KHẢO SÁT PHƯƠNG PHÁP TÁCH CHIẾT PHYCOBILIN TỪ RONG MỨT KHÔ PORPHYRA SP

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT PHƯƠNG PHÁP TÁCH CHIẾT PHYCOBILIN TỪ RONG MỨT KHÔ PORPHYRA SP Họ tên sinh viên: ĐÀO THỊ KIM TUYỀN Ngành: CHẾ BIẾN THỦY SẢN Niên khóa: 2008-2012 Tháng 08/2012 KHẢO SÁT PHƯƠNG PHÁP TÁCH CHIẾT PHYCOBILIN TỪ RONG MỨT KHÔ PORPHYRA SP Tác giả ĐÀO THỊ KIM TUYỀN Khóa luận đệ trình để đáp ứng u cầu cấp Kỹ sư Ngành Chế Biến Thủy Sản Giáo viên hướng dẫn: Th.S NGUYỄN THÙY LINH Tháng 08 năm 2012 i TÓM TẮT Đề tài “Khảo sát phương pháp tách chiết phycobilin từ rong mứt khô Porphyra sp.” thực phòng thí nghiệm khoa Thủy Sản trường Đại Học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh từ ngày 02/01/2012 đến ngày 05/04/2012 với nội dung sau: a) Xác định phổ hấp thu dịch chiết rong dung môi acetone(80%), ethanol (80%) dung dịch đệm phosphate 0,1M (pH7) b) Khảo sát ảnh hưởng điều kiện trích ly thích hợp thu nhận phycobilin từ nguyên liệu rong mứt khô Porphyra sp c) Khảo sát điều kiện cô đặc phycobilin để kiểm tra độ bền màu Qua kết nghiên cứu cho thấy: + Bước sóng hấp thu cực đại dịch chiết rong dung môi acetone (80%), ethanol (80%) λ450 nm λ650 nm dung dịch đệm phosphate 0,1M (pH7) λ550 nm + Các điều kiện trích ly thích hợp thu nhận phycobilin là: − Dung dịch đệm phosphate thích hợp để trích ly phycobilin so với dung dịch đệm acetate − Rong ủ với dung dịch đệm phosphate 0,1M (pH7) vòng 24 giờ, 30oC, điều kiện tối cho hiệu chiết tách phycobilin tốt (10696,1 µg/g) − Khi bổ sung 4% (NH2)2CO vào trình chiết tách, kết lượng phycobilin thu tăng lên đáng kể (11465,6 µg/g) + Phycobilin đặc nhiệt độ cao dịch màu trích ly nhanh; thời gian khơng ảnh hưởng nhiều đến màu phycobilin Nhiệt độ cô đặc tốt 60oC (trong tủ sấy) với thời gian 150 phút ii CẢM ƠN Con xin bày tỏ lòng biết ơn vơ hạn đến bố mẹ, chị em, người thân yêu hết lòng dạy dỗ lo cho ăn học nên người Em xin chân thành cảm ơn: Ban giám hiệu trường Đại Học Nông Lâm Tp.HCM Ban chủ nhiệm khoa Thủy Sản Q thầy khoa Thủy Sản tồn thể thầy cô trường Đại Học Nông Lâm truyền đạt cho em kiến thức, kinh nghiệm quí báu trình học tập Đặc biệt em xin gửi lời biết ơn sâu sắc đến cô Nguyễn Thùy Linh tận tình hướng dẫn giúp đỡ em trình thực đề tài Cuối cùng, xin chân thành cảm ơn tất bạn lớp động viên giúp đỡ tơi q trình học tập thời gian thực đề tài Do đề tài thực thời gian ngắn, có nhiều cố gắng khơng tránh khỏi thiếu sót Kính mong đóng góp q báu q thầy bạn để luận văn hồn chỉnh iii MỤC LỤC Trang tựa i TÓM TẮT ii CẢM ƠN iii MỤC LỤC iv DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT viii DANH SÁCH CÁC BẢNG ix DANH SÁCH CÁC HÌNH x DANH SÁCH CÁC ĐỒ THỊ xi CHƯƠNG GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề 1.2.Mục tiêu đề tài CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1.Giới thiệu 2.1.1.Chất màu 2.1.2.Phycobilin 2.1.2.1.Giới thiệu 2.1.2.2.Cấu tạo hóa học 2.2.Rong đỏ 2.2.1.Giới thiệu 2.2.2.Thành phần hóa học 2.2.3.Phân loại 2.2.4.Tổ chức thể 2.2.5.Cấu tạo tế bào 2.2.6.Sinh sản 2.2.7.Giá trị kinh tế 2.2.8.Vai trò rong tảo thiên nhiên 2.2.9.Một số loài rong đỏ 2.2.9.1.Rong câu (Gracilaria sp.) iv 2.2.9.2.Rong đỏ (Laurenciapapillosa) 10 2.3.Rong mứt Porphyra sp 10 2.3.1.Phân loại 11 2.3.2.Hình thái, cấu tạo 11 2.3.3.Phân bố 12 2.3.4.Tình hình ni trồng 12 2.4.Phương pháp trích ly 13 2.4.1.Trích ly chất lỏng 13 2.4.2.Trích ly chất rắn 14 2.5.Các yếu tố ảnh hưởng đến trình trích ly chất màu thiên nhiên 15 2.5.1.Nhiệt độ 15 2.5.2.Thời gian trích ly 15 2.5.3.Hệ dung môi 15 2.5.4.Mức độ phá vỡ cấu trúc tế bào 16 2.5.5.Kích thước hình dạng ngun liệu 16 2.6.Các yếu tố ảnh hưởng đến q trình đặc 16 2.6.1.Nhiệt độ 16 2.6.2.Thời gian 16 2.6.3.Thiết bị cô đặc 16 2.7.Một số phương pháp trích ly phycobilin 17 2.7.1.Phương pháp Sven Beer Amram Eshel 17 2.7.2Phương pháp R.BermejoRoman, J.M.ALvarez-Pez, F.G.Acien Fernandez, E.Molina Grima 17 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 3.1.Thời gian địa điểm 19 3.1.1.Thời gian 19 3.1.2.Địa điểm 19 3.2.Vật liệu khảo sát 19 3.2.1.Nguyên liệu 19 3.2.2.Thiết bị 20 3.2.3.Dụng cụ 20 v 3.3.Hóa chất 20 3.4.Phương pháp nghiên cứu 21 3.4.1.Bố trí thí nghiệm 21 3.4.1.1.Xác định phổ hấp thu dịch chiết rong dung môi khác 21 3.4.1.2.Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến q trình trích ly phycobilin 22 3.4.1.3.Các yếu tố ảnh hưởng đến q trình đặc 24 3.4.2.Phương pháp tính tốn 25 3.4.2.1.Xác định nồng độ phycobilin 25 3.4.2.2.Xác định hàm lượng phycobilin 25 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 26 4.1.Xác định phổ hấp thu dịch chiết rong dung môi khác 26 4.2.Các yếu tố ảnh hưởng đến q trình trích ly phycobilin 27 4.2.1.Khảo sát ảnh hưởng dung dịch đệm lên q trình trích ly phycobilin 28 4.2.2.Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ lên trình chiết tách phycobilin 30 4.2.3.Khảo sát ảnh hưởng ánh sáng lên trình trích ly phycobilin 31 4.2.4.Khảo sát ảnh hưởng thời gian (giờ) ủ lên hàm lượng (µg/g) phycoerythrin(RPE) phycocyanin (R-PC) phycobilin (C) 33 4.2.5.Khảo sát ảnh hưởng pH lên hàm lượng (µg/g) phycoerythin(R-PE) phycocyanin (R-PC) phycobilin (C) thu nhận 35 4.2.6.Ảnh hưởng chất bổ sung tăng hiệu trích ly 37 4.3.Các yếu tố ảnh hưởng đến q trình đặc 43 4.3.1.Ảnh hưởng nhiệt độ 43 4.3.2.Ảnh hưởng thời gian 45 4.4.Quy trình chiết tách phycobilin từ rong mứt porphyra sp 49 4.4.1.Nguyên liệu 49 4.4.2.Nghiền ủ rong 50 4.4.3.Ly tâm 50 4.4.4.Cô đặc 50 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 51 5.1.Kết luận 51 5.2.Đề xuất 51 vi TÀI LIỆU THAM KHẢO 52 PHỤ LỤC 54 vii DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT ATP: Adenosine triphosphate FAO: Food and Agriculture Organization R-PE: Phycoerythrin R-PC: Phycocyanin C: Phycobilin viii DANH SÁCH CÁC BẢNG Bảng 4.1 Độ hấp thu sắc tố chlorophyll, carotenoid, phycobilin bước sóng khác 26 Bảng 4.2 Ảnh hưởng dung dịch đệm đến hàm lượng (µg/g) phycoerythin (R-PE) phycocyanin (R-PC) phycobilin (C) thu nhận 28 Bảng 4.3 Ảnh hưởng nhiệt độ (oC) lên hàm lượng (µg/g) phycoerythin (R-PE) phycocyanin (R-PC) phycobilin (C) thu nhận 30 Bảng 4.4 Ảnh hưởng ánh sáng lên hàm lượng (µg/g) phycoerythin (R-PE) phycocyanin (R-PC) phycobilin (C) thu nhận 31 Bảng 4.5 Ảnh hưởng thời gian ủ lên hàm lượng (µg/g) phycoerythin (R-PE) phycocyanin (R-PC) phycobilin (C) thu nhận 33 Bảng 4.6 Ảnh hưởng pH lên hàm lượng (µg/g) phycoerythin (R-PE) phycocyanin (R-PC) phycobilin (C) thu nhận 35 Bảng 4.7 Ảnh hưởng Na2SO4 (%) lên hàm lượng (µg/g) phycoerythin (R-PE) phycocyanin (R-PC) phycobilin (C) thu nhận 37 Bảng 4.9 Ảnh hưởng (NH2)2CO (%) lên hàm lượng (µg/g) phycoerythin (R-PE) phycocyanin (R-PC) phycobilin (C) thu nhận 41 Bảng 4.10 Ảnh hưởng nhiệt độ cô đặc (oC) đến hàm lượng (µg/g) phycoerythin (R-PE) phycocyanin (R-PC) phycobilin (C) thu nhận 43 Bảng 4.11 Ảnh hưởng thời gian đặc (phút) đến hàm lượng (µg/g) phycoerythrin (R-PE) phycocyanin (R-PC) phycobilin (C) thu nhận 45 ix phycobilin có màu sắc khác (hình 4.10) R – PE rong có màu đỏ R – PC có màu xanh dương, hàm lượng R - PE hay hàm lượng R – PC thu nhiều hay ảnh hưởng đến màu sắc dịch trích ly phycobilin 2.5 (NH2)2CO=2% (NH2)2CO=4% Độ hấp thu (NH2)2CO=6% 1.5 0.5 450 500 550 600 650 Bước sóng (nm) Đồ thị 4.9 Bước sóng ảnh hưởng đến độ hấp thu phycobilin bổ sung (NH2)2CO Theo đồ thị 4.9 độ hấp thu cực đại dịch trích ly nồng độ khác xuất bước sóng 564 618 nm Độ hấp thu (NH2)2CO 4% đạt giá trị cao Hình 4.10 thể màu phycobilin trích ly nồng độ (NH2)2CO khác nồng độ 4% màu đậm nhạt dần 6% Điều tương ứng với hàm lượng phycobilin trích ly bảng 4.9 Hàm lượng phycobilin trích ly cao bổ sung nồng độ (NH2)2CO 4% hai nồng độ 2% 6% phycobilin thu đáng kể (9363,15) (7239,85 µg/g) Như nồng độ (NH2)2CO bổ sung ảnh hưởng đến q trình trích ly phycobilin Khi có mặt (NH2)2CO, cấu trúc vòng porphyrin bị phá vỡ mở vị trí liên kết với protein Cấu trúc prosthetic bị thay đổi làm thay đổi theo cấu trúc tự nhiên gây liên kết protein prosthetic giúp q trình trích ly hiệu (O’Carra O’hEocha, 1966) Tuy nhiên, nồng độ (NH2)2CO cao hay thấp cho hiệu trích ly thấp, điều (NH2)2CO tạo thành từ NH3 CO2 có tính kiềm Khi pH tăng làm cho hiệu trích ly tăng lên nồng độ 4% cho kết trích ly tốt 2%, 42 nồng độ 6% thu hàm lượng phycobilin thấp nồng độ pH vượt ngưỡng cho phép khơng thích hợp với tồn phycobilin Thông qua xử lý thống kê số liệu, hàm lượng phycobilin trích ly nồng độ (NH2)2CO khác có ý nghĩa (p < 0,01) 4% (NH2)2CO chọn làm chất bổ sung để tăng hiệu trích ly áp dụng cho thí nghiệm kế sau Hình 4.10 Phycobilin trích ly bổ sung (NH2)2CO nồng độ 6, 4, 2% (từ trái sang phải) 4.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến q trình đặc 4.3.1 Ảnh hưởng nhiệt độ Bảng 4.10 Ảnh hưởng nhiệt độ cô đặc (oC) đến hàm lượng (µg/g) phycoerythrin (RPE) phycocyanin (R-PC) phycobilin (C) thu nhận Nhiệt độ (oC) R – PE R – PC C 60 4133,6 ± 802,4 477,7 ± 436,4 4611,3 ± 1099,4 90 1084 ± 32,8 295,4 ± 38,3 1379,4 ± 57,4 120 641,6 ± 183,8 70,5 ± 12,0 712,2 ± 196,8 Đối với nhiệt độ cô đặc tiến hành cô đặc ba mức nhiệt độ 60, 90 120oC 30 phút Theo bảng 4.10, hàm lượng R – PE R – PC giảm nhanh tăng nhiệt độ cô đặc So sánh nhiệt độ cô đặc 60 120oC hàm lượng R – PE giảm 43 84,5% R – PC giảm 83,5% Như R – PE R – PC bị ảnh hưởng nhiệt độ cô đặc mức độ ảnh hưởng Theo hình 4.11, màu phycobilin đặc 60oC màu tím đỏ 120oC chất màu chuyển sang màu nâu đen Nhiệt độ giữ vai trò quan trọng việc ổn định cấu trúc phycobilin, việc gia tăng nhiệt độ làm gia tăng phân hủy phycobilin Có thể, đặc nhiệt độ cao protein phycobiliprotein bị kết tủa 60°C Độ hấp thu 90°C 1.5 120°C 0.5 450 500 550 600 650 Bước sóng (nm) Đồ thị 4.10 Bước sóng ảnh hưởng đến độ hấp thu phycobilin nhiệt độ cô đặc Dựa vào đồ thị 4.10 nhận thấy 60oC độ hấp thu đạt cực đại bước sóng 564 nm, 90oC 120oC dường khơng có điểm cực đại độ hấp thu đường thẳng giảm dần từ bước sóng 455 nm đến 645 nm So với mẫu trước đặc độ hấp thu đạt cực đại hai bước sóng 564nm 618 nm, nhiệt độ tăng lên điểm cực đại giảm dần biến Hàm lượng phycobilin giảm dần tăng dần nhiệt độ cô đặc, trước cô đặc hàm lượng phycobilin thu (11465,6 µg/g), sau cô đặc hàm lượng phycobilin giảm nhanh 60oC (4611,3 µg/g) thấp 120oC (712,2 µg/g) Kết xử lý thống kê cho thấy khác biệt nhiệt độ cô đặc 60, 90 120oC khác có ý nghĩa (p < 0,01) Như nhiệt độ ảnh hưởng đến độ bền màu phycobilin, nhiệt độ thấp mức độ bền màu tốt nhiệt độ cao Khi không cô đặc dịch màu phycobilin tốt nhiên để kiểm tra độ bền màu cần 44 nâng nhiệt độ lên để khảo sát Qua chúng tơi chọn nhiệt độ 60oC làm nhiệt độ đặc cho thí nghiệm Hình 4.11 Phycobilin đặc nhiệt độ 60, 90 120oC (từ trái sang phải) 4.3.2 Ảnh hưởng thời gian Bảng 4.11 Ảnh hưởng thời gian cô đặc (phút) đến hàm lượng (µg/g) phycoerythrin (R-PE) phycocyanin (R-PC) phycobilin (C) thu nhận Thời gian (giờ) R – PE R – PC C 60 3000,8 ± 410,0 333,9 ± 50,4 3334,7 ± 460,3 90 2668,8 ± 111,6 300,9 ± 58,3 2969,7 ± 60,50 120 2695,2 ± 219,6 243,5 ± 28,0 2938,7 ± 224,6 150 2340,0 ± 439,6 226,0 ± 43,7 2566,0 ± 481,8 Dịch trích ly phycobilin cô đặc 60oC với khoảng thời gian khác (60 – 150 phút) Theo bảng 4.11, hàm lượng R – PE hàm lượng R –PC có giảm thời gian cô đặc kéo dài Tuy nhiên thay đổi không nhiều khoảng thời gian từ 60 phút đến 120 phút: R – PE giảm 22,1% R – PC giảm 32,3% Do R – PC bị ảnh hưởng thời gian cô đặc R – PE Hàm lượng phycobilin giảm từ 60 phút (3334,7 μg/g) đến 150 phút (2566,0 μg/g) so với mẫu trước đặc hàm lượng phycobilin thu (11465,6 µg/g), thời gian đặc dài kết hợp với 45 nhiệt độ cô đặc 60oC làm cho dịch màu phycobilin nhanh Khi cô đặc thời gian dài, protein phycobiliprotein bị kết tủa Theo quan sát mắt thường, dịch trích ly đặc 60, 90, 120, 150 phút có xuất kết tủa lơ lửng màu sắc chuyển sang nhạt dần Do sau 60 phút, lượng protein kết tủa đạt mức tối đa nên lúc dịch trích ly hàm lượng phycobilin thay đổi 60 phút 90 phút 120 phút Độ hấp thu 1.5 150 phút 0.5 450 500 550 600 650 Bước sóng Đồ thị 4.11 Bước sóng ảnh hưởng đến độ hấp thu phycobin khoảng thời gian đặc Nhìn vào đồ thị 4.11 ghi nhận cô đặc khoảng thời gian 60, 90, 120, 150 phút độ hấp thu phycobilin giảm dần xuất điểm cực đại bước sóng 564 nm Độ hấp thu khoảng thời gian nói chênh lệch không đáng kể So với mẫu trước đặc độ hấp thu xuất hai điểm cực đại bước sóng 564 nm 618 nm Khi thời gian cô đặc kéo dài dịch màu phycobilin khơng màu tím đỏ đặc trưng mà chuyển thành màu hồng nhạt (hình 4.12) dẫn đến độ hấp thu thay đổi theo Thông qua xử lý thống kê số liệu, khác biệt thời gian cô đặc từ 60 đến150 phút khác biệt khơng có ý nghĩa (p> 0,05) màu sắc phycobilin gần khơng khác biệt Do chúng tơi chọn thời gian 150 phút thời gian cô đặc tốt thí nghiệm 46 Hình 4.12 Phycobilin đặc khoảng thời gian 60, 90, 120 150 phút (từ trái sang phải) *Ứng dụng: Dung dịch phycobilin sau chiết tách tiến hành ứng dụng làm chất màu tự nhiên Chúng sử dụng 5g gelatin 200ml nước nấu cho hỗn hợp gelatin sôi lên sau để nguội Sau nhiệt độ hỗn hợp hạ xuống khoảng 35oC tiến hành đổ khn (hình 4.13) Ngồi dung dịch phycobilin chúng tơi ứng dụng làm chất màu tự nhiên sản phẩm kem đá Tiến hành phối chế dịch trích ly hỗn hợp gồm siro 60°Brix, hương liệu, trộn giữ lạnh ngăn đá đông đặc Dung dịch phycobilin trích ly ống nghiệm (hình 4.14) quan sát mắt thường nhận thấy dịch màu dường không khác biệt chúng tơi bảo quản 4oC vòng tuần Kết sau tuần bảo quản màu phycobilin bị ngả sang màu hồng nhạt (hình 4.15) khơng màu tím đỏ đặc trưng Điều cho thấy màu phycobilin biến đổi nhanh Có thể, bảo quản nhiệt độ thấp kéo dài protein phycobiliprotein bị kết tủa cần có chất bảo quản thích hợp 47 Hình 4.13 Ứng dụng phycobilin làm chất tạo màu Hình 4.14 Dịch phycobilin trích ly Hình 4.15 Dịch Phycobilin sau ba tuần 4oC 48 4.4 Quy trình chiết tách phycobilin từ rong mứt porphyra sp Rong khô Xay máy xay sinh tố Ủ dung dịch đệm phosphate (0,1M; pH7), 24giờ, 30oC, điều kiện tối Urea (NH2)2CO 4% Ly tâm 6000 vòng/phút, 10 phút Cô đặc 60oC, 150 phút Sản phẩm 4.4.1 Nguyên liệu Rong mứt khô mua khu vực Chợ Lớn có nguồn gốc Việt Nam Rong đóng thành bánh tròn bán theo kg, giữ ngun màu đỏ tía khơng bị tẩy màu 49 Hình 4.16 Rong mứt porphyra sp khô 4.4.2 Nghiền ủ rong Rong xay nhỏ máy xay sinh tố sau cân cho thí nghiệm 0,1g rong Cho 10 ml dung dịch đệm phosphate (0,1M; pH7) thêm (NH2)2CO 4% vào cốc lắc nhẹ, bịt miệng cốc giấy bạc phủ bên bao nilon đen Sau đem mẫu ủ nhiệt độ phòng (30oC) vòng 24 Hình 4.17 Rong sau xay Hình 4.18 Mẫu rong với dung mơi chuẩn bị ủ 4.4.3 Ly tâm Rong sau ủ nhiệt độ phòng (30oC), vòng 24 đem ly tâm 6000 vòng 10 phút Sau ly tâm phần dịch bên mang cô đặc 4.4.4 Cô đặc Phần dịch phycobilin cô đặc tủ sấy 60oC vòng 150 phút Sau đặc đo độ hấp thu phycobilin bước sóng 455, 564, 592, 618, 645 nm 50 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 5.1 Kết luận Thơng qua q trình thí nghiệm khảo sát chúng tơi đưa kết luận sau: - Dịch trích ly phycobilin hấp thu cao bước sóng 550 – 650 nm - Đối với dung môi dung dịch đệm phosphate (0,1M; pH7) cho kết hàm lượng phycobilin thu nhận cao (10696,1µg/g) Do dung dịch đệm phosphate (0,1M; pH7) phù hợp để chiết tách - Nhiệt độ ủ rong với dung dịch đệm phosphate (0,1M; pH7) 30oC, điều kiện tối thu hàm lượng phycobilin 10696,1µg/g Thời gian ủ thích hợp 24 với hàm lượng phycobilin cao (10696,1 µg/g) - pH dung dịch ủ pH7 với hàm lượng phycobilin cao (10696,1 µg/g) Như pH7 phù hợp để chiết tách - (NH2)2CO bổ sung làm tăng hiệu trích ly Sử dụng 4% (NH2)2CO cho kết tốt ( 11465,6 µg/g) Sự diện Na2SO4 CaCl2 khơng cho hiệu trích ly tốt - Nhiệt độ cô đặc tốt 60oC thời gian cô đặc 150 phút - Bảo quản phycobilin tủ lạnh tuần thấy màu phycobilin biến đổi rõ rệt từ màu tím đỏ chuyển sang màu hồng nhạt 5.2 Đề xuất - Khảo sát phương pháp chiết tách phycobilin từ rong mứt porphyra sp tươi - Khảo sát ảnh hưởng chất màu khác đến ổn định phycobilin thực phẩm - Khảo sát điều kiện cô đặc áp suất chân không với nhiệt độ thấp 51 TÀI LIỆU THAM KHẢO A.Tài liệu tiếng Việt Ngô Văn Hiến, 1978 - Kỹ thuật nuôi trồng rong biển - Đại học Nha Trang Nguyễn Thanh Tùng – Tài nguyên sinh thái rong – Tủ sách Đại học Khoa Học Tự Nhiên , 1998 Đặng Thị Sy – Tảo học – Nhà xuất Đại học Quốc Gia Hà Nội, 2005 Nguyễn Thùy Linh – Bài giảng Chế biến Thủy Sản Tổng Hợp – Đại học Nông Lâm, 2010 Nguyễn Đức Chung, 2002 – Hóa học đại cương - NXB ĐH quốc gia TP.HCM B Tài liệu tiếng nước Maria Rio A Naguit and Wilson L Tisera, Pigment analysis on Eucheuma Denticulatum (Collins and Hervey) and Kappaphycus Alvarezii (Doty) cultivars cultured at different depths, 2009 Dainippon Ink and Chemicals, 1985, Lina blue A (Natural blue colorant of Spirulina origin) Kursar, T.A., van der Meer, J.P., and Alberte, R.S (1983) Light-harvesting system of the red alga Gracilaria tikvahiae, Plant Physiol (Bethesda) 73, 353-60 Beer S, Eshel A Determining phycoerythrin and phycocyanin concentrations in aqueous crude extracts of rad algae Aust J Mar Freshwater Res 36 1985 R.Bermejo Roman, J.M.Alvarez-Pez, F.G.Acien Fernandez, E Molina Grima Recovery of pure B-phycoerythin from the microalga Porphyridium cruentum, 2001 Jeffrey and Humprey,1975 Biochem Biophys Phlanz.167: 191-194 Hopkins Marine Station of Stanford University, Pacific Grove, 1957, Properties of phycobilins from Porphyra Naiadum 52 O’Carra, P and O’hEocha, C (1966) Phytochemistry 4, 635-638 Dring, M.J Light harvesting and pigment composition in marine phytoplankton and macroalgae In: P.J Herring, A.K Campbell, M Whitfield & L Maddock (eds.), Light and Life in the Sea Cambridge University Press Pp 89-103.1990 10 Gantt, E., Phycobilisomes Ann Rev Plant Physiol ,1981 11.Glazer, A.N., Photosynthetic Accesory Proteins with Bilins Prothetics Groups The Biochemistry of Plant, vol 8.Academic Press, New York, p 51., 1981 12 Mar Biol Goodwin , T.W Carotenoids and biliproteins In: W.D P Stewart (ed.), Algal Physiology and Biochemistry Oxford: Blackwell Scientific, pp 176-205 1974 13 Grossman, AR, MR Schaeffer, GG Chiang & JL Collier (1993), The phycobilisome, a light-harvesting complex responsive to environmental conditions C Tài liệu từ internet http://en.wikipedia.org/wiki/Phycobilin http://www.wattpad.com/832624-quanghop http://nongnghiep.vn/nongnghiepvn/72/5/5/58007/Rong-bien-Can-khai-thac-che-bienhop-ly.aspx http://www.scribd.com/doc/44943905/CHAT-MAU http://baigiang.violet.vn/present/same/entry_id/7649283 53 PHỤ LỤC Phụ lục Ảnh hưởng dung dịch đệm lên q trình trích ly phycobilin Source DD Đệm Error Total Level DF N 3 Pooled StDev = SS 14525882 2119420 16645302 Mean 10696 7584 728 MS 14525882 529855 F 27,41 P 0,006 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev StDev + -+ -+ -772 ( * -) 680 ( -* ) + -+ -+ -7500 9000 10500 Phụ lục Ảnh hưởng nhiệt độ lên q trình trích ly phycobilin Source Nhiệt độ Error Total Level DF N 3 Pooled StDev = SS 21267921 2938233 24206154 Mean 10696 6931 857 MS 21267921 734558 F 28,95 P 0,006 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev StDev -+ -+ -+ -+ 772 ( -* ) 934 ( * ) -+ -+ -+ -+ 6000 8000 10000 12000 Phụ lục Ảnh hưởng điều kiện ánh sáng lên trình trich ly phycobilin Source DF SS MS F P Ánh sáng 30075368 30075368 45,96 0,002 Error 2617623 654406 Total 32692991 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N 3 Pooled StDev = Mean 10696 6218 809 StDev 772 844 + -+ -+ -+ ( -* ) ( -* ) + -+ -+ -+ 6000 8000 10000 12000 54 Phụ lục Ảnh hưởng thời gian ủ lên q trình trích ly phycobilin Source TG Error Total Level DF N 3 Pooled StDev = SS 7792577 4725115 12517692 Mean 8417 9537 10696 MS 3896289 787519 StDev 937 942 772 887 F 4,95 P 0,054 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ ( -* -) ( * -) ( -* ) -+ -+ -+ -+ 7500 9000 10500 12000 Phụ lục Ảnh hưởng pH lên q trình trích ly phycobilin Source pH Error Total Level DF SS 174235170 3727930 11 177963101 N 3 3 Pooled StDev = Mean 170 4139 10696 6444 MS 58078390 465991 StDev 18 966 772 578 683 F 124,63 P 0,000 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ (-* ) ( *-) ( *-) (-* ) -+ -+ -+ -+ 3500 7000 10500 Phụ lục Ảnh hưởng Na2SO4 lên q trình trích ly phycobilin Source Na2SO4 Error Total DF SS MS F P 681 681 0,00 0,980 3798740 949685 3799421 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev + -+ -+ -1 8604 615 ( -* -) 8582 1233 ( -* ) + -+ -+ -Pooled StDev = 975 8000 9000 10000 Phụ lục Ảnh hưởng CaCl2 lên q trình trích ly phycobilin Source CaCl2 Error Total DF SS 168200985 10 3698833 14 171899818 MS 42050246 369883 F 113,69 P 0,000 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev 55 Level N 3 3 Pooled StDev = Mean 5318 2164 2557 1712 10696 StDev 1078 76 253 143 772 608 -+ -+ -+ ( *-) (-* ) ( *-) ( *-) ( *-) -+ -+ -+ 3000 6000 9000 Phụ lục Ảnh hưởng (NH2)2CO lên q trình trích ly phycobilin Source (NH2)2CO Error Total Level DF N 3 Pooled StDev = SS 26785029 2348325 29133354 Mean 9363 11466 7240 MS 13392515 391387 StDev 540 783 519 626 F 34,22 P 0,001 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ ( * -) ( -* ) ( -* ) -+ -+ -+ 8000 10000 12000 Phụ lục Ảnh hưởng nhiệt độ tủ sấy lên q trình đặc phycobilin Source Nhiet Error Total Level DF N 3 Pooled StDev = SS 26094228 2500715 28594943 Mean 4611,3 1379,4 712,1 MS 13047114 416786 StDev 1099,4 57,4 195,8 645,6 F 31,30 P 0,001 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ -( -* -) ( -* ) ( * -) + -+ -+ -+ -0 1600 3200 4800 Phụ lục 10 Ảnh hưởng thời gian tủ sấy lên trình cô đặc phycobilin Source Thoi gian Error Total Level DF 11 N 3 3 Pooled StDev = SS 887950 996258 1884209 Mean 3334,7 2969,6 2938,7 2565,9 352,9 MS 295983 124532 StDev 460,3 60,5 224,6 481,8 F 2,38 P 0,146 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ ( -* ) ( * -) ( -* ) ( * -) -+ -+ -+ 2500 3000 3500 56 ... rong Laurencia papiosa: − Phycoerythin (PE): Tối đa 1,45 ± 0,17 mg/g fr.wt Tối thi u 0,93 ± 0,15 mg/g fr.wt − Phycocyanin (PC): Tối đa 0,79 ± 0,06 mg/g fr.wt Tối thi u 0,29 ±0,03 mg/g fr.wt (Kursar... dài làm thay đổi cấu trúc hóa học hợp chất mang trích ly 2.6.3 Thi t bị đặc Tùy vào điều kiện sở mà có thi t bị đặc khác Nhìn chung thi t bị phải thỏa mãn yêu cầu sau: (a) cường độ truyền nhiệt... đệm đến hàm lượng (µg/g) phycoerythin (R-PE) phycocyanin (R-PC) phycobilin (C) thu nhận 28 Bảng 4.3 Ảnh hưởng nhiệt độ (oC) lên hàm lượng (µg/g) phycoerythin (R-PE) phycocyanin (R-PC) phycobilin