PHÂN LẬP, ĐỊNH DANH ASPERGILLUS FLAVUS CÓ TRONG BẮP VÀ KHẢO SÁT KHẢ NĂNG SINH AFLATOXIN CỦA CÁC CHỦNG PHÂN LẬP ĐƯỢC

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA CHĂN NI – THÚ Y - X W - LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP PHÂN LẬP, ĐỊNH DANH ASPERGILLUS FLAVUS CÓ TRONG BẮP VÀ KHẢO SÁT KHẢ NĂNG SINH AFLATOXIN CỦA CÁC CHỦNG PHÂN LẬP ĐƯỢC Sinh viên thực : VÕ THỊ ĐAN TRÂM Ngành : Dược Thú Y Niên khóa : 2004 - 2009 - 2009 - PHÂN LẬP, ĐỊNH DANH ASPERGILLUS FLAVUS CÓ TRONG BẮP VÀ KHẢO SÁT KHẢ NĂNG SINH AFLATOXIN CỦA CÁC CHỦNG PHÂN LẬP ĐƯỢC Tác giả VÕ THỊ ĐAN TRÂM Khóa luận đệ trình để đáp ứng yêu cầu cấp Bác sỹ ngành Thú Y Giáo viên hướng dẫn TS LÊ ANH PHỤNG - 2009 i XÁC NHẬN CỦA GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN Họ tên sinh viên thực hiện: Võ Thị Đan Trâm Tên đề tài: “Phân lập, định danh Aspergillus flavus có bắp khảo sát khả sinh aflatoxin chủng phân lập được” Đã hoàn thành luận văn tốt nghiệp theo yêu cầu giáo viên hướng dẫn ý kiến nhận xét đóng góp Hội đồng chấm thi tốt nghiệp khóa ngày 17 – 18/09/2009 Giáo viên hướng dẫn TS Lê Anh Phụng ii LỜI CẢM ƠN Kính dâng lên ba mẹ người có công sinh thành, yêu thương dạy dỗ nên người Xin chân thành nhớ ơn TS Lê Anh Phụng tận tình hướng dẫn, giúp đỡ em thực hoàn tất đề tài Xin cảm ơn Ban giám hiệu Ban chủ nhiệm Khoa Chăn nuôi – Thú y trường Đại học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh hỗ trợ tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt trình học tập Trân trọng biết ơn q thầy tận tình giảng dạy truyền đạt kiến thức kinh nghiệm quý báu cho em suốt thời gian em học tập trường Xin cảm ơn quý thầy cô thuộc môn Vi sinh tạo điều kiện cho em hoàn thành đề tài Cảm ơn bạn lớp Dược Thú Y 30 chia sẻ khó khăn, vui buồn sống sinh viên giảng đường Đại học Nông Lâm yêu dấu iii TÓM TẮT LUẬN VĂN Đề tài: “Phân lập, định danh Aspergillus flavus có bắp khảo sát khả sinh aflatoxin chủng phân lập được”, thực phòng thực hành vi sinh, khoa Chăn ni – Thú y, trường Đại học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh thời gian từ tháng 03/2009 đến tháng 07/2009 Qua trình khảo sát 30 mẫu bắp nguyên liệu lấy ngẫu nhiên từ đại lý cửa hàng bán lẻ thức ăn gia súc, thu nhận kết sau: • Tỷ lệ mẫu bắp bị nhiễm nấm mốc 100% với TSKL nấm mốc trung bình có g bắp 42,66 x 104 • Tỷ lệ mẫu bắp bị nhiễm A flavus/ parasiticus 93% với TSKL A flavus/ parasiticus trung bình có g bắp 1,82 x 104 • Tỷ lệ khuẩn lạc A flavus/ parasiticus so với TSKL nấm mốc 75,35% • Sau phân lập: thu 56 chủng nghi ngờ A flavus/ parasiticus • Sau định danh: có 100% chủng phân lập A flavus • Có 20/56 chủng phân lập có khả sinh aflatoxin mơi trường thạch nước cốt dừa, chiếm tỷ lệ 35,71% • Trong 20 chủng có khả sinh aflatoxin, chúng tơi chọn chủng xem có khả sinh độc tố mạnh để nuôi cấy môi trường gạo tiến hành định hàm lượng aflatoxin sinh chủng Kết hàm lượng aflatoxin sinh ra: cao 39.216 ppb (chủng 14) thấp 3.367 ppb (chủng 52) iv MỤC LỤC Trang Trang tựa i Xác nhận giáo viên hướng dẫn .ii Lời cảm ơn iii Tóm tắt luận văn iv Mục lục v Danh sách từ viết tắt .vii Danh sách bảng viii Danh sách biểu đồ ix Danh sách hình .x Chương 1: MỞ ĐẦU .1 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích .2 1.3 Yêu cầu .2 Chương 2: TỔNG QUAN .3 2.1 Nấm mốc độc tố nấm mốc .3 2.1.1 Nấm mốc .3 2.1.2 Độc tố nấm mốc 2.2 Nấm mốc A flavus .3 2.2.1 Phân loại 2.2.2 Đặc điểm hình thái 2.2.3 Đặc điểm nuôi cấy .5 2.2.4 Đặc điểm sinh thái .5 2.2.5 Đặc điểm sinh trưởng phát triển .5 2.3 Độc tố aflatoxin 2.3.1 Lịch sử phát aflatoxin 2.3.2 Các loài nấm mốc có khả sinh aflatoxin 2.3.3 Đặc điểm aflatoxin v 2.3.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến tạo aflatoxin nấm mốc 2.4 Bệnh nhiễm độc aflatoxin 10 2.4.1 Cơ chế gây bệnh 10 2.4.2 Aflatoxicosis .11 2.5 Các phương pháp phát định lượng aflatoxin 12 2.5.1 Phương pháp sinh vật học 12 2.5.2 Phương pháp lý hóa 13 2.5.3 Phương pháp miễn dịch học 14 2.6 Giải pháp nhằm hạn chế tác hại aflatoxin 14 2.6.1 Phòng nấm mốc xâm nhập phát triển .14 2.6.2 Biện pháp loại trừ, vơ hiệu hóa tính độc hại aflatoxin 15 2.7 Một số cơng trình nghiên cứu có liên quan 17 Chương 3: NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .18 3.1 Thời gian địa điểm thực đề tài .18 3.2 Vật liệu thí nghiệm 18 3.3 Nội dung đề tài 19 3.4 Phương pháp nghiên cứu 19 3.5 Chỉ tiêu khảo sát .25 3.6 Phương pháp xử lý số liệu 25 Chương 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 26 4.1 Kết đếm TSKL nấm mốc TSKL nghi ngờ A flavus/ parasiticus 26 4.2 Phân lập – Định danh nhóm A flavus 30 4.3 Khảo sát khả sinh aflatoxin chủng A flavus định danh 36 CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 40 5.1 Kết luận 40 5.2 Đề nghị .41 TÀI LIỆU THAM KHẢO 42 PHỤ LỤC .45 vi DANH SÁCH CÁC TỪ VIẾT TẮT • A flavus: Aspergillus flavus • AFB1: aflatoxin B1 • AFPA: Aspergillus Flavus and Parasiticus Agar • ctv: cộng tác viên • CYA: Czapek Yeast extract Agar • FAO: Food and Agriculture Organization (Tổ chức Lương Nơng Quốc tế) • IARC: International Agency for Research on Cancer (Tổ chức bệnh Ung thư Quốc tế) • LD50: Lethal Dose – 50 (liều gây chết 50% tổng đàn) • ppb: part per billion (phần tỷ) • TAGS: thức ăn gia súc • TSKL: tổng số khuẩn lạc • UV: Ultra violet (tia cực tím) vii DANH SÁCH CÁC BẢNG Trang Bảng 2.1: Một số lồi nấm mốc có khả sản sinh aflatoxin Bảng 2.2: Các tính chất lý hóa số aflatoxin Bảng 2.3: Liều gây chết LD50 aflatoxin B1 cho uống lần 11 Bảng 2.4: Khả gây ung thư gan aflatoxin B1 động vật thí nghiệm 12 Bảng 2.5: Hàm lượng tối đa độc tố aflatoxin B1 aflatoxin tổng số thức ăn hỗn hợp hoàn chỉnh cho gia súc, gia cầm 16 Bảng 3.1: Bố trí số lượng mẫu 19 Bảng 4.1: TSKL nấm mốc TSKL nghi ngờ A flavus/ parasiticus g bắp 26 Bảng 4.2: Tỷ lệ phân lập chủng nghi ngờ A flavus/ parasiticus từ mẫu bắp 30 Bảng 4.3: Kết định danh xác định nấm mốc A flavus từ mẫu bắp 31 Bảng 4.4: Đặc điểm hình thái khuẩn lạc A flavus theo thời gian nuôi cấy 31 Bảng 4.5: Kích thước khuẩn lạc chủng A flavus theo thời gian ni cấy .32 Bảng 4.6: Kích thước thành phần sợi nấm .33 Bảng 4.7: Tỷ lệ chủng A flavus có khả phát huỳnh quang mơi trường nước cốt dừa .36 Bảng 4.8: Hàm lượng aflatoxin thu chủng A flavus sau ngày nuôi cấy môi trường gạo 38 viii DANH SÁCH CÁC BIỂU ĐỒ Trang Biểu đồ 4.1: Trung bình TSKL nấm mốc TSKL nghi ngờ A flavus/ parasiticuscó g bắp (tính theo log số 10) .27 Biểu đồ 4.2: Kích thước khuẩn lạc chủng A flavus theo thời gian nuôi cấy 32 Biểu đồ 4.3: Tỷ lệ chủng A flavus phát huỳnh quang môi trường thạch nước cốt dừa sau ngày nuôi cấy 36 ix Qua bảng 4.8, nhận thấy: chủng phân lập đánh giá có khả phát huỳnh quang mơi trường thạch nước cốt dừa có khả sinh aflatoxin nuôi cấy môi trường gạo Hàm lượng aflatoxin sinh cao 39.216 ppb (chủng 14) thấp 3.367 ppb (chủng 52) So sánh với kết số tác giả khác (cũng nuôi cấy chủng A flavus môi trường gạo): - Nguyễn Lan Thanh (2004): hàm lượng aflatoxin cao sinh chủng phân lập 18.090 ppb - Trần Bắc Vi (2005): hàm lượng aflatoxin cao sinh 50.633 ppb - Phan Thị Thu Phương (2007): hàm lượng aflatoxin cao sinh 20.921 ppb Kết hàm lượng aflatoxin sinh qua khảo sát tác giả cao Điều cho thấy: tự nhiên, bắp nhiễm số chủng nấm mốc A flavus độc lực mạnh, nguy gây nhiễm độc cho gia súc, gia cầm cho ăn nguyên liệu bắp Kết khảo sát tác giả mở tiềm sản xuất lượng lớn aflatoxin (từ việc ni cấy nấm mốc có khả sinh aflatoxin) để sử dụng nghiên cứu lĩnh vực độc chất học 39 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Số lượng tỷ lệ nhiễm nấm mốc bắp - TSKL nấm mốc trung bình có g bắp 42,66 x 104 Kết cao so với mức quy định cho phép FAO (1995) - TSKL A flavus/ parasiticus trung bình có g bắp 1,82 x 104 - Tỷ lệ khuẩn lạc A flavus/ parasiticus so với TSKL nấm mốc 75,35% - Tỷ lệ phân lập A flavus/ parasiticus (tỷ lệ nhiễm A flavus/ parasiticus) từ 30 mẫu bắp 93% Định danh A flavus - 56 chủng phân lập định danh A flavus dựa đặc điểm hình thái (Raper Fennell, 1965) - Kích thước khuẩn lạc trung bình chủng A flavus ngày thứ 3, thứ thứ 31,05 mm, 53,75 mm 69,88 mm - Kích thước trung bình thành phần sợi nấm: + Cuống sinh bào tử: 984,2 µm + Thể bọng: chiều dài: 36,01 µm, đường kính: 33,12 µm + Thể bình: Lớp 1: chiều dài: 6,53 µm, đường kính: 3,44 µm Lớp 2: chiều dài: 6,84 µm, đường kính: 3,52 µm + Đường kính bào tử: 4,42 µm Khả sinh aflatoxin - Có 20/56 chủng phân lập có khả sinh aflatoxin mơi trường thạch nước cốt dừa, chiếm tỷ lệ 35,71% - Hàm lượng aflatoxin thu cao sau nuôi cấy chủng A flavus môi trường gạo 39.216 ppb (chủng 14) 40 5.2 Đề nghị - Sử dụng chủng 14 (đã chúng tơi giữ giống phòng vi sinh) để nuôi cấy tiến hành thực quy trình chiết tách aflatoxin, từ sản xuất lượng lớn aflatoxin - Tiếp tục phân lập tuyển lựa chủng A flavus có khả sinh độc tố cao để ứng dụng vào việc sản xuất aflatoxin, phục vụ cho nghiên cứu độc chất học 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO Phần tiếng Việt Bộ Khoa Học, Công Nghệ Môi Trường, 1986 Lấy mẫu chuẩn bị mẫu TCVN 4325-86 Dương Duy Đồng, Dương Thanh Liêm Bùi Huy Như Phúc, 2006 Thức ăn dinh dưỡng động vật Nhà xuất Nơng Nghiệp, Tp Hồ Chí Minh Bùi Xuân Đồng, 2003 Các phương pháp phòng chống nấm mốc Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, Hà Nội Bùi Xuân Đồng Nguyễn Huy Văn, 2003 Vi nấm dùng công nghệ sinh học Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, Hà Nội Bùi Xuân Đồng, 2004 Nguyên lý phòng chống nấm mốc mycotoxin Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, Hà Nội Đậu Ngọc Hào Lê Thị Ngọc Diệp, 2003 Nấm mốc độc tố aflatoxin thức ăn chăn nuôi Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội Đậu Ngọc Hào, 2007 Giáo trình Độc chất học thú y Nhà xuất Nông Nghiệp, Hà Nội Đặng Thị Mỹ Lệ, 2001 Phân lập, định danh, đếm số khuẩn lạc A flavus bánh dầu phộng bắp, đồng thời khảo sát khả sinh aflatoxin chúng số điều kiện môi trường nuôi cấy Luận văn tốt nghiệp, Khoa Chăn nuôi – Thú y, Đại học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh Dương Thanh Liêm, 2008 Giáo trình Độc Chất Học Tủ sách Đại học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh 10 Phạm Thị Tuyết Mai, 2000 Phân lập chủng Aspergillus flavus từ bánh dầu phọng Tp Hồ Chí Minh khảo sát khả sinh aflatoxin B1 Aspergillus flavustrên môi trường bắp Luận văn tốt nghiệp, Khoa Công nghệ sinh học, Đại học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh 11 Đặng Vũ Hồng Miên, 2003 Hệ nấm mốc thức ăn gia súc Miền Nam Việt Nam Bộ Nông Nghiệp Phát Triển Nông Thôn, Công ty giám định khử trùng FCC 12 Claude Moreau, 1974 Nấm mốc độc thực phẩm (bản dịch Đặng Vũ Hồng Miên, 1980) Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, Hà Nội 42 13 Nguyễn Hữu Nam, 1974 Một số tiêu biến đổi sinh lý gà công nghiệp nhiễm aflatoxin thực nghiệm Luận án Tiến sĩ nông nghiệp, Đại học Nông nghiệp I Hà Nội 14 Lê Anh Phụng, 1996 Ảnh hưởng số biện pháp làm giảm độc tính aflatoxin bánh dầu phộng dinh dưỡng gia cầm Luận án Thạc sĩ khoa học nơng nghiệp, Đại học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh 15 Lê Anh Phụng, 2001 Bệnh nhiễm độc aflatoxin phương pháp phát aflatoxin Chuyên đề cấp Tiến sĩ, Đại học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh 16 Lê Anh Phụng, 2002 Nấm mốc sinh độc tố ảnh hưởng số độc tố nấm mốc động vật, hướng khắc phục tác hại độc tố nấm mốc Chuyên đề cấp Tiến sĩ, Đại học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh 17 Lê Anh Phụng, Dương Thanh Liêm Lê Văn Thọ, 2002 Tạp chí Khoa học kỹ thuật Thú y, tập IX – số 3, trang 59 18 Trần Cúc Phương, 2008 Phân lập Aspergillus flavus bắp khảo sát khả sinh aflatoxin chủng phân lập Luận văn tốt nghiệp Bác sĩ thú y, Đại học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh 19 Phan Thị Thu Phương, 2007 Phân lập – Định danh Aspergillus flavus bắp khảo sát khả sinh aflatoxin chủng phân lập Luận văn tốt nghiệp Bác sĩ thú y, Đại học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh 20 Nguyễn Thị Minh Tần, 2004 So sánh khả sản xuất aflatoxin hai chủng Aspergillus flavus môi trường bắp gạo Luận văn tốt nghiệp, Khoa Chăn nuôi – Thú y, Đại học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh 21 Lê Lương Tề Nguyễn Thị Trường, 2005 Giáo trình Bảo vệ thực vật Nhà xuất Nơng Nghiệp, Hà Nội 22 Nguyễn Thị Thu, 2005 Phân lập định danh Aspergillus flavus từ bắp đánh giá khả sinh độc tố aflatoxin chủng phân lập Thủ Đức, Hóc Mơn, Biên Hòa Luận văn tốt nghiệp Kỹ sư chăn nuôi, Đại học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh 23 Phạm Văn Tự, Huỳnh Thị Mỹ Lệ Trương Quang, 2006 Tạp chí Khoa học kỹ thuật Thú y, tập XIII – số 4, trang 31 24 Trần Bắc Vi, 2005 Phân lập Aspergillus flavus bánh dầu phọng bị mốc khảo sát khả sinh aflatoxin chủng phân lập Luận văn tốt nghiệp, Khoa Chăn nuôi – Thú y, Đại học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh 43 Phần tiếng nước 25 Dyer S and Sharee Mc – Cammon, 1994 Detection of toxigenic Aspergillus flavus and related species on coconut cream agar Journal of appllied bacteriology 26 FAO, 1990 Manual of food quality cotrol (Rew Microbiological analysis) Food and agriculter organization of the Nations, Romer 27 IARC, 1993 Some naturally accuring substances Food items and constituents, Lyon 28 Mehan V K, McDonald D., Haravu L J., and Jayanthi S., 1991 The groundnut aflatoxin problem review and literature database India 29 Raper K P and Fennel D I., 1965 The genus Aspergillus, Williams and Wilkin Co., Baltimore Địa website 44 PHỤ LỤC THÀNH PHẦN MÔI TRƯỜNG TỔNG HỢP 1.1 Môi trường thạch khoai tây Khoai tây 200 g Saccharose 20 g Agar 18 g Nước cất 1000 ml Chloramphenicol – g/l môi trường pH – 6,4 Thanh trùng 1210C/ 20 phút 1.2 Môi trường Czapek Saccharose 30 g NaNO3 3g K2PO4 1g KCl 0,5 g MgSO4.7H2O 0,5 g FeSO4.7H2O 0,01 g Agar 15 g Nước cất 1000 ml Chloramphenicol g/l môi trường pH – 6,4 Thanh trùng 1210C/ 20 phút 1.3 Môi trường AFPA (Aspergillus Flavus and Parasiticus Agar) Pepton 10 g Yeast extract 20 g Ferric ammonium citrat 0,5 g Dichloran mg Chloramphenicol 0,1 g Agar 15 g 45 Nước cất 1000 ml pH 6,1 – 6,5 Thanh trùng 1210C/ 20 phút 1.4 Môi trường CYA (Czapek Yeast extract Agar) Saccharose 30 g Yeast extract 5g K2PO4 1g KCl 0,5 g MgSO4.7H2O 0,5 g FeSO4.7H2O 0,01 g Agar 15 g Nước cất 1000 ml pH – 6,4 Thanh trùng 1210C/ 20 phút 1.5 Môi trường thạch nước cốt dừa Nước cốt dừa 500 ml Nước cất 500 ml Chloramphenicol 0,1 g Agar 15 g Thanh trùng 1210C/ 20 phút 1.6 Môi trường gạo 50 g kiểm tra aflatoxin Mơi trường Czapek lỏng để đạt hàm ẩm 30% Thanh trùng 1210C/ 20 phút 46 CÁC CƠNG THỨC 2.1 Cơng thức xác định hàm ẩm X = (P1 – P2) * 100 / 10 Trong đó: X : hàm ẩm nguyên liệu P1 : khối lượng nguyên liệu trước sấy (g) P2 : khối lượng nguyên liệu sau sấy (g) 10 : khối lượng mẫu xác định hàm ẩm (g) 100 : tỷ lệ % 2.2 Cơng thức tính lượng nước thêm vào nguyên liệu để đạt hàm ẩm cần dùng Y = 100 (A – M) / (100 – M) Trong đó: Y : hàm lượng nước thêm vào để đạt hàm ẩm cần đạt đến A : hàm ẩm cần đạt đến M : khối lượng mẫu nguyên liệu để xác định hàm ẩm QUÁ TRÌNH SINH TỔNG HỢP AFLATOXIN Các giai đoạn sinh tổng hợp aflatoxin (Townsend, 1992) 47 CHI TIẾT SỐ LIỆU Bảng 4.1: TSKL nấm mốc TSKL A flavus/ parasiticus g bắp STT TSKL nấm mốc TSKL A flavus/ parasiticus Đại lý Cửa hàng Đại lý Cửa hàng 6,09 4,88 3,95 4,05 5,86 5,51 5,66 4,61 6,13 6,09 4,82 5,2 4,93 5,1 3,8 4,38 6,14 4,98 4,88 4,71 5,38 3,16 5,03 5,85 5,08 4,97 4,21 5,85 5,86 4,35 4,05 5,14 6,43 4,44 5,27 10 6,08 4,71 5,59 11 6,09 6,08 4,78 12 6,38 5,83 5,93 3,93 13 5,64 5,23 4,52 4,54 14 5,73 5,32 15 4,7 5,85 4,45 4,62 Các số liệu chuyển đổi sang log số 10 với y = log (x +1) Trong đó: x, y số liệu trước sau chuyển đổi 48 Bảng 4.2: Kích thước khuẩn lạc chủng A flavus môi trường Czapek Chủng ngày Chủng ngày 33 58 73 29 28 51 71 35 57 75 30 30,5 53 75 32 48 67 31 26 45,3 70 35 48 69 32 33 44 68 34 46,5 63 33 28,5 54 78 33 42 55 34 28,33 55 65 39 49,33 60 35 28 56 67 31 56,67 72 36 25,67 60 79 40 64 79,5 37 24,33 53 66 10 28 55 72 38 23,67 50,33 61 11 29 48 62 39 24,1 50 59,5 12 30,67 50 64 40 26,67 64 82 13 30,33 58,5 78 41 28,8 46 57 14 28,33 49 66 42 27,33 42,5 53 15 29 58 76 43 30,4 49 60 16 36 60 81,5 44 33 65 83 17 29 54,33 68 45 29,5 49,5 63,27 18 32 56 72 46 28 49 61 19 28,33 47 57 47 25,33 56 61 20 27,5 51,5 69,03 48 28 54 72 21 37 64 83 49 32 62 65 22 32 52 71,33 50 36 45 73 23 33 62 82 51 37 49 65 24 35 60,33 75,5 52 35 56 67,13 25 25,33 55 72 53 39 67,23 81 26 29,33 51 72,33 54 35 58,5 74 27 34 59 79 55 34 57 69 28 30 56,23 76 56 38 52,5 77 (đơn vị tính: mm) 49 Bảng 4.3: Kích thước thành phần sợi nấm Thể bọng Chiều Đường dài kính Thể bình lớp Chiều Đường dài kính Thể bình lớp Chiều Đường dài kính Bào tử Chủng Cuống 535 37,5 33,75 6,13 3,6 6,2 3,3 676,7 40,83 47,5 6,2 2,4 8,8 995 25,5 24,5 4,9 3,1 7,3 4,6 4,5 1273,3 48,75 50 7,3 2,8 6,6 3,22 4,13 965 24,18 20,4 5,2 3,23 4,9 2,56 5,5 985 21,25 20 5,1 2,33 5,7 2,82 3,25 736,7 35,1 30,04 6,62 3,2 0 1358,3 57,5 54,18 8,92 2,67 9,2 4,8 3,8 725 62 49,6 4,8 2,32 5,8 3,3 10 765 23,75 22,93 5,33 3,42 6,33 3,47 11 506,7 30 28,75 5,03 3,45 7,4 4,02 12 806,7 52,5 57,93 8,05 2,58 7,2 3,96 13 1213,3 60,33 62,5 9,12 3,82 6,2 3,12 14 1256,7 52,5 43,33 8,53 2,76 8,23 4,2 4,1 15 1323,3 65,83 48,43 9,02 4,7 8,03 4,18 4,5 16 1006,7 31,68 29,33 6,02 3,33 8,38 3,9 5,16 17 1081,3 31,75 33,75 5,1 2,4 0 18 485 32,8 25,81 5,82 4,2 6,3 3,55 3,2 19 596,7 22,5 21,25 5,23 2,36 6,72 2,96 3,67 20 1206,7 40 23,75 5,44 2,45 7,26 3,83 21 1123,3 31,25 32,83 6,16 2,5 6,18 3,03 22 1426 38,75 24,18 6,13 3,47 7,1 4,36 4,5 23 1021,6 34,18 31,25 6,12 2,6 8,2 4,3 4,2 24 1296,7 51,68 37,5 6,3 3,7 7,2 3,67 6,5 25 1365 38,33 32,5 5,88 3,66 6,77 3,06 26 926,7 19,5 21,25 5,02 3,25 7,96 3,9 4,2 27 825 25,1 18,67 5,4 3,62 5,22 2,6 4,5 28 653,3 17,35 15,83 6,1 3,02 5,3 2,42 3,33 29 426,7 25,05 19,7 6,4 2,96 6,1 2,93 4,8 30 635 38,31 36,14 7,3 3,6 0 3,16 50 31 935 23,75 20 5,72 2,92 5,9 3,48 4,16 32 1060 21,68 18,75 5,8 3,22 5,8 2,67 4,43 33 1450,3 34,58 25,4 6,92 4,4 6,03 3,13 5,23 34 1233,3 53,75 39,58 8,14 4,62 7,92 4,04 35 925 17,9 22,5 5,16 2,44 6,12 3,2 4,33 36 952,3 19,18 21,25 4,82 2,42 4,9 2,54 37 896,7 19,18 20,4 4,9 2,65 5,02 2,8 3,5 38 1100 38,75 40 6,73 3,26 6,1 3,03 39 1118,3 39,18 40 7,8 4,3 7,2 3,9 40 635 16,81 16,25 4,7 2,7 5,33 2,6 6,16 41 936,7 19,2 15,4 4,93 2,64 5,42 2,4 4,3 42 530 30,83 38,33 6,23 3,9 6,3 3,63 4,16 43 1330 62,5 57,5 9,02 5,12 8,87 4,2 5,67 44 1415 61,25 49,18 8,8 5,02 8,92 4,05 3,5 45 1006,7 34,18 35 8,6 4,8 7,4 3,34 46 1065 31,25 32,5 5,02 4,2 7,6 3,8 47 888,3 24,58 26,25 6,05 3,6 7,2 4,25 3,67 48 598,3 18,02 12,93 5,8 2,4 4,97 2,47 5,2 49 685 37,08 38,33 7,32 4,2 6,23 3,42 4,5 50 1206,7 57,9 57,5 8,96 4,5 8,44 4,4 51 1395 58,75 57,5 5,03 9,36 4,62 4,3 52 1056,3 40 30,83 7,16 3,8 6,2 3,6 3,5 53 1188,3 45,08 45,4 8,8 4,92 7,67 3,87 54 1278,3 45 45 4,94 7,93 3,92 5,2 55 1036,7 30,15 31,25 4,33 8,34 4,7 6,5 56 995 20,4 20 5,5 2,96 4,83 2,3 (đơn vị tính: µm) 51 Bảng 4: Khả phát huỳnh quang môi trường thạch nước cốt dừa Chủng 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 5 Chủng ngày ngày ngày ngày 29 + 30 31 32 + 33 + + 34 + + 35 36 + + + 37 + 38 39 40 41 + ++ ++ +++ 42 43 + + 44 45 + + 46 + 47 + 48 + + ++ 49 50 51 + + ++ + ++ +++ 52 + + + + ++ +++ 53 + + + ++ +++ 54 + + ++ ++ 55 56 (-) : không phát huỳnh quang (+) : có phát huỳnh quang Các mức độ (+; ++; +++) đánh giá cảm quan dựa cường độ sáng độ rộng vòng huỳnh quang tính từ rìa khuẩn lạc 52 SO SÁNH KẾT QUẢ THU ĐƯỢC GIỮA CÁC KHU VỰC KHẢO SÁT So sánh khác biệt TSKL nấm mốc hai địa điểm lấy mẫu khảo sát One-way ANOVA: TSKL nammoc versus KHUVUC Analysis of Variance for TSKL nam Source DF SS MS KHUVUC 0,096 0,096 Error 28 7,437 0,266 Total 29 7,533 Level N 15 15 Pooled StDev = Mean 5,6880 5,5747 StDev 0,5509 0,4772 0,5154 F 0,36 P 0,552 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+( * -) ( -* ) -+ -+ -+ -+5,40 5,60 5,80 6,00 So sánh khác biệt TSKL A flavus/ parasiticus hai địa điểm lấy mẫu khảo sát One-way ANOVA: TSKL A.flavus versus KHUVUC Analysis of Variance for TSKL A.f Source DF SS MS KHUVUC 2,66 2,66 Error 28 46,66 1,67 Total 29 49,33 Level N 15 15 Mean 4,561 3,965 Pooled StDev = StDev 0,696 1,688 1,291 F 1,60 P 0,217 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( * ) ( * ) + -+ -+ -+ 3,60 4,20 4,80 5,40 So sánh khác biệt tỷ lệ B/A hai địa điểm lấy mẫu khảo sát One-way ANOVA: B/A versus KHUVUC Analysis of Variance for B/A Source DF SS MS KHUVUC 0,0705 0,0705 Error 28 1,3700 0,0489 Total 29 1,4406 Level N 15 15 Pooled StDev = Mean 0,8020 0,7050 StDev 0,0954 0,2979 0,2212 F 1,44 P 0,240 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ -( -* -) ( -* ) + -+ -+ -+ -0,60 0,70 0,80 0,90 So sánh tỷ lệ phân lập A flavus/ parasiticus hai địa điểm láy mẫu khảo sát Chi-Sq = 0,071 + 1,000 + 0,071 + 1,000 = 2,143 DF = 1, P-Value = 0,143 53 ... Phân lập, định danh Aspergillus flavus có bắp khảo sát khả sinh aflatoxin chủng phân lập được 1.2 Mục đích - Tìm hiểu tình hình nhiễm A flavus nguyên liệu bắp khả sản sinh độc tố aflatoxin chủng. ..PHÂN LẬP, ĐỊNH DANH ASPERGILLUS FLAVUS CÓ TRONG BẮP VÀ KHẢO SÁT KHẢ NĂNG SINH AFLATOXIN CỦA CÁC CHỦNG PHÂN LẬP ĐƯỢC Tác giả VÕ THỊ ĐAN TRÂM Khóa luận đệ... i XÁC NHẬN CỦA GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN Họ tên sinh viên thực hiện: Võ Thị Đan Trâm Tên đề tài: Phân lập, định danh Aspergillus flavus có bắp khảo sát khả sinh aflatoxin chủng phân lập được Đã hoàn