BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH **************** KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP PHÂN LẬP VÀ ĐỊNH DANH MỘT SỐ GIỐNG VI KHUẨN LACTIC CÓ TRONG TUNG LỌ MỌ Họ tên: Đoàn Thị Kim Phúc Ngành: Bảo Quản Chế Biến Nơng Sản Thực Phẩm Niên khóa: 2007 - 2011 Tháng 08/2011 PHÂN LẬP VÀ ĐỊNH DANH MỘT SỐ GIỐNG VI KHUẨN LACTIC CĨ TRONG TUNG LỌ MỌ Tác giả Đồn Thị Kim Phúc Khóa luận đệ trình để đáp ứng yêu cầu cấp Kỹ sư ngành Bảo quản chế biến nông sản thực phẩm Giáo viên hướng dẫn: TS VŨ THỊ LÂM AN TS TRƯƠNG THANH LONG Tháng 08/2011 i LỜI CẢM TẠ Với lòng biết ơn người con, xin gởi đến Cha Mẹ tốt đẹp – Người sinh thành nuôi dạy từ thuở ấu thơ có ngày hơm Với lòng kính trọng người học trò, em xin chân thành cảm ơn Quý Thầy Cô Trường Đại học Nông Lâm, đặc biệt Quý Thầy Cô Khoa Công Nghệ Thực Phẩm tận tâm dạy bảo em năm qua, truyền đạt kiến thức quý báu làm hành trang cho em bước vào đời Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc chân thành đến Cô Vũ Thị Lâm An Thầy Trương Thanh Long tận tình hướng dẫn, giúp đỡ truyền đạt kinh nghiệm quý báu cho em suốt trình thực đề tài Em xin chân thành cám ơn Q Thầy Cơ phòng Thí Nghiệm Vi Sinh, Hóa Sinh Xưởng Chế Biến Thịt Cá, khoa Công Nghệ Thực Phẩm tạo điều kiện thuận lợi quan tâm giúp đỡ để em hoàn thành đề tài Xin gửi đến người thân yêu bạn lớp DH07BQ, DH07VT, DH07DD lời cảm ơn sâu sắc Xin chân thành cảm ơn! Đồn Thị Kim Phúc ii TĨM TẮT Đề tài “Phân lập định danh số giống vi khuẩn lactic có Tung lọ mọ” thực từ ngày 07/03/2010 đến 01/07/2010 phòng Thí Nghiệm Vi Sinh, Hóa Sinh Xưởng Chế Biến Thịt Cá thuộc khoa Công Nghệ Thực Phẩm trường Đại học Nông Lâm, thành phố Hồ Chí Minh Nghiên cứu nhằm mục đích định chủng vi khuẩn lactic có lợi bổ sung lại vào Tung lọ mọ Qua hi vọng chủ động trình lên men, cải thiện chất lượng sản phẩm Việc phân lập vi khuẩn lactic (LAB) từ Tung lọ mọ có 16 mẫu LAB (phân thành bốn nhóm A, B, C, D) phân lập từ ba lần sản xuất khác Các chủng đại diện chọn ngẫu nhiên từ nhóm để định danh Kết định danh kỹ thuật giải trình tự gen 16S rRNA chủng LAB chọn Phòng xét nghiệm NK – BIOTEK, 793/58 Trần Xuân Soạn, phường Tân Hưng, quận Lactobacillus fermentum hai mẫu Weissella cibaria mẫu Tiến hành khảo sát ảnh hưởng việc cấy riêng lẻ hai chủng W cibaria Lb fermentum phân lập tổ hợp chúng đến pH thời gian lên men Tung lọ mọ Kết cho thấy pH Tung lọ mọ giảm dần tới ngày thứ ba sau có tăng trở lại vào ngày thứ tư Trong pH mẫu bổ sung Lb fermentum tổ hợp W ciabaria Lb fermentum lên men ngày thứ ba thấp Chúng tiến hành khảo sát ảnh hưởng việc cấy riêng lẻ hai chủng W cibaria Lb fermentum phân lập tổ hợp chúng đến cảm quan Tung lọ mọ sau ngày lên men Tung lọ mọ bổ sung tổ hợp W cibaria Lb fermentum người thử ưa thích iii MỤC LỤC Trang Trang tựa i Lời cảm ơn ii Tóm tắt iii Mục lục iv Danh sách bảng vii Danh sách hình viii Bảng viết tắt ix CHƯƠNG 1: MỞ ĐẦU .1 1.1 Đặt vấn đề .1 1.2 Mục đích nội dung CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN .3 2.1 Giới thiệu sản phẩm thịt cổ truyền .3 2.2 Hệ vi sinh vật thịt lên men 2.2.1 Trong nem chua 2.2.2 Trong lạp xưởng lên men 2.3 Khái quát vi khuẩn lactic lên men lactic 2.3.1 Vi khuẩn lactic 2.3.2 Lên men lactic 2.4 Khái quát phương pháp phân lập LAB 2.4.1 Phương pháp phân lập LAB truyền thống 2.4.2 Phương pháp phân lập LAB đại .10 CHƯƠNG 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 3.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 13 3.2 Vật liệu phương pháp nghiên cứu 13 3.2.1 Nguyên vật liệu thí nghiệm 13 3.2.2 Môi trường thiết bị phân tích 13 3.2.2.1 Môi trường thuốc thử 13 3.2.2.2 Dụng cụ 13 iv 3.2.2.3 Thiết bị 14 3.3 Nội dung nghiên cứu 14 3.4 Phương pháp nghiên cứu 14 3.4.1 Phân lập chủng LAB 14 3.4.1.1 Phương pháp lấy mẫu .14 3.4.1.2 Đồng mẫu 14 3.4.1.3 Pha loãng mẫu 14 3.4.1.4 Nuôi cấy dịch mẫu 15 3.4.1.5 Tăng sinh 15 3.4.1.5 Ria .15 3.4.2 Tiến hành định danh 16 3.4.2.1 Định danh sơ LAB phân lập .16 3.4.2.2 Định danh LAB phân lập .16 3.4.3 Thử nghiệm sản xuất Tung lọ mọ sử dụng chủng LAB phân lập 16 3.4.3.1 Chuẩn bị giống khởi động .16 3.4.3.2 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng việc cấy riêng lẻ hai chủng W cibaria Lb fermentum phân lập tổ hợp chúng đến pH thời gian lên men Tung lọ mọ .17 3.4.3.3 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng việc cấy riêng lẻ hai chủng Weissella cibaria Lb fermentum phân lập tổ hợp chúng đến cảm quan Tung lọ mọ sau ngày lên men 18 3.5 Kỹ thuật đo pH 18 3.6 Xử lý thống kê số liệu thu 19 CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 20 4.1 Kết gởi mẫu định danh 20 4.2 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng việc cấy riêng lẻ hai chủng Weissella cibaria Lb fermentum phân lập tổ hợp chúng đến pH thời gian lên men Tung lọ mọ .23 4.3 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng việc cấy riêng lẻ hai chủng Weissella cibaria Lb fermentum phân lập tổ hợp chúng đến cảm quan Tung lọ mọ sau ngày lên men 31 v CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 33 5.1 Kết luận 33 5.2 Đề nghị 33 TÀI LIỆU THAM KHẢO .34 PHỤ LỤC 40 vi DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT aw Hoạt độ nước ctv Cộng DC Đối chứng DNA Deoxyribonucleic Acid GRAS Generally Regarded As Safe LAB Lactic Acid Bacteria L1 Weissella cibaria L2 Lactobacillus fermentum L1L2 Weissella cibaria Lactobacillus fermentum MRS De Man, Rogosa and Sharpe PCR Polymerase Chain Reaction PE Polyethylene PFGE Pulsed Field Gel Electrophoresis RAPD Random Amplified Polymorphic DNA vii DANH SÁCH CÁC BẢNG Trang Bảng 2.1: Đặc điểm vài loài thuộc giống Lactobacillus Bảng 3.1: Sơ đồ bố trí thí nghiệm .17 Bảng 4.1: Những tính chất hình thái sinh hóa 16 chủng LAB phân lập từ Tung lọ mọ .21 Bảng 4.2: Sự khác biệt mức độ ưa thích mẫu DC, L1, L2 L1L2 32 viii DANH SÁCH CÁC HÌNH Trang Hình 2.1: Sơ đồ lên men lactic .8 Hình 3.1: Quy trình sản xuất Tung lọ mọ thử nghiệm .41 Hình 3.2: Các bước chuẩn bị giống khởi động 45 Hình 3.3: Quy trình sản xuất Tung lọ mọ thử nghiệm có bổ sung vi sinh vật 46 Hình 4.1: Hình thái tế bào của các nhóm LAB 22 Hình 4.2: Thay đổi pH Tung lọ mọ ngày lên men 23 Hình 4.3: Quan hệ pH thời gian lên men Tung lọ mọ 25 Hình 4.4: Quan hệ pH ngày lên men mẫu L1, L2, L1L2 so với mẫu DC 26 Hình 4.5: So sánh pH Tung lọ mọ thử nghiệm mẫu DC, L1, L2 L1L2 lên men ngày 27 Hình 4.6: So sánh pH Tung lọ mọ thử nghiệm mẫu DC, L1, L2 L1L2 lên men ngày 28 Hình 4.7: So sánh pH Tung lọ mọ thử nghiệm mẫu DC, L1, L2 L1L2 lên men ngày 29 Hình 4.8: So sánh pH Tung lọ mọ thử nghiệm mẫu DC, L1, L2 L1L2 lên men ngày 29 Hình 4.9: So sánh pH Tung lọ mọ thử nghiệm mẫu DC, L1, L2 L1L2 lên men ngày 30 ix 8 527 527 527 527 527 372 372 372 372 372 372 372 372 3 1 1 52 3 3 4 4 4 4 -0,3 0,3 -0,3 1,03 0,3 -1,03 1,03 1,03 1,03 1,03 1,03 0,3 1,03 Phụ lục Kết xử lý thống kê thí nghiệm 1 Bảng phân tích phương sai số pH Source DF thit vsv vsv*ngay Error Total 12 38 59 Seq SS 0,00133 0,17526 12,73417 0,08621 0,09514 13,09210 Adj SS Adj MS 0,00133 0,17526 12,73417 0,08621 0,09514 F 0,00066 0,27 0,05842 23,33 3,18354 1271,59 0,00718 2,87 0,00250 P 0,768 0,000 0,000 0,007 So sánh khác biệt mẫu Trong vsv = DC; vsv = L1; vsv = L2; vsv = L1L2 vsv = subtracted from: vsv Lower -0,0551 -0,1131 -0,1831 Center -0,0060 -0,0640 -0,1340 Upper 0,04309 -0,01491 -0,08491 -+ -+ -+ ( * ) ( * ) ( * ) -+ -+ -+ -0,140 -0,070 0,000 Upper -0,00891 -0,07891 -+ -+ -+ ( * ) ( * ) -+ -+ -+ -0,140 -0,070 0,000 Upper -0,02091 -+ -+ -+ ( * ) -+ -+ -+ -0,140 -0,070 0,000 vsv = subtracted from: vsv Lower -0,1071 -0,1771 Center -0,0580 -0,1280 vsv = subtracted from: vsv Lower -0,1191 Center -0,07000 vsv = subtracted from: Level vsv Difference of Means -0,0060 -0,0640 -0,1340 SE of Difference 0,01827 0,01827 0,01827 T-Value -0,328 -3,503 -7,334 Adjusted P-Value 0,9876 0,0063 0,0000 T-Value -3,175 -7,006 Adjusted P-Value 0,0151 0,0000 T-Value -3,831 Adjusted P-Value 0,0025 vsv = subtracted from: Level vsv Difference of Means -0,0580 -0,1280 SE of Difference 0,01827 0,01827 vsv = subtracted from: Level vsv Difference of Means -0,07000 SE of Difference 0,01827 53 So sánh khác biệt ngày Với ngày = N0; ngày = N1; ngày = N2; ngày = N3; ngày = N4 = subtracted from: Lower -0,727 -1,158 -1,298 -1,213 Center -0,668 -1,099 -1,240 -1,155 Upper -0,610 -1,041 -1,182 -1,097 -+ -+ -+ -+ (*-) (-*) (*) (*-) -+ -+ -+ -+ -1,20 -0,80 -0,40 -0,00 Upper -0,3723 -0,5132 -0,4282 -+ -+ -+ -+ (*-) (-*) (-*) -+ -+ -+ -+ -1,20 -0,80 -0,40 -0,00 Upper -0,08233 0,00267 -+ -+ -+ -+ (*-) (-*) -+ -+ -+ -+ -1,20 -0,80 -0,40 -0,00 = subtracted from: Lower -0,4893 -0,6302 -0,5452 Center -0,4308 -0,5717 -0,4867 = subtracted from: Lower -0,1993 -0,1143 Center -0,1408 -0,0558 = subtracted from: Lower 0,02650 Center 0,08500 Upper 0,1435 -+ -+ -+ -+ (*-) -+ -+ -+ -+ -1,20 -0,80 -0,40 -0,00 = subtracted from: Level Difference of Means -0,668 -1,099 -1,240 -1,155 SE of Difference 0,02043 0,02043 0,02043 0,02043 T-Value -32,72 -53,81 -60,70 -56,54 Adjusted P-Value 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 T-Value -21,09 -27,99 -23,82 Adjusted P-Value 0,0000 0,0000 0,0000 = subtracted from: Level Difference of Means -0,4308 -0,5717 -0,4867 SE of Difference 0,02043 0,02043 0,02043 = subtracted from: Level Difference SE of Adjusted 54 of Means -0,1408 -0,0558 Difference 0,02043 0,02043 T-Value -6,894 -2,733 P-Value 0,0000 0,0674 = subtracted from: SE of Adjusted of Means Difference T-Value 0,08500 0,02043 4,161 P-Value 0,0016 So sánh tương tác mẫu ngày lên men vsv = = subtracted from: vsv*ngay -1 2 2 3 3 4 4 4 Lower Center Upper -0,755 -1,172 -1,355 -1,242 -0,175 -0,775 -1,169 -1,302 -1,289 -0,149 -0,835 -1,309 -1,419 -1,289 -0,139 -0,925 -1,365 -1,502 -1,419 -0,600 -1,017 -1,200 -1,087 -0,020 -0,620 -1,013 -1,147 -1,133 0,007 -0,680 -1,153 -1,263 -1,133 0,017 -0,770 -1,210 -1,347 -1,263 -0,445 -0,861 -1,045 -0,931 0,135 -0,465 -0,858 -0,991 -0,978 0,162 -0,525 -0,998 -1,108 -0,978 0,172 -0,615 -1,055 -1,191 -1,108 -+ -+ -+ (-*) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) -+ -+ -+ - 0,80 0,00 0,80 vsv = = subtracted from: vsv*ngay -1 2 2 3 3 4 Lower Center Upper -0,5721 -0,7554 -0,6421 0,4246 -0,1754 -0,5688 -0,7021 -0,6888 0,4512 -0,2354 -0,7088 -0,8188 -0,6888 0,4612 -0,3254 -0,7654 -0,4167 -0,6000 -0,4867 0,5800 -0,0200 -0,4133 -0,5467 -0,5333 0,6067 -0,0800 -0,5533 -0,6633 -0,5333 0,6167 -0,1700 -0,6100 -0,2612 -0,4446 -0,3312 0,7354 0,1354 -0,2579 -0,3912 -0,3779 0,7621 0,0754 -0,3979 -0,5079 -0,3779 0,7721 -0,0146 -0,4546 55 -+ -+ -+ (-*-) (-*) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) 4 -0,9021 -0,8188 -0,7467 -0,6633 -0,5912 -0,5079 (-*-) (-*-) -+ -+ -+ - 0,80 0,00 0,80 vsv = = subtracted from: vsv*ngay -1 2 2 3 3 4 4 4 Lower Center Upper -0,3388 -0,2254 0,8412 0,2412 -0,1521 -0,2854 -0,2721 0,8679 0,1812 -0,2921 -0,4021 -0,2721 0,8779 0,0912 -0,3488 -0,4854 -0,4021 -0,1833 -0,0700 0,9967 0,3967 0,0033 -0,1300 -0,1167 1,0233 0,3367 -0,1367 -0,2467 -0,1167 1,0333 0,2467 -0,1933 -0,3300 -0,2467 -0,0279 0,0854 1,1521 0,5521 0,1588 0,0254 0,0388 1,1788 0,4921 0,0188 -0,0912 0,0388 1,1888 0,4021 -0,0379 -0,1746 -0,0912 -+ -+ -+ (-*-) (-*-) (*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) -+ -+ -+ - 0,80 0,00 0,80 vsv = = subtracted from: vsv*ngay -1 *-) 2 *-) 3 3 *-) 4 4 Lower Center Upper -0,0421 1,0246 0,1133 1,1800 0,26875 1,33542 0,4246 0,0312 -0,1021 -0,0888 1,0512 0,5800 0,1867 0,0533 0,0667 1,2067 0,73542 0,34209 0,20875 0,22209 1,36209 0,3646 -0,1088 -0,2188 -0,0888 1,0612 0,5200 0,0467 -0,0633 0,0667 1,2167 0,67542 0,20209 0,09209 0,22209 1,37209 0,2746 -0,1654 -0,3021 -0,2188 0,4300 -0,0100 -0,1467 -0,0633 0,58542 0,14542 0,00875 0,09209 -+ -+ -+ (-*-) ((-*-) (-*-) (-*-) (-*-) ((*-) (-*-) (-*-) (-*-) ((-*-) (-*-) (-*-) (-*-) -+ -+ -+ - 0,80 56 0,00 0,80 vsv = = subtracted from: vsv*ngay -2 2 ) 3 3 ) 4 4 Lower Center Upper 0,9112 0,3112 -0,0821 -0,2154 -0,2021 0,9379 1,0667 0,4667 0,0733 -0,0600 -0,0467 1,0933 1,2221 0,6221 0,2288 0,0954 0,1088 1,2488 0,2512 -0,2221 -0,3321 -0,2021 0,9479 0,4067 -0,0667 -0,1767 -0,0467 1,1033 0,5621 0,0888 -0,0212 0,1088 1,2588 0,1612 -0,2788 -0,4154 -0,3321 0,3167 -0,1233 -0,2600 -0,1767 0,4721 0,0321 -0,1046 -0,0212 -+ -+ -+ (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*(-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*(-*-) (*-) (-*-) (-*-) -+ -+ -+ - 0,80 0,00 0,80 vsv = = subtracted from: vsv*ngay -2 2 3 3 4 4 4 Lower Center Upper -0,755 -1,149 -1,282 -1,269 -0,129 -0,815 -1,289 -1,399 -1,269 -0,119 -0,905 -1,345 -1,482 -1,399 -0,600 -0,993 -1,127 -1,113 0,027 -0,660 -1,133 -1,243 -1,113 0,037 -0,750 -1,190 -1,327 -1,243 -0,445 -0,838 -0,971 -0,958 0,182 -0,505 -0,978 -1,088 -0,958 0,192 -0,595 -1,035 -1,171 -1,088 -+ -+ -+ (-*) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (*-) (-*-) (*-) (-*-) (-*-) (-*-) (*-) -+ -+ -+ - 0,80 0,00 0,80 vsv = = subtracted from: vsv*ngay -2 3 Lower Center Upper -0,5488 -0,6821 -0,6688 0,4712 -0,2154 -0,3933 -0,5267 -0,5133 0,6267 -0,0600 -0,2379 -0,3712 -0,3579 0,7821 0,0954 57 -+ -+ -+ (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) 3 4 4 4 5 -0,6888 -0,7988 -0,6688 0,4812 -0,3054 -0,7454 -0,8821 -0,7988 -0,5333 -0,6433 -0,5133 0,6367 -0,1500 -0,5900 -0,7267 -0,6433 -0,3779 -0,4879 -0,3579 0,7921 0,0054 -0,4346 -0,5712 -0,4879 (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) -+ -+ -+ - 0,80 0,00 0,80 vsv = = subtracted from: vsv*ngay -2 3 3 4 4 4 Lower Center Upper -0,2888 -0,2754 0,8646 0,1779 -0,2954 -0,4054 -0,2754 0,8746 0,0879 -0,3521 -0,4888 -0,4054 -0,1333 -0,1200 1,0200 0,3333 -0,1400 -0,2500 -0,1200 1,0300 0,2433 -0,1967 -0,3333 -0,2500 0,0221 0,0354 1,1754 0,4888 0,0154 -0,0946 0,0354 1,1854 0,3988 -0,0412 -0,1779 -0,0946 -+ -+ -+ (-*-) (-*) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*) (-*-) (-*-) (-*) (-*-) (-*-) -+ -+ -+ - 0,80 0,00 0,80 vsv = = subtracted from: vsv*ngay -2 ) 3 3 *) 4 4 Lower Center Upper -0,1421 0,9979 0,0133 1,1533 0,16875 1,30875 0,3112 -0,1621 -0,2721 -0,1421 1,0079 0,4667 -0,0067 -0,1167 0,0133 1,1633 0,62209 0,14875 0,03875 0,16875 1,31875 0,2212 -0,2188 -0,3554 -0,2721 0,3767 -0,0633 -0,2000 -0,1167 0,53209 0,09209 -0,04458 0,03875 -+ -+ -+ (-*-) (-*(-*-) (-*-) (-*) (-*-) ((-*-) (-*-) (*-) (-*) -+ -+ -+ - 0,80 vsv = = subtracted from: 58 0,00 0,80 vsv*ngay -3 ) 3 3 ) 4 4 Lower Center Upper -+ -+ -+ - 0,9846 1,1400 1,29542 (-*- 0,2979 -0,1754 -0,2854 -0,1554 0,9946 0,4533 -0,0200 -0,1300 -0,0000 1,1500 0,60875 0,13542 0,02542 0,15542 1,30542 0,2079 -0,2321 -0,3688 -0,2854 0,3633 -0,0767 -0,2133 -0,1300 0,51875 0,07875 -0,05791 0,02542 (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*(-*) (-*-) (-*-) (-*-) -+ -+ -+ - 0,80 0,00 0,80 vsv = = subtracted from: vsv*ngay -3 3 4 4 4 Lower Center Upper -0,842 -1,315 -1,425 -1,295 -0,145 -0,932 -1,372 -1,509 -1,425 -0,687 -1,160 -1,270 -1,140 0,010 -0,777 -1,217 -1,353 -1,270 -0,531 -1,005 -1,115 -0,985 0,165 -0,621 -1,061 -1,198 -1,115 -+ -+ -+ (-*-) (-*) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) -+ -+ -+ - 0,80 0,00 0,80 vsv = = subtracted from: vsv*ngay -3 3 4 4 4 Lower Center Upper -0,6288 -0,7388 -0,6088 0,5412 -0,2454 -0,6854 -0,8221 -0,7388 -0,4733 -0,5833 -0,4533 0,6967 -0,0900 -0,5300 -0,6667 -0,5833 -0,3179 -0,4279 -0,2979 0,8521 0,0654 -0,3746 -0,5112 -0,4279 -+ -+ -+ (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) -+ -+ -+ - 0,80 0,00 0,80 vsv = = subtracted from: vsv*ngay Lower Center Upper 59 -+ -+ -+ - 3 *-) 4 4 -0,2654 -0,1354 1,0146 -0,1100 0,0200 1,1700 0,04542 0,17542 1,32542 0,2279 -0,2121 -0,3488 -0,2654 0,3833 -0,0567 -0,1933 -0,1100 0,53875 0,09875 -0,03791 0,04542 (-*-) (-*-) ((-*-) (-*-) (-*-) (-*-) -+ -+ -+ - 0,80 0,00 0,80 vsv = = subtracted from: vsv*ngay -3 *-) 4 4 Lower Center Upper -0,0254 1,1246 0,13000 1,28000 0,28542 1,43542 0,3379 -0,1021 -0,2388 -0,1554 0,49333 0,05333 -0,08333 -0,00000 0,64875 0,20875 0,07209 0,15542 -+ -+ -+ (-*-) ((-*-) (-*-) (-*-) (-*-) -+ -+ -+ - 0,80 0,00 0,80 vsv = = subtracted from: vsv*ngay -4 ) 4 4 Lower Center Upper -+ -+ -+ - 0,9946 1,1500 1,30542 (-*- 0,2079 -0,2321 -0,3688 -0,2854 0,3633 -0,0767 -0,2133 -0,1300 0,51875 0,07875 -0,05791 0,02542 (-*) (-*-) (-*-) (-*-) -+ -+ -+ - 0,80 0,00 0,80 vsv = = subtracted from: vsv*ngay -4 4 4 Lower Center Upper -+ -+ -+ - -0,942 -1,382 -1,519 -1,435 -0,787 -1,227 -1,363 -1,280 -0,631 -1,071 -1,208 -1,125 (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) -+ -+ -+ - 0,80 vsv = 60 0,00 0,80 = subtracted from: vsv*ngay -4 4 Lower Center Upper -+ -+ -+ - -0,5954 -0,7321 -0,6488 -0,4400 -0,5767 -0,4933 -0,2846 -0,4212 -0,3379 (-*) (-*-) (-*-) -+ -+ -+ - 0,80 0,00 0,80 vsv = = subtracted from: vsv*ngay -4 4 Lower Center Upper -+ -+ -+ - -0,2921 -0,2088 -0,1367 -0,0533 0,01875 0,10209 (-*-) (-*-) -+ -+ -+ - 0,80 0,00 0,80 vsv = = subtracted from: vsv*ngay -4 Lower Center Upper -+ -+ -+ - -0,07209 0,08333 0,2388 (-*-) -+ -+ -+ - 0,80 Tukey Simultaneous Tests Response Variable pH All Pairwise Comparisons among Levels of vsv*ngay vsv = = subtracted from: Level vsv*ngay 2 2 3 3 4 Difference of Means -0,600 -1,017 -1,200 -1,087 -0,020 -0,620 -1,013 -1,147 -1,133 0,007 -0,680 -1,153 -1,263 -1,133 0,017 -0,770 -1,210 SE of Difference 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 T-Value -14,69 -24,89 -29,37 -26,60 -0,49 -15,18 -24,80 -28,07 -27,74 0,16 -16,64 -28,23 -30,92 -27,74 0,41 -18,85 -29,62 61 Adjusted P-Value 0,0001 0,0001 0,0001 0,0001 1,0000 0,0001 0,0001 0,0001 0,0001 1,0000 0,0001 0,0001 0,0001 0,0001 1,0000 0,0001 0,0001 0,00 0,80 4 -1,347 -1,263 0,04085 0,04085 -32,96 -30,92 0,0001 0,0001 SE of Difference 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 T-Value -10,20 -14,69 -11,91 14,20 -0,49 -10,12 -13,38 -13,05 14,85 -1,96 -13,54 -16,24 -13,05 15,09 -4,16 -14,93 -18,28 -16,24 Adjusted P-Value 0,0001 0,0001 0,0001 0,0001 1,0000 0,0001 0,0001 0,0001 0,0001 0,8994 0,0001 0,0001 0,0001 0,0001 0,0199 0,0001 0,0001 0,0001 T-Value -4,488 -1,713 24,396 9,709 0,082 -3,182 -2,856 25,048 8,241 -3,345 -6,038 -2,856 25,293 6,038 -4,732 -8,078 -6,038 Adjusted P-Value 0,0082 0,9666 0,0001 0,0001 1,0000 0,2004 0,3606 0,0001 0,0001 0,1434 0,0001 0,3606 0,0001 0,0001 0,0041 0,0001 0,0001 T-Value 2,774 28,883 14,197 4,569 1,305 1,632 Adjusted P-Value 0,4097 0,0001 0,0001 0,0065 0,9982 0,9789 vsv = = subtracted from: Level vsv*ngay 2 2 3 3 4 4 4 Difference of Means -0,4167 -0,6000 -0,4867 0,5800 -0,0200 -0,4133 -0,5467 -0,5333 0,6067 -0,0800 -0,5533 -0,6633 -0,5333 0,6167 -0,1700 -0,6100 -0,7467 -0,6633 vsv = = subtracted from: Level vsv*ngay 2 2 3 3 4 4 4 Difference of Means -0,1833 -0,0700 0,9967 0,3967 0,0033 -0,1300 -0,1167 1,0233 0,3367 -0,1367 -0,2467 -0,1167 1,0333 0,2467 -0,1933 -0,3300 -0,2467 SE of Difference 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 vsv = = subtracted from: Level vsv*ngay 2 2 Difference of Means 0,1133 1,1800 0,5800 0,1867 0,0533 0,0667 SE of Difference 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 62 3 3 4 4 4 5 1,2067 0,5200 0,0467 -0,0633 0,0667 1,2167 0,4300 -0,0100 -0,1467 -0,0633 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 29,536 12,728 1,142 -1,550 1,632 29,781 10,525 -0,245 -3,590 -1,550 0,0001 0,0001 0,9997 0,9874 0,9789 0,0001 0,0001 1,0000 0,0831 0,9874 SE of Difference 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 T-Value 26,109 11,423 1,795 -1,469 -1,142 26,762 9,954 -1,632 -4,324 -1,142 27,007 7,751 -3,019 -6,364 -4,324 Adjusted P-Value 0,0001 0,0001 0,9496 0,9929 0,9997 0,0001 0,0001 0,9789 0,0128 0,9997 0,0001 0,0001 0,2728 0,0001 0,0128 T-Value -14,69 -24,31 -27,58 -27,25 0,65 -16,16 -27,74 -30,43 -27,25 0,90 -18,36 -29,13 -32,47 -30,43 Adjusted P-Value 0,0001 0,0001 0,0001 0,0001 1,0000 0,0001 0,0001 0,0001 0,0001 1,0000 0,0001 0,0001 0,0001 0,0001 T-Value -9,63 -12,89 -12,57 15,34 Adjusted P-Value 0,0001 0,0001 0,0001 0,0001 vsv = = subtracted from: Level vsv*ngay 2 2 3 3 4 4 4 Difference of Means 1,0667 0,4667 0,0733 -0,0600 -0,0467 1,0933 0,4067 -0,0667 -0,1767 -0,0467 1,1033 0,3167 -0,1233 -0,2600 -0,1767 vsv = = subtracted from: Level vsv*ngay 2 3 3 4 4 4 Difference of Means -0,600 -0,993 -1,127 -1,113 0,027 -0,660 -1,133 -1,243 -1,113 0,037 -0,750 -1,190 -1,327 -1,243 SE of Difference 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 vsv = = subtracted from: Level vsv*ngay Difference of Means -0,3933 -0,5267 -0,5133 0,6267 SE of Difference 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 63 3 3 4 4 4 5 -0,0600 -0,5333 -0,6433 -0,5133 0,6367 -0,1500 -0,5900 -0,7267 -0,6433 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 -1,47 -13,05 -15,75 -12,57 15,58 -3,67 -14,44 -17,79 -15,75 0,9929 0,0001 0,0001 0,0001 0,0001 0,0686 0,0001 0,0001 0,0001 SE of Difference 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 T-Value -3,264 -2,937 24,967 8,159 -3,427 -6,119 -2,937 25,212 5,956 -4,814 -8,159 -6,119 Adjusted P-Value 0,1701 0,3148 0,0001 0,0001 0,1202 0,0001 0,3148 0,0001 0,0002 0,0032 0,0001 0,0001 T-Value 0,326 28,230 11,423 -0,163 -2,856 0,326 28,475 9,220 -1,550 -4,895 -2,856 Adjusted P-Value 1,0000 0,0001 0,0001 1,0000 0,3606 1,0000 0,0001 0,0001 0,9874 0,0026 0,3606 T-Value 27,904 11,096 -0,490 -3,182 -0,000 28,149 8,893 -1,877 -5,222 -3,182 Adjusted P-Value 0,0001 0,0001 1,0000 0,2004 1,0000 0,0001 0,0001 0,9274 0,0010 0,2004 vsv = = subtracted from: Level vsv*ngay 3 3 4 4 4 Difference of Means -0,1333 -0,1200 1,0200 0,3333 -0,1400 -0,2500 -0,1200 1,0300 0,2433 -0,1967 -0,3333 -0,2500 vsv = = subtracted from: Level vsv*ngay 3 3 4 4 4 Difference of Means 0,0133 1,1533 0,4667 -0,0067 -0,1167 0,0133 1,1633 0,3767 -0,0633 -0,2000 -0,1167 SE of Difference 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 vsv = = subtracted from: Level vsv*ngay 3 3 4 4 4 Difference of Means 1,1400 0,4533 -0,0200 -0,1300 -0,0000 1,1500 0,3633 -0,0767 -0,2133 -0,1300 SE of Difference 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 64 vsv = = subtracted from: Level vsv*ngay 3 3 4 4 4 Difference of Means -0,687 -1,160 -1,270 -1,140 0,010 -0,777 -1,217 -1,353 -1,270 SE of Difference 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 T-Value -16,81 -28,39 -31,09 -27,90 0,24 -19,01 -29,78 -33,13 -31,09 Adjusted P-Value 0,0001 0,0001 0,0001 0,0001 1,0000 0,0001 0,0001 0,0001 0,0001 T-Value -11,59 -14,28 -11,10 17,05 -2,20 -12,97 -16,32 -14,28 Adjusted P-Value 0,0001 0,0001 0,0001 0,0001 0,7816 0,0001 0,0001 0,0001 T-Value -2,693 0,490 28,638 9,383 -1,387 -4,732 -2,693 Adjusted P-Value 0,4616 1,0000 0,0001 0,0001 0,9963 0,0041 0,4616 T-Value 3,182 31,331 12,075 1,305 -2,040 -0,000 Adjusted P-Value 0,2004 0,0001 0,0001 0,9982 0,8656 1,0000 T-Value 28,149 8,893 Adjusted P-Value 0,0001 0,0001 vsv = = subtracted from: Level vsv*ngay 3 4 4 4 Difference of Means -0,4733 -0,5833 -0,4533 0,6967 -0,0900 -0,5300 -0,6667 -0,5833 SE of Difference 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 vsv = = subtracted from: Level vsv*ngay 4 4 4 Difference of Means -0,1100 0,0200 1,1700 0,3833 -0,0567 -0,1933 -0,1100 SE of Difference 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 vsv = = subtracted from: Level vsv*ngay 4 4 4 Difference of Means 0,13000 1,28000 0,49333 0,05333 -0,08333 -0,00000 SE of Difference 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 vsv = = subtracted from: Level vsv*ngay 4 Difference of Means 1,1500 0,3633 SE of Difference 0,04085 0,04085 65 4 4 -0,0767 -0,2133 -0,1300 0,04085 0,04085 0,04085 -1,877 -5,222 -3,182 0,9274 0,0010 0,2004 SE of Difference 0,04085 0,04085 0,04085 0,04085 T-Value -19,26 -30,03 -33,37 -31,33 Adjusted P-Value 0,0001 0,0001 0,0001 0,0001 T-Value -10,77 -14,12 -12,08 Adjusted P-Value 0,0001 0,0001 0,0001 T-Value -3,345 -1,305 Adjusted P-Value 0,1434 0,9982 T-Value 2,040 Adjusted P-Value 0,8656 vsv = = subtracted from: Level vsv*ngay 4 4 Difference of Means -0,787 -1,227 -1,363 -1,280 vsv = = subtracted from: Level vsv*ngay 4 4 Difference of Means -0,4400 -0,5767 -0,4933 SE of Difference 0,04085 0,04085 0,04085 vsv = = subtracted from: Level vsv*ngay 4 Difference of Means -0,1367 -0,0533 SE of Difference 0,04085 0,04085 vsv = = subtracted from: Level vsv*ngay Difference of Means 0,08333 SE of Difference 0,04085 Phụ lục Kết xử lý thống kê thí nghiệm Factor subject sample Type Levels Values fixed 8 fixed 4 Analysis of Variance for score, using Adjusted SS for Tests Source subject sample Error Total DF 85 95 Seq SS 0,0000 24,9473 30,2959 55,2432 Adj SS 0,0000 24,9473 30,2959 Adj MS 0,0000 8,3158 0,3564 F 0,00 23,33 P 1,000 0,000 Unusual Observations for score Obs 17 36 73 89 score -1,03000 1,03000 1,03000 -1,03000 Fit 0,30208 -0,50958 -0,47375 0,68125 StDev Fit 0,20209 0,20209 0,20209 0,20209 Residual -1,33208 1,53958 1,50375 -1,71125 66 St Resid -2,37R 2,74R 2,68R -3,05R ... thực đề tài: Phân lập định danh số giống vi khuẩn lactic có Tung lọ mọ 1.2 MỤC ĐÍCH VÀ NỘI DUNG Đề tài thực nhằm mục đích định chủng vi khuẩn lactic có lợi bổ sung lại vào Tung lọ mọ Qua hi vọng... mục đích định chủng vi khuẩn lactic có lợi bổ sung lại vào Tung lọ mọ Qua hi vọng chủ động trình lên men, cải thiện chất lượng sản phẩm Vi c phân lập vi khuẩn lactic (LAB) từ Tung lọ mọ có 16 mẫu... Tiến hành định danh 16 3.4.2.1 Định danh sơ LAB phân lập .16 3.4.2.2 Định danh LAB phân lập .16 3.4.3 Thử nghiệm sản xuất Tung lọ mọ sử dụng chủng LAB phân lập 16 3.4.3.1