Khảo sát khả năng ức chế sinh trưởng nấm gây bệnh cây của hoạt chấtt chiếtt xuấtt từ nhân hạt cây Neem (Azadirachta indica A.juss)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC  LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT KHẢ NĂNG ỨC CHẾ NẤM GÂY BỆNH CÂY CỦA HOẠT CHẤT CHIẾT XUẤT TỪ NHÂN HẠT CÂY NEEM (Azadirachta indica A.Juss) Ngành học: CƠNG NGHỆ SINH HỌC Niên khóa: 2004 - 2008 Lớp: DH04SH Sinh viên thực hiện: NGUYỄN THỊ TUYẾT NGA Tháng 09/2008 i BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC NƠNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC  LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT KHẢ NĂNG ỨC CHẾ NẤM GÂY BỆNH CÂY CỦA HOẠT CHẤT CHIẾT XUẤT TỪ NHÂN HẠT CÂY NEEM (Azadirachta indica A.Juss) Giáo viên hướng dẫn: Sinh viên thực hiện: PGS.TS.NGUYỄN TIẾN THẮNG NGUYỄN THỊ TUYẾT NGA Tháng 09/2008 ii LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành cảm ơn:  Ban Giám hiệu trường Đại Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh, Ban chủ nhiệm Bộ mơn Cơng Nghệ Sinh Học, tất Quý Thầy Cô truyền đạt kiến thức cho tơi q trình học trường  PGS.TS Nguyễn Tiến Thắng tận tình hướng dẫn, giúp đỡ, tạo điều kiện tốt để hoàn thành luận văn  Cử nhân Nguyễn Thị Hiểu Yến, bạn Trần Châu Quang nhiệt tình hợp tác, chia xẻ với tơi khó khăn q trình thực đề tài  Các quý Thầy, Cô, Chú, Anh, Chị công tác Viện Sinh học Nhiệt đới, đặc biệt thầy Vũ Văn Độ nhiệt tình cung cấp số tài liệu, dụng cụ thí nghiệm đóng góp ý kiến liên quan đến đề tài  Các bạn bè thân yêu lớp CNSH K30 chia sẻ vui buồn suốt thời gian học hết lòng hỗ trợ, giúp đỡ suốt thời gian thực tập  Tình yêu thương giúp đỡ cha mẹ Sinh viên thực Nguyễn Thị Tuyết Nga iii TÓM TẮT NGUYỄN THỊ TUYẾT NGA, Đại học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh Đề tài “Khảo sát khả ức chế sinh trưởng nấm gây bệnh hoạt chấtt chiếtt xuấtt từ nhân hạt Neem (Azadirachta indica A.juss)” tiến hành Phịng Các Chất có Hoạt tính Sinh học, Viện Sinh học Nhiệt đới thời gian từ ngày 01/04/2008 đến 22/08/2008 Mục tiêu đề tài đánh giá khả kháng loài nấm gây bệnh Sclerotium rolfsii Fusarium oxysporum hoạt chất chiết xuất từ nhân hạt Neem Nội dung nghiên cứu: Đánh giá tỷ lệ dầu thu phương pháp ép nguội từ nhân hạt Neem qua trình bảo quản 8-11 tháng Trích ly hoạt chất sinh học từ bánh dầu Neem, định lượng azaicrachtin dầu Neem bánh dầu Neem Khảo sát hoạt tính kháng nấm gây bệnh loài nấm: Sclerotium rolfsii Fusarium oxysporum dầu Neem hoạt chất ly trích từ bánh dầu Neem Những kết đạt được: Thu nhận dầu từ nhân hạt Neem phương pháp ép nguội máy Komet Xây dựng quy trình ly trích hoạt chất limonoid từ dầu Neem bánh dầu Neem để định lượng hàm lượng AZRL Khảo sát hàm lượng limonoid Neem bánh dầu Neem Bước đầu đánh giá nồng độ hoạt chất ảnh hưởng đến ức chế sinh trưởng nấm gây bệnh So sánh chênh lệch hàm lượng limonoid dầu Neem bánh dầu Neem iv SUMMARY NGUYEN THI TUYET NGA, Nong Lam university of Ho Chi Minh city The thesis: “Surveying antifungal activity of the extracts from Neem (Azadirachta indicaA.juss) kernels seed in inhibiting the growth of phytopathogenic” This thesis was carried out at Bioactive Compounds Department, Institute of Tropical Biology from 04/01/2008 to 22/08/2008 The aims of this research were studying the competence of the extracts from Neem seed in inhibiting the growth of Sclerotium rolfsii and Fusarium oxysporum The achieved results were: Receiving oil from Neem seed by pressing Neem seed with Komet machine Establishing the process of extracting limonoid from Neem oil and Neem cake Surveying the concentration of limonoid in Neem oil and Neem cake Assessing the concentration of the extracts affects the inhibiting of the growth of phytopathogenic Comparing the diference between the limonoid concentration of Neem oil and the limonoid concentration of Neem cake The content of the thesis: Accessing the rate of received oil by pressing Neem kernel by Komet machine Extract the bioactive compounds from Neem cake Finding the concentration of limonoid of Neem oil and Neem cake Surveying antifungal bioactivity of Neem kernel seed to two phytopathogenic fungis: Sclerotium rolfsii and Fusarium oxysporum v MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN iii TÓM TẮT iv SUMMARY v MỤC LỤC vi DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT ix DANH SÁCH CÁC HÌNH VÀ SƠ ĐỒ x DANH SÁCH CÁC BẢNG xi Chương 1: MỞ ĐẦU 1.1.Đặt vấn đề 1.2.Mục đích 1.3.Yêu cầu 1.4.Giới hạn đề tài Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1.Tổng quan Neem 2.1.1.Tên phân loại 2.1.2.Đặc điểm thực vật học 2.1.3.Phân bố địa lý 2.1.4.Công dụng Neem 2.2.Sơ lược tình hình nghiên cứu Neem 2.2.1.Trên giới .7 2.2.2.Ở Việt Nam .8 2.3.Hoạt tính kháng vi sinh vật sản phẩm chiết xuất từ Neem 2.3.1.Các nghiên cứu tác dụng kháng nấm gây bệnh sản phẩm chiết xuất từ Neem 2.3.2.Hoạt chất triterpenoid có hạt Neem vi 2.4 Bệnh đặc điểm số loài nấm gây bệnh dùng nghiên cứu 11 2.4.1 Giới thiệu 11 2.4.2 Đặc điểm sinh học số loài nấm gây bệnh sử dụng nghiên cứu 12 2.4.2.1 Nấm Sclerotium rolfsii gây bệnh héo rũ gốc mốc trắng đậu phộng [3;13;14] 12 2.4.2.2 Nấm Fusarium oxysporum gây bệnh héo vàng khoai tây [3;13;14] 13 2.4.3 Một số biện pháp sinh học phòng trừ bệnh nấm [3;13;14] .14 Chương 3.VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 3.1.Vật liệu nghiên cứu 16 3.2 Phương pháp nghiên cứu 16 3.2.1 Thu nhận dầu Neem bánh dầu Neem từ nhân hạt Neem 16 3.2.2 Xác định độ ẩm nhân hạt 16 3.2.3 Li trích hoạt chất triterpenoid bánh dầu Neem .17 3.2.4 Li trích hoạt chất dầu Neem để định lượng AZRL 18 3.2.5 Xác định hàm lượng hoạt chất limonoid tổng (AZRL) phương pháp so màu .19 3.2.5.1 Xây dựng đường chuẩn 20 3.2.5.2 Định lượng AZRL dầu Neem .21 3.2.5.3 Định lượng AZRL bột giàu hoạt chất AZRL 21 3.2.6 Khảo sát hoạt tính kháng nấm gây bệnh 21 vii 3.2.6.1 Đối tượng nấm gây bệnh 21 3.2.6.2 Phương pháp thử hoạt tính 22 3.2.6.3 Tính tốn .22 Chương 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .23 4.1 Kết thu nhận dầu Neem .24 4.2 Kết li trích hoạt chất từ bánh dầu Neem để định lượng AZRL 25 4.3.Hàm lượng AZRL dầu Neem hoạt chất ly trích từ bánh dầu Neem 26 4.4.Hoạt tính kháng nấm gây bệnh hoạt chất ly trích từ bánh dầu Neem dầu Neem .26 4.4.1.Hoạt tính ức chế sinh trưởng nấm Sclerotium rolfsii .26 4.4.1.1So sánh hoạt tính ức chế sinh trưởng theo dãy nồng độ dầu Neem hoạt chất ly trích từ bánh dầu Neem 26 4.4.1.2So sánh hoạt chất ức chế sinh trưởng theo nồng độ dầu Neem hoạt chất ly trích từ bánh dầu 27 4.4.2.Hoạt tính ức chế sinh trưởng nấm Fusarium oxysporum 28 4.4.2.1So sánh hoạt tính ức chế sinh trưởng theo dãy nồng độ dầu Neem hoạt chất ly trích từ bánh dầu Neem 29 4.4.2.2So sánh hoạt chất ức chế sinh trưởng theo nồng độ dầu Neem hoạt chất ly trích từ bánh dầu 30 Chương 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ .35 5.1.Kết luận 31 5.2.Đề nghị 31 TÀI LIỆU THAM KHẢO 32 PHỤ LỤC viii DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT AZRL Azadirachtin – related limonoids EtOH Ethanol MeOH Methanol PE Petroleum ether PGA Potato-Glucose-Agar YES Yeast Extract - Sucrose ĐKTN Đường kính tơ nấm theo dạng tỏa trịn SE Sai số chuẩn HCLT Hoạt chất ly trích ix DANH SÁCH CÁC HÌNH VÀ SƠ ĐỒ Hình 2.1 Một số hình ảnh Neem Phụ lục Hình2.2 Năm hợp chất limonoid 10 Hình 2.3 Một số hình ảnh nấm Sclerotium rolfsii Phụ lục Hình 2.4.Một số hình ảnh nấm Fusarium oxysprum Phụ lục Hình 3.1 Các công đoạn thu nhận dầu Neem thô Phụ lục Hình3.2 Sơ đồ ly trích hoạt chất từ bánh dầu Neem 18 Hình 3.3.Sơ đồ ly trích hoạt chất limonoid từ dầu Neem 19 Hình 3.4 Đường chuẩn biểu diễn độ hấp thu vs nồng độ dung dịch Azadirachtin chuẩn y = 8,7014 + 0,0001 20 Hình 3.5 Li trích – định lượng AZRL dầu Neem Phụ lục Hình 4.1 Sơ đồ thí nghiệm 23 Hình 4.2 Bột giàu hoạt chất AZRL 25 Đồ thị 4.1 Tác dụng ức chế sinh trưởng (%) nấm Sclerotium rolfsii dầu Neem hoạt chất ly trích từ bánh dầu Neem theo dãy nồng độ 27 Đồ thị 4.2 Tác động ức chế sinh trưởng (%) nấm Sclerotium rolfsii sản phẩm so sánh theo nồng độ xử lý 28 Đồ thị 4.3 Tác dụng ức chế sinh trưởng (%) nấm Fusarium oxysporum dầu Neem hoạt chất ly trích từ bánh dầu Neem theo dãy nồng độ 29 Đồ thị 4.4 Tác động ức chế sinh trưởng (%) nấm Fusarium oxysporum sản phẩm so sánh theo nồng độ xử lý 30 x ... MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC  LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT KHẢ NĂNG ỨC CHẾ NẤM GÂY BỆNH CÂY CỦA HOẠT CHẤT CHIẾT XUẤT TỪ NHÂN HẠT CÂY NEEM (Azadirachta indica A.Juss) Giáo viên hướng dẫn: Sinh viên thực... AZRL dầu Neem bánh dầu Neem Tìm nồng độ hoạt chất ly trích từ nhân hạt Neem có tác dụng hiệu việc ức chế sinh trưởng nấm gây bệnh Tìm % ức chế sinh trưởng tơ nấm dầu Neem hoạt chất ly trích từ bánh... từ nhân hạt Neem (Azadirachta indica A.juss)? ?? 1.2 Mục đích Đánh giá khả ức chế sinh trưởng số loài nấm gây bệnh thành phần chiết xuất từ nhân hạt Neem Xây dựng quy trình trích ly hoạt chất từ