỆM TẠO BỘT GIÀU AZADIRACHTIN TỪ NHÂN HẠT CÂY NEEM (Azadirachta indica A.Juss) VÀ ỨNG DỤNG LÀM THUỐC BẢO VỆ THỰC VẬT

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP THỬ NGHIỆM TẠO BỘT GIÀU AZADIRACHTIN TỪ NHÂN HẠT CÂY NEEM (Azadirachta indica A.Juss) VÀ ỨNG DỤNG LÀM THUỐC BẢO VỆ THỰC VẬT Họ tên sinh viên: NGƠ ĐÌNH LUẬN Ngành: CƠNG NGHỆ HĨA HỌC Niên khóa: 2004-2008 Tháng 10/2008 THỬ NGHIỆM TẠO BỘT GIÀU AZADIRACHTIN TỪ NHÂN HẠT CÂY NEEM (Azadirachta indica A.Juss) VÀ ỨNG DỤNG LÀM THUỐC BẢO VỆ THỰC VẬT Tác giả NGƠ ĐÌNH LUẬN Khóa luận đệ trình để đáp ứng yêu cầu cấp Kỹ sư ngành Cơng nghệ hóa học Giáo viên hướng dẫn: Tiến sĩ Vũ Văn Độ Tiến sĩ Phan Phước Hiền Tháng 10 năm 2008   i LỜI CẢM ƠN Đề tài “Thử nghiệm tạo bột giàu azadirachtin từ nhân hạt Neem (Azadirachta indica A Juss) ứng dụng làm thuốc bảo vệ thực vật” từ bắt đầu tiến hành đến lúc hoàn tất nhận quan tâm giúp đỡ nhiều người Em xin bày tỏ lòng tri ân đến TS Trương Vĩnh q thầy Bộ mơn Cơng nghệ hóa học trường ĐH Nông lâm Những tri thức em học từ thầy cô hành trang vô giá cho em vào đời Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến thầy hướng dẫn, TS Vũ Văn Độ TS Phan Phước Hiền Các thầy tận tình hướng dẫn, dạy tạo điều kiện thuận lợi cho em hoàn thành luận văn Em xin chân thành cảm ơn CN Đỗ Thị Tuyến, CN Nguyễn Thị Như Quỳnh thầy cô, anh chị viện Sinh học nhiệt đới giúp đỡ, góp ý thời gian em thực đề tài Xin gửi lời cảm ơn đến anh chị phòng Sinh học - Trung tâm nghiên cứu phát triển nơng dược, cơng ty Vipesco nhiệt tình hỗ trợ, bảo trình thử sâu Em cảm ơn anh Nguyễn Thanh Điền Dù công việc bận rộn, với kinh nghiệm người trước, anh trực tiếp thực cho em nhiều lời khuyên quý báu việc phân tích HPLC Cảm ơn bạn DH04HH Được quen biết học tập bạn năm qua điều may mắn tơi Cuối cùng, khơng có lời nói bày tỏ tình cảm dành cho Ba Má gia đình Mọi người ln bên con, động viên, giúp đỡ, chia sẻ vui buồn nhờ mà có ngày hơm Cảm ơn người Ngơ Đình Luận   ii TÓM TẮT Đề tài nghiên cứu “Thử nghiệm tạo bột giàu azadirachtin từ nhân hạt Neem (Azadirachta indica A Juss) ứng dụng làm thuốc bảo vệ thực vật” tiến hành từ 20/03/2008 đến 03/10/2008 Viện Sinh học nhiệt đới, TP Hồ Chí Minh Đề tài nghiên cứu trình tách chiết azadirachtin từ bánh dầu Neem, từ tiến hành tạo chế phẩm thuốc bảo vệ thực vật từ cao chiết giàu azadirachtin, dầu Neem phụ gia thích hợp Thí nghiệm thử hoạt lực thuốc sâu tơ (Plutella xylostella)trong phịng thí nghiệm bố trí hồn tồn ngẫu nhiên với lần lặp lại Kết thu xử lý phần mềm Excel 2007 Kết cho thấy: từ 1,5 kg bánh dầu tiến hành chiết azadirachtin dung môi ethanol 96o thu 17,5 g cao chứa 3956,925 mg azadirachtin, tỉ lệ azadirachtin cao đạt 22,611 % Chế phẩm tạo từ cao chiết, dầu Neem phụ gia có chứa 2000 ppm azadirachtin Thử nghiệm sử dụng edenol D81 làm chất bảo quản chế phẩm Hàm lượng azadirachtin thuốc bảo quản gia tốc điều kiện 54 ± oC: sau ngày bảo quản gia tốc (tương đương năm điều kiện thường) 1831,17 ppm (89,04 %), sau 14 ngày 1654,25 ppm (80,44 %) Chế phẩm nồng độ ‰ diệt sâu tốt có ý nghĩa kinh tế nhất, gây chết 80 % sâu tơ sau 72   iii MỤC LỤC Trang Trang tựa i Lời cảm ơn ii Tóm tắt iii Mục lục iv Danh mục chữ viết tắt ix Danh mục hình x Danh mục bảng xii CHƯƠNG MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 2.1 Giới thiệu Neem 2.1.1 Phân loại 2.1.2 Đặc điểm thực vật học 2.1.3 Nguồn gốc phân bố 2.1.4 Công dụng Neem .6 2.2 Quá trình nghiên cứu Neem 2.2.1 Sơ lược tình hình nghiên cứu Neem giới 2.2.2 Sơ lược tình hình nghiên cứu ứng dụng Neem Việt Nam 10 2.3 Các chất có hoạt tính sinh học Neem 13   iv 2.3.1 Isoprenoid chất isoprenoid 13 2.3.1.1 Diterpenoid 13 2.3.1.2 Triterpenoid 14 2.3.2 Tác động chất có Neem loài dịch hại 20 2.3.2.1 Phương thức tác động 20 2.3.2.2 Đối tượng tác động 22 2.4 Giới thiệu sâu tơ Plutella xylostella Linnaeus 24 2.4.1 Đặc điểm hình thái sinh học 24 2.4.2 Tập quán sinh sống cách gây hại 25 2.4.3 Biện pháp phòng trị 25 2.4.4 Quy trình ni sâu tơ phịng thí nghiệm Trung tâm nghiên cứu phát triển nông dược, công ty Vipesco 25 2.5 Cơ sở hóa học thuốc bảo vệ thực vật cơng nghệ sản xuất thuốc bảo vệ thực vật 26 2.5.1 Thành phần thuốc bảo vệ thực vật 26 2.5.1.1 Hoạt chất 26 2.5.1.2 Chất mang 26 2.5.1.3 Chất hoạt động bề mặt 27 2.5.1.4 Các chất phù trợ 29 2.5.2 Các dạng thuốc bảo vệ thực vật 31 2.5.2.1 Thuốc dạng hạt 31 2.5.2.2 Thuốc dạng bột thấm nước 31   v 2.5.2.3 Thuốc phun bột 32 2.5.2.4 Thuốc dạng bột tan 32 2.5.2.5 Thuốc dạng bột mịn 32 2.5.2.6 Thuốc dạng dung dịch đậm đặc 32 2.5.2.7 Thuốc sữa 32 2.5.3 Phân loại thuốc bảo vệ thực vật 33 2.5.3.1 Theo đường tác động 33 2.5.3.2 Theo phương pháp xử lý 33 2.5.3.3 Theo nguồn gốc hóa học 33 2.5.4 Công nghệ sản xuất thuốc bảo vệ thực vật 35 2.5.5 Một số chế phẩm thuốc bảo vệ thực vật từ Neem 35 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 37 3.1 Bố trí thí nghiệm 37 3.1.1 Địa điểm 37 3.1.2 Thời gian 37 3.2 Vật liệu, hóa chất thiết bị 37 3.2.1 Vật liệu 37 3.2.2 Hóa chất 38 3.2.3 Dụng cụ thiết bị 38 3.3 Phương pháp nghiên cứu 38 3.3.1 Thu nhận dầu Neem bánh dầu Neem 38 3.3.2 Ly trích bánh dầu Neem để tạo cao chiết giàu azadirachtin 39   vi 3.3.3 Định lượng azadirachtin cao chiết chế phẩm thuốc bảo vệ thực vật 40 3.3.4 Phối trộn dầu Neem, cao chiết phụ gia khác để tạo chế phẩm thuốc bảo vệ thực vật 40 3.3.5 Xác định tính chất hóa lý hóa học chế phẩm 41 3.3.5.1 Tỉ trọng 41 3.3.5.2 Độ nhớt 42 3.3.5.3 pH dung dịch % chế phẩm 43 3.3.5.4 Độ tự nhũ 43 3.3.5.5 Độ bền nhũ tương 44 3.3.5.6 Độ tái nhũ 44 3.3.5.7 Độ bền bảo quản theo phương pháp gia tốc 44 3.3.6 Xác định hoạt lực chế phẩm phịng thí nghiệm 45 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 47 4.1 Kết thu nhận dầu Neem, bánh dầu Neem từ nhân hạt Neem 47 4.2 Kết chiết xuất azadirachtin từ bánh dầu Neem 48 4.3 Tạo chế phẩm Hazal 2000 EC 52 4.3.1 Thành phần chế phẩm 52 4.3.1.1 Hoạt chất 54 4.3.1.2 Chất tác động phối hợp 54 4.3.1.3 Chất nhũ hóa 54 4.3.1.4 Dung môi 54   vii 4.3.2 Các số lý hóa chế phẩm 55 4.3.2.1 Xác định độ tự nhũ 55 4.3.2.2 Xác định độ bền nhũ tương độ tái nhũ 56 4.3.3 Độ bền bảo quản theo phương pháp gia tốc 56 4.3.3.1 Các số lý hóa 56 4.3.3.2 Hàm lượng hoạt chất 57 4.4 Xác định hoạt lực Hazal 2000 EC sâu tơ (Plutella xylostella) phòng thí nghiệm 60 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 64 5.1 Kết luận 64 5.2 Đề nghị 65 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC   viii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT A Azadirachta ARN acid ribonucleic CIPAC Collaborative International Pesticides Analytical Council EC Emulsifiable Concentrate EtOAc   ethyl acetate EtOH ethanol FAO Food and Agriculture Organization HPLC High Pressure Liquid Chromatography MeOH methanol PABA para – aminobenzoic acid PVC poly vinyl clorua TCVN Tiêu chuẩn Việt Nam TCN Tiêu chuẩn ngành WHO World Health Organization ix Hình 4.9 Sắc ký đồ chất chuẩn Hình 4.10 Sắc ký đồ mẫu L bq2 Hình 4.11 Sắc ký đồ mẫu L bq4 Kết phân tích cho thấy: mẫu không sử dụng chất bảo quản edenol D81, hàm lượng azadirachtin thuốc trước bảo quản 2056,5 ppm, sau bảo quản gia tốc ngày 1819,25 ppm (88,46 %), sau 14 ngày 1130,1 ppm   59 (54,95 %) Như điều kiện tự nhiên, hàm lượng azadirachtin Hazal ước tính cịn khoảng 1130 ppm sau năm bảo quản Mặt khác, có khác biệt lớn dùng edenol D81 làm chất bảo quản Hàm lượng azadirachtin mẫu có edenol sau bảo quản gia tốc 14 ngày 1654,25 ppm (80,44 %), cao mẫu khơng có edenol thời gian tương ứng 25,49 % Trong “Nghiên cứu hoàn thiện quy trình cơng nghệ sản xuất thuốc bảo vệ thực vật từ dầu nhân hạt Neem (Azadirachta indica A Juss) trồng Việt Nam” (Luận văn thạc sĩ khoa học sinh học, trường ĐH Khoa học tự nhiên – ĐH Quốc gia TP Hồ Chí Minh, 2006), Bùi Văn Tồn chiết bánh dầu Neem dung môi EtOAc theo quy trình Hubertus [31] Hàm lượng azadirachtin chế phẩm không dùng chất bảo quản sau bảo quản gia tốc ngày 1200 ppm (75 %) mẫu tương ứng chúng tơi (mẫu L bq1) có 1819,25 ppm (88,46 %) Từ thấy nguyên liệu pha thuốc (cao chiết bánh dầu) hơn, tạp chất nên dù khơng dùng chất bảo quản hàm lượng azadirachtin lại cao kết Bùi Văn Toàn Theo quy trình Lidert, dùng nước cất, nước muối bão hịa q trình chiết bánh dầu loại tạp chất sáp, protein, đường, … Nhờ cao chiết thu [36] Tiêu chuẩn Bộ Nông nghiệp phát triển nông thôn Ấn Độ (1995) quy định hàm lượng azadirachtin chế phẩm thuốc trừ sâu từ dầu Neem phải từ 300 ppm trở lên, từ dịch chiết không chứa dầu Neem phải từ 1500 ppm trở lên Theo tiêu chuẩn chế phẩm Hazal 2000 EC sử dụng vòng năm 4.4 Xác định hoạt lực Hazal 2000 EC sâu tơ (Plutella xylostella) phịng thí nghiệm Thí nghiệm hiệu diệt sâu chế phẩm Hazal 2000 EC nồng độ khác nhau, nồng độ lặp lại lần, số lượng sâu tơ 10 / đĩa petri Thuốc đối chứng dương Vibamec bố trí nồng độ nhà sản xuất khuyến cáo, ml / l tức 0,75 ‰ Ngồi ra, chúng tơi cịn bố trí mẫu L bq3, L bq4 nồng độ 10 ‰ Kết ghi nhận bảng 4.5   60 Bảng 4.5 Tỉ lệ gây chết sâu tơ Hazal 2000 EC Nồng độ (‰) 10 Vibamec 0,75‰ L bq3 L bq4 Tỉ lệ sâu chết (%) 24 48 72 10,00 16,67 6,67 30,00 33,33 10,00 43,33 50,00 6,67 23,33 80,00 16,67 60,00 6,67 36,67 70,00 6,67 30,00 33,33 13,33 40,00 70,00 10,00 43,33 70,00 Số sâu chết sau 72 (con) Đĩa Đĩa Đĩa 3 5 10 6 8 4 Chế phẩm Hazal 2000 EC gây chết sâu tơ nồng độ khác với tỉ lệ khác Sau 24, 48, 72 giờ, Hazal nồng độ ‰ gây chết 0, 10,00 %, 16,67 %, Hazal nồng độ 10 ‰ gây chết 6,67 %, 36,67 %, 70,00 % sâu tơ Thuốc đối chứng Vibamec 1,8 EC nồng độ 0,75 ‰ gây chết 6,67 %, 30,00 %, 33,33 % sâu tơ Tỉ lệ sâu tơ Vibamec gây chết không cao, nguyên nhân Vibamec thuốc sinh học nên tác dụng chậm thuốc hóa học khác Sau xử lý số liệu ANOVA, phương pháp LSD với phần mềm Statgraphic 7.0, nhận thấy số sâu chết nồng độ ‰ ‰ khác biệt có ý nghĩa độ tin cậy 95 % Tuy nhiên, số sâu chết nồng độ ‰ ‰, ‰ 10 ‰, L bq3 L bq4 lại khơng có khác biệt độ tin cậy 95 % Hình 4.12 Tỉ lệ sâu chết sau 72 xử lý Hazal   61 Nồng độ ‰ có hiệu gây chết sâu tơ cao (80 %) nồng độ ‰ lại diệt 60 % sâu nồng độ 10 ‰ diệt 70 % Theo chúng tôi, nguyên nhân mà nồng độ ‰ lại diệt sâu tốt nồng độ 10 ‰ tác động chủ yếu hoạt chất azadirachtin gây ngán ăn, đạt đến ngưỡng gây ngán ăn cho sâu dù tiếp tục tăng nồng độ thuốc có hiệu Nhìn chung tất mẫu xử lý Hazal, sau 24 sâu bỏ ăn, hoạt động Sâu chết thường nhũn đen, chảy nhớt Dựa kết thử nghiệm hoạt lực, đề nghị sử dụng Hazal 2000 EC nồng độ ‰, tức 48 ml / bình lít Tuy nhiên, kết luận bước đầu, cần phải khảo nghiệm thực tế ngồi đồng ruộng Hình 4.13 Mẫu xử lý Vibamec 0.75 ‰ (trái) Hazal 10 ‰ (phải) sau 24 Hình 4.15 Mẫu xử lý Hazal ‰ sau 72   Hình 4.14 Mẫu xử lý Hazal 10 ‰ sau 72 Hình 4.16 Sâu chết xử lý Hazal ‰ sau 72 62 Đối với mẫu L bq3 (Hazal bảo quản gia tốc ngày), L bq4 (Hazal bảo quản gia tốc 14 ngày), sau 24, 48, 72 gây chết tương ứng 13,33 %, 40,00 %, 70 % 10,00 %, 43,33 %, 70,00 % sâu tơ Tỉ lệ gây chết hai mẫu khơng có khác biệt có ý nghĩa Theo chúng tôi, nguyên nhân hàm lượng azadirachtin hai mẫu khác biệt không lớn, Lbq3 có 1831,17 ppm azadirachtin (89,04 %) cịn L bq4 có 1654,25 ppm (80,44 %) Như nói trên, hàm lượng azadirachtin đạt đến ngưỡng gây ngán ăn cho sâu hàm lượng có tăng lên có hiệu Ngồi ra, chúng tơi khảo sát hàm lượng hoạt chất azadirachtin sau bảo quản gia tốc, hàm lượng hoạt chất khác có tác dụng diệt sâu điều kiện thực đề tài có hạn nên chưa khảo sát Hình 4.17 Tỉ lệ gây chết L bq3, L bq4   63 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận • Kết thu nhận bột giàu azadirachtin: xây dựng quy trình chiết xuất hoạt chất bánh dầu Neem với hiệu suất cao Từ 1000 g bánh dầu thu 11,668 g cao chiết có chứa 2,638 g azadirachtin Tỉ lệ azadirachtin chiếm 22,611 % khối lượng cao chiết • Kết phối trộn tạo thuốc Hazal 2000 EC: ™ Đã xác định công thức thuốc Hazal 2000 EC chứa 25 % dầu Neem, 0,8 % bột giàu azadirachtin, % cypermethrin, % Tween 20, % acid oleic, % edenol D81, 61,2 % xylene ™ Đã xác định số lý hóa Hazal: - Trước bảo quản gia tốc: chế phẩm dạng lỏng, màu vàng, tỉ trọng d20 = 0,9168, độ nhớt η = 1,7845 centipoise, pH dung dịch 5% nước cứng chuẩn 28,4oC = 5,01, độ tự nhũ độ bền nhũ tương đạt tiêu chuẩn ngành, hàm lượng azadirachtin 2056,50 ppm (100 %) - Sau bảo quản gia tốc 14 ngày (tương đương năm điều kiện thường): tỉ trọng d20 = 0,9168, độ nhớt η = 1,7845 centipoise, pH dung dịch % nước cứng chuẩn 29,7oC = 4,76, độ tự nhũ độ bền nhũ tương đạt tiêu chuẩn ngành, hàm lượng azadirachtin 1654,25 ppm (80,44 %) • Hiệu làm bền thuốc có edenol: thử nghiệm bảo quản Hazal 2000 EC edenol D81 với hàm lượng % Sau bảo quản gia tốc 14 ngày, hàm lượng azadirachtin thuốc có edenol 1654,25 ppm (80,44 %), thuốc khơng có edenol 1130,1 ppm (54,95 %)   64 • Hiệu diệt sâu Hazal 2000 EC: chế phẩm Hazal nồng độ xử lý khác gây chết sâu tơ Sau 72 giờ, nồng độ ‰ đạt hiệu cao nhất, gây chết 80 % sâu tơ Thuốc tác dụng chậm có tác động kéo dài 5.2 Đề nghị • Thử nghiệm phối trộn cao chiết bánh dầu, dầu Neem với dung môi phụ gia khác để cải thiện số lý hóa độ bền hoạt chất chế phẩm • Thử nghiệm điều chế dầu đậu nành epoxy hóa từ nguyên liệu dầu đậu nành • Tiếp tục thử nghiệm dùng edenol làm chất bảo quản với nồng độ khác Từ thí nghiệm số chất bảo quản khác như: dầu hạt lanh epoxy hóa, epichlohydrin C3H5OCl, cyclo octen oxyd, … • Khảo sát hoạt lực chế phẩm Hazal 2000 EC đồng ruộng đối tượng khác sâu xanh (Heliothis armigera), sâu xanh da láng (Spodoptera exigua), sâu khoang (Spodoptera litura)   65 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Trung, Bùi Xuân Chương Viện Dược liệu, 1000 thuốc động vật làm thuốc Việt Nam Tập 2, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật Bộ Nông Nghiệp Phát Triển Nông Thôn, 2005 Danh mục thuốc bảo vệ thực vật phép sử dụng Việt Nam, trang Hồ Văn Chiến, 2001 Thuốc bảo vệ thực vật kỹ thuật phun thuốc khảo nghiệm đồng Tài liệu Cục bảo vệ thực vật – Trung tâm kiểm định thuốc bảo vệ thực vật phía Nam, trang – 16 Huỳnh Thành Đạt ctv, 2001 Thực tập vật lý đại cương Tủ sách Đại học Khoa học tự nhiên, trang 37 – 44 Lâm Công Định, 1985 Xoan chịu hạn (Azadirachta indica A Juss ) – Một lồi thích ứng với vùng nóng hạn Thuận Hải Tạp chí Lâm nghiệp, tháng 8/1985 Lâm Công Định, 1991 Giới thiệu xoan chịu hạn (Azadirachta indica A Juss) nhập nội vào vùng cát nóng hạn Phan Thiết – Tuy Phong Sở Nơng - Lâm nghiệp Thuận Hải   66 Vũ Văn Độ, Nguyễn Tiến Thắng, 2004 Biến động hàm lượng dẫn xuất azadirachtin nimbin Neem (Azadirachta indica A Juss) trồng Việt Nam theo mùa theo thời gian năm Tuyển tập Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật Hà Nội, trang 467 – 470 Vũ Văn Độ, Nguyễn Tiến Thắng, Ngô Kế Sương, 2005 Khảo sát hàm lượng ba hoạt chất sinh học dầu hạt Neem (Azadirachta indica A Juss) trồng Việt Nam Tạp chí Sinh học, tập 27 – số 3, trang 61 – 65 Trần Quang Hùng, 1999 Thuốc bảo vệ thực vật Nhà xuất nông nghiệp Hà Nội, trang 7-13, 56-62, 114-117 10 Karumitze S A., 1963 Cơ sở hóa học bảo vệ thực vật (Phan Cát dịch) Nhà xuất Khoa học Hà Nội, trang – 66, 197 – 203 11 Vũ Đăng Khánh, Vũ Văn Độ, Nguyễn Tiến Thắng, 2004 Hoạt tính kháng nấm dầu xoan chịu hạn sản phẩm chiết xuất từ xoan chịu hạn (Azadirachta indica A Juss) lên nấm gây bệnh (Fusarium oxysporum) Tạp chí phát triển khoa học công nghệ Vol.7: 57 – 62 12 Nguyễn Ngọc Kiểng, 2000 Thống kê học ứng dụng – Các kiểu mẫu thí nghiệm Đại học Nơng lâm TP Hồ Chí Minh, trang 127 – 137, 164 – 166 13 Nguyễn Trần Oánh, 2002 Công nghệ sản xuất thuốc bảo vệ thực vật Giáo trình cao học – Viện khoa học Nông nghiệp, trang 20 – 54   67 14 Nguyễn Kim Phi Phụng, 2007 Phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ, Nhà xuất Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh 15 Lê Thị Thanh Phượng, 2004 Chiết xuất hoạt chất sinh học từ nhân hạt Neem (Azadirachta indica A Juss) khảo sát tác động chúng ngài gạo (Corcyra cephalonica St.) Luận văn thạc sĩ khoa học Nông nghiệp, Đại học Nơng lâm Thành phố Hồ Chí Minh, trang – 26, 96 – 98 16 Trần Kim Quy cộng sự, 2005 Báo cáo nghiệm thu giai đoạn đề tài: Hồn thiện quy trình trích ly limonoid quy mô pilot từ Neem điều chế phụ gia thích hợp để làm nguyên liệu pha chế thuốc trừ sâu bảo vệ thực vật, 75 trang 17 Nguyễn Xuân Thành, 1997 Nông dược bảo quản sử dụng, Nhà xuất Nông nghiệp Hà Nội, trang 3-17, 13-24, 146-147 18 Nguyễn Thị Phương Thảo, Nguyễn Thị Quỳnh, Nguyễn Tiến Thắng Akiko Hirano, 2000 Bước đầu nghiên cứu ảnh hưởng dầu Neem lên kí sinh bọ hà (Cylas formicarius F.) trưởng thành củ khoai lang (Ipomoea batatas L.) Tuyển tập cơng trình nghiên cứu khoa học công nghệ 1999 – 2000 Viện Sinh học Nhiệt Đới, Trung tâm khoa học tự nhiên công nghệ quốc gia, Nhà xuất Nông nghiệp thành phố Hồ Chí Minh, trang 141 – 147 19 Tiêu chuẩn ngành 10TCN 105 – 88 Thuốc trừ sâu – Phương pháp thử bảo quản gia tốc   68 20 Tiêu chuẩn Việt Nam, 1984 Thuốc trừ dịch hại dạng nhũ dầu TCVN 3711 – 82 + TCVN 3714 – 82, 21 trang 21.Tiêu chuẩn Việt Nam, 1989 Thuốc bảo vệ thực vật – Danh mục tiêu chất lượng TCVN 4729 – 89, trang 22 Dương Anh Tuấn, Dương Ngọc Tú, Lưu Tham Mưu, Nguyễn Văn Giáp, Nguyễn Kim Đào, Nguyễn Duy Trang, 2002 Kết thử nghiệm chế phẩm trừ sâu từ gốc thực vật sâu hại rau ngoại thành Hà Nội Trong Hội nghị trùng học tồn quốc, Hà Nội – 2002, trang 504 – 506 23 Dương Anh Tuấn, 2002 Azadirachtin phân đoạn dầu Neem hạt Neem (Azadirachta indica A Juss), họ Meliaceae di thực vào Việt Nam có hoạt tính gây ngán ăn mạnh sâu khoang Trong Hội nghị trùng học tồn quốc, Hà Nội – 2002, trang 504 – 506 24 Phan Văn Tương, 2001 Phương pháp khảo nghiệm hiệu lực sinh học đồng ruộng thuốc trừ sâu hại trồng, Tài liệu Cục bảo vệ thực vật – Trung tâm kiểm định thuốc bảo vệ thực vật phía Nam, trang – 16 Trang 17 – 25 25 “Cây tử đinh hương Ấn đa dụng” Đăng ngày 14/04/2004 lúc 29 phút.  Truy cập ngày tháng năm 2008   69 26 “Sâu tơ Plutella xylostella Linnaeus” Truy cập ngày tháng năm 2008 http://www.ctu.edu.vn/colleges/agri/gtrinh/bvtv/rau%20sach/source/sauHai/sauto.htm       Tài liệu tiếng Anh 27 Collaborative International Pesticides Analytical Council limited, 1995 CIPAC handbook Volume F: Physico – chemical Methods for Technical and Formulated Pesticides ED by W Dobrat & A Martin, pages 13 – 15, 75 – 84, 108 – 150 28 Gunasena H P M., Marambe B., 1998 Neem in Sri Lanka – A monograph, A Publication of the university of Peradeniya – Oxford Forestry Institute, UK Forestry Research Link, 62 pages 29 Gupta B N and Sharma K K., 1998 Neem – A Wonder Tree Indian council of forestry research and education, Dehra Dun, India 30 Jacobson, 1992, Neem – A tree for solving global problem National Academy Press, Washington D.C, USA 31 Hubertus K., 1992 Method for the production of storage stable azadirachtin – rich insecticide from seed kernels of the Neem tree CA Patent No.2106670, Sep 23rd 1992 32 Kelkar C M and Kelkar M S., 1995 Neem cake in feeds for domestic animal In Neem tree Azadirachta indica A Juss and Other Meliaceous plants (ED by Schmutterer) VCH Publisher Inc, New York, USA, page 550   70 33 Kelkar C M., 1996 Chap.28, Commercialization, Neem Society of Pesticide Science, India (ED by N S Randhawa and B S Parmar) New age international limited publish, pages 319 – 323 34 Kenneth and J Lissant, 1974 Emulsions and emulsions technology Marcel Dekker Inc, New York, USA, pages 71 – 111 35 Kovach J., Petzoldt C., Pegni J., Tette J., 2005 Method for measure the environment impact of pesticides 36 Lidert Z., 2005 Stable extracts from neem seeds US Patent 5391779, USA 37 Lindner Paul L., 1974 Chap 4, Agricultural Emulsions In Emulsions and Emulsions technology ED by Kenneth and J Lissant, Marcel Dekker Inc, New York, USA, pages 191 – 209 38 Mordue A J., Morgan E D., Nisbet A J., 2005 Azadirachtin, a natural product insect control Comprehensive Insect Moleculer Science, Amsterdam, vol 39 Puri H S., 1999 Neem A Divine Tree Azadirachta indica Harwood Academic Publishers, England   71 40 Sanguanpong and Schmutterer, 1992 Chap.4, What’s in Neem In Neem – A tree for solving global problems National Academy Press, Washington DC, page 38 41 Saxena R C., 1995 Homoteria: leaf and planthoppers, aphids, psyllids, whiteflies and scale insect In The Neem tree Azadirachta indica A Juss and Other Meliaceous Plants, (ED by H Schmutterer) VCH Publishers Inc, New York, USA, pages 269 – 281 42 Vankenburg W V., 1973 Pesticide Formulations, Marcel Dekker Inc, New York, USA, pages 65 – 110 43 Völlinger M., 1986 The possible development of resistance against Neem seed kernel extract and deltamethrin in Plutella xylostella In Natural pesticides from the Neem tree Azadirachta indica A Juss and other tropical plants Proc.3rd inter Neem conf., Nairobi, Kenya, pages 543 – 554   72 PHỤ LỤC Kết kiểm nghiệm hàm lượng azadirachtin cao chiết, chế phẩm Hazal 2000 EC, chế phẩm Hazal 2000 EC sau bảo quản gia tốc ngày 14 ngày Sắc ký đồ HPLC chất chuẩn azadirachtin 500 ppm, mẫu L bq2, mẫu L bq4 Kết xử lý thống kê: Hiệu gây chết sâu tơ chế phẩm Hazal 2000 EC nồng độ 5, 6, 8, 10 ‰ sau 72 ... azadirachtin từ nhân hạt neem nghiên cứu dùng số chất bảo quản bột giàu azadirachtin Ứng dụng làm sản phẩm thuốc bảo vệ thực vật từ bột giàu azadirachtin Thử nghiệm hiệu lực, tác dụng chế phẩm bảo vệ thực. ..THỬ NGHIỆM TẠO BỘT GIÀU AZADIRACHTIN TỪ NHÂN HẠT CÂY NEEM (Azadirachta indica A.Juss) VÀ ỨNG DỤNG LÀM THUỐC BẢO VỆ THỰC VẬT Tác giả NGƠ ĐÌNH LUẬN Khóa luận đệ trình để đáp ứng yêu cầu...   ii TĨM TẮT Đề tài nghiên cứu ? ?Thử nghiệm tạo bột giàu azadirachtin từ nhân hạt Neem (Azadirachta indica A Juss) ứng dụng làm thuốc bảo vệ thực vật? ?? tiến hành từ 20/03/2008 đến 03/10/2008 Viện