NGHIÊN CỨU ẢNH HƢỞNG CỦA BỨC XẠ GAMMA LÊN CÂY HOẮC HƢƠNG (Pogostemon cablin (Blaco) Benth) in vitro

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU ẢNH HƢỞNG CỦA BỨC XẠ GAMMA LÊN CÂY HOẮC HƢƠNG (Pogostemon cablin (Blaco) Benth) in vitro Ngành học: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Sinh viên thực hiện: LÊ ĐẠI PHÚC Niên khóa: 2008-2012 Tháng 07/ 2012 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU ẢNH HƢỞNG CỦA BỨC XẠ GAMMA LÊN CÂY HOẮC HƢƠNG (Pogostemon cablin (Blaco) Benth) in vitro Hƣớng dẫn khoa học Sinh viên thực ThS TRỊNH THỊ THANH HUYỀN KS NGÔ QUANG HƢỞNG Tháng 7/2012 LÊ ĐẠI PHÚC LỜI CÁM ƠN Tơi xin chân thành bày tỏ lòng cám ơn sâu sắc đến: Quý Thầy, Cô Trƣờng Đại học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh tận tâm hƣớng dẫn, truyền đạt kiến thức cho suốt thời gian học tập ThS Trịnh Thị Thanh Huyền tận tình hƣớng dẫn tơi hồn thành cơng trình nghiên cứu Anh Ngơ Quang Hƣởng, chị Phí Thị Thu Hiền, chị Ngô Ngọc Tú, tập thể cán bộ, nhân viên Trung tâm Ứng dụng Công nghê sinh học – Sở Khoa học Công nghệ Đồng Nai tạo điều kiện thuận lợi cho tơi hồn thành báo cáo Gia đình, bạn bè động viên, chia sẻ góp ý cho tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Sinh viên Lê Đại Phúc i TÓM TẮT Cây hoắc hƣơng đƣợc biết đến hƣơng liệu, dƣợc liệu, thân thảo Tinh dầu hoắc hƣơng nguyên liệu tự nhiên quan trọng đƣợc sử dụng nghành công nghiệp nƣớc hoa Để đáp ứng nhu cầu thực tiễn cần xây dựng qui trình nhân giống hoắc hƣơng, với xạ gamma tác nhân hiệu việc cải tiến đặc tính tốt trồng Mục tiêu đề tài xây dựng qua trình ni cấy in vitro hoắc hƣơng khảo sát ảnh hƣởng xạ gamma lên hoắc hƣơng in vitro Qui trình nhân giống in vitro hoắc hƣơng đƣợc xây dựng hoàn chỉnh bao gồm khử trùng mẫu, tạo cụm chồi tái sinh hồn chỉnh Thí nghiệm khử trùng mẫu đốt thân hoắc hƣơng đạt kết tối ƣu (56,93 % mẫu có khả tái sinh) với nghiệm thức sử dụng javel : nƣớc theo tỷ lệ 1:5 (v/v) thời gian xử lý 10 phút Môi trƣờng MS có bổ sung BA (0,5 mg/l) mơi trƣờng thích hợp để tạo cụm chồi Mơi trƣờng MS có bổ sung NAA (0,5 mg/l) mơi trƣờng thích hợp để tái sinh in vitro hoàn chỉnh Liều xạ 12 Gy có tác dụng gây nên hiệu ứng kích thích sinh trƣởng phát triển mẫu chồi hoắc hƣơng in vitro Đã xác định đƣợc liều LD50 mẫu chồi in vitro hoắc hƣơng (Pogostemon cablin (Blaco) Benth) 75,58 Gy, tần suất xuất biến dị in vitro hoắc hƣơng liều chiếu 20, 40, 60, 80 100 lần lƣợt 14,65; 11,07; 9,76; 49,29; 40,64‰ Có dạng biến dị in vitro hoắc hƣơng đƣợc phân lập xạ gamma 60Co hệ M1V1 cụ thể nhƣ: tròn, dài, đậm màu, thân to, thân nhỏ, thân ngắn ii SUMMARY Patchouli is known as a flavoring plants, medicinal herbs, herbaceous The essential oil of patchouli is one of the important natural ingredients used in perfume industry To meet the practical requirements necessary to build a breeding process patchouli, along with gamma radiation is an effective agent in improving the virtues of plants The objective of the thesis is to build through the in vitro culture and patchouli to the effects of gamma radiation on in vitro patchouli Process in vitro propagation of patchouli plants was set up including sterilization complete sample, creating clusters and regeneration shoot entire plant Disinfection experiment nodal samples of patchouli achieved the best results (56,93% sample renewability) with treatments using javel:water ratio 1: (v / v) in 10 minutes MS medium supplemented with BA (0,5 mg/l) is the appropriate medium for the formation bud clusters MS medium supplemented with NAA (0,5 mg/l) is the most appropriate medium to regenerate complete plants in vitro The dose of 12 Gy stimulated the growth and development of in vitro of patchouli shoots The lethal dose of 50% sample (LD50) for in vitro patchouli shoots was found at 75,58 Gy The variational frequencies in vitro of patchouli at the doses of 20, 40, 60, 80 and 100 Gy was found at: 14,65; 11,07; 9,76; 49,29; 40,64‰, respectively Six types of in vitro variations of patchouli by 60Co gamma irradiation in M1V4 were screened as follow: oval leaves, long leaves, dark leaves, big shoots, small shoots, short stem iii MỤC LỤC Mục Trang LỜI CÁM ƠN i TÓM TẮT ii DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT .vii DANH SÁCH CÁC HÌNH VÀ BIỂU ĐỒ viii DANH SÁCH CÁC BẢNG VÀ QUY TRÌNH ix Chƣơng GIỚI THIỆU 10 1.1 Đặt vấn đề 10 1.2 Yêu cầu đề tài 11 1.3 Nội dung thực 11 Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 12 2.1 Giới thiệu hoắc hƣơng 12 2.1.1 Đặc điểm hình thái hoắc hƣơng 12 2.1.2 Điều kiện nuôi trồng thu hoạch hoắc hƣơng 13 2.1.3 Thành phần hóa học 14 2.1.4 Tác dụng dầu hoắc hƣơng 14 2.2 Nhân giống vơ tính phƣơng pháp ni cấy mô 15 2.2.1 Khái niệm 15 2.2.3 Những vấn đề thƣờng gặp nuôi cấy mô 17 2.2.3.1 Sự tạp nhiễm 17 2.2.3.2 Tính bất định mặt di truyền 18 2.2.3.3 Hiện tƣợng thủy tinh thể 18 2.2.4 Các yếu tố ảnh hƣởng đến nuôi cấy mô thực vật 18 2.3 Lịch sử nghiên cứu tạo giống đột biến 19 2.4 Phƣơng pháp đột biến nhân tạo trồng 21 2.5 Giới thiệu tia gamma ứng dụng thực vật 22 2.5.1 Khái niệm xạ 22 iv 2.5.2 Bức xạ gamma 22 2.5.4 Nguyên tắc gây đột biến xạ ion hóa 23 2.5.5 Chọn lọc dòng biến dị 24 2.5.6 Các thành tựu nghiên cứu đột biến phóng xạ chọn tạo giống 25 2.6 Các thành tựu nghiên cứu hoắc hƣơng 26 Chƣơng VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 3.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 28 3.2 Vật liệu 28 3.3 Phƣơng pháp tiến hành 28 3.3.1 Tạo hoắc hƣơng (Pogostemon cablin (Blaco) Benth) in vitro hoàn chỉnh 28 3.3.1.1 Xác định nồng độ javel thời gian khử trùng thích hợp để khử trùng mẫu 28 3.3.1.2 Khảo sát ảnh hƣởng BA lên khả tái sinh chồi hoắc hƣơng in vitro 30 3.3.1.3 Khảo sát ảnh hƣởng NAA lên khả hình thành rễ hoắc hƣơng in vitro 31 3.3.2 Khảo sát ảnh hƣởng xạ gamma lên hoắc hƣơng in vitro 32 3.3.2.1 Ảnh hƣởng liều xạ kích thích lên hoắc hƣơng in vitro 32 3.3.2.2 Ảnh hƣởng liều xạ biến dị lên hoắc hƣơng in vitro 32 3.3.3 Theo dõi, xác định tách dạng biến dị phát đƣợc 34 3.3.4 Phƣơng pháp xử lý số liệu 34 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 35 4.1 Tạo hoắc hƣơng in vitro hoàn chỉnh 35 4.1.1 Nồng độ javel thời gian khử trùng thích hợp để khử trùng mẫu cấy 35 4.1.2 Ảnh hƣởng nồng độ BA lên khả tái sinh chồi hoắc hƣơng in vitro 38 4.1.3 Ảnh hƣởng NAA lên khả hình thành rễ hoắc hƣơng in vitro 40 4.2 Ảnh hƣởng xạ gamma lên hoắc hƣơng in vitro 43 4.2.1 Hiệu ứng kích thích mẫu in vitro xạ gamma 43 4.2.2 Trồng thử nghiệm hoắc hƣơng in vitro hoắc hƣơng in vitro đƣợc xử lý tia gamma (liều xạ 12 Gy) 45 v 4.2.2 Khảo sát khả biến dị hoắc hƣơng chiếu xạ 46 4.2.2.1 Khảo sát giá trị LD50 46 4.2.2.2 Gây tạo phân lập biến dị 48 Chƣơng KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 58 5.1 Kết luận 58 5.2 Đề nghị 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO 59 vi DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT BA: Benzyladenine NAA: Naphthylacetic acid Ctv: cộng tác viên MS: Murashige – Skoog LD50: Liều gây chết 50% mẫu IAEA: International Atomic Energy Agency DNA: Deoxyribonucleic Acid TNHH: Trách nhiệm hữu hạn Gy: Gray ĐC: Đối chứng LSD: sai khác tối thiểu có ý nghĩa ĐHST: Điều hòa sinh trƣởng TB: Trung bình vii DANH SÁCH CÁC HÌNH VÀ BIỂU ĐỒ Trang Biểu đồ 4.1 Tình trạng mẫu sau xử lý 37 Hình 4.1 Mẫu hoắc hƣơng từ đốt thân mang chồi ngủ sau tuần ni cấy 37 Hình 4.2 Cụm chồi hoắc hƣơng môi trƣờng bổ sung BA 39 Hình 4.3 Rễ hoắc hƣơng in vitro sau tuần nuôi cấy 41 Hình 4.4 Sự phát triển chồi hoắc hƣơng đƣợc chiếu xạ 12Gy đối chứng 45 Hình 4.5 Cây hoắc hƣơng đối chứng chiếu xạ 12Gy vƣờn ƣơm 46 Hình 4.6 Các dạng biến dị 56 Hình 4.7 Các dạng biến dị thân .57 viii Chƣơng KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Cây hoắc hƣơng (Pogostemon cablin (Blaco) Benth.) đƣợc nhân giống in vitro cho hiệu nhân giống cao Quy trình nhân giống gồm bƣớc sau: Chất khử trùng javel với nồng độ Clo 38 g/l, tỷ lệ javel/nƣớc 1:5 (v/v) 10 phút thích hợp cho q trình khử trùng mẫu đốt thân hoắc hƣơng Môi trƣờng MS có bổ sung BA (0,50 mg/l) mơi trƣờng thích hợp để tạo cụm chồi Mơi trƣờng MS có bổ sung NAA (0,50 mg/l) mơi trƣờng thích hợp để tái sinh in vitro hoàn chỉnh Liều xạ 12 Gy có tác dụng gây nên hiệu ứng kích thích sinh trƣởng phát triển mẫu chồi hoắc hƣơng in vitro Đã xác định đƣợc liều LD50 mẫu chồi hoắc hƣơng (Pogostemon cablin (Blaco) Benth.) in vitro 75,58 Gy Xác định đƣợc tần số biến dị in vitro hoắc hƣơng khoảng liều chiếu 20, 40, 60, 80 100 lần lƣợt là: 14,65; 11,07; 9,76; 49,29; 40,64 ‰ Phân lập đƣợc dạng biến dị in vitro hoắc hƣơng xạ gamma 60CO hệ M1V1 cụ thể là: dài, tròn, đậm màu, thân to, thân nhỏ, thân có đốt ngắn 5.2 Đề nghị Cần tiếp tục khảo sát ảnh hƣởng xạ gamma callus, hạt, Tiếp tục theo dõi tính ổn định đặc điểm nhƣ tiêu sinh trƣởng, phát triển, suất, hàm lƣợng tinh dầu biến dị tạo đƣợc qua hệ vơ tính phát triển thành giống 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Tạ Nhƣ Thục Anh, Trần Dụ Chi Vũ Văn Vụ 2007 Bƣớc đầu nghiên cứu ảnh hƣởng chất điều hòa sinh trƣởng đến phát sinh hình thái mô hoắc hƣơng (Pogostemon cablin (Blanco) Benth.) nuôi cấy in vitro Tạp chí khoa học Đại học Quốc gia Hà Nội, Khoa học Tự nhiên Công nghệ 24 Trang 44 – 49 Bùi Bá Bổng 1995 Nhân giống nuôi cấy mô NXB An Giang Lê xuân Đắc 2008 Nghiên cứu ứng dụng biện pháp công nghệ sinh học nhằm khắc phục nhƣợc điểm sinh lý cao cảm quang giống lúa tám Luận án Tiến sĩ sinh học, Viện Công nghệ sinh học, Hà Nội Trần Lệ Trúc Hà 2010 Nghiên cứu ảnh hƣởng xạ gamma lên bạc hà (Mentha arvensis L.) in vitro Luận án Thạc sĩ khoa học nông nghiệp ngành khoa học kỹ thuật Trƣờng Đại học Nông Lâm Tp.HCM Nguyễn Quốc Hiến 1997 Công nghệ xạ sinh học Trƣờng Đại học Đà Lạt Nguyễn Văn Hiển 2000 Chọn giống trồng NXB Giáo dục Hà Nội, trang 96 – 102 Dƣơng Công Kiên 2002 Nuôi cấy mô Thực vật NXB Đại học Quốc Gia Tp Hồ Chí Minh, trang 56 – 68 Trần Văn Minh 1999 Giáo trình Cơng nghệ sinh học Thực vật, Viện sinh học nhiệt đới Vũ Nhƣ Ngọc 2005 Ứng dụng kỹ thuật hạt nhân sinh học nông nghiệp, NXB Nơng nghiệp 10 Trƣơng Thị Bích Phƣợng 2004 Nghiên cứu ảnh hƣởng môi trƣờng nuôi cấy in vitro chiếu xạ tia gamma đến biến đổi sinh lý, hóa sinh, tế bào hình thái lúa (Oryza sativa L.) Luận án tiến sĩ sinh lý thực vật, Đại học Huế 11 Chu Thị Thơm, Phan Thị Lài Nguyễn Văn Tó 2006 Phương pháp chọn giống trồng NXB Lao Động 59 12 Từ Bích Thủy 1994 Chọn tạo giống đậu nành phƣơng pháp xử lý phóng xạ, Luận án phó tiến sĩ khoa học nơng nghiệp Đại học Nơng Lâm Tp.HCM, Tp Hồ Chí Minh 13 Viện dƣợc liệu 2004 Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, NXB Khoa học Kỹ thuât, Trang 965 – 968 TÀI LIỆU TIẾNG NƢỚC NGOÀI 14 Anilkumar M 2005 Effect of plant growth regulators on growth and yield of Patchouli (Pogostemon cablin Benth L.) University of Agricultural Sciences, Dharwad 15 George E.F 1993 Plant Propagation by Tissue Culture Exegetics Ltd., Edington, Wilts BA13 4QG, England 16 IAEA 2009 Nuclear Technology review International Atomic Energy Agency Vienna international Centre, Austria 17 Kukreja A.K., Mathur A.K and Zaim M 1990 Mass production of virus free patchouli plants (Pogostemon cablin (Blanco) Benth.) by in vitro culture Trop Agric 67, pp 101 - 104 18 Misra M 1996 Regeneration of patchouli (Pogostemon cablin Benth.) plants from leaf and node callus, and evaluation after growth in the field Plant Cell Reports 15 pp 991 – 994 19 M Singh, S Sharma, and S Ramesh 2002 Herbage, oil yield and oil quality of patchouli [Pogostemon cablin (Blanco) Benth.] influenced by irrigation, organic mulch and nitrogen application in semi-arid tropical climate Industrial Crops and Products 16 pp 101 – 107 20 Pattnaik S, Subramanyam V.R and Kole C 1996, Antibacterial and antifungal activity of ten essential oils in vitro, Microbios, 86, pp 237 - 246 21 Robbins 1983 Natural essential oils Current trends in production, marketing and demand Perfumer and Flavorist 8, 75 – 82 22 Skaria B.P et at 2007 Eromatic plants Horticulture science series – pp 123 - 125 60 23 Shokeri A.F.Md 2008 Effect of organic and biofertilizer on the growth of Patchouli plant (Pogostemon cablin Benth.L) Faculty of Chemical and Natural Recources Engineering Universiti Malaysia Pahang 24 Tao C 1983 China’s burgeoning aromatic industry Perfumer and Flavorist 7, 25 Yang D et at 1996 Antifungal and antibacterial properties in vitro of three patchouli oils from different origins Acta Botanica Gallica 29 - 35 26 Zaiton A et al 2006 Effects of ion beam irradiation on Oncidium danceanum orchids Iournal of Nuclear and related Technologies, 3, - 27 Zulkarnain 2004 in vitro culture of Pogostemon cablin Benth (Nilam plant) the effect of NAA and BAP on embryogenic callus proliferation and subsequent somatic embryogenesis Makara, sains, Vol 8, No 3: pp 103 - 107 INTERNET 28 http://www.thuocdantoc.com/theo-ten-han-viet/371-cay-hoac-huong.html ngày truy cập 10/7/2012 29 http://www.hotfrog.in/Companies/C-G-Herbals/Patchouli-in-1928 ngày truy cập 10/7/2012 61 PHỤ LỤC Phụ lục Thành phần môi trƣờng MS (Murashige skoog, 1962) Thành phần Đa lƣợng Vi lƣợng Vitamine aminoacid Nồng độ (mg/l) CaCl2 332,02 KNO3 1900,00 KH2PO4 170,00 NH4NO3 1650,00 MgSO4.7H2O 180,54 CoCl2.6H2O 0,025 CuSO4.5H2O 0,025 H3BO3 6,20 KI 0,83 MnSO4.H2O 16,90 Na2MoO4.H2O 0,25 ZnSO4.H2O 8,60 Glycine 2,00 Myo-inositol 100 Nicotinic acid 0,50 Pyridoxine HCl 0,50 Thiamine – HCl 0,10 Na2.EDTA 37,30 FeSO4.7H2O 27,80 Sắt EDTA 62 Phụ lục Bảng Số liệu dùng cho xử lý thống kê thí nghiệm vô mẫu – tỷ lệ mẫu không nhiễm Nghiệm thức Lần lặp lại Trung bình 60,50 60,20 60,80 60,500 68,60 68,98 68,33 68,637 71,91 71,85 72,08 71,947 78,05 78,17 78,98 78,400 87,18 86,97 87,08 87,077 70,78 70,67 70,50 70,650 64,67 64,02 64,31 64,333 61,90 62,32 62,50 62,240 Bảng Bảng ANOVA thí nghiệm vơ mẫu – tỷ lệ mẫu không nhiễm Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 1647.098 235.300 2694.781 0.0000 Within 16 1.397 0.087 -Total 23 1648.496 Bảng Bảng trắc nghiệm phân hạng thí nghiệm vơ mẫu – tỷ lệ mẫu không nhiễm Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Original Order = 60.50 H = 68.64 E = 71.95 C = 78.40 B = 87.08 A = 70.65 D = 64.33 F = 62.24 G Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 63 Ranked Order = 87.08 = 78.40 = 71.95 = 70.65 = 68.64 = 64.33 = 62.24 = 60.50 A B C D E F G H Bảng Số liệu dùng cho xử lý thống kê thí nghiệm vơ mẫu – tỷ lệ mẫu đạt Nghiệm thức Lần lặp lại Trung bình 54,73 55,20 60,86 56,93 38,43 27,96 38,32 34,903 15,06 14,87 15,00 14,977 12,35 12,48 12,08 12,303 3,62 3,88 4,08 3,860 4,28 4,03 4,45 4,253 5,27 6,58 6,63 6,160 7,97 8,32 8,73 8,34 Bảng Bảng ANOVA thí nghiệm vơ mẫu – tỷ lệ mẫu đạt Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 7393.877 1056.268 173.558 0.0000 Within 16 97.375 6.086 -Total 23 7491.253 Bảng Bảng trắc nghiệm phân hạng thí nghiệm vơ mẫu – tỷ lệ mẫu đạt Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Original = = = = = = = = Order 56.93 34.90 14.98 12.30 3.860 4.250 6.160 8.340 A B C CD E E E DE Ranked Order = 56.93 = 34.90 = 14.98 = 12.30 = 8.340 = 6.160 = 4.250 = 3.860 Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 64 A B C CD DE E E E Bảng bảng số liệu dùng cho liều chiếu xạ - số chồi/ bình Số chồi/bình Liều xạ Lần lặp lại Lần lặp lại Lần lặp lại 6 7 6 10 11 12 11 14 10 13 10 14 15 14 17 15 18 13 20 14 16 15 18 13 12 19 17 18 18 10 13 15 15 14 17 16 15 14 14 12 19 20 22 24 21 23 20 25 26 Bảng bảng ANOVA số chồi Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 1738.635 289.772 87.348 0.0000 Within 56 185.778 3.317 -Total 62 1924.413 Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 9.00 54.000 6.000 0.87 0.61 9.00 63.000 7.000 1.12 0.61 9.00 100.000 11.111 1.62 0.61 9.00 140.000 15.556 2.30 0.61 9.00 146.000 16.222 2.44 0.61 9.00 133.000 14.778 1.20 0.61 9.00 200.000 22.222 2.44 0.61 -Total 63.00 836.000 13.270 5.57 0.70 Within 1.82 Bảng Trắc nghiệm phân hạng Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Original Order = 6.000 = 7.000 = 11.11 = 15.56 = 16.22 = 14.78 = 22.22 D D C B B B A Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Ranked Order = 22.22 = 16.22 = 15.56 = 14.78 = 11.11 = 7.000 = 6.000 65 A B B B C D D Bảng 10 số liệu dùng cho chiếu xạ - chiều cao chồi Chiều cao chồi Liều xạ Lần lặp lại Lần lặp lại Lần lặp lại 1.9 1.8 2.0 1.8 1.7 1.6 1.8 1.5 1.5 1.6 1.8 1.8 1.6 1.9 1.6 1.9 1.5 1.3 1.6 1.8 1.8 1.9 2.0 1.9 1.9 2.1 2.2 2.0 1.9 2.2 1.8 2.1 2.2 2.1 1.9 2.2 2.3 2.3 2.5 2.4 2.2 2.4 2.3 2.1 2.1 10 2.5 2.5 2.6 2.4 2.6 2.7 2.3 2.1 2.2 12 2.0 2.9 2.5 2.8 2.6 3.0 2.6 2.7 2.8 Bảng 11 bảng ANOVA thí nghiệm chiếu xạ - chiều cao chồi Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 7.346 1.224 32.007 0.0000 Within 56 2.142 0.038 -Total 62 9.489 Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 9.00 15.600 1.733 0.17 0.07 9.00 15.000 1.667 0.20 0.07 9.00 17.200 1.911 0.18 0.07 9.00 18.400 2.044 0.15 0.07 9.00 20.600 2.289 0.14 0.07 9.00 21.900 2.433 0.20 0.07 9.00 23.900 2.656 0.29 0.07 -Total 63.00 132.600 2.105 0.39 0.05 Within 0.20 Bảng 12 bảng trắc nghiệm phân hạng thí nghiệm chiếu xạ - chiều cao chồi Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = = 1.730 1.670 1.910 2.040 2.290 2.430 2.660 Ranked Order DE E DE CD BC AB A Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 66 = = = = = = = 2.660 2.430 2.290 2.040 1.910 1.730 1.670 A AB BC CD DE DE E Bảng 13 số liệu dùng cho chiếu xạ - số chồi Số lá/chồi Liều xạ Lần lặp lại Lần lặp lại Lần lặp lại 10 11 11 14 12 12 14 14 10 10 12 13 15 15 11 14 12 12 12 11 12 15 14 12 14 15 13 13 12 15 15 12 13 13 14 14 15 12 13 14 12 12 12 12 13 10 13 13 14 15 12 12 10 11 10 12 14 15 16 16 13 15 14 14 15 Bảng 14 bảng ANOVA thí nghiệm chiếu xạ - số lá/chồi Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 42.762 7.127 3.394 0.0053 Within 56 114.222 2.040 -Total 62 156.984 Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 9.00 108.000 12.000 1.66 0.48 9.00 114.000 12.667 1.73 0.48 9.00 118.000 13.111 1.45 0.48 9.00 121.000 13.344 1.13 0.48 9.00 115.000 12.778 1.09 0.48 9.00 110.000 12.222 1.72 0.48 9.00 132.000 14.667 1.00 0.48 -Total 63.00 818.000 12.984 1.59 0.20 Within 1.43 Bảng 15 bảng trắc nghiệm phân hạng thí nghiệm chiếu xạ - số lá/chồi Original Order Mean = Mean = Mean = Mean = Mean = Mean = Mean = 12.00 12.67 13.11 13.34 12.78 12.22 14.67 B B AB AB B B A Ranked Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Order = = = = = = = 67 14.67 13.34 13.11 12.78 12.67 12.22 12.00 A AB AB B B B B Bảng 16 số liệu dùng cho thí nghiệm NAA – số rễ Số rễ/chồi NAA Lần lặp lại Lần lặp lại Lần lặp lại 11 15 12 11 13 14 12 20 25 23 18 14 16 17 12 13 16 18 17 17 13 12 15 24 18 20 22 25 24 22 18 26 17 19 16 14 25 24 26 16 19 26 29 32 35 40 29 34 41 29 15 16 12 11 15 12 17 11 15 14 10 13 12 10 11 11 14 Bảng 17 bảng ANOVA thí nghiệm NAA – số rễ Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 3277.778 468.254 39.524 0.0000 Within 64 758.222 11.847 -Total 71 4036.000 Number Sum Average SD SE -1 9.00 95.000 10.556 2.55 1.15 9.00 133.000 14.778 2.33 1.15 9.00 159.000 17.667 4.33 1.15 9.00 176.000 19.556 4.39 1.15 9.00 199.000 22.111 2.93 1.15 9.00 295.000 32.778 5.19 1.15 9.00 124.000 13.778 2.28 1.15 9.00 103.000 11.444 2.01 1.15 -Total 72.00 1284.000 17.833 7.54 0.89 Within 3.34 Bảng 18 bảng trắc nghiệm phân hạng – số rễ Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Original = = = = = = = = Order 10.56 14.78 17.67 19.56 22.11 32.78 13.78 11.44 E DE CD BC B A DE E Ranked Order = 32.78 = 22.11 = 19.56 = 17.67 = 14.78 = 13.78 = 11.44 = 10.56 Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 68 A B BC CD DE DE E E Bảng 19 số liệu dùng cho thí nghiệm NAA – chiều dài rễ Chiều dài rễ/chồi NAA Lần lặp lại Lần lặp lại Lần lặp lại 1.1 0.8 0.6 0.5 0.8 1.0 0.6 0.6 1.0 1.2 1.1 0.7 0.9 0.9 0.9 1.2 1.0 1.3 1.2 1.4 1.4 1.3 1.2 1.0 0.8 0.9 1.1 1.3 1.4 1.3 1.3 1.2 1.1 1.3 1.25 1.3 1.6 1.2 1.2 0.9 1.4 1.55 1.55 1.2 1.0 1.8 1.6 1.7 1.6 1.85 1.65 1.9 2.0 1.7 1.4 1.1 1.35 1.1 1.2 1.15 1.15 1.2 1.1 0.7 0.7 0.9 0.6 0.65 0.6 0.75 0.83 0.8 Bảng 20 bảng ANOVA thí nghiệm NAA – chiều dài rễ Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 6.633 0.948 31.246 0.0000 Within 64 1.941 0.030 -Total 71 8.574 Number Sum Average SD SE -1 9.00 7.000 0.778 0.22 0.06 9.00 9.200 1.022 0.19 0.06 9.00 10.400 1.156 0.21 0.06 9.00 11.450 1.272 0.08 0.06 9.00 11.600 1.289 0.25 0.06 9.00 15.800 1.756 0.14 0.06 9.00 10.650 1.183 0.12 0.06 9.00 6.530 0.726 0.10 0.06 -Total 72.00 82.630 1.148 0.35 0.04 Within 0.17 Bảng 21 bảng trắc nghiệm phân hạng – chiều dài rễ Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = = = 0.7800 1.020 1.160 1.270 1.290 1.760 1.180 0.7300 D C BC B B A BC D Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 69 = = = = = = = = 1.760 1.290 1.270 1.180 1.160 1.020 0.7800 0.7300 A B B BC BC C D D Bảng 22 số liệu dùng cho thí nghiệm BA – chồi/cụm BA Chồi/cụm Lần lặp lại Lần lặp lại Lần lặp lại 5 23 22 25 27 29 26 22 23 26 16 16 18 17 15 19 16 16 15 13 12 16 11 14 13 13 16 15 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Bảng 23 bảng ANOVA thí nghiệm BA – chồi/cụm Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 5192.190 865.365 472.017 0.0000 Within 56 102.667 1.833 -Total 62 5294.857 Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 9.00 55.000 6.111 1.45 0.45 9.00 223.000 24.778 2.44 0.45 9.00 148.000 16.444 1.33 0.45 9.00 123.000 13.667 1.73 0.45 9.00 0.000 0.000 0.00 0.45 9.00 0.000 0.000 0.00 0.45 9.00 0.000 0.000 0.00 0.45 -Total 63.00 549.000 8.714 9.24 1.16 Within 1.35 Bảng 24 bảng trắc nghiệm phân hạng – chồi/cụm Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Original Order = 6.110 = 24.78 = 16.44 = 13.67 = 0.0000 = 0.0000 = 0.0000 D A B C E E E Ranked Order = 24.78 = 16.44 = 13.67 = 6.110 = 0.0000 = 0.0000 = 0.0000 Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 70 A B C D E E E Bảng 25 số liệu dùng cho thí nghiệm BA – chiều cao chồi Chiều cao chồi BA Lần lặp lại Lần lặp lại Lần lặp lại 1.2 1.2 1.3 1.0 1.2 1.1 1.4 1.1 1.1 2.0 2.3 2.4 2.3 2.2 2.0 2.1 2.3 2.5 1.4 1.5 1.2 1.1 1.5 1.6 1.8 1.4 1.3 1.2 1.3 1.4 1.5 1.4 1.4 1.3 1.4 1.4 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Bảng 26 bảng ANOVA thí nghiệm BA – chiều cao chồi Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 43.025 7.171 511.917 0.0000 Within 56 0.784 0.014 -Total 62 43.810 Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 9.00 10.700 1.189 0.13 0.04 9.00 20.100 2.233 0.17 0.04 9.00 12.800 1.422 0.21 0.04 9.00 12.300 1.367 0.09 0.04 9.00 0.000 0.000 0.00 0.04 9.00 0.000 0.000 0.00 0.04 9.00 0.000 0.000 0.00 0.04 -Total 63.00 55.900 0.887 0.84 0.11 Within 0.12 Bảng 27 bảng trắc nghiệm phân hạng – chiều cao chồi Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Original Order = 1.180 = 2.230 = 1.420 = 1.370 = 0.0000 = 0.0000 = 0.0000 C A B B D D D Mean Mean Mean Mean Mean Mean Ranked Order = 2.230 = 1.420 = 1.370 = 1.180 = 0.0000 = 0.0000 Mean = 71 0.0000 A B B C D D D Bảng 28 số liệu dùng cho thí nghiệm BA – số lá/chồi Số lá/chồi BA Lần lặp lại Lần lặp lại Lần lặp lại 11 12 11 13 10 10 13 13 13 13 13 12 12 15 13 15 12 14 11 11 10 14 14 13 14 11 10 12 14 12 12 10 11 11 13 11 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Bảng 29 bảng ANOVA thí nghiệm BA – số lá/chồi Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 2307.270 384.545 354.965 0.0000 Within 56 60.667 1.083 -Total 62 2367.937 Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 9.00 106.000 11.778 1.30 0.35 9.00 119.000 13.222 1.20 0.35 9.00 108.000 12.000 1.73 0.35 9.00 106.000 11.778 1.20 0.35 9.00 0.000 0.000 0.00 0.35 9.00 0.000 0.000 0.00 0.35 9.00 0.000 0.000 0.00 0.35 -Total 63.00 439.000 6.968 6.18 0.78 Within 1.04 Bảng 30 bảng trắc nghiệm phân hạng – số lá/ chồi Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Original = = = = = = = Order 11.78 13.22 12.00 11.78 0.0000 0.0000 0.0000 B A AB B C C C Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Ranked Order = 13.22 = 12.00 = 11.78 = 11.78 = 0.0000 = 0.0000 = 0.0000 72 A AB B B C C C ... sterilization complete sample, creating clusters and regeneration shoot entire plant Disinfection experiment nodal samples of patchouli achieved the best results (56,93% sample renewability) with... phần hóa học Methylchavicol, Anethole, Anisaldehyde, Limonene, p-Methoxinnamaldehyde, Pinene, 3-Octanone, 1-Octen-3-ol, Linalool, 1-Caryphyllene, b-Emelene, b-Humulene, bFarnenene, a-Ylangene, g-Cardinene,... variations of patchouli by 60Co gamma irradiation in M1V4 were screened as follow: oval leaves, long leaves, dark leaves, big shoots, small shoots, short stem iii MỤC LỤC Mục Trang LỜI CÁM ƠN