KHẢO SÁT HÀM LƯỢNG AFLATOXIN M TRONG SỮA BÒ TƯƠI VÀ HÀM LƯỢNG AFLATOXIN B 1 1 TRONG THỨC ĂN HỖN HỢP BỔ SUNG CHO BÒ TẠI MỘT SỐ HỘ CHĂN NUÔI BÒ SỮA TRÊN ĐỊA BÀN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT HÀM LƯỢNG AFLATOXIN M1 TRONG SỮA BÒ TƯƠI VÀ HÀM LƯỢNG AFLATOXIN B1 TRONG THỨC ĂN HỖN HỢP BỔ SUNG CHO BỊ TẠI MỘT SỐ HỘ CHĂN NI BỊ SỮA TRÊN ĐỊA BÀN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH Họ tên sinh viên : VÕ THỊ THANH MINH Ngành : Thú Y Niên khóa : 2003 – 2008 Tháng 9/2008 KHẢO SÁT HÀM LƯỢNG AFLATOXIN M1 TRONG SỮA BÒ TƯƠI VÀ HÀM LƯỢNG AFLATOXIN B1 TRONG THỨC ĂN HỖN HỢP BỔ SUNG CHO BÒ TẠI MỘT SỐ HỘ CHĂN NI BỊ SỮA TRÊN ĐỊA BÀN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH Tác giả VÕ THỊ THANH MINH Khóa luận đề trình để đáp ứng yêu cầu cấp Bác sĩ ngành Thú Y Giáo viên hướng dẫn TS LÊ ANH PHỤNG ThS NGUYỄN LÊ KIỀU THƯ Tháng 9/2008 i LỜI CẢM ƠN Mãi khắc ghi công ơn ba, mẹ sinh thành, dạy dỗ, nuôi nấng cho đến ngày hôm Con vô biết ơn trước khó khăn, vất vả mà ba mẹ hy sinh tốt đẹp Chân thành cảm ơn Ban Giám Hiệu Trường Đại Học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh Ban chủ nhiệm Khoa Chăn Nuôi Thú Y, quý thầy cô truyền đạt kiến thức kinh nghiệm quý báu cho suốt năm qua Chân thành cảm ơn Trạm Chẩn Đoán Xét Nghiệm Điều Trị - Chi Cục Thú Y TP Hồ Chí Minh tạo điều kiện cho em thực tập tốt đề tài Chân thành biết ơn sâu sắc đến TS Lê Anh Phụng ThS Nguyễn Lê Kiều Thư tận tình hướng dẫn cho em hoàn thành tốt đề tài Chân thành cảm ơn người thân, hàng xóm tồn thể bạn bè ngồi lớp động viên, giúp đỡ tơi xuốt thời gian học tập thực đề tài Sinh viên Võ Thị Thanh Minh ii TÓM TẮT KHÓA LUẬN Đề tài “Khảo sát hàm lượng aflatoxin M1 sữa bò tươi hàm lượng aflatoxin B1 thức ăn hỗn hợp bổ sung cho bò số hộ chăn ni bị sữa địa bàn thành phố Hồ Chí Minh”, thực từ 18/02/2008 đến 18/06/2008 Trạm Chẩn đoán Xét nghiệm Điều trị - Chi Cục Thú Y thành phố Hồ Chí Minh Qua khảo sát 176 mẫu sữa bò tươi kỹ thuật ELISA 20 mẫu TAHH bổ sung cho bị từ hộ chăn ni bị sữa có phát AFM1 sữa phương pháp sắc ký lỏng cao áp (HPLC) thu kết sau  Tỉ lệ nhiễm AFM1 sữa bò tươi chiếm 63,64% tổng số mẫu khảo sát Khơng có khác biệt tỉ lệ nhiễm AFM1 loại TAHH bổ sung sản lượng sữa  Mức độ nhiễm AFM1 trung bình sữa bị tươi 13,66 ppt Mức nhiễm < 25 ppt chiếm 36,36%, mức nhiễm 25 - 500 ppt chiếm 60,80% mức nhiễm > 500 ppt chiếm 2,84% Như có 97,16% số mẫu sữa đạt yêu cầu AFM1 (theo quy định Bộ Y Tế năm 1998 < 500 ppt)  Tỉ lệ nhiễm AFB1 tổng số mẫu TAHH khảo sát 95%  Mức độ nhiễm AFB1 trung bình TAHH 13,49 ppb Các mẫu âm tính chiếm 5%, mức nhiễm - 20 ppb chiếm 50% mức nhiễm > 20 ppb chiếm 45% số mẫu khảo sát Có 55% số mẫu TAHH khảo sát đạt yêu cầu AFB1 theo quy định Bộ Nông Nghiệp Và Phát Triển Nông Thôn năm 1998  Giữa AFB1 TAHH bổ sung cho bò AFM1 sữa bò cho ăn thức ăn có tương quan chưa chặt, với r = 0,456, có lẽ bị cho ăn nhiều loại thức ăn khác TAHH Tỉ lệ chuyển đổi từ AFB1 sang AFM1 1,52% iii MỤC LỤC Trang Trang tựa i Lời cảm ơn ii Tóm tắt khóa luận iii Mục lục iv Danh sách chữ viết tắt vii Danh sách bảng viii Danh sách hình ix Danh sách biểu đồ ix Chương MỞ ĐẦU 1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ 1.2 MỤC ĐÍCH 1.3 YÊU CẦU Chương TỔNG QUAN 2.1 NẤM MỐC TRONG THỨC ĂN VÀ NGUYÊN LIỆU THỨC ĂN 2.1.1 Một số loài nấm mốc thường gặp thức ăn 2.1.2 Tác hại việc nhiễm nấm mốc thức ăn nguyên liệu thức ăn .3 2.2 ĐỘC TỐ NẤM MỐC, ẢNH HƯỞNG ĐỐI VỚI NGƯỜI VÀ ĐỘNG VẬT 2.2.1 Độc tố nấm mốc .4 2.2.2 Ảnh hưởng độc tố nấm mốc người động vật 2.3 CÁC LOÀI NẤM MỐC SINH AF 2.3.1 Đặc điểm Aspergillus flavus 2.3.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến tạo AF nấm mốc .6 2.4 ĐẶC ĐIỂM CỦA AF 2.4.1 Cấu trúc hóa học tính chất lý hóa AF 2.4.2 Sự hấp thu chuyển hóa AF thể động vật 2.5 BỆNH NHIỄM ĐỘC AF 10 2.5.1 Cơ chế gây độc 10 2.5.2 Nhiễm độc cấp tính 11 2.5.3 Nhiễm độc mãn tính .11 iv 2.5.4 Ức chế miễn dịch 12 2.5.5 Gây ung thư 12 2.6 TÌNH HÌNH NHIỄM AF VÀ MỨC TỐI ĐA ĐƯỢC PHÉP TRÊN NÔNG SẢN 13 2.6.1 Tình hình nhiễm AF .13 2.6.2 Mức AF tối đa phép nông sản 14 2.7 CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN VÀ ĐO LƯỜNG AF 15 2.7.1 Phương pháp sinh vật học 15 2.7.2 Phương pháp hóa học 16 2.7.3 Các phương pháp sắc ký 16 2.7.4 Phương pháp miễn dịch học .18 2.8 CÁC BIỆN PHÁP PHỊNG CHỐNG VÀ XỬ LÝ NƠNG SẢN NHIỄM AF 19 2.8.1 Các biện pháp phòng chống AF 19 2.8.2 Xử lý nông sản nhiễm AF 19 Chương NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .21 3.1 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM THỰC HIỆN ĐỀ TÀI 21 3.1.1 Thời gian 21 3.1.2 Địa điểm .21 3.2 VẬT LIỆU 21 3.2.1 Đối tượng khảo sát .21 3.2.2 Thiết bị dụng cụ .21 3.2.3 Bộ kít ELISA 22 3.2.4 Hóa chất dùng phân tích AFB1 22 3.3 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 22 3.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 3.4.1 Cách lấy mẫu 23 3.4.2 Kiểm tra hàm lượng AFM1 kỹ thuật ELISA .24 3.4.3 Kiểm tra hàm lượng AFB1 phương pháp sắc ký lỏng cao áp (HPLC)26 3.5 CÁC CHỈ TIÊU THEO DÕI 27 3.6 XỬ LÝ SỐ LIỆU 28 v Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29 4.1 TỈ LỆ NHIỄM AFM1 TRONG SỮA BÒ TƯƠI Ở MỘT SỐ QUẬN, HUYỆN VÀ ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ YẾU TỐ ĐẾN TỈ LỆ NHIỄM AFM1 29 4.1.1 Tỉ lệ nhiễm AFM1 sữa bò tươi số quận, huyện 29 4.1.2 Tỉ lệ nhiễm AFM1 sữa bò tươi theo loại TAHH bổ sung 31 4.1.3 Tỉ lệ nhiễm AFM1 sữa bò tươi theo sản lượng sữa 32 4.2 MỨC ĐỘ NHIỄM AFM1 TRONG SỮA BÒ TƯƠI 34 4.2.1 Mức độ nhiễm AFM1 trung bình sữa bị tươi .34 4.2.2 Tỉ lệ mức nhiễm AFM1 sữa bò tươi .36 4.2.3 Tỉ lệ mẫu sữa đạt yêu cầu AFM1 quận, huyện .38 4.3 AFB1 TRONG TAHH BỔ SUNG CHO BÒ 39 4.3.1 Tỉ lệ nhiễm AFB1 TAHH bổ sung 40 4.3.2 Mức độ nhiễm AFB1 TAHH bổ sung 40 4.3.3 Mối tương quan hàm lượng AFB1 TAHH bổ sung AFM1 sữa .42 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Error! Bookmark not defined 5.1 KẾT LUẬN 44 5.2 ĐỀ NGHỊ .44 TÀI LIỆU THAM KHẢO 45 PHỤ LỤC .48 vi DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT Viết tắt Nguyên chữ Nghĩa AF Aflatoxin AFB1 Aflatoxin B1 AFB2 Aflatoxin B2 AFG1 Aflatoxin G1 AFG2 Aflatoxin G2 AFM1 Aflatoxin M1 AFM2 Aflatoxin M2 AOAC Association of Official Analytical Hiệp hội nhà phân tích hóa Chemists học Ctv Cộng tác viên EIA Enzyme Immuno Assay ELISA Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay Phản ứng ELISA FAO Food and Agricutural Organization Tổ chức Lương Thực Nông Nghiệp Liên Hiệp Quốc Sắc ký lỏng cao áp HPLC High Pressure Liquid Chromatography NXB Nhà xuất Ppb Part per billion Phần tỉ (µg / kg) Ppt Part per trillion Phần nghìn tỉ (ng / l) TAHH Thức ăn hỗn hợp TLC Thin Layer Chromatography Sắc ký lớp mỏng UV Ultra violet Tia cực tím vii DANH SÁCH CÁC BẢNG Trang Bảng 2.1: Một số loài nấm mốc thường gặp thức ăn Bảng 2.2 : Tác động gây độc loại độc tố nấm mốc sinh Bảng 2.3: Tỉ lệ chuyển hóa AFB1 từ thức ăn vào sữa 10 Bảng 2.4: Liều LD50 AFB1 cho uống lần động vật 11 Bảng 2.5: Tình hình nhiễm độc tố AF thức ăn miền Nam Việt Nam 12 Bảng 2.6: Tình hình nhiễm AFM1 sữa số quốc gia giới 13 Bảng 2.7: Giới hạn nhiễm độc tố vi nấm 13 Bảng 2.8: Qui định hàm lượng tối đa AFB1 tổng số AF (B1+B2+G1+G2) TAHH cho gia súc, gia cầm 14 Bảng 2.9: Mức qui định AF thức ăn gia súc khối EU .15 Bảng 3.1: Bố trí lấy mẫu sữa mẫu TAHH bổ sung cho bò sữa quận, huyện 23 Bảng 4.1: Tỉ lệ nhiễm AFM1 sữa bò tươi số quận, huyện 29 Bảng 4.2: Tỉ lệ nhiễm AFM1 sữa bò tươi theo loại TAHH bổ sung 31 Bảng 4.3: Tỉ lệ nhiễm AFM1 sữa bò tươi theo sản lượng sữa 33 Bảng 4.4: Mức độ nhiễm AFM1 trung bình biến động mẫu sữa 34 Bảng 4.5: Tỉ lệ mức nhiễm AFM1 sữa bò tươi .36 Bảng 4.6: Tỉ lệ mẫu sữa đạt yêu cầu AFM1 quận, huyện .38 Bảng 4.7: Tỉ lệ nhiễm AFB1 TAHH bổ sung 40 Bảng 4.8: Mức nhiễm AFB1 TAHH bổ sung 40 Bảng 4.9: Hàm lượng AFB1 TAHH bổ sung AFM1 sữa bò tươi 42 viii DANH SÁCH CÁC HÌNH Trang Hình 2.1 :Hình dạng Aspergillus flavus Hình 2.2: Cấu trúc hóa học AF chủ yếu Hình 3.1: Đưa đĩa vào máy đọc kết sau nhỏ dung dịch dừng phản ứng .24 Hình 3.2: Mẫu đựng bình tam giác có nút nhám thủy tinh 25 Hình 4.1: Đĩa phân tích AFM1 phương pháp ELISA 31 Hình 4.2: TAHH bổ sung cho bò để sàn nhà ẩm ướt 35 Hình 4.3: Nơi trộn TAHH bổ sung cho bị ẩm ướt khơng đảm bảo vệ sinh 36 DANH SÁCH CÁC BIỂU ĐỒ Trang Biểu đồ 4.1: Tỉ lệ nhiễm AFM1 sữa bò tươi quận, huyện 29 Biểu đồ 4.2: Tỉ lệ nhiễm AFM1 sữa bò tươi theo loại TAHH bổ sung .32 Biểu đồ 4.3: Tỉ lệ nhiễm AFM1 sữa bò tươi theo sản lượng sữa 33 Biểu đồ 4.4: Mức độ nhiễm AFM1 trung bình sữa bị tươi quận, huyện 34 Biểu đồ 4.5: Tỉ lệ mức nhiễm AFM1 sữa bò tươi quận, huyện 37 Biểu đồ 4.6: Tỉ lệ mẫu sữa đạt yêu cầu AFM1 quận, huyện 39 Biểu đồ 4.7 Tỉ lệ nhiễm AFB1 TAHH bổ sung 39 Biều đồ 4.8: Phân bố mức nhiễm AFB1 TAHH bổ sung 41 ix Tỉ lệ (%) 80 69.44 70 70.97 57.14 60 50 42.86 54.17 50 46.43 45.83 40 30 26.39 25.81 20 10 4.17 HM 3.22 CC 3.57 BC BT 500 ppt Q12 Quận, huyện Biểu đồ 4.5 Tỉ lệ mức nhiễm AFM1 sữa bò tươi quận, huyện Ghi Mức < 25 ppt: Mức không phát Mức 25 - 500 ppt: Mức tiêu chuẩn cho phép (theo quy định Bộ Y Tế, 1998) Mức > 500 ppt: Mức giới hạn cho phép Qua kết khảo sát trình bày bảng 4.5 cho thấy tỉ lệ nhiễm AFM1 sữa bò tươi mức 25 - 500 ppt chiếm tỉ lệ cao (60,80%), mức < 25 ppt (36,36%) thấp mức > 500 ppt (2,84%) So với kết Nguyễn Thị Hồng Phúc năm 2007 mức > 500 ppt năm thấp (2,84% so với 4,1%) Một lần lại khẳng định chất lượng sữa đạt tiêu chuẩn cho phép năm 2008 cao năm 2007 Vậy nhìn chung, kết chúng tơi có cải thiện so với năm 2007 chứng tỏ người chăn ni ngày có kinh nghiệm kỹ thuật việc bảo quản chọn lựa thức ăn cho gia súc nhằm hạn chế độc tố Nhưng so với kết Trần Văn Thành năm 2001 (ở mức 25 – 500 ppt > 500 ppt chiếm 0%), mức nhiễm AFM1 chúng tơi cịn cao, ngun nhân đề tài Trần Văn Thành thực vào mùa khơ cịn đề tài chúng tơi thực vào mùa mưa khí hậu ẩm ướt nên nấm mốc dễ sản sinh độc tố nhiễm vào thức ăn nguyên liệu thức ăn Hơn mẫu sữa Trần Văn Thành lấy trạm trung chuyển nơi mà sữa hộ chăn nuôi trộn chung với nhau, độc tố AFM1 bị pha loãng 37 Khi so sánh mức nhiễm AFM1 sữa bị tươi quận, huyện mức < 25 ppt huyện Bình Chánh chiếm tỉ lệ cao (57,14%), quận Bình Tân (50%), quận 12 (45,83%), huyện Hóc Mơn (26,39%) thấp huyện Củ Chi (25,81%) Kết cho thấy chất lượng sữa huyện Bình Chánh quận Bình Tân tốt quận, huyện lại Ở mức 25 - 500 ppt huyện Củ Chi chiếm tỉ lệ cao (70,97%), huyện Hóc Mơn (69,44%), quận 12 chiếm 54,17%, quận Bình Tân chiếm 46,43% thấp huyện Bình Chánh chiếm 42,86% Nhưng theo quy định Bộ Y Tế năm 1998 mức 25 - 500 ppt mức nằm giới hạn cho phép Ở mức > 500 ppt huyện Hóc Mơn chiếm tỉ lệ cao (4,17%), (trong tỉ lệ Nguyễn Thị Hồng Phúc năm 2007 15,9%), quận Bình Tân huyện Củ Chi (lần lượt 3,57% 3,22%), thấp huyện Bình Chánh quận 12 (đều 0%) 4.2.3 Tỉ lệ mẫu sữa đạt yêu cầu AFM1 quận, huyện Tỉ lệ mẫu sữa đạt yêu cầu AFM1 quận, huyện minh họa bảng 4.6 biểu đồ 4.6 Bảng 4.6: Tỉ lệ mẫu sữa đạt yêu cầu AFM1 quận, huyện Quận, Số mẫu sữa huyện khảo sát Mẫu sữa đạt yêu cầu Mẫu sữa không đạt yêu cầu Số mẫu Tỉ lệ (%) Số mẫu Tỉ lệ (%) Hóc Mơn 72 69 95,83 4,17 Củ Chi 31 30 96,78 3,22 Bình Chánh 21 21 100,00 0,00 Bình Tân 28 27 96,43 3,57 Quận 12 24 24 100,00 0,00 Tổng 176 171 97,16 2,84 38 Tỉ lệ (%) 100 100 100 99 98 97 96 97,16 96,78 96,43 95,83 Đạt 95 94 93 HM CC BC BT Q12 Tổng Quận, huyện Biểu đồ 4.6: Tỉ lệ mẫu sữa đạt yêu cầu AFM1 quận, huyện Theo quy định Bộ Y Tế năm 1998 hàm lượng AFM1 tối đa sữa 0,5 ppb hay 500 ppt qua kết trình bày bảng 4.6 biểu đồ 4.6 cho thấy tỉ lệ mẫu sữa không đạt yêu cầu AFM1 chiếm 2,84% tổng số mẫu khảo sát, tỉ lệ mẫu sữa đạt yêu cầu AFM1 97,16% So với kết Nguyễn Thị Hồng Phúc năm 2007 (tỉ lệ 4,1% 95,9%) kết Tarik (Thổ Nhĩ Kỳ) năm 2003 (tỉ lệ 64% 36%) tỉ lệ mẫu sữa đạt yêu cầu AFM1 năm cao hơn, lần lại khẳng định người chăn nuôi ngày quan tâm đến chất lượng sữa nói riêng chất lượng thực phẩm nói chung để tạo sản phẩm tốt lành cho người tiêu dùng Tuy nhiên hàm lượng AFM1 mẫu sữa điều đáng lo ngại, AFM1 loại độc tố mà độc lực tương đương AFB1, vào thể người gây hậu nặng nề, nhiều chứng cho thấy có khả gây ung thư sinh quái thai (trích dẫn Dương Thanh Liêm, 2007) Tóm lại, tỉ lệ mẫu sữa đạt yêu cầu AFM1 huyện Bình Chánh quận 12 cao đạt 100%, huyện Hóc Mơn 95,83%, huyện Củ Chi 96,78% quận Bình Tân 96,43% 4.3 AFB1 TRONG TAHH BỔ SUNG CHO BÒ Sau khảo sát hàm lượng AFM1 sữa bị tươi, chúng tơi tiến hành khảo sát thăm dò 20 mẫu TAHH bổ sung thu thập hộ chăn ni bị sữa có 39 hàm lượng AFM1 cao để tìm diện AFB1 Bằng phương pháp sắc ký lỏng cao áp (HPLC) thu đươc kết sau 4.3.1 Tỉ lệ nhiễm AFB1 TAHH bổ sung Tỉ lệ nhiễm AFB1 TAHH bổ sung trình bày bảng 4.7 biểu đồ 4.7 Bảng 4.7: Tỉ lệ nhiễm AFB1 TAHH bổ sung Số mẫu khảo Mẫu thong nhiễm AFB1 Mẫu nhiễm AFB1 sát Số mẫu Tỉ lệ (%) Số mẫu Tỉ lệ (%) 20 19 95 Tỉ lệ (%) 95 100 80 Không nhiễm AFB1 Nhiễm AFB1 60 40 20 AFB1 Biểu đồ 4.7 Tỉ lệ nhiễm AFB1 TAHH bổ sung Qua kết trình bày bảng 4.7 biểu đồ 4.7 cho thấy số mẫu nhiễm AFB1 19 mẫu chiếm 95% số mẫu khảo sát, tỉ lệ lớn so với kết Nguyễn Thị Hồng Phúc năm 2007 (55%) Nguyên nhân mẫu lấy hộ chăn ni bị sữa có mức nhiễm AFM1 cao, cịn mẫu TAHH Nguyễn Thị Hồng Phúc lấy ngẫu nhiên công ty sản xuất 4.3.2 Mức độ nhiễm AFB1 TAHH bổ sung Mức độ nhiễm AFB1 TAHH bổ sung trình bày bảng 4.8 biểu đồ 4.8 Bảng 4.8: Mức nhiễm AFB1 TAHH bổ sung Số mẫu khảo sát 20 Mức nhiễm AFB1 (ppb) Trung Biến động bình 13,49 – 887,12 Các mức nhiễm AFB1 0,00 ppb Số Tỉ lệ mẫu (%) 40 - 20 ppb Số Tỉ lệ mẫu (%) 10 50 > 20 ppb Số Tỉ lệ mẫu (%) 45 Tỉ lệ(%) 50 50 45 40 0,00 ppb 1-20 ppb >20 ppb 30 20 10 AFB1 Biều đồ 4.8: Phân bố mức nhiễm AFB1 TAHH bổ sung Qua kết khảo sát trình bày bảng 4.8 biểu đồ 4.8 cho thấy mức nhiễm AFB1 trung bình TAHH bổ sung cho bò 13,49 ppb mức biến động - 887 ppb Mức biến động lớn so với kết khảo sát Nguyễn Thị Hồng Phúc năm 2007 (0 - ppb) Tỉ lệ nhiễm AFB1 mức 0,00 ppb 5%, tỉ lệ nhiễm AFB1 mức - 20 ppb 50% tỉ lệ nhiễm AFB1 mức > 20 ppb 45% Còn tỉ lệ kết khảo sát Nguyễn Thị Hồng Phúc 45%, 55% 0% Nhìn chung kết mức độ nhiễm AFB1 TAHH bổ sung cho bò năm cao nhiều so với kết Nguyễn Thị Hồng Phúc năm 2007, nguyên nhân mẫu chúng tơi lấy từ thức ăn bò hộ chăn ni có mức nhiễm AFM1 cao, cịn mẫu Nguyễn Thị Hồng Phúc lấy cách ngẫu nhiên Theo quy định Bộ Nông Nghiệp Phát Triển Nông Thôn năm 1998, hàm lượng AFB1 tối đa phép TAHH bổ sung cho bò sữa 20 ppb số mẫu TAHH đạt yêu cầu AFB1 11 chiếm 55% số mẫu khảo sát, tỉ lệ mẫu vi phạm 45% Đây tỉ lệ đáng báo động cho ngành chăn ni bị sữa, AFB1 loại độc tố độc nhiễm với lượng lớn gây ngộ độc cấp tính dẫn đến chết, nhiễm phải với lượng thấp thời gian dài dẫn đến ung thư gan (Lê Thị Ngọc Diệp – Bùi Thị Tho, 2006) Vì cần phải kiểm sốt nghiêm ngặt nguồn thức ăn cho gia súc sản phẩm nhằm đảm bảo sức khỏe cho cộng đồng 41 4.3.3 Mối tương quan hàm lượng AFB1 TAHH bổ sung AFM1 sữa Mối tương quan hàm lượng AFB1 TAHH bổ sung cho bò AFM1 sữa bị tươi trình bày bảng 4.9 Bảng 4.9: Hàm lượng AFB1 TAHH bổ sung AFM1 sữa bò tươi STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Mức trung bình Ước lượng tỉ lệ chuyển hóa từ AFB1 sang AFM1 (%) AFB1 (ppb) AFM1 (ppt) 1,08 105,32 0,00 108,50 0,54 108,77 2,58 109,04 10,31 109,59 5,19 110,40 1,32 112,62 4,12 112,83 4,97 114,03 3,53 117,48 1,63 119,54 26,83 136,77 23,04 170,52 38,17 179,18 93,66 431,63 887,12 506,68 177,40 563,48 267,65 605,42 234,78 1250,00 147,40 1250,00 13,49 204,41 1,52 Chi ppb = 103 ppt Qua kết khảo sát trình bày bảng 4.9 cho thấy hàm lượng AFB1 TAHH bổ sung hàm lượng AFM1 sữa bò cho ăn loại thức ăn có tương quan với với r = 0,456 (r hệ số tương quan) Hệ số tương quan thấp 42 bị khơng cho ăn TAHH mà cịn cho ăn nhiều loại thức ăn khác cỏ, xác mì, xác đậu nành, hèm bia,… Mà xác mì, xác đậu nành loại thức ăn dễ bị nhiễm AFB1 tình trạng thức ăn cịn đọng lại máng ẩm ướt nguyên nhân làm thức ăn dễ nhiễm AFB1 Từ kết thu ước lượng tỉ lệ chuyển hóa từ AFB1 sang AFM1 1,52%, kết phù hợp với nghiên cứu trước có khoảng – 3% lượng AFB1 ăn vào chuyển hóa thành AFM1 qua sữa bị (trích dẫn Lê Anh Phụng, Bùi Cách Tuyến ctv, 2001) 43 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Qua kết khảo sát 176 mẫu sữa bò tươi kỹ thuật ELISA 20 mẫu thức ăn bổ sung phương pháp sắc ký lỏng cao áp chúng tơi có kết luận sau Tỉ lệ mức độ nhiễm AFM1  Tỉ lệ nhiễm AFM1 sữa bò tươi cao chiếm 63,64% tổng số mẫu khảo sát, tỉ lệ nhiễm AFM1 sữa bò tươi huyện Củ Chi cao chiếm 74,19% thấp huyện Bình Chánh chiếm 42,86% Giữa loại TAHH bổ sung mức sản lượng sữa không ảnh hưởng đến tỉ lệ nhiễm AFM1  Mức độ nhiễm AFM1 trung bình sữa bò tươi 13,66 ppt Mức nhiễm < 25 ppt chiếm 36,36%, mức nhiễm 25 - 500 ppt chiếm 60,80% mức nhiễm > 500 ppt chiếm 2,84% Theo quy định Bộ Y Tế năm 1998 có 97,16% mẫu sữa đạt yêu cầu AFM1 (≤ 0,5 ppb hay 500 ppt) Tỉ lệ mức độ nhiễm AFB1  Tỉ lệ nhiễm AFB1 tổng số mẫu TAHH khảo sát 95%  Mức độ nhiễm AFB1 trung bình TAHH 13,49 ppb Các mẫu âm tính chiếm 5%, mức nhiễm - 20 ppb chiếm 50% mức nhiễm >20 ppb chiếm 45% Có 55% số mẫu TAHH khảo sát đạt yêu cầu AFB1 theo quy định Bộ Nông Nghiệp Và Phát Triển Nông Thôn năm 1998 Mối quan hệ AFB1 AFM1  Giữa AFB1 TAHH bổ sung cho bò AFM1 sữa bị cho ăn thức ăn có tương quan chưa chặt, vớí r = 0,456 Tỉ lệ chuyển hóa từ AFB1 sang AFM1 1,52% 5.2 ĐỀ NGHỊ Các công ty sản xuất thức ăn chăn nuôi nên chọn loại nguyên liệu tốt, nguyên liệu phải thật khô trước đưa vào kho dự trữ Kiểm tra, khống chế độ ẩm, nhiệt độ thích hợp, diệt trừ côn trùng, gặm nhấm Áp dụng biện pháp xử lý nông sản bị 44 nhiễm nấm mốc như: dùng chất hấp phụ độc tố, dùng vi sinh vật để phân hủy độc tố Những nhà chăn ni nên bảo quản TAHH nơi cao thống khí, thường xuyên kiểm tra khống chế độ ẩm, nhiệt độ thích hợp, diệt trừ trùng lồi gặm nhấm Cần có biện pháp cải tiến phần thức ăn bị nhiễm độc tố Các sở thú y quan kiểm tra chất lượng vệ sinh an toàn thực phẩm cần lấy mẫu TAHH mẫu sữa kiểm tra định kỳ để kiểm soát độc tố, đảm bảo an toàn vệ sinh thực phẩm cho người tiêu dùng Cần khảo sát số lượng mẫu nhiều nhiều yếu tố ảnh hưởng đến tỉ nhiễm AFM1 sữa bị tươi để tìm yếu tố ảnh hưởng đến tỉ lệ nhiễm AFM1 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tham khảo tiếng Việt Bộ khoa học, công nghệ môi trường, 1986 TCVN 4325 – 86: Lấy mẫu chuẩn bị mẫu thức ăn chăn nuôi Việt Nam Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn, 2001 Quyết định số 104/2001/QĐ/BNN ngày 31/10/2001 v/v ban hành số quy định tạm thời thức ăn chăn nuôi Bộ Y Tế, 1998 Quyết định số 867/1998 QĐ – BYT ngày 4/4/1998 v/v ban hành giới hạn nhiễm độc tố vi nấm thực phẩm Việt Nam, danh mục tiêu chuẩn vệ sinh lương thực, thực phẩm Đậu Ngọc Hào, Lê Thị Ngọc Diệp, 2003 Nấm mốc độc tố aflatoxin thức ăn chăn nuôi NXB nông nghiệp, Hà Nội, Việt Nam Devegowada, 2002 Vấn nạn Mycotoxin toàn cầu: Các giải pháp sinh học Alltech’s 16th Annual Asia Pacific Lecture Tour Proceedings Trang 63 – 77 Dương Thanh Liêm, 2007 Bài Giảng Độc Chất học Tủ sách đại học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh, Việt Nam Claude Moreau, 1974 Nấm mốc độc thực phẩm (Đặng Hồng Miên dịch) Nhà xuất khoa học kỹ thuật, Hà Nội, Việt Nam, 301 trang Nguyễn Thị Hồng Phúc, 2007 Khảo sát hàm lượng aflatoxin M1 sữa hàm lượng aflatoxin B1 thức ăn hỗn hợp bổ sung số hộ chăn ni bị sữa địa bàn thành phố Hồ Chí Minh Luận văn tốt nghiệp Bác sĩ Thú y, Đại Học Nơng Lâm, TP Hồ Chí Minh, Việt Nam Lê Anh Phụng, Bùi Cách Tuyến ctv, 2001 Khảo sát diện aflatoxin M1 sữa bò tươi TP HCM số tỉnh lân cận Tập san khoa học kỹ thuật nông lâm nghiệp, số 4: 88-90 10 Lê Anh Phụng, 2001 Bệnh nhiễm độc aflatoxin phương pháp phát aflatoxin Chuyên đề cấp tiến sĩ Trường Đại Học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh, Việt Nam 11 Lê Anh Phụng, 2002 Hiệu giảm độc aflatoxin số chất có khả hấp phụ độc tố thức ăn nuôi vịt siêu thịt Luận án tiến sĩ nông nghiệp, Đại Học Nơng Lâm, TP Hồ Chí Minh, Việt Nam 46 12 Trần Văn Thành, 2001 Khảo sát số tính chất sữa bị tươi kiểm tra diện aflatoxin M1 sữa bò tươi TP Hồ Chí Minh tỉnh lân cận Luận văn tốt nghiệp Bác sĩ Thú y, Đại Học Nơng Lâm, TP Hồ Chí Minh Việt Nam 13 Hồ Hoa Phương Thảo, 2006 Khảo sát tình hình nhiễm aflatoxin B1 thức ăn hỗn hợp heo tỉnh Bà Rịa Vũng Tàu Luận văn tốt nghiệp Bác sĩ Thú y, Đại Học Nơng Lâm, TP Hồ Chí Minh, Việt Nam 14 Trần Bắc Vi, 2005 Phân lập Aspergillus Flavus bánh dầu phộng bị mốc khảo sát khả sinh aflatoxin chủng phân lập Luận văn tốt nghiệp Kỹ sư chăn nuôi, Đại Học Nơng Lâm, TP Hồ Chí Minh, Việt Nam Tài liệu tham khảo tiếng Anh 15 Sigrid Pasteiner, 1998 Mycotoxins in Animal Husbandry Erber AG, Austria Pages 21 – 28 16 Tecnalab, 2008 I’screen AFLA M1- Enzyme immunoassay for the detection of Aflatoxin M1 (code MA418) Tecna S.r.l – Area Science Pard – Padriciano 99, Trieste, Italy Tài liệu từ hệ thống internet Dương Thanh Liêm, 2003 Độc tố nấm mốc, kẻ thù số thức ăn công nghiệp Đặc san khoa học kỹ thuật thức ăn chăn nuôi, số Truy cập tháng năm 2008 Tarik, 2003 “Aflatoxin M1 contamination in pasteurised milk” Deparment of Food Hygiene and Technology, Faculty of Veterinary Medicine, University of Ankara, Ankara, Turkey Truy cập ngày tháng năm 2008 47 PHỤ LỤC STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 Phụ lục 1: Hàm lượng AFM1 sữa bò tươi quận, huyện STT Quận, huyện Hàm lượng Quận, huyện Hàm lượng AFM1 (ppt) AFM1 (ppt) Hóc Mơn 0,00 89 Củ Chi 61,37 Hóc Mơn 0,00 90 Củ Chi 61,75 Hóc Mơn 0,00 91 Củ Chi 69,57 Hóc Mơn 0,00 92 Củ Chi 73,66 Hóc Mơn 0,00 93 Củ Chi 73,84 Hóc Mơn 0,00 94 Củ Chi 74,11 Hóc Mơn 0,00 95 Củ Chi 77,37 Hóc Mơn 0,00 96 Củ Chi 80,78 Hóc Mơn 0,00 97 Củ Chi 86,77 Hóc Mơn 0,00 98 Củ Chi 92,33 Hóc Mơn 0,00 99 Củ Chi 94,96 Hóc Mơn 0,00 100 Củ Chi 96,51 Hóc Mơn 0,00 101 Củ Chi 109,04 Hóc Mơn 0,00 102 Củ Chi 112,83 Hóc Mơn 0,00 103 Củ Chi 605,42 Hóc Mơn 0,00 104 Bình Chánh 0,00 Hóc Mơn 0,00 105 Bình Chánh 0,00 Hóc Mơn 0,00 106 Bình Chánh 0,00 Hóc Mơn 0,00 107 Bình Chánh 0,00 Hóc Mơn 25,99 108 Bình Chánh 0,00 Hóc Mơn 26,80 109 Bình Chánh 0,00 Hóc Mơn 27,43 110 Bình Chánh 0,00 Hóc Mơn 29,86 111 Bình Chánh 0,00 Hóc Mơn 31,01 112 Bình Chánh 0,00 Hóc Mơn 31,53 113 Bình Chánh 0,00 Hóc Mơn 32,35 114 Bình Chánh 0,00 Hóc Mơn 33,62 115 Bình Chánh 0,00 Hóc Mơn 33,97 116 Bình Chánh 44,23 Hóc Mơn 38,25 117 Bình Chánh 48,21 Hóc Mơn 38,64 118 Bình Chánh 48,53 Hóc Mơn 38,64 119 Bình Chánh 63,38 Hóc Mơn 39,04 120 Bình Chánh 66,53 Hóc Mơn 39,75 121 Bình Chánh 72,13 Hóc Mơn 40,17 122 Bình Chánh 74,91 Hóc Mơn 47,37 123 Bình Chánh 83,89 Hóc Mơn 47,98 124 Bình Chánh 104,07 Hóc Mơn 48,35 125 Bình Tân 0,00 Hóc Mơn 54,00 126 Bình Tân 0,00 Hóc Mơn 54,40 127 Bình Tân 0,00 Hóc Mơn 56,19 128 Bình Tân 0,00 Hóc Mơn 56,33 129 Bình Tân 0,00 48 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 Hóc Mơn Hóc Mơn Hóc Mơn Hóc Mơn Hóc Mơn Hóc Mơn Hóc Mơn Hóc Mơn Hóc Mơn Hóc Mơn Hóc Mơn Hóc Mơn Hóc Mơn Hóc Mơn Hóc Mơn Hóc Mơn Hóc Mơn Hóc Mơn Hóc Mơn Hóc Mơn Hóc Mơn Hóc Mơn Hóc Mơn Hóc Mơn Hóc Mơn Hóc Mơn Hóc Mơn Hóc Mơn Hóc Mơn Hóc Mơn Hóc Môn Củ Chi Củ Chi Củ Chi Củ Chi Củ Chi Củ Chi Củ Chi Củ Chi Củ Chi Củ Chi Củ Chi Củ Chi Củ Chi Củ Chi Củ Chi Củ Chi 57,89 62,37 63,15 66,03 66,53 73,47 75,51 75,70 77,21 79,55 83,60 89,40 90,51 96,07 100,71 100,96 101,72 105,32 108,50 109,59 110,40 112,62 114,03 117,48 119,54 136,77 170,52 179,18 506,68 563,48 1250,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 26,46 27,52 27,80 30,30 30,30 30,71 32,60 43,35 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 49 Bình Tân Bình Tân Bình Tân Bình Tân Bình Tân Bình Tân Bình Tân Bình Tân Bình Tân Bình Tân Bình Tân Bình Tân Bình Tân Bình Tân Bình Tân Bình Tân Bình Tân Bình Tân Bình Tân Bình Tân Bình Tân Bình Tân Bình Tân Quận 12 Quận 12 Quận 12 Quận 12 Quận 12 Quận 12 Quận 12 Quận 12 Quận 12 Quận 12 Quận 12 Quận 12 Quận 12 Quận 12 Quận 12 Quận 12 Quận 12 Quận 12 Quận 12 Quận 12 Quận 12 Quận 12 Quận 12 Quận 12 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 28,29 33,54 33,97 34,50 34,68 38,44 39,45 50,37 54,54 84,64 84,85 108,77 431,63 1250,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 25,67 30,91 33,92 45,57 48,85 50,27 60,38 65,82 67,98 69,46 77,79 81,66 84,80 Chi-Square Test: k.nhiem AFM1 nhiem AFM1 k.nhiem nhiem AF 19 53 26,18 45,82 Chi-Square Test: k.nhiem AFM1 nhiem AFM1 theo loai TAHH Total 72 k.nhiem nhiem AF 35 54 32,36 56,64 Total 89 11,27 23 19,73 31 10,55 22 18,45 29 12 7,64 13,36 21 2,91 5,09 14 10,18 14 17,82 28 2,55 4,45 11 8,73 13 15,27 24 4,73 8,27 13 Total 64 112 176 3,27 5,73 2,91 5,09 8 4,73 8,27 13 64 64,00 112 112,00 176 Total 128 224 352 Chi-Sq = 1,970 0,950 2,494 1,432 0,592 DF = 4, P-Value + 1,126 + 0,543 + 1,425 + 0,818 + 0,338 = 0,020 + + + + = 11,687 Chi-Square Test: k.nhiem AFM1 nhiem AFM1 theo san luong sua k.nhiem nhiem AF 5,09 8,91 Total 14 Chi-Sq = 31 31,27 55 54,73 86 23 22,91 40 40,09 63 4 4,73 8,27 13 Total 64 112 176 Chi-Sq = 0,162 0,002 0,000 0,112 DF = 3, P-Value + 0,093 + 0,001 + 0,000 + 0,064 = 0,933 0,215 1,192 0,409 0,081 0,112 0,162 1,253 0,343 0,000 DF = 8, P-Value + + + = 0,435 Correlations: AFB1 AFM1 Pearson correlation of AFB1 and AFM1 = 0,456 P-Value = 0,043 50 + 0,123 + 0,681 + 0,234 + 0,046 + 0,064 + 0,092 + 0,716 + 0,196 + 0,000 = 0,656 + + + + + + + + = 5,918 Hình 1: Kết phân tích AFB1 phương pháp sắc ký lỏng cao áp 51 ...KHẢO SÁT H? ?M LƯỢNG AFLATOXIN M1 TRONG SỮA B? ? TƯƠI VÀ H? ?M LƯỢNG AFLATOXIN B1 TRONG THỨC ĂN HỖN HỢP B? ?? SUNG CHO B? ?? TẠI M? ??T SỐ HỘ CHĂN NI B? ?? SỮA TRÊN ĐỊA B? ?N THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH Tác giả... Thú Y thành phố Hồ Chí Minh, thực đề tài: ? ?Khảo sát h? ?m lượng aflatoxin M1 sữa b? ? tươi h? ?m lượng aflatoxin B1 thức ăn hỗn hợp b? ?? sung cho b? ? số hộ chăn ni b? ?? sữa địa b? ?n thành phố Hồ Chí Minh? ??... ? ?Khảo sát h? ?m lượng aflatoxin M1 sữa b? ? tươi h? ?m lượng aflatoxin B1 thức ăn hỗn hợp b? ?? sung cho b? ? số hộ chăn ni b? ?? sữa địa b? ?n thành phố Hồ Chí Minh? ??, thực từ 18 /02/2008 đến 18 /06/2008 Trạm