CHẨN ĐOÁN VIÊM KHỚP BẰNG PHƯƠNG PHÁP HUYẾT THANH HỌC TẠI BỆNH VIỆN 175

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC    KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP CHẨN ĐỐN VIÊM KHỚP BẰNG PHƯƠNG PHÁP HUYẾT THANH HỌC TẠI BỆNH VIỆN 175 Ngành học : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Sinh viên thực : HỒNG LỆ DUNG Niên khóa : 2007 – 2011 Tháng năm 2011 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC    KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP CHẨN ĐỐN VIÊM KHỚP BẰNG PHƯƠNG PHÁP HUYẾT THANH HỌC TẠI BỆNH VIỆN 175 Hướng dẫn khoa học Sinh viên thực TS BS VŨ BẢO CHÂU HOÀNG LỆ DUNG CN CHU THỊ THU HÀ Tháng năm 2011 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành khóa luận tốt nghiệp này, quan tâm, giúp đỡ, chăm sóc gia đình, thầy cơ, bạn bè người thân nguồn động lực lớn giúp em vượt qua khó khăn Thành kính cảm ơn ơng bà, ba mẹ, người sinh thành nuôi dưỡng nên người, để có ngày hơm Ln động viên gặp khó khăn sống sinh viên xa nhà Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến quý thầy cô Trường Đại Học Nơng Lâm TP.HCM nói chung q thầy cô Bộ Môn Công Nghệ Sinh Học – Trường Đại Học Nơng Lâm TP.HCM nói riêng truyền đạt cho chúng em kiến thức quý báu tạo điều kiện thuận lợi thời gian học tập trường Em xin chân thành cảm ơn TS.BS Vũ Bảo Châu tập thể cô chú, anh chị công tác khoa Vi Sinh Vật – Bệnh Viện 175 dành thời gian quý báu hướng dẫn, bảo tận tình, tạo điều kiện thuận lợi để em hồn thành tốt khóa luận Cảm ơn bạn sinh viên thực tập Bệnh Viện 175 giúp đỡ tơi q trình thực tập, hồn thành khóa luận Cảm ơn tập thể lớp DH07SH đồng hành giúp đỡ, chia sẻ với lúc tơi gặp khó khăn thời gian hồn thành khóa luận Cảm ơn người bạn bên tôi, động viên, chia sớt buồn vui sống Phú Yên, ngày 10 tháng năm 2011 Sinh viên thực HỒNG LỆ DUNG i TĨM TẮT Đề tài “Chẩn đốn viêm khớp phương pháp huyết học bệnh viện 175” đánh giá tỷ lệ viêm khớp bệnh nhân để có phương pháp điều trị bệnh thích hợp Nghiên cứu mô tả cắt ngang, thực Bệnh viện 175 527 bệnh nhân (gồm mẫu huyết bệnh nhân) tiến hành xét nghiệm ASO, RF CRP Theo kết nghiên cứu chúng tôi, tỷ lệ viêm khớp 19,2% Lứa tuổi từ 20 60 tuổi chiếm tỷ lệ cao (75,6%) có phản ứng ASO dương tính, lứa tuổi 20 tuổi (19,5 %) 60 tuổi (4,9 %) Tỷ lệ dương tính phản ứng CRP lứa tuổi từ 20 - 60 tuổi (73,3%), 60 tuổi (15,6%) 20 tuổi (11,1%) Đối với phản ứng RF nữ có tỷ lệ dương tính (56,7%) nam (43,33%), lứa tuổi từ 20 - 60 tuổi có tỷ lệ dương tính cao Độ tuổi giới tính có liên quan đến viêm khớp nghiên cứu ii SUMMARY Topic title : “Use of serology for diagnosing arthritis at 175 Hospital” To evaluate rate of arthritis in order to have treatment method appropriate A cross – sectional study was performed at 175 Hospital for 527 patients Sera samples were tested for ASO, RF and CRP The results of our study, the rate of arthritis was 19.2% Age 20 - 60 years old showed the highest positive rate (75.6%) with ASO test, followed by age less than 20 years old (19.5%) and over 60 years old (4.9%) Age 20 – 60 years old had 73.3% in the positive rate with CRP, over 60 years old was 15.6% and less than 20 years old was 11.1% With RF test, women had the positive rate (56.7%) higher than males (43.3%), and the highest positive rate was in age of 20 – 60 years old Age and sex were associated with arthritis in this study iii MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN i TÓM TẮT ii SUMMARY iii MỤC LỤC iv DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH SÁCH CÁC BẢNG vii DANH SÁCH CÁC HÌNH .viii CHƯƠNG MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu đề tài 1.3 Nội dung thực CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu viêm khớp 2.1.1 Viêm khớp cấp liên cầu khuẩn nhóm A (Streptococcus pyogenes) 2.1.1.1 Nguyên nhân chế gây bệnh 2.1.1.2 Triệu chứng lâm sàng 2.1.2 Viêm khớp dạng thấp (VKDT) (Rheumatoid factor : RF) 2.1.2.1 Nguyên nhân chế gây bệnh 2.1.2.2 Triệu chứng lâm sàng 10 2.1.3 Phản ứng viêm không đặc hiệu (C - reactive protein : CRP) 14 2.1.3.1 Nguyên nhân chế gây bệnh 15 2.1.3.2 Triệu chứng lâm sàng 16 2.2 Tình hình mắc bệnh viêm khớp 17 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 3.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 20 3.2 Sơ đồ tiến hành khảo sát 20 3.3 Đối tượng nghiên cứu 20 iv 3.4 Vật liệu 20 3.5 Quy trình xét nghiệm 22 3.6 Phương pháp nghiên cứu 25 3.6.1 Thiết kế nghiên cứu 25 3.6.2 Thu thập số liệu 25 3.6.3 Xử lý số liệu 25 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 26 4.1 Tỷ lệ viêm khớp chung bệnh nhân 26 4.2 Tỷ lệ dương tính phản ứng ASO 27 4.3 Tỷ lệ dương tính phản ứng CRP 29 4.4 Tỷ lệ dương tính phản ứng RF 30 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 34 5.1 Kết luận 34 5.2 Đề nghị 34 TÀI LIỆU THAM KHẢO 35 Tài liệu nước 35 Tài liệu từ internet 35 PHỤ LỤC v DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT ASO, ASLO: Antistreptolysin O CCP: Cyclic Citrullinated Peptide CRP: C – reactive protein Cs: Cộng HLA: Human Leucocyte Antigen MHC: Major Histocompatibility Complex RF: Rheumatoid Factor WHO: World Health Organisation VKDT: Viêm khớp dạng thấp vi DANH SÁCH CÁC BẢNG Trang Bảng 2.1 Tiêu chuẩn chẩn đoán xác định thấp tim theo Duckett Jones (1992) Bảng 3.1 Quan sát kết ngưng kết 23 Bảng 4.1 Tỷ lệ viêm khớp chung bệnh nhân 26 Bảng 4.2 Tỷ lệ dương tính phản ứng ASO 27 Bảng 4.3 Tỷ lệ dương tính phản ứng ASO theo lứa tuổi 28 Bảng 4.4 Tỷ lệ dương tính phản ứng CRP 29 Bảng 4.5 Tỷ lệ dương tính phản ứng CRP theo lứa tuổi 29 Bảng 4.6 Tỷ lệ dương tính phản ứng RF 30 Bảng 4.7 Tỷ lệ dương tính với phản ứng RF theo giới tính 31 Bảng 4.8 Tỷ lệ dương tính với phản ứng RF theo lứa tuổi 32 vii DANH SÁCH CÁC HÌNH Trang Hình 2.1 Hình ảnh hẹp hở van hai thấp tim Hình 2.2 Hình ảnh ban đỏ vòng sốt thấp Hình 2.3 Hạt Meynet Hình 2.4 Hình ảnh viêm khớp hạt da thấp khớp cấp Hình 2.5 Hình ảnh X-quang khuyết xương hay bào mòn xương 10 Hình 2.6 Phản ứng Waaler Rose Gama latex 13 Hình 2.7 Cấu trúc phân tử CRP 16 Hình 3.1 Sơ đồ tiến hành khảo sát 21 Hình 3.2 Thao tác lấy máu 22 Hình 3.3 Bệnh phẩm máu 22 Hình 3.4 Bệnh phẩm máu sau ly tâm 23 Hình 3.6 Quan sát kết ngưng kết 23 Hình 3.5 Quy trình thao tác 24 Hình 4.1 Biểu đồ tỷ lệ viêm khớp chung bệnh nhân 26 Hình 4.2 Biểu đồ tỉ lệ dương tính phản ứng ASO 27 Hình 4.3 Biểu đồ tỷ lệ dương tính phản ứng ASO theo lứa tuổi 28 Hình 4.4 Biểu đồ tỷ lệ dương tính phản ứng CRP 29 Hình 4.5 Biểu đồ tỷ lệ dương tính phản ứng CRP theo lứa tuổi 30 Hình 4.6 Biểu đồ tỷ lệ dương tính phản ứng RF 31 Hình 4.7 Biểu đồ tỷ lệ dương tính với phản ứng RF theo giới tính 31 Hình 4.8 Biểu đồ tỷ lệ dương tính với phản ứng RF theo lứa tuổi 32 viii Bảng 4.3 Tỷ lệ dương tính phản ứng ASO theo lứa tuổi Tuổi ≤ 20 20 – 60 > 60 Số lượng 31 Tỷ lệ (%) 19,5 75,6 4,9 Tỉ lệ dương tính phản ứng ASO theo lứa tuổi 4.9% 19.5% ≤ 20 20 - 60 > 60 75.6% Hình 4.3 Biểu đồ tỷ lệ dương tính phản ứng ASO theo lứa tuổi Một cơng trình nghiên cứu Hoa Kỳ cho thấy năm có khoảng 100.000 trường hợp thấp khớp thấp tim có liên quan đến nhiễm liên cầu khuẩn nhóm A (ASO dương tính) Khoảng 64,5% mắc bệnh thấp tim độ tuổi học đường, trẻ - tuổi chiếm 2% tỉ lệ mắc bệnh Tỷ lệ nghiên cứu cao Sỡ dĩ kết nghiên cứu cao phương pháp lấy mẫu nghiên cứu ngẫu nhiên Tất mẫu xét nghiệm thực dựa yêu cầu bác sĩ có dấu hiệu lâm sàng viêm khớp nghi ngờ nhiễm liên cầu khuẩn nhóm A Theo Tổ chức Y Tế Thế giới (WHO) năm có khoảng 12 – 30 triệu trẻ em mắc bệnh khoảng nửa triệu trẻ em tử vong bệnh van tim hậu thấp Hội nghị Thế giới tổ chức Genever ngày 07 – 09/09/1994 báo cáo tần suất thấp tim nước phát triển từ – 12% 28 Ở Việt Nam, số cơng trình điều tra cho thấy tỷ lệ mắc bệnh thấp tim lứa tuổi học sinh lên tới gần 30 phần vạn Thống kê tuổi mắc bệnh 883 em mắc bệnh thấp (trong 10 năm 1969-1978, Viện Bảo vệ sức khỏe trẻ em) cho thấy tuổi trường hợp nào, 4-6 tuổi: 7%; 7-12 tuổi: 52%; 13-15 tuổi: 41% 4.3 Tỷ lệ dương tính phản ứng CRP Bảng 4.4 Tỷ lệ dương tính phản ứng CRP CRP Số bệnh nhân Tỷ lệ % Dương tính 45 15,7 Âm tính 241 84,3 Tổng 286 100 Tỷ lệ dương tính phản ứng CRP 15.7% Âm tính Dương tính 84.3% Hình 4.4 Biểu đồ tỷ lệ dương tính phản ứng CRP Tỷ lệ bệnh nhân dương tính với xét nghiệm CRP 15,7% tổng số 286 bệnh nhân đến khám Bệnh Viện 175 Bảng 4.5 Tỷ lệ dương tính phản ứng CRP theo lứa tuổi Tuổi ≤ 20 20 – 60 Số lượng 33 Tỷ lệ (%) 11,1 73,3 15,6 29 > 60 Tỉ lệ dương tính phản ứng CRP theo lứa tuổi 11.1% 15.6% ≤ 20 20 - 60 73.3% > 60 Hình 4.5 Biểu đồ tỷ lệ dương tính phản ứng CRP theo lứa tuổi Bảng 4.5 cho thấy khác biệt tỷ lệ dương tính phản ứng CRP theo lứa tuổi Theo đó, lứa tuổi từ 20 – 60 tuổi chiếm tỷ lệ dương tính với xét nghiệm cao (73%), lứa tuổi 60 tuổi (15,6 %) nhỏ 20 tuổi (11%) Tỷ lệ dương tính phản ứng CRP năm nước bán đảo Scandilavia, Tây Âu châu Mỹ từ 30 – 40/100.000 dân Lứa tuổi từ 20 - 40 tuổi chiếm tỷ lệ cao 85%, xét nghiệm có tỷ lệ thấp trẻ em người cao tuổi 50 - 70% bệnh nhân có tiền sử viêm nhiễm đường tiết niệu sinh dục đường tiêu hóa cấp tính mạn tính có khả cho kết dương tính với xét nghiệm Khoảng 20 - 30% bệnh nhân có tiền sử gia đình mắc bệnh nhóm bệnh lý cột sống thể huyết âm tính, thường gặp bệnh viêm cột sống dính khớp có khả cho kết dương tính với xét nghiệm 4.4 Tỷ lệ dương tính phản ứng RF Bảng 4.6 Tỷ lệ dương tính phản ứng RF RF Số bệnh nhân Tỷ lệ % Dương tính 30 8,9 Âm tính 306 91,1 Tổng 336 100 30 Tỷ lệ dương tính với phản ứng RF 8.9% Âm tính Dương tính 91.1% Hình 4.6 Biểu đồ tỷ lệ dương tính phản ứng RF Tỷ lệ bệnh nhân dương tính với phản ứng RF 8,9% tổng số 336 bệnh nhân đến khám Bệnh Viện 175 Bảng 4.7 Tỷ lệ dương tính với phản ứng RF theo giới tính RF Dương tính Tỷ lệ (%) Nam 13 43,3 Nữ 17 56,7 Tỉ lệ bệnh viêm khớp dạng thấp theo giới tính 43% 57% Nữ Nam Hình 4.7 Biểu đồ tỷ lệ dương tính với phản ứng RF theo giới tính 31 Bảng 4.8 Tỷ lệ dương tính với phản ứng RF theo lứa tuổi Tuổi Số lượng Tỷ lệ (%) ≤ 20 3,3 20 – 60 23 76,7 > 60 20 Tỷ lệ dương tính với phản ứng RF theo lứa tuổi 3.3% 20% ≤ 20 20 -60 76.7% > 60 Hình 4.8 Biểu đồ tỷ lệ dương tính với phản ứng RF theo lứa tuổi Qua bảng 4.7 bảng 4.8 cho thấy khác biệt tỷ lệ mắc bệnh viêm khớp dạng thấp theo lứa tuổi giới tính - bệnh có liên quan đến xuất yếu tố thấp huyết bệnh nhân (phản ứng RF dương tính) Nghiên cứu chúng tơi cho thấy tỷ lệ mắc bệnh nữ giới (56,7%) cao hẳn nam giới (43,3%), tỷ lệ mắc bệnh VKDT nữ giới so với nam giới 1,3/1, thấp so với nghiên cứu khác, số lượng mẫu thu thập ít, chưa thể rõ khác biệt 76,7% tỷ lệ mắc bệnh khoảng từ 20 - 60 tuổi, 60 tuổi tỷ lệ người mắc bệnh VKDT chiếm 20% 20 tuổi 3,3% Theo WHO (1992), tỷ lệ mắc bệnh chung 0,5 - 3% dân số giới, tỷ lệ lên đến 5% tuỳ chủng tộc Tỷ lệ bệnh thấp 0,5% người Nhật Trung Quốc Đặc biệt 0,1 % quần thể người da đen Nam Phi 0,18% Tây Bắc Hy Lạp Tỷ lệ mắc bệnh cao 5% quần thể người da trắng lạc da đỏ Bắc Mỹ Tỷ lệ mắc 32 bệnh phụ nữ cao hẳn nam giới Tỷ lệ nam/nữ 1/2,5 Ở lứa tuổi 60, tỷ lệ 1/5 - 6, 65 tuổi, tỉ lệ 1/2 Tại Việt Nam, theo nghiên cứu tỉnh phía Bắc, tỷ lệ 0,5% dân số, chiếm 20% số bệnh nhân mắc bệnh khớp đến điều trị bệnh viện Hàng năm, có khoảng 700 - 750 người/1 triệu dân từ 15 tuổi trở lên mắc VKDT 60 - 70% tỷ lệ mắc bệnh tập trung vào lứa tuổi 30, 70 - 80% bệnh nhân nữ giới Ở Hoa Kỳ, 42 - 68/100.000 người bị VKDT Bệnh bắt đầu tuổi nào, thường sau 30 tuổi trước 60 tuổi Tỷ lệ mắc bệnh chủng tộc 33 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Chẩn đoán viêm khớp kit ASO, RF, CRP hãng Dialab kit định tính, xác định có hay khơng có diện yếu tố ASO, RF, CRP huyết bệnh nhân Qua nội dung nghiên cứu trên, đưa số nhận xét sau: - Tỷ lệ dương tính với xét nghiệm có liên quan đến viêm khớp 101 người, chiếm 19,2% - Tỷ lệ viêm khớp có liên quan đến việc nhiễm liên cầu khuẩn nhóm A theo lứa tuổi Trong đó, lứa tuổi nhỏ 20 chiếm 19,5%; lứa tuổi 20 – 60 chiếm 75,6%; lứa tuổi 60 chiếm 4,9% - Tỷ lệ dương tính xét nghiệm CRP có liên quan theo lứa tuổi Trong đó, lứa tuổi nhỏ 20 chiếm 11,1%; lứa tuổi từ 20 – 60 chiếm 73,3%; lứa tuổi 60 chiếm 15,6% - Tỷ lệ mắc bệnh viêm khớp dạng thấp có liên quan đến giới tính Trong đó, nữ chiếm tỷ lệ 56,7%; nam chiếm 43,3% - Tỷ lệ viêm khớp dạng thấp có liên quan đến lứa tuổi Trong đó, lứa tuổi nhỏ 20 chiếm 3,3%; lứa tuổi từ 20 – 60 chiếm 76,7%; lứa tuổi 60 chiếm 20% 5.2 Đề nghị Vì mẫu thu thập chưa phản ánh cách đầy đủ tình hình mắc bệnh viêm khớp bệnh viện cộng đồng Nếu có điều kiện, tiếp tục thực đề tài này, tiến hành nghiên cứu với số lượng mẫu lớn nhiều độ tuổi khác 34 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu nước Trần Đình Bình Mối liên quan hệ thống kháng nguyên bạch cầu người (HLA: Human Leucocyte Antigens) với số bệnh tật Bộ môn Vi sinh, Đại học Y – Huế Lê Chuyển 2008 Nghiên cứu biến đổi nồng độ protein phản ứng C (CRP) huyết bệnh nhân nhồi máu não Luận án Tiến sĩ Y Khoa Trường Đại Học Y Dược Huế Tạ Mạnh Cường 2009 Thấp tim Viện Tim Mạch Việt Nam – Bệnh Viện Bạch Mai Nguyễn Hải Linh 2010 Tìm hiểu nguyên khả đề kháng kháng sinh vi khuẩn gây nhiễm khuẩn vết mổ, vết thương bệnh viện 175 Khóa luận tốt nghiệp kỹ sư Cơng nghệ Sinh học Trường Đại học Nông Lâm TP.HCM Trần Thị Ngọc Quỳnh 2010 Tìm hiểu cấu nhiễm HIV/AISD xét nghiệm tầm soát Determine HIV – 1/2 bệnh viện 175 Khóa luận tốt nghiệp kỹ sư Cơng nghệ Sinh học Trường Đại học Nông Lâm TP.HCM Lê Đình Sáng 2005 - 2011 Bách khoa y học Trường Đại Học Y Hà Nội Lê Anh Thư Điều trị bệnh viêm khớp dạng thấp, tương lai Khoa xương khớp Bệnh Viện Chợ Rẫy TP.HCM Tài liệu từ internet Trường Bộ Binh Thủ Đức www.batkhuat.net/yhoc Từ trang website www.cardionet.vn 10 Từ trang website www.dieutridau.com 11 Từ trang website www.labtestsonline.org 12 Từ trang website www.pacifichospital.com 13 Y học cổ truyền www.yhoccotruyen.htmedsoft.com 14 Từ trang website Y Khoa Việt Nam www.ykhoanet.com 15 Từ trang website http://www.yteduphong.com 16 Từ trang website http://www.uphs.upenn.edu 35 PHỤ LỤC Các kit chẩn đoán bệnh viêm khớp RF (Rheumatoid Factors) 1.1 Nguyên tắc Kỹ thuật ngưng kết RF-latex kỹ thuật ngưng kết định tính bán định lượng xác định yếu tố dạng thấp huyết bệnh nhân Lượng nhỏ latex phủ IgG người xảy ngưng kết trộn với mẫu có chứa RF 1.2 Hóa chất Bảng 3.1 Thành phần kit Rheumatoid Factors Latex Reagent Huyền dịch hạt bao phủ phức hợp IgG người, (dịch có chứa Sodium azide 0,95 g/l) Positive Control Huyết người có chứa RF > 30 IU/ml Có chứa Sodium azide 0,95 g/l Negative Control Huyết động vật (có chứa Sodium azide 0,95 g/l)  Ghi chú: Tất chất sinh phẩm sử dụng pha chế Test control nên lắc trộn nhẹ nhàng thật kỹ trước sử dụng Để nhiệt độ phòng trước dùng Các sinh phẩm thử nghiệm cho kết âm tính với HBsAg HIV, HCV, nhiên trình thao tác cần thiết phải cẩn thận mẫu bệnh phẩm có khả lây nhiễm Hoá chất bảo quản - 8oC tư đứng Phiến nhựa ống hút bảo quản nhiệt độ phòng 1.3 Quy trình thao tác (Xem hình 3.5) Để thuốc thử mẫu cần thực nhiệt độ phòng Độ nhạy test bị giới hạn nhiệt độ thấp + Phương pháp định tính Nhỏ 50 l huyết bệnh nhân chứng âm dương vào vòng thử nghiệm phiến nhựa Nhỏ giọt huyền dịch kháng nguyên (tương ứng với 50 µl kháng nguyên) vào vòng thử nghiệm Trộn nhẹ nhàng que khuấy, dùng que khuấy riêng biệt cho mẫu Lắc tròn 80 - 100 vòng/phút phút + Phương pháp bán định lượng Nhỏ 50 µl nước muối sinh lý vào vòng 2, 3, 4, Nhỏ 50 µl huyết bệnh nhân vào vòng Dùng micropipette trộn hỗn dịch vòng 2, chuyển 50 µl sang vòng 3, tương tự chuyển sang vòng 4,…, bỏ 50 µl cuối Nhỏ giọt huyền dịch kháng nguyên vào vòng thử nghiệm Trộn nhẹ nhàng que khuấy, dùng que khuấy riêng biệt cho mẫu Lắc tròn 80 – 100 vòng/phút phút 1.4 Nhận định kết Kiểm tra mắt thường có xuất hay khơng xảy ngưng kết rõ ràng sau phút Quan sát hình thành đám kết cụm quanh vòng thử nghiệm sau đủ thời gian lắc Xuất ngưng kết cho biết lượng RF cô đặc lớn IU/ml Trong phương pháp bán định lượng, hiệu giá huyết định nghĩa mức pha loãng cao mà cho thấy kết dương tính Bảng 3.2 Quan sát kết ngưng kết Quan sát ngưng kết Đọc kết Kết cụm quanh vòng thử nghiệm Khơng ngưng kết Dương tính Âm tính Ghi nhận Có phản ứng Khơng phản ứng Đối với test bán định lượng, hiệu giá huyết ghi nhận giếng có độ pha lỗng lớn cho kết ngưng kết ASO (Anti – Streptolysin O) 2.1 Nguyên tắc Kỹ thuật ngưng kết ASO – latex kỹ thuật ngưng kết định tính bán định lượng xác định kháng thể ASO Lượng nhỏ latex phủ với streptolysin O xảy ngưng kết trộn với mẫu có chứa ASO 2.2 Hóa chất Bảng 3.3 Thành phần kit Anti – Streptolysin O Latex Reagent Huyền dịch hạt bao phủ Streptolysin O, (dịch có chứa Sodium azide 0,95 g/l) Positive Control Huyết người có chứa ASO đặc > 200 IU/ml Có chứa Sodium azide 0,95 g/l Negative Control Huyết động vật (có chứa Sodium azide 0,95 g/l)  Ghi chú: Tất chất sinh phẩm sử dụng pha chế Test control nên lắc trộn nhẹ nhàng thật kỹ trước sử dụng Để nhiệt độ phòng trước dùng Các sinh phẩm thử nghiệm cho kết âm tính với HBsAg HIV, HCV, nhiên trình thao tác cần thiết phải cẩn thận mẫu bệnh phẩm có khả lây nhiễm Hố chất bảo quản - 8oC tư đứng Phiến nhựa ống hút bảo quản nhiệt độ phòng 2.3 Quy trình thao tác (Xem hình 3.5) Để thuốc thử mẫu cần thực nhiệt độ phòng Độ nhạy test bị giới hạn nhiệt độ thấp + Phương pháp định tính Nhỏ 50 l huyết bệnh nhân chứng âm dương vào vòng thử nghiệm phiến nhựa Nhỏ giọt huyền dịch kháng nguyên vào vòng thử nghiệm Trộn nhẹ nhàng que khuấy, dùng que khuấy riêng biệt cho mẫu Lắc tròn 80 – 100 vòng/phút phút + Phương pháp bán định lượng Nhỏ 50 µl nước muối sinh lý vào vòng 2, 3, 4, Nhỏ 50 µl huyết bệnh nhân vào vòng Dùng micropipette trộn hỗn dịch vòng 2, chuyển 50 µl sang vòng 3, tương tự chuyển sang vòng 4,…, bỏ 50 µl cuối Nhỏ giọt huyền dịch kháng nguyên vào vòng thử nghiệm Trộn nhẹ nhàng que khuấy, dùng que khuấy riêng biệt cho mẫu Lắc tròn 80 – 100 vòng/phút phút 2.4 Nhận định kết Kiểm tra mắt thường có xuất hay không xảy ngưng kết rõ ràng sau phút Quan sát hình thành đám kết cụm quanh vòng thử nghiệm sau đủ thời gian lắc Xuất ngưng kết cho biết lượng ASO cô đặc lớn 200 IU/ml Trong phương pháp bán định lượng, hiệu giá huyết định nghĩa mức pha loãng cao mà cho thấy kết dương tính Bảng 3.4 Quan sát kết ngưng kết Quan sát ngưng kết Đọc kết Kết cụm quanh vòng thử nghiệm Khơng ngưng kết Dương tính Âm tính Ghi nhận Có phản ứng Khơng phản ứng Đối với test bán định lượng, hiệu giá huyết ghi nhận giếng có độ pha lỗng lớn cho kết ngưng kết CRP (C – reactive protein) 3.1 Nguyên tắc Kỹ thuật ngưng kết CRP – latex kỹ thuật ngưng kết định tính bán định lượng xác định CRP huyết người Lượng nhỏ latex phủ IgG dê kháng CRP người xảy ngưng kết trộn với mẫu có chứa CRP 3.2 Hóa chất Bảng 3.5 Thành phần kit CRP Latex Reagent Huyền dịch hạt bao phủ phức hợp IgG dê đơn dòng chứa antihCRP, pH 8,2, (dịch có chứa Sodium azide 0,95 g/l) Positive Control Huyết người có chứa CRP đặc > 200 IU/ml Có chứa Sodium azide 0,95 g/l Negative Control Huyết động vật (có chứa Sodium azide 0,95 g/l)  Ghi Tất chất sinh phẩm sử dụng pha chế Test control nên lắc trộn nhẹ nhàng thật kỹ trước sử dụng Để nhiệt độ phòng trước dùng Các sinh phẩm thử nghiệm cho kết âm tính với HBsAg HIV, HCV, nhiên trình thao tác cần thiết phải cẩn thận mẫu bệnh phẩm có khả lây nhiễm Hố chất bảo quản - 8oC tư đứng Phiến nhựa ống hút bảo quản nhiệt độ phòng 3.3 Quy trình thao tác (Xem hình 3.5) Để thuốc thử mẫu cần thực nhiệt độ phòng Độ nhạy test bị giới hạn nhiệt độ thấp + Phương pháp định tính Nhỏ 50 l huyết bệnh nhân chứng âm dương vào vòng thử nghiệm phiến nhựa Nhỏ giọt huyền dịch kháng nguyên vào vòng thử nghiệm Trộn nhẹ nhàng que khuấy, dùng que khuấy riêng biệt cho mẫu Lắc tròn 80 – 100 vòng/phút phút + Phương pháp bán định lượng Nhỏ 50 µl nước muối sinh lý vào vòng 2, 3, 4, Nhỏ 50 µl huyết bệnh nhân vào vòng Dùng micropipette trộn hỗn dịch vòng 2, chuyển 50 µl sang vòng 3, tương tự chuyển sang vòng 4,…, bỏ 50 µl cuối Nhỏ giọt huyền dịch kháng nguyên vào vòng thử nghiệm Trộn nhẹ nhàng que khuấy, dùng que khuấy riêng biệt cho mẫu Lắc tròn 80 – 100 vòng/phút phút 3.4 Nhận định kết Kiểm tra mắt thường có xuất hay không xảy ngưng kết rõ ràng sau phút Quan sát hình thành đám kết cụm quanh vòng thử nghiệm sau đủ thời gian lắc (Xem hình 3.6) Xuất ngưng kết cho biết lượng CRP cô đặc lớn mg/l Trong phương pháp bán định lượng, hiệu giá huyết định nghĩa mức pha loãng cao mà cho thấy kết dương tính Bảng 3.6 Quan sát kết ngưng kết Quan sát ngưng kết Đọc kết Ghi nhận Dương tính Có phản ứng Âm tính Khơng phản ứng Kết cụm quanh vòng thử nghiệm Khơng ngưng kết Đối với test bán định lượng, hiệu giá huyết ghi nhận giếng có độ pha lỗng lớn cho kết ngưng kết Hình 3.6 Quan sát kết ... samples were tested for ASO, RF and CRP The results of our study, the rate of arthritis was 19.2% Age 20 - 60 years old showed the highest positive rate (75.6%) with ASO test, followed by age less... rate with CRP, over 60 years old was 15.6% and less than 20 years old was 11.1% With RF test, women had the positive rate (56.7%) higher than males (43.3%), and the highest positive rate was... Cyclic Citrullinated Peptide CRP: C – reactive protein Cs: Cộng HLA: Human Leucocyte Antigen MHC: Major Histocompatibility Complex RF: Rheumatoid Factor WHO: World Health Organisation VKDT: Viêm khớp