PHÂN LẬP VÀ KHẢO SÁT CÁC YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN SỰ SINH TRƯỞNG CỦA NẤM MEN SACCHAROMYCES CEREVISIAE VAR. BOULARDII TỪ CHẾ PHẨM THUỐC BIOFLORA

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP PHÂN LẬP VÀ KHẢO SÁT CÁC YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN SỰ SINH TRƯỞNG CỦA NẤM MEN SACCHAROMYCES CEREVISIAE VAR BOULARDII TỪ CHẾ PHẨM THUỐC BIOFLORA Họ tên sinh viên: NGUYỄN THỊ THÚY LIỄU Ngành: BẢO QUẢN CHẾ BIẾN NÔNG SẢN THỰC PHẨM VÀ VI SINH THỰC PHẨM Niên khóa: 2007-2011 Tháng 08/2011 PHÂN LẬP VÀ KHẢO SÁT CÁC YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN SỰ SINH TRƯỞNG CỦA NẤM MEN SACCHAROMYCES CEREVISIAE VAR BOULARDII TỪ CHẾ PHẨM THUỐC BIOFLORA Tác giả NGUYỄN THỊ THÚY LIỄU Khóa luận đệ trình để đáp ứng yêu cầu cấp Kỹ sư ngành Bảo quản chế biến nông sản thực phẩm Vi sinh thực phẩm Giáo viên hướng dẫn: ThS DƯƠNG THỊ NGỌC DIỆP TS VŨ THỊ LÂM AN Tháng 08 năm 2011 i LỜI CẢM ƠN Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến: Ban Giám Hiệu Quý Thầy Cơ Trường Đại học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh, đặc biệt Thầy Cô Khoa Công nghệ Thực Phẩm tận tình hướng dẫn, truyền đạt kiến thức bổ ích kinh nghiệm quý báu cho em ThS Dương Thị Ngọc Diệp TS Vũ Thị Lâm An tận tình bảo, đóng góp nhiều ý kiến quý báu cho việc hoàn chỉnh luận văn Người thân, bạn bè động viên giúp đỡ nhiệt tình tơi thực đề tài Do hạn chế thời gian, điều kiện thí nghiệm kinh nghiệm thân tác giả nên q trình thực đề tài hồn thành luận văn khơng tránh khỏi thiếu sót Kính mong q thầy bạn bè đóng góp ý kiến để luận văn hồn chỉnh ii TĨM TẮT Đề tài “Phân lập khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng nấm men Saccharomyces cerevisiae var boulardii từ chế phẩm thuốc Bioflora” tiến hành Phòng thí nghiệm vi sinh Phòng thí nghiệm hóa sinh thuộc Khoa Cơng nghệ Thực Phẩm – Trường Đại học Nông Lâm Tp Hồ Chi Minh, thời gian thực từ tháng 03 đến tháng 07 năm 2011 Mục tiêu đề tài nhằm phân lập chủng nấm men S cerevisiae var boulardii (S boulardii) khảo sát khả chống chịu loài vi sinh điều kiện môi trường nhiệt độ cao, pH thấp có tác động enzyme thủy phân Đề tài tiến hành nghiên cứu vấn đề: phân lập tế bào nấm men S boulardii từ chế phẩm thuốc Bioflora, từ xây dựng đường cong sinh trưởng S boulardii khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ, pH, enzyme đến khả sinh trưởng phát triển lồi vi nấm Tất thí nghiệm bố trí theo kiểu khối hồn tồn ngẫu nhiên yếu tố với lần lặp lại Kết thí nghiệm cho thấy tế bào nấm men S boulardii sinh trưởng tốt môi trường YNB 37 oC, sinh khối đạt cực đại sau 12 nuôi cấy Tế bào S boulardii tồn thời gian dài nhiệt độ 60 oC, tỷ lệ sống sót sau ni cấy 94,48% Ở nhiệt độ 80 oC, tế bào chết hoàn tồn sau 30 phút ni cấy Bên cạnh đó, sinh trưởng phát triển nấm men S boulardii không chịu tác động nhiều môi trường pH giá trị 4, Với môi trường có giá trị pH 2, số lượng tế bào nấm men S boulardii giảm không nhanh Tỷ lệ sống sót sau 18 ni cấy 76,88% Đồng thời, tế bào nấm men S boulardii tồn mơi trường có diện enzyme tiêu hóa pepsin pH 1,9 iii MỤC LỤC Trang Trang tựa i LỜI CẢM ƠN .ii TÓM TẮT iii MỤC LỤC iii DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT .vii DANH SÁCH CÁC HÌNH VÀ BẢNG viii Chương MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu đề tài 1.3 Nội dung thực Chương 2.TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan probiotic 2.1.1 Lịch sử probiotic 2.1.2 Định nghĩa probiotic 2.1.3 Vai trò chế hoạt động probiotic 2.1.3.1 Vai trò probiotic 2.1.3.2 Cơ chế tác động probiotic 2.1.4 Tiêu chuẩn lựa chọn chủng vi sinh vật probiotic 2.1.5 Một vài kết ứng dụng probiotic 2.2 Tổng quan nấm men S boulardii 2.2.1 Lịch sử nghiên cứu S boulardii 2.2.2 Phân loại 2.2.3 Đặc điểm hình thái, kích thước cấu tạo tế bào 2.2.4 Cấu trúc gen 2.2.5 Đặc điểm sinh học iv 2.2.6 Vai trò S boulardii 10 2.2.7 Một số nghiên cứu nấm men dược tính S boulardii 12 2.2.7.1 Tính bám dính khả chống chịu tác động pH acid, enzyme tiêu hóa muối mật S boulardii 12 2.2.7.2 Tính kháng khuẩn 14 2.2.7.3 Các điểm giống khác cấu trúc phân tử đặc điểm sinh lý S boulardii S cerevisiae 15 2.2.7.4 Dược động học nấm men S boulardii 17 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 3.1 Thời gian địa điểm thí nghiệm 20 3.2 Nguyên liệu 20 3.3 Dụng cụ, thiết bị hóa chất sử dụng 20 3.4 Phương pháp thí nghiệm 21 3.4.1 Phân lập nấm men S boulardii từ chế phẩm thuốc Bioflora 21 3.4.1.1 Chuẩn bị mẫu 21 3.4.1.2 Phương pháp phân lập nấm men S boulardii 21 3.4.2 Xây dựng đường cong sinh trưởng S boulardii 22 3.4.2.1 Mục đích 22 3.4.2.2 Bố trí thí nghiệm 22 3.4.2.3 Chỉ tiêu theo dõi 22 3.4.2.4 Phương pháp thực 23 3.4.3 Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ, pH, enzyme đến khả sinh trưởng phát triển nấm men S boulardii 23 3.4.3.1 Ảnh hưởng nhiệt độ đến khả sinh trưởng phát triển nấm men S boulardii 23 3.4.3.2 Ảnh hưởng pH đến khả sinh trưởng phát triển nấm men S boulardii 23 3.4.3.3 Ảnh hưởng enzyme tiêu hóa đến khả sinh trưởng phát triển nấm men S boulardii 24 v 3.5 Xử lý số liệu 25 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 26 4.1 Phân lập nấm men S boulardii từ chế phẩm thuốc Bioflora 26 4.2 Khảo sát đường cong sinh trưởng S boulardii 27 4.3 Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ, pH, enzyme tiêu hóa đến khả sinh trưởng phát triển nấm men S boulardii 31 4.3.1 Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ đến khả sinh trưởng phát triển nấm men S boulardii 31 4.3.2 Khảo sát ảnh hưởng môi trường pH đến khả sinh trưởng phát triển nấm men S boulardii 33 4.3.3 Khảo sát ảnh hưởng enzyme tiêu hóa đến khả sinh trưởng phát triển nấm men S boulardii 35 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 38 5.1 Kết luận 38 5.2 Đề nghị 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO 39 PHỤ LỤC 412 vi DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT Saccharomyces boulardii: Saccharomyces cerevisiae var boulardii DNA: Deoxyribonucleic acid EIEC: Enteroinvasive Escherichia coli EHEC: Enterohemorrhagic Escherichia coli ETEC: Enterotoxigenic Escherichia coli EPEC: Enteropathogenic Escherichia coli FAO: Food and Agriculture Organization - Tổ chức Lương Nông Thế Giới IgA: Immunoglobulin A PCR: Polymerase Chain Reaction - Phản ứng khuếch đại gen RNA: Ribonucleic acid VSV: Vi sinh vật WHO: World Health Organization - Tổ chức y tế giới YMA: Yeast Malt Agar YNB: Yeast Nitrogen Base Ctv: Cộng tác viên vii DANH SÁCH CÁC HÌNH VÀ BẢNG Trang Hình 2.1 Tế bào S boulardii Hình 2.2 Khả sản sinh kháng thể IgA S boulardii so với tác nhân khác 10 Hình 2.3 Cơ chế kháng khuẩn S boulardii 14 Hình 2.4 Tăng trưởng S boulardii S.cerevisiae W303 môi trường YPD (2% glucose) 30 oC 37 oC 16 Hình 2.5 Sự sống sót S boulardii S cerevisiae W303 điều kiện 49 oC, 52 oC, môi trường mô dày môi trường mơ ruột 17 Hình 2.6 Thời gian loại thải S boulardii người dùng liều (1 g) 18 Hình 2.7 Tỷ lệ thu hồi S boulardii liều dùng 200 mg, g g 18 Hình 3.1 Pha loãng cấy trang mẫu 22 Hình 4.1 Khuẩn lạc nấm men S boulardii 26 Hình 4.2 Tế bào S boulardii kính hiển vi 27 Hình 4.3 Đường cong sinh trưởng S boulardii mơi trường YNB 28 Hình 4.4 Đường cong sinh trưởng S boulardii môi trường YNB 29 Hình 4.5 Đường cong tăng trưởng S boulardii 28 oC 37 oC 48 30 Hình 4.6 Ảnh hưởng nhiệt độ đến khả sinh trưởng phát triển nấm men S boulardii 31 Hình 4.7 Tỷ lệ sống sót S boulardii sau 30 phút nuôi cấy môi trường YNB nhiệt độ 60 oC 32 Hình 4.8 Tỷ lệ sống sót S boulardii sau 30 phút nuôi cấy môi trường YNB nhiệt độ 80 oC 33 Hình 4.9 Sơ đồ biểu diễn ảnh hưởng pH đến khả sinh trưởng phát triển nấm men S boulardii 34 viii Hình 4.10 Tỷ lệ sống sót S boulardii theo thời gian tăng sinh môi trường YNB với điều kiện pH 35 Hình 4.11 Sơ đồ biểu diễn ảnh hưởng enzyme tiêu hóa đến khả sinh trưởng phát triển nấm men S boulardii 36 Hình 4.12 Tỷ lệ sống sót S boulardii theo thời gian tăng sinh môi trường YNB với điều kiện pH 1,9 có enzyme tiêu hóa 37 Bảng 2.1 Khả chịu đựng pH thấp, muối mật khả bám dính dòng S boulardii 18 dòng S cerevisiae 13 ix Không nên trộn thuốc vào dung dịch thực phẩm nóng (trên 50 oC), hay q lạnh (nước đá) Ultra-Levure có chứa tế bào men nấm sống Không pha với cồn Tránh giữ thuốc nơi ẩm nóng • Tương tác thuốc Do có chất nấm, S boulardii không dùng chung với thuốc kháng sinh kháng nấm đường uống tồn thân • Liều lượng cách dùng Liều thông thường viên ngày, chia làm lần Đối với trẻ em tuổi, không nên cho uống trọn viên nang mà nên trút phần bột thuốc viên nang vào chai sữa thực phẩm khác để uống • Bảo quản Bảo quản tránh ẩm nóng 51 PHỤ LỤC 3: THÀNH PHẦN MƠI TRƯỜNG NI CẤY 3.1 Mơi trường Yeast Nitrogen Base (YNB) pH = 5,4 ± 0,2 Khối lượng Thành phần Ammonium sulfate g/l L_Histidine HCl 10 mg/l DL_Methyonine 20 mg/l DL_Tryptophan 20 mg/l Biotin μg /l 400 μg /l Calcium pantothenate μg /l Folic acid Niacin 400 μg /l p-Aminobenzoic acid 200 μg /l Pyridixine HCl 400 μg /l Riboflavin 200 μg /l Thiamine HCl 400 μg /l Inositol mg/l Boric acid 500 μg /l Copper sulfate 40 μg /l Potassium iodide 100 μg /l Ferric chloride 200 μg /l Manganese sulfate 400 μg /l Sodium molybdate 200 μg /l Zinc sulfate 400 μg /l Potassium phosphate monobasic g/l Magnesium sulfate 0,5 g/l Sodium chloride 0,1 g/l Calcium chloride 0,1 g/l 52 3.2 Môi trường Yeast Malt Agar (YMA) Khối lượng Thành phần Yeast Extract g/l Malt Extract g/l Bacteriological Peptone g/l Bacteriological Agar 15 g/l Glucose 10 g/l PHỤ LỤC 4: PHƯƠNG PHÁP LÀM TIÊU BẢN NẤM MEN 4.1 Thuốc thử • Crystal violet (tím kết tinh) - Dung dịch A: Crystal violet : 2g Ethanol 95% : 20 ml - Dung dịch B: Ammonium oxalate: Nước cất 0,8 g : 80 ml Trộn dung dịch A B, lọc qua giấy lọc thô, giữu nhiệt độ phòng chai màu nâu • Gentiant violet (có thể dùng thay cho Crystal violet) Gentiant violet: 1g Ethanol 95%: 10 ml Phenol: 2g Nước cất: 100 ml • Fushin theo Zil (Zichl) Fushin base : 1g Phenol tinh thể: 5g Ethanol 95% : 10 ml Glycerin : - giọt Nước cất : 100 ml 53 • Xanh methylen bão hòa cồn Cho g xanh methylen vào 100 ml cồn 90%, lắc để yên vài ngày, ngày lắc vài lần, sau lọc dung dịch xanh methylen bão hòa cồn • Xanh methylen theo Lơffle (Loeffler) Xanh methylen bão hòa cồn 30 ml Dung dịch KOH 1% 1ml Nước cất 100 ml 4.2 Làm tiêu nấm men theo phương pháp nhuộm đơn Gồm bước: • Bước 1: Làm vết bôi (trải trùng) - Dùng bút sáp để ghi tên mẫu số nhận diện, ngày thử nghiệm Vẽ vòng tròn để giới hạn vùng lam phết nấm men - Cho giọt nước cất vô trùng đặt vào vòng tròn vẽ, dùng que cấy vòng lấy lượng nhỏ nấm men từ khuẩn lạc dàn mỏng với nước cất vòng tròn Để dịch men tự khơ hồn tồn • Bước 2: Cố định vết bơi Hơ mặt lam lính qua lại lửa đến lần, tránh không để tiêu q nóng • Bước 3: Nhuộm màu Dùng Crystal violet (Gentiant violet) Fushin Xanh methylen phủ lên lam kính vị trí vết bơi, để n phút, sau rửa với nước cất Dùng giấy thấm để thấm khơ để khơ tự nhiên • Bước 4: Quan sát tế bào nấm men kính hiển vi (vật kính 100) với vật kính dầu PHỤ LỤC 5: PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH CÁC CHỈ TIÊU 5.1 Định lượng nấm men phương pháp đếm khuẩn lạc 5.1.1 Nguyên tắc Cấy thể tích xác định mẫu huyền phù vi sinh vật lên môi trường thạch hộp petri Mơi trường chọn có thành phần chất đặc trưng thích hợp cho lồi vi sinh vật cần định lượng phát triển Sau khoảng thời gian nuôi cấy, bề mặt 54 thạch xuất khuẩn lạc ta quan sát mắt thường Dựa vào số khuẩn lạc đếm được, thể tích mẫu cấy hệ số pha lỗng, ta suy số khuẩn lạc có 1ml mẫu khảo sát ban đầu Ưu điểm phương pháp định lượng tế bào sống có mẫu khảo sát ban đầu Tuy nhiên, phương pháp có nhược điểm thời gian dài, tốn chi phí hóa chất 5.1.2 Cách tiến hành Để xác định mật độ tế bào đơn vị thể tích mơi trường YNB chúng tơi tiến hành phương pháp cấy trang theo bước sau: • Bước 1: Chuẩn bị mẫu môi trường thạch Môi trường YMA để gieo cấy, nước muối sinh lý 0,85% hấp tiệt trùng 121 oC 15 phút Tiến hành pha loãng mẫu với độ pha loãng khác - Dung dịch mẫu 10-1: Hút 1ml dung dịch mẫu lỏng cho vào ml nước pepton Lắc 2-3 phút, thu dung dịch mẫu 10-1 - Dung dịch mẫu 10-2, 10-3, 10-4…: Hút xác ml dung dịch mẫu thử 10-1 cho sang ống nghiệm chứa sẵn ml nước pepton Lắc 2-3 phút, thu dung dịch 10-2 Tiếp tục làm tương tự vậy, ta thu dung dịch mẫu tương ứng 10-3, 10-4… • Bước 2: Ni cấy mẫu Hình 6: Pha lỗng cấy mẫu Ghi ký hiệu mẫu nồng độ dung dịch mẫu thử lên đĩa thạch YMA 55 Chọn nồng độ pha loãng liên tiếp mà dự kiến chứa số khuẩn lạc nằm khoảng 15 - 300 khuẩn lạc đĩa Mỗi bậc pha lỗng dùng micropipet vơ trùng hút xác 0,1ml nhỏ lên bề mặt đĩa thạch YMA hong khô Dùng que trang vô trùng để dàn mẫu bề mặt thạch Tiến hành cấy mẫu độ pha loãng với hai đĩa thạch giống (lặp lại hai lần) Tiếp theo, chờ cho bề mặt thạch khô (15-20 phút), tiến hành bao hộp petri, lật úp hộp đặt chúng vào tủ ấm Ủ 37 oC thời gian 48 5.1.3 Tính kết Kết thúc thời gian ủ, đếm số khuẩn lạc phát triển môi trường thạch đĩa Mật độ tế bào tính theo cơng thức sau: Trong đó: C (CFU/ml): số tế bào vi khuẩn ml mẫu N (CFU): tổng số khuẩn lạc đếm đĩa n i : số đĩa cấy nồng độ pha loãng thứ i V i (ml): thể tích mẫu cấy đĩa f i : độ pha loãng thứ i 5.2 Phương pháp xác định đường cong sinh trưởng 5.2.1 Nguyên tắc Dựa vào phát triển tế bào nấm men thời điểm khác 5.2.2 Cách tiến hành Chuẩn bị mẫu: Lấy khuẩn lạc nấm men S boulardii đưa vào 12 ml dịch YNB, để tăng sinh qua đêm 37 oC Sau thời gian tăng sinh 12-13 giờ, tiến hành hút ml mẫu cho vào ml dịch YNB tiến hành nghiên cứu khả sinh trưởng, phát triển Khoảng lấy mẫu pha lỗng cấy trang mơi trường YMA Dùng phương pháp đếm khuẩn lạc xác định mật độ tế bào (CFU/ml) có mẫu Vẽ đồ thị đường cong sinh trưởng log cfu/ml – trục tung thời gian – trục hồnh 56 PHỤ LỤC 6: KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM 6.1 Kết khảo sát đường cong sinh trưởng nấm men S boulardii Thời gian (h) -4 10 10-5 10-6 10-4 10-5 10-6 12 10-5 10-6 10-7 14 CFU/đĩa Nồng độ 10-4 10-5 7,991 1,473 2,309 1,282 108 108 108 1,688 108 8,227 1,418 108 1,418 108 8,152 1,423 108 1,423 108 8,153 202 228 22 26 kđđ 117 122 14 252 218 23 15 183 239 17 52 kđđ 79 83 12 134 115 16 17 135 145 17 15 144 137 15 17 157 135 15 20 Kđđ 53 65 2,764 2,173 2,232 107 107 107 10-7 24 9,8 107 252 297 29 30 Kđđ 107 80 7 130 154 24 16 10-6 10-7 7,378 Lần1 10-5 10-6 2,39 107 Lần3 10-5 10-5 Log (CFU/ml) Lần2 10-7 18 CFU/ml trung bình Lần1 10-6 16 CFU/ml 115 125 14 113 87 115 147 13 87 81 Lần2 9,35 107 1,195 108 Lần3 8,1 107 1,2 108 1,31 108 1,486 108 1,332 108 8,125 1.108 8,4 107 5,9 107 8,1.107 7,908 57 10-6 10-7 30 10-4 10-5 10-6 10-7 36 51 10-6 10-4 10-6 10-7 10-6 10-7 54 32 24 10-4 10-5 10-4 10-5 10-6 1 Kđđ 50 53 36 31 179 146 20 22 Kđđ 50 39 2,85 107 5,15 107 4,15 107 7,618 2,55 107 1,123 107 1,836 107 7,264 197 189 21 20 2,8 107 1,941 107 2,371 107 7,375 172 201 19 23 3,35 107 1,886 107 2.618 107 7,418 151 163 21 15 1,668 1,591 107 107 1,63 107 7,212 169 10-5 10-5 48 24 33 0 10-4 10-7 42 14 13 0 4,45 107 32 46 58 6.2 Kết khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ đến khả sinh trưởng phát triển nấm men S boulardii Nhiệt độ (oC) Thời gian (phút) CFU/đĩa Nồng độ CFU/ml Lần1 Lần2 Lần3 Lần1 -4 10 10-2 263 272 293 261 42 26 37 24 4 Kđđ 265 226 31 22 23 17 Kđđ 236 253 32 27 34 27 4 Kđđ 10-3 Kđđ 10-4 210 244 297 227 260 40 23 34 16 Kđđ Kđđ Kđđ 10-5 10-6 37 30 10-4 10-5 10-6 60 10-4 10-5 10-6 60 30 10-5 2,564 107 7,409 2,451 107 7,389 2,697 107 7,431 2,111 107 7,324 Lần3 183 2,886 2,65 2,155 107 107 107 239 17 35 232 2,7 2,409 2,245 107 107 107 219 25 18 192 3,3 2,468 2,323 107 107 107 271 19 29 2 1,686 2,185 2,468 107 107 107 Kđđ 8,4 106 1,575 106 107 30 0 0 60 0 0 10-3 10-4 80 Log (CFU/ml) 5,85 106 60 10-2 Lần2 CFU/ml trung bình 61 56 87 81 165 150 59 6.3 Kết khảo sát ảnh hưởng pH đến khả sinh trưởng phát triển nấm men S boulardii pH Thời gian (giờ) -4 10 10-5 10-6 10-3 10-4 10-5 12 10-6 10-3 10-4 10-5 10-6 18 10-2 10-3 10-4 24 10-1 10-2 10-3 CFU/đĩa Nồng độ Lần3 243 257 22 25 Kđđ 300 270 34 24 Kđđ 2,85 107 2,73 107 7,436 1,49 107 9,62 106 6,983 32 30 0 112 111 14 16 268 2,486 2,855 107 107 293 25 41 Kđđ 3,1 1,086 106 107 152 146 13 kđđ 28 22 0 253 298 34 31 Kđđ 71 89 10 15 25 Lần2 Log (CFU/ml) Lần2 260 299 22 36 Lần1 CFU/ml trung bình Lần1 10-4 10-5 CFU/ml Lần3 2,5 106 2,805 106 9,6 106 4,968 106 6,696 104 88 285 kđđ 253 26 35 56 45 Kđđ Kđđ 2,8 105 2,723 105 1,01 106 5,208 105 5,717 8.104 4,8.104 2,56 106 8,96 105 5,952 55 41 Kđđ 254 258 Kđđ 107 9,7.107 8,9.107 6,867 107 7,837 102 92 100 78 60 10-6 10-7 12 10-4 10-5 10-6 10-7 18 0 10-3 48 51 7 Kđđ 10-4 10-5 73 66 -6 24 10 10-3 Kđđ 10-4 10-5 6 10-4 10-5 10-6 10-7 12 15 12 1 10-4 10-5 10-6 10-7 18 49 55 10-3 10-4 53 82 1 Kđđ 10 Kđđ Kđđ 141 187 183 18 21 27 15 Kđđ Kđđ 92 16 Kđđ 146 122 12 13 Kđđ 86 69 Kđđ 72 76 Kđđ 106 111 11 10 116 111 14 Kđđ Kđđ 158 181 23 26 194 185 18 16 Kđđ 4,95 107 8,318 107 1,859 108 1,062 108 8,026 6,95 107 4,909 107 1,34 108 8,42 107 7,925 5,2 107 7,75 106 7,4 107 4,458 107 7,649 7,5 106 1,085 108 1,135 108 7,65 107 7,886 6,75 107 1,764 108 1,877 108 1,439 108 8,158 7,8 107 1,205 108 1,32 108 3,305 108 8,519 Kđđ 61 10-5 77 79 10-6 24 10-3 10-4 Kđđ 10-5 249 276 33 30 10-6 10-3 10-4 10-5 10-6 12 10-3 10-4 10-5 10-6 18 39 39 3 0 10-3 10-4 10-5 21 32 1 Kđđ 124 117 Kđđ 81 73 16 Kđđ 213 214 22 30 Kđđ 79 113 58 64 35 38 10-3 10-4 10-5 1,22 108 1,172 108 8,069 123 121 Kđđ Kđđ 3,9 106 3,65 107 2,177 107 2,072 107 7,316 2,65 106 9,6 107 6,1 107 5,322 107 7,726 2,436 107 8,3 107 1,245 108 7,729 107 7,888 4,15 107 7,5 107 1,545 108 9,033 107 7,956 Kđđ 214 263 22 37 100 66 Kđđ Kđđ 130 119 14 12 Kđđ 39 44 65 85 166 143 10-6 24 123 141 12 13 Kđđ 2,218 7,727 108 106 62 6.4 Kết khảo sát ảnh hưởng Enzyme tiêu hóa đến khả sinh trưởng phát triển nấm men S boulardii Enz yme Thời gian (giờ) 10 Kđđ Kđđ 4,35.10 4,9.107 7,665 10-5 4,625 107 39 48 Kđđ 51 47 Kđđ 1,545.107 1,409.107 1,477 107 7,169 159 153 28 14 Kđđ 154 110 29 17 Kđđ 1,286.107 8,25.106 10,555 106 7,023 118 128 15 22 Kđđ 78 87 14 Kđđ 2,073.106 1,3.106 1,687 106 6,227 192 219 25 20 Kđđ 129 131 13 Kđđ 1,115.106 4,65.105 7,9.105 5,898 103 120 Kđđ 48 45 Kđđ 9,95.106 1,79.107 13,925 106 7,144 103 96 Kđđ 165 193 Kđđ 6,7.106 8,1.106 7,4.106 6,869 75 59 79 83 10-3 10-3 10-4 10-5 10-2 10-3 10-4 24 10-1 10-2 10-3 Bổ sung enzy me 10-2 Lần1 Log (CFU/ml) Lần2 10-5 18 CFU/ml trung bình Lần1 10-4 12 CFU/ml -4 10-6 Ko bổ sung Enz yme CFU/đĩa Nồng độ Lần2 10-3 10-4 12 10-2 10-3 10-4 63 18 24 10-1 10-2 10-3 Kđđ Kđđ 1,08.106 2,655.106 1,87 106 6,272 216 10-1 10-2 10-3 Kđđ 274 257 Kđđ 1,22.106 1,25 106 1,235 106 6,092 124 120 113 137 PHỤ LỤC 7: KẾT QUẢ THỐNG KÊ 7.1 Kết phân tích thống kê khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ đến khả sinh trưởng phát triển nấm men S boulardii • Bảng ANOVA Two-way Analysis of Variance Analysis of Variance for Log(cfu/ml) Source DF SS MS Khoi 0,0133 0,0133 Nhiet 70,8426 35,4213 Error 0,0401 0,0201 Total 70,8959 F 0,66 1765,94 P 0,502 0,001 • Bảng so sánh khác biệt nghiệm thức LSD Level N 2 Pooled StDev = Mean 7.4100 7.1620 0.0000 StDev 0.0297 0.2291 0.0000 0.1334 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ -(-*) (-*) (*) + -+ -+ -+ -0.0 2.5 5.0 7.5 7.2 Kết phân tích thống kê khảo sát ảnh hưởng pH đến khả sinh trưởng phát triển nấm men S boulardii • Bảng ANOVA Two-way Analysis of Variance Analysis of Variance for Log(cfu/ml) Source DF SS MS Khoi 0,997 0,332 pH 6,119 2,040 Error 2,659 0,295 Total 15 9,776 F 1,12 6,90 64 P 0,390 0,010 • Bảng so sánh khác biệt nghiệm thức LSD Level N 4 4 Mean 6.3370 7.6458 7.9322 7.6383 StDev 0.5997 0.4697 0.6621 0.4474 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ ( * -) ( -* ) ( * ) ( * -) -+ -+ -+ 7.3 Kết phân tích thống kê khảo sát ảnh hưởng Enzyme tiêu hóa đến khả sinh trưởng phát triển nấm men S boulardii • Bảng ANOVA Two-way Analysis of Variance Analysis of Variance for Log(cfu/ Source DF SS MS Khoi 1,8352 0,6117 Enzyme 0,0005 0,0005 Error 0,0316 0,0105 Total 1,8672 F 58,16 0,04 P 0,004 0,849 • Bảng so sánh khác biệt nghiệm thức LSD Level N 4 Pooled StDev = Mean 6.5792 6.5942 0.5578 StDev 0.6145 0.4946 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ ( * -) ( * ) -+ -+ -+ -+ 6.00 6.40 6.80 7.20 65 ...PHÂN LẬP VÀ KHẢO SÁT CÁC YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN SỰ SINH TRƯỞNG CỦA NẤM MEN SACCHAROMYCES CEREVISIAE VAR BOULARDII TỪ CHẾ PHẨM THUỐC BIOFLORA Tác giả NGUYỄN THỊ THÚY... tài Phân lập khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng nấm men Saccharomyces cerevisiae var boulardii từ chế phẩm thuốc Bioflora tiến hành Phòng thí nghiệm vi sinh Phòng thí nghiệm hóa sinh. .. S boulardii phương diện chuyên môn vi sinh công nghệ thực phẩm, tiến hành thực đề tài: Phân lập khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng nấm men Saccharomyces cerevisiae var boulardii từ chế