Tuyển chọn chủng bacillus subtilis ứng dụng trong phòng và trị bệnh đường tiêu hóa trên gà

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ LÊ THỊ HẢI YẾN TUYỂN CHỌN CHỦNG BACILLUS SUBTILIS ỨNG DỤNG TRONG PHÕNG BỆNH NHIỄM KHUẨN ĐƯỜNG TIÊU HÓA TRÊN GÀ LUẬN ÁN TIẾN SĨ CHUYÊN NGÀNH BỆNH LÝ HỌC VÀ CHỮA BỆNH VẬT NUÔI MÃ SỐ: 62 64 01 02 CẦN THƠ, 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ LÊ THỊ HẢI YẾN TUYỂN CHỌN CHỦNG BACILLUS SUBTILIS ỨNG DỤNG TRONG PHÕNG BỆNH NHIỄM KHUẨN ĐƢỜNG TIÊU HÓA TRÊN GÀ LUẬN ÁN TIẾN SĨ CHUYÊN NGÀNH BỆNH LÝ HỌC VÀ CHỮA BỆNH VẬT NUÔI MÃ SỐ: 62 64 01 02 HƢỚNG DẪN KHOA HỌC PGS.TS NGUYỄN ĐỨC HIỀN Cần Thơ, 2018 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành nội dung luận văn tốt nghiệp, cố gắng học hỏi thân, nhận giúp đỡ nhiều từ quý thầy cô, bạn bè Tôi xin gởi lời cảm ơn chân thành đến: PGS TS Nguyễn Đức Hiền động viên, giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho tơi học tập, nghiên cứu hồn thành luận án Q thầy Bộ mơn Thú y, khoa Nơng nghiêp Sinh học Ứng dụng, trường Đại học Cần Thơ dạy dỗ, truyền đạt kiến thức kinh nghiệm quý báu cho suốt thời gian học tập trường Ban lãnh đạo Vemedim Corporation, Trung tâm nghiên cứu phát triển Vemedim tạo điều kiện thuận lợi để học tập, nghiên cứu nâng cao trình độ thời gian qua Cty TNHH chăn nuôi thành viên Vemedim tạo điều kiện thuận lợi cho tơi thực thí nghiệm Xin chân thành cảm ơn tất bạn bè, bạn đồng nghiệp, anh, chị, em phòng Sản phẩm sinh học, Trung Tâm nghiên cứu phát triển Vemedim hỗ trợ, chia sẻ cung cấp thông tin giúp tơi hồn thành luận án Cảm ơn gia đình người thân động viên, chia sẻ sát cánh bên tơi suốt q trình học tập thực đề tài ii TÓM LƢỢC Đề tài “Tuyển chọn chủng Bacillus subtilis ứng dụng phòng bệnh nhiễm khuẩn đường tiêu hóa gà” thực với mục đích phân lập chủng vi khuẩn B subtilis có tiềm probiotic thích hợp cho gia cầm từ đất phân trại gà Nghiên cứu nhằm tìm biện pháp thay kháng sinh phòng trị bệnh, nâng cao suất, hiệu chăn nuôi gà công nghiệp, giảm bớt nguy lan rộng dòng vi khuẩn kháng kháng sinh tự nhiên Đề tài phân lập 296 chủng vi khuẩn từ 70 mẫu đất 70 mẫu phân gà thu thập trại gà thuộc tỉnh, thành vùng ĐBSCL Các chủng vi khuẩn chọn lọc qua kiểm định sinh lý, sinh hóa với tiêu như: âm tính với lecithinase, dương tính với catalase, amylase, cellulase, VP (VogesProskauer), chịu nhiệt cao (phát triển 50oC); định danh kít API CH50B (Biomerieux-France) kết hợp với kỹ thuật sinh học phân tử giải trình tự gen 16S rRNA (sử dụng phần mềm BLAST so sánh trình tự gen sở liệu NCBI) Kết phân tích cho thấy chọn 21 chủng vi khuẩn đạt tiêu mặt sinh lý, sinh hóa theo yêu cầu mặt định danh có mức độ tương đồng gene 16S rRNA cao (≥ 99%) với B subtilis Nhằm tuyển chọn chủng vi khuẩn có tiềm probiotic, 21 chủng B subtilis tuyển chọn khảo sát đặc điểm đặc trưng cho vi khuẩn probiotic như: tính nhạy cảm kháng sinh (erythromycin, gentamycin, neomycin, oxytetracyclin, doxycyclin, colistin, sulfadimidin - trimethoprim, norfloxacin, enrofloxacin), tính chịu nhiệt (phát triển nhiệt độ từ 50-60oC), khả sinh enzyme ngoại bào (amylase, protease, lipase), khả ức chế vi khuẩn gây bệnh (E coli, S enterica, Staphylococcus spp., Streptococcus spp.), khả chịu pH acid dày (pH 2,0), khả chịu muối mật 0,3%, khả bám dính (tự bám dính, bám dính với vi khuẩn gây bệnh, bám dính tế bào biểu mơ ruột) khả sống đường tiêu hóa gà Kết cho thấy 21 chủng vi khuẩn khảo sát, B subtilis VL28 thể tốt đặc tính probiotic, chủng chọn để sử dụng thử nghiệm thức ăn bổ sung probiotic cho gà Vi khuẩn B subtilis VL28 mật độ 107 CFU/g với liều lượng g/kg thức ăn bổ sung vào thức ăn cho gà độ tuổi 1-56 ngày cho thấy hiệu tăng trọng gà đạt 11,7%, đồng thời lượng thức ăn sử dụng giảm 16,8% so với đối chứng nuôi thức ăn không bổ sung vi khuẩn Bên cạnh đó, gà 18 ngày tuổi lây nhiễm với S enterica (liều 7,5x104 CFU/mL/gà) E coli (liều 5,0x106 CFU/mL/gà), ni với thức ăn có bổ sung B subtilis VL28 với liều có khả tăng trọng tỉ lệ sống tương đương với điều trị kháng sinh enrofloxacin iii oxytetracyclin Các kết cho thấy chủng B subtilis VL28 phân lập tuyển chọn đề tài có tiềm probiotic lớn, chủng sử dụng để thay cho kháng sinh việc phòng trị bệnh đường tiêu hóa gia cầm Trình tự gen 16S rRNA B subtilis VL28 đăng ký ngân hàng gen NCBI với mã số truy cập KY346980 Từ khóa: B subtilis, gà, phân lập, định danh, probiotic iv ABSTRACT The dissertation “Isolation of Bacillus subtilis and its application on the prevention of intestinal diseases in chicken” was carried out to isolate the B subtilis strains with probiotic potential from soil and fecal samples at intensive chicken farms This study aimed to find out alternatives for antibiotics in the prevention and treatment of intestinal diseases as well as to increase productivity and effectiveness in poultry industry and also to reduce the risks of spreading antibiotic resistant bacteria in nature From 70 soil samples and 70 fecal samples of chicken farms from provinces in the Mekong Delta, 296 similarly B subtilis bacteria were isolated These isolates were analyzed further for B subtilis characteristics by physiobiological tests with the following criteria such as: negative in lecithinase, positive in catalase, amylase, cellulase, VP (Voges-Proskauer), and temperature tolerance (being able to grow at 50oC); and identified by the API CH50B kit (Biomerieux-France) in combination with the bio-molecular technique namely partial sequencing of 16S rRNA (using BLAST alignment with the known sequences on the NCBI genbank) The results showed that there were 21 isolates which satisfied the required physio-biochemical criteria, and the strain identification revealed that the similarity of gene 16S rRNA was high (≥ 99%) with B subtilis In order to select the B subtilis strain with probiotic capabilities, 21 selected B subtilis isolates were investigated further on the susceptibility to antibiotics (erythromycin, gentamycin, neomycin, oxytetracyclin, doxycyclin, colistin, sulfadimidin - trimethoprim, norfloxacin, enrofloxacin), temperature tolerance (being able to grow at 50-60oC), extracellular enzyme production (amylase, protease, lipase), bacterial pathogen inhibition properties (E coli, S enterica, Staphylococcus spp., Streptococcus spp.), tolerance to acidity of the gastric juice (pH 2,0) and 0.3% bile salts, adherence ability (autoaggregation, coaggregation, adherence to epithelial cells) and survival rate in gastrointestinal environment The results showed that among 21 isolates observed, the strain B subtilis VL28 exposed the best probiotic capabilities Consequently, this strain was chosen to use as a supplement for chicken feed The B subtilis VL28 (the density of 107 CFU/g and the dosage at g/kg of feed) was supplemented in feed for the 1-56 day old chicken The results showed that chicken growth increased by 11,7% and feed usage decreased by 16,8%, compared with the control groups without supplementing B subtilis VL28 Furthermore, the 18 day old chicken, infected by S enterica (with the dosage of 7,5x104CFU/mL/chicken) and by E coli (with the dosage of 5,0x106 CFU/mL/chicken), then fed with v B subtilis VL28 (supplemented in feed with the above described dosage), had growth ability and mortality rate equivalent to control groups treated with enrofloxacin and oxytetracyclin These results showed that the selected B subtilis VL28 strain in our study has great probiotic potential and could be used to replace antibiotics for prevention and treatment of intestinal diseases in poultry The 16S rRNA partial sequence of the new B subtilis VL28 was registered in the Genbank of NCBI with the access code KY346980 Key words: B subtilis, chicken, isolation, identification, probiotic vi MỤC LỤC Lời cam kết kết i Lời cảm ơn ii Tóm lược iii Abstract v Danh sách bảng x Danh sách hình xii Danh mục từ viết tắt xv CHƢƠNG GIỚI THIỆU 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục tiêu 1.3 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 1.4 Những đóng góp luận án 1.5 Ý nghĩa thực tiễn luận án CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU …………………………… 2.1 Tổng quan probiotic 2.1.1 Lịch sử probiotic 2.1.2 Các định nghĩa probiotic 2.1.3 Xu hướng sử dụng probiotic 2.1.4 Vai trò chế tác động probiotic 2.1.5 Cơ chế tác động probiotic gia cầm 2.1.6 Các chủng vi khuẩn thường dùng làm probiotic 12 2.1.7 Các tiêu để chọn vi sinh vật làm probiotic 13 2.1.8 Yêu cầu an toàn chủng vi sinh vật probiotic 14 2.2 Tổng quan Bacillus subtilis 15 2.2.1 Đặc điểm chung giống Bacillus 15 2.2.2 Đặc điểm loài Bacillus subtilis 16 vii 2.2.3 Dinh dưỡng tăng trưởng 22 2.2.4 Các chất B subtilis sinh 23 2.2.5 Tính đối kháng B subtilis 25 2.2.6 Một số phương pháp nghiên cứu tính đối kháng B subtilis vi sinh vật gây bệnh 26 2.3 Hệ tiêu hóa vi sinh vật đƣờng ruột 27 2.3.1 Hệ tiêu hóa gia cầm khác biệt so với động vật hữu nhũ 27 2.3.2 Vi sinh vật đường ruột tác động chúng đến vật nuôi 30 2.4 Một số vi khuẩn gây bệnh đƣờng tiêu hóa thƣờng gặp gà 31 2.4.1 Salmonella 31 2.4.2 E coli 36 2.4.3.Clostridium perfringens 39 2.5 Một số nghiên cứu probiotic giới Việt Nam 42 2.5.1 Trên giới 42 2.5.2 Tại Việt Nam 43 2.6 Một số nghiên cứu ứng dụng B subtilis 44 2.6.1 B subtilis ứng dụng cho người vật nuôi 44 2.6.2 B subtilis sử dụng cho gia cầm 45 CHƢƠNG PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 47 3.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 47 3.2 Phƣơng tiện nghiên cứu 47 3.2.1 Vật liệu 47 3.2.2 Dụng cụ 47 3.2.3 Thiết bị 47 3.2.4 Hóa chất mơi trường phân lập nuôi cấy vi khuẩn 48 3.3 Nội dung nghiên cứu phƣơng pháp nghiên cứu 49 3.3.1 Nội dung nghiên cứu 49 3.3.2 Phân lập chủng Bacillus subtilis 50 viii Nghiệm thức Mean SE Mean ĐC (-) 67.69 0.4018 ĐC (+) 68.32 0.4018 NT1 68.71 0.4018 NT2 69.40 0.4018 NT3 68.42 0.4018 Grouping Information Using Tukey Method and 95.0% Confidence Nghiệm thức N Mean Grouping NT2 69.40 A NT1 68.71 A NT3 68.42 A ĐC (+) 68.32 A ĐC (-) 67.69 A Means that not share a letter are significantly different General Linear Model: Tăng trọng 1-14 ngày versus Nghiệm thức Factor Type Levels Values Nghiệm thức fixed ĐC (-), ĐC (+), NT1, NT2, NT3 Analysis of Variance for Tăng trọng 0-14 ngày, using Adjusted SS for Tests Source DF Seq SS Adj SS Adj MS F P Nghiệm thức 53.829 53.829 13.457 15.09 0.000 Error 10 8.918 8.918 0.892 Total 14 62.746 Least Squares Means for Tăng trọng 1-14 ngày Nghiệm thức Mean SE Mean ĐC (-) 125.4 0.5452 ĐC (+) 124.7 0.5452 NT1 129.7 0.5452 NT2 125.1 0.5452 NT3 127.5 0.5452 Grouping Information Using Tukey Method and 95.0% Confidence Nghiệm thức N Mean Grouping NT1 129.7 A NT3 127.5 A B ĐC (-) 125.4 B C NT2 125.1 B C ĐC (+) 124.7 C Means that not share a letter are significantly different General Linear Model: Thức ăn 1-14 ngày versus Nghiệm thức Factor Nghiệm thức Type fixed Levels Values ĐC (-), ĐC (+), NT1, NT2, NT3 Analysis of Variance for Thức ăn 0-14 ngày, using Adjusted SS for Tests Source DF Seq SS Adj SS Adj MS F P Nghiệm thức 305.500 305.500 76.375 7.99 0.004 Error 10 95.618 95.618 9.562 Total 14 401.117 Least Squares Means for Thức ăn 1-14 ngày Nghiệm thức Mean SE Mean ĐC (-) 248.9 1.785 ĐC (+) 247.2 1.785 NT1 248.9 1.785 NT2 255.7 1.785 NT3 258.7 1.785 Grouping Information Using Tukey Method and 95.0% Confidence 210 Nghiệm thức NT3 NT2 NT1 ĐC (-) ĐC (+) N 3 3 Mean 258.7 255.7 248.9 248.9 247.2 Grouping A A B B C B C C Means that not share a letter are significantly different General Linear Model: FCR 1-14 ngày versus Nghiệm thức Factor Type Levels Values Nghiệm thức fixed ĐC (-), ĐC (+), NT1, NT2, NT3 Analysis of Variance for FCR 0-14 ngày, using Adjusted SS for Tests Source DF Seq SS Adj SS Adj MS F P Nghiệm thức 0.0240589 0.0240589 0.0060147 15.74 0.000 Error 10 0.0038209 0.0038209 0.0003821 Total 14 0.0278798 Least Squares Means for FCR 1-14 ngày Nghiệm thức Mean SE Mean ĐC (-) 1.985 0.01129 ĐC (+) 1.982 0.01129 NT1 1.919 0.01129 NT2 2.027 0.01129 NT3 2.029 0.01129 Grouping Information Using Tukey Method and 95.0% Confidence Nghiệm thức N Mean Grouping NT3 2.029 A NT2 2.027 A ĐC (-) 1.985 A ĐC (+) 1.982 A NT1 1.919 B Means that not share a letter are significantly different General Linear Model: % số chết 1-14 ngày versus Nghiệm thức Factor Nghiệm thức Type fixed Levels Values ĐC (-), ĐC (+), NT1, NT2, NT3 Analysis of Variance for % số chết 7-21 ngày, using Adjusted SS for Tests Source DF Seq SS Adj SS Adj MS F P Nghiệm thức 11.616 11.616 2.904 1.00 0.452 Error 10 29.040 29.040 2.904 Total 14 40.656 Least Squares Means for % số chết 7-21 ngày Nghiệm thức Mean SE Mean ĐC (-) 2.200 0.9839 ĐC (+) 2.200 0.9839 NT1 2.200 0.9839 NT2 3.300 0.9839 NT3 4.400 0.9839 Grouping Information Using Tukey Method and 95.0% Confidence Nghiệm thức N Mean Grouping NT3 4.400 A NT2 3.300 A ĐC (+) 2.200 A ĐC (-) 2.200 A NT1 2.200 A Means that not share a letter are significantly different 211 General Linear Model: Tăng trọng 15-28 ngày versus Nghiệm thức Factor Nghiệm thức Type fixed Levels Values ĐC (-), ĐC (+), NT1, NT2, NT3 Analysis of Variance for Tăng trọng 15-28 ngày, using Adjusted SS for Tests Source DF Seq SS Adj SS Adj MS F P Nghiệm thức 33378.7 33378.7 8344.7 127.94 0.000 Error 10 652.2 652.2 65.2 Total 14 34030.9 Least Squares Means for Tăng trọng 15-28 ngày Nghiệm thức Mean SE Mean ĐC (-) 226.0 4.663 ĐC (+) 122.2 4.663 NT1 252.8 4.663 NT2 234.4 4.663 NT3 239.2 4.663 Grouping Information Using Tukey Method and 95.0% Confidence Nghiệm thức N Mean Grouping NT1 252.8 A NT3 239.2 A B NT2 234.4 A B ĐC (-) 226.0 B ĐC (+) 122.2 C Means that not share a letter are significantly different General Linear Model: Thuc an 15-28 versus Nghiệm thức Factor Nghiệm thức Type fixed Levels Values ĐC (-), ĐC (+), NT1, NT2, NT3 Analysis of Variance for Thuc an 15-28 ngay, using Adjusted SS for Tests Source DF Seq SS Adj SS Adj MS F P Nghiệm thức 36757.2 36757.2 9189.3 38.86 0.000 Error 10 2365.0 2365.0 236.5 Total 14 39122.2 Least Squares Means for Thuc an 15-28 Nghiệm thức Mean SE Mean ĐC (-) 508.0 8.879 ĐC (+) 450.7 8.879 NT1 548.2 8.879 NT2 572.2 8.879 NT3 588.6 8.879 Grouping Information Using Tukey Method and 95.0% Confidence Nghiệm thức N NT3 NT2 NT1 ĐC (-) ĐC (+) Means that Mean 588.6 572.2 548.2 508.0 450.7 not Grouping A A A B B C share a letter are significantly different 212 General Linear Model: FCR 15-28 ngày versus Nghiệm thức Factor Nghiệm thức Type fixed Levels Analysis of Variance for Source DF Seq SS Nghiệm thức 4.6289 Error 10 0.1029 Total 14 4.7319 Values ĐC (-), ĐC (+), NT1, NT2, NT3 FCR 15-28 ngày, using Adjusted SS for Tests Adj SS Adj MS F P 4.6289 1.1572 112.43 0.000 0.1029 0.0103 Least Squares Means for FCR 15-28 ngày Nghiệm thức Mean SE Mean ĐC (-) 2.248 0.05858 ĐC (+) 3.691 0.05858 NT1 2.169 0.05858 NT2 2.444 0.05858 NT3 2.463 0.05858 Grouping Information Using Tukey Method and 95.0% Confidence Nghiệm thức N Mean Grouping ĐC (+) 3.691 A NT3 2.463 B NT2 2.444 B ĐC (-) 2.248 B C NT1 2.169 C Means that not share a letter are significantly different General Linear Model: Tỉ lệ chết 29-56 ngày versus Nghiệm thức Factor Nghiệm thức Type fixed Levels Analysis of Variance for Source DF Seq SS Nghiệm thức 721.04 Error 10 120.51 Total 14 841.55 Values ĐC (-), ĐC (+), NT1, NT2, NT3 Tỉ lệ chết 29-56 ngày, using Adjusted SS for Tests Adj SS Adj MS F P 721.04 180.26 14.96 0.000 120.51 12.05 Least Squares Means for Tỉ lệ chết 29-56 ngày Nghiệm thức Mean SE Mean ĐC (-) 2.299 2.004 ĐC (+) 20.370 2.004 NT1 1.110 2.004 NT2 4.806 2.004 NT3 7.418 2.004 Grouping Information Using Tukey Method and 95.0% Confidence Nghiệm thức N Mean Grouping ĐC (+) 20.370 A NT3 7.418 B NT2 4.806 B ĐC (-) 2.299 B NT1 1.110 B Means that not share a letter are significantly different 213 General Linear Model: tăng trọng 29-56 ngày versus Nghiệm thức Factor Nghiệm thức Type fixed Levels Values ĐC (-), ĐC (+), NT1, NT2, NT3 Analysis of Variance for tăng trọng 29-56 ngày, using Adjusted SS for Tests Source Nghiệm thức Error Total DF 10 14 Seq SS 105627 762 106388 Adj SS 105627 762 Adj MS 26407 76 F 346.76 P 0.000 Least Squares Means for tăng trọng 29-56 ngày Nghiệm thức Mean SE Mean ĐC (-) 518.2 5.038 ĐC (+) 307.5 5.038 NT1 542.3 5.038 NT2 493.5 5.038 NT3 496.8 5.038 Grouping Information Using Tukey Method and 95.0% Confidence Nghiệm thức N Mean Grouping NT1 542.3 A ĐC (-) 518.2 B NT3 496.8 B C NT2 493.5 C ĐC (+) 307.5 D Means that not share a letter are significantly different General Linear Model: thức ăn 29-56 ngày versus Nghiệm thức Factor Nghiệm thức Type fixed Levels Values ĐC (-), ĐC (+), NT1, NT2, NT3 Analysis of Variance for thức ăn 29-56 ngày, using Adjusted SS for Tests Source DF Seq SS Adj SS Adj MS F P Nghiệm thức 527211 527211 131803 56.13 0.000 Error 10 23481 23481 2348 Total 14 550692 Least Squares Means for thức ăn Nghiệm thức Mean SE Mean ĐC (-) 1738 27.98 ĐC (+) 1480 27.98 NT1 1877 27.98 NT2 1956 27.98 NT3 1999 27.98 29-56 ngày Grouping Information Using Tukey Method and 95.0% Confidence Nghiệm thức N Mean Grouping NT3 1999 A NT2 1956 A NT1 1877 A ĐC (-) 1738 B ĐC (+) 1480 C Means that not share a letter are significantly different 214 General Linear Model: FCR 29-56 ngày versus Nghiệm thức Factor Nghiệm thức Type fixed Levels Values ĐC (-), ĐC (+), NT1, NT2, NT3 Analysis of Variance for FCR Source Nghiệm thức Error Total DF 10 14 Seq SS 4.0071 0.0970 4.1041 29-56 ngày, using Adjusted SS for Tests Adj SS 4.0071 0.0970 Least Squares Means for FCR Nghiệm thức Mean SE Mean ĐC (-) 3.354 0.05687 ĐC (+) 4.811 0.05687 NT1 3.462 0.05687 NT2 3.965 0.05687 NT3 4.023 0.05687 Adj MS 1.0018 0.0097 F 103.24 P 0.000 29-56 ngày Grouping Information Using Tukey Method and 95.0% Confidence Nghiệm thức N Mean Grouping ĐC (+) 4.811 A NT3 4.023 B NT2 3.965 B NT1 3.462 C ĐC (-) 3.354 C Means that not share a letter are significantly different General Linear Model: tang 1-56 ngày versus Nghiệm thức Factor Nghiệm thức Type fixed Levels Values ĐC (-), ĐC (+), NT1, NT2, NT3 Analysis of Variance for tang 0-56 ngày, using Adjusted SS for Tests Source DF Seq SS Adj SS Adj MS F P Nghiệm thức 260185 260185 65046 2552.44 0.000 Error 10 255 255 25 Total 14 260440 Least Squares Means for tang 0-56 ngày Nghiệm thức Mean SE Mean ĐC (-) 869.7 2.915 ĐC (+) 554.4 2.915 NT1 924.8 2.915 NT2 852.9 2.915 NT3 863.5 2.915 Grouping Information Using Tukey Method and 95.0% Confidence Nghiệm thức N Mean Grouping NT1 924.8 A ĐC (-) 869.7 B NT3 863.5 B C NT2 852.9 C ĐC (+) 554.4 D Means that not share a letter are significantly different 215 General Linear Model: Thuc an 1-56 ngày versus Nghiệm thức Factor Nghiệm thức Type fixed Levels Values ĐC (-), ĐC (+), NT1, NT2, NT3 Analysis of Variance for Thuc an 0-56 ngày, using Adjusted SS for Tests Source Nghiệm thức Error Total DF 10 14 Seq SS 960410 3908 964317 Adj SS 960410 3908 Adj MS 240102 391 F 614.41 P 0.000 Least Squares Means for Thuc an 0-56 ngày Nghiệm thức Mean SE Mean ĐC (-) 2495 11.41 ĐC (+) 2101 11.41 NT1 2674 11.41 NT2 2757 11.41 NT3 2792 11.41 Grouping Information Using Tukey Method and 95.0% Confidence Nghiệm thức N Mean Grouping NT3 2792 A NT2 2757 A NT1 2674 B ĐC (-) 2495 C ĐC (+) 2101 D Means that not share a letter are significantly different General Linear Model: FCR 1-56 ngày versus Nghiệm thức Factor Nghiệm thức Type fixed Levels Values ĐC (-), ĐC (+), NT1, NT2, NT3 Analysis of Variance for FCR 0-56 ngày, using Adjusted SS for Tests Source DF Seq SS Adj SS Adj MS F P Nghiệm thức 1.66602 1.66602 0.41651 643.16 0.000 Error 10 0.00648 0.00648 0.00065 Total 14 1.67250 Least Squares Means for FCR 0-56 ngày Nghiệm thức Mean SE Mean ĐC (-) 2.869 0.01469 ĐC (+) 3.790 0.01469 NT1 2.892 0.01469 NT2 3.232 0.01469 NT3 3.234 0.01469 Grouping Information Using Tukey Method and 95.0% Confidence Nghiệm thức N Mean Grouping ĐC (+) 3.790 A NT3 3.234 B NT2 3.232 B NT1 2.892 C ĐC (-) 2.869 C Means that not share a letter are significantly different 216 Thí nghiệm 3: Đánh giá khả bảo vệ probiotic gà gây nhiễm với E.coli so với kháng sinh General Linear Model: tỉ lệ chết 1-14 ngày versus Nghiệm thức Factor Nghiệm thức Type fixed Levels Values ĐC (-), ĐC (+), NT1, NT2, NT3 Analysis of Variance for tỉ lệ chết 0-14 ngày, using Adjusted SS for Tests Source DF Seq SS Adj SS Adj MS F P Nghiệm thức 4.436 4.436 1.109 0.50 0.737 Error 10 22.178 22.178 2.218 Total 14 26.613 Least Squares Means for tỉ lệ chết 0-14 ngày Nghiệm thức Mean SE Mean ĐC (-) 2.220 0.8598 ĐC (+) 2.220 0.8598 NT1 2.220 0.8598 NT2 3.330 0.8598 NT3 3.330 0.8598 Grouping Information Using Tukey Method and 95.0% Confidence Nghiệm thức N Mean Grouping NT3 3.330 A NT2 3.330 A ĐC (+) 2.220 A ĐC (-) 2.220 A NT1 2.220 A Means that not share a letter are significantly different General Linear Model: Thức ăn 1-14 ngày versus Nghiệm thức Factor Type Levels Values Nghiệm thức fixed ĐC (-), ĐC (+), NT1, NT2, NT3 Analysis of Variance for Thuc an 0-14 ngày, using Adjusted SS for Tests Source DF Seq SS Adj SS Adj MS F P Nghiệm thức 178.70 178.70 44.67 3.71 0.042 Error 10 120.32 120.32 12.03 Total 14 299.02 Least Squares Means for Thuc an 0-14 ngày Nghiệm thức Mean SE Mean ĐC (-) 246.6 2.003 ĐC (+) 247.1 2.003 NT1 246.6 2.003 NT2 255.2 2.003 NT3 251.7 2.003 Grouping Information Using Tukey Method and 95.0% Confidence Nghiệm thức N Mean Grouping NT2 255.2 A NT3 251.7 A ĐC (+) 247.1 A NT1 246.6 A ĐC (-) 246.6 A Means that not share a letter are significantly different 217 General Linear Model: Tang 1-14 ngày versus Nghiệm thức Factor Nghiệm thức Type fixed Levels Values ĐC (-), ĐC (+), NT1, NT2, NT3 Analysis of Variance for Tang 0-14 ngày, using Adjusted SS for Tests Source DF Seq SS Adj SS Adj MS F P Nghiệm thức 87.950 87.950 21.987 26.42 0.000 Error 10 8.323 8.323 0.832 Total 14 96.272 Least Squares Means for Tang 0-14 ngày Nghiệm thức Mean SE Mean ĐC (-) 124.2 0.5267 ĐC (+) 123.5 0.5267 NT1 130.3 0.5267 NT2 126.2 0.5267 NT3 124.8 0.5267 Grouping Information Using Tukey Method and 95.0% Confidence Nghiệm thức N Mean Grouping NT1 130.3 A NT2 126.2 B NT3 124.8 B C ĐC (-) 124.2 B C ĐC (+) 123.5 C Means that not share a letter are significantly different General Linear Model: FCR 1-14 ngày versus Nghiệm thức Factor Nghiệm thức Type fixed Levels Values ĐC (-), ĐC (+), NT1, NT2, NT3 Analysis of Variance for FCR 0-14 ngày, using Adjusted SS for Tests Source Nghiệm thức Error Total DF 10 14 Seq SS 0.033609 0.010176 0.043785 Adj SS 0.033609 0.010176 Adj MS 0.008402 0.001018 F 8.26 P 0.003 Least Squares Means for FCR 0-14 ngày Nghiệm thức Mean SE Mean ĐC (-) 1.986 0.01842 ĐC (+) 2.001 0.01842 NT1 1.893 0.01842 NT2 2.022 0.01842 NT3 2.017 0.01842 Grouping Information Using Tukey Method and 95.0% Confidence Nghiệm thức N Mean Grouping NT2 2.022 A NT3 2.017 A ĐC (+) 2.001 A ĐC (-) 1.986 A NT1 1.893 B Means that not share a letter are significantly different 218 General Linear Model: FCR 15-28 ngày versus Nghiệm thức Factor Nghiệm thức Type fixed Levels Values ĐC (-), ĐC (+), NT1, NT2, NT3 Analysis of Variance for FCR 15-28 ngày, using Adjusted SS for Tests Source Nghiệm thức Error Total DF 10 14 Seq SS 7.5204 0.0410 7.5614 Adj SS 7.5204 0.0410 Adj MS 1.8801 0.0041 F 458.07 P 0.000 Least Squares Means for FCR 15-28 ngày Nghiệm thức Mean SE Mean ĐC (-) 2.191 0.03699 ĐC (+) 4.011 0.03699 NT1 2.235 0.03699 NT2 2.249 0.03699 NT3 2.297 0.03699 Grouping Information Using Tukey Method and 95.0% Confidence Nghiệm thức N Mean Grouping ĐC (+) 4.011 A NT3 2.297 B NT2 2.249 B NT1 2.235 B ĐC (-) 2.191 B Means that not share a letter are significantly different General Linear Model: tăng trọng 15-28 ngày versus Nghiệm thức Factor Nghiệm thức Type fixed Levels Values ĐC (-), ĐC (+), NT1, NT2, NT3 Analysis of Variance for tăng trọng 15-28 ngày, using Adjusted SS for Tests Source DF Seq SS Adj SS Adj MS F P Nghiệm thức 36368.8 36368.8 9092.2 165.61 0.000 Error 10 549.0 549.0 54.9 Total 14 36917.8 Least Squares Means for tăng trọng 15-28 ngày Nghiệm thức Mean SE Mean ĐC (-) 238.2 4.278 ĐC (+) 119.1 4.278 NT1 246.9 4.278 NT2 242.2 4.278 NT3 240.6 4.278 Grouping Information Using Tukey Method and 95.0% Confidence Nghiệm thức N Mean Grouping NT1 246.9 A NT2 242.2 A NT3 240.6 A ĐC (-) 238.2 A ĐC (+) 119.1 B Means that not share a letter are significantly different 219 General Linear Model: Thức ăn 15-28 ngày versus Nghiệm thức Factor Nghiệm thức Type fixed Levels Values ĐC (-), ĐC (+), NT1, NT2, NT3 Analysis of Variance for Thức ăn 15-28 ngày, using Adjusted SS for Tests Source Nghiệm thức Error Total DF 10 14 Seq SS 12034.7 3866.5 15901.2 Adj SS 12034.7 3866.5 Adj MS 3008.7 386.6 F 7.78 P 0.004 Least Squares Means for Thức ăn 15-28 ngày Nghiệm thức Mean SE Mean ĐC (-) 521.8 11.35 ĐC (+) 477.5 11.35 NT1 551.9 11.35 NT2 544.4 11.35 NT3 552.5 11.35 Grouping Information Using Tukey Method and 95.0% Confidence Nghiệm thức N Mean Grouping NT3 552.5 A NT1 551.9 A NT2 544.4 A ĐC (-) 521.8 A B ĐC (+) 477.5 B Means that not share a letter are significantly different General Linear Model: tỉ lệ chết 15-28 ngày versus Nghiệm thức Factor Nghiệm thức Type fixed Levels Values ĐC (-), ĐC (+), NT1, NT2, NT3 Analysis of Variance for tỉ lệ chết 15-28 ngày, using Adjusted SS for Tests Source DF Seq SS Adj SS Adj MS F P Nghiệm thức 2290.77 2290.77 572.69 50.12 0.000 Error 10 114.26 114.26 11.43 Total 14 2405.03 Least Squares Means for tỉ lệ chết 15-28 ngày Nghiệm thức Mean SE Mean ĐC (-) 1.111 1.952 ĐC (+) 35.249 1.952 NT1 4.559 1.952 NT2 5.747 1.952 NT3 8.046 1.952 Grouping Information Using Tukey Method and 95.0% Confidence Nghiệm thức N Mean Grouping ĐC (+) 35.249 A NT3 8.046 B NT2 5.747 B NT1 4.559 B ĐC (-) 1.111 B Means that not share a letter are significantly different 220 General Linear Model: tỉ lệ chết 29-56 ngày versus Nghiệm thức Factor Nghiệm thức Type fixed Levels Values ĐC (-), ĐC (+), NT1, NT2, NT3 Analysis of Variance for tỉ lệ chết 29-56 ngày, using Adjusted SS for Tests Source DF Seq SS Adj SS Adj MS F P Nghiệm thức 59.96 59.96 14.99 1.24 0.356 Error 10 121.30 121.30 12.13 Total 14 181.26 Least Squares Means for tỉ lệ chết 29-56 ngày Nghiệm thức Mean SE Mean ĐC (-) 4.483 2.011 ĐC (+) 6.576 2.011 NT1 1.149 2.011 NT2 6.041 2.011 NT3 6.180 2.011 Grouping Information Using Tukey Method and 95.0% Confidence Nghiệm thức N Mean Grouping ĐC (+) 6.576 A NT3 6.180 A NT2 6.041 A ĐC (-) 4.483 A NT1 1.149 A Means that not share a letter are significantly different General Linear Model: tăng trọng 29-56 ngày versus Nghiệm thức Factor Nghiệm thức Type fixed Levels Values ĐC (-), ĐC (+), NT1, NT2, NT3 Analysis of Variance for tăng trọng 29-56 ngày, using Adjusted SS for Tests Source DF Seq SS Adj SS Adj MS F P Nghiệm thức 130433 130433 32608 466.64 0.000 Error 10 699 699 70 Total 14 131132 Least Squares Means for tăng trọng 29-56 ngày Nghiệm thức Mean SE Mean ĐC (-) 480.8 4.826 ĐC (+) 283.3 4.826 NT1 545.6 4.826 NT2 513.1 4.826 NT3 502.7 4.826 Grouping Information Using Tukey Method and 95.0% Confidence Nghiệm thức N Mean Grouping NT1 545.6 A NT2 513.1 B NT3 502.7 B C ĐC (-) 480.8 C ĐC (+) 283.3 D Means that not share a letter are significantly different 221 General Linear Model: Thức ăn 29-56 ngày versus Nghiệm thức Factor Nghiệm thức Type fixed Levels Values ĐC (-), ĐC (+), NT1, NT2, NT3 Analysis of Variance for Thức ăn 29-56 ngày, using Adjusted SS for Tests Source DF Seq SS Adj SS Adj MS F P Nghiệm thức 729505 729505 182376 117.65 0.000 Error 10 15502 15502 1550 Total 14 745006 Least Squares Means for Thức ăn 29-56 ngày Nghiệm thức Mean SE Mean ĐC (-) 1666 22.73 ĐC (+) 1258 22.73 NT1 1791 22.73 NT2 1816 22.73 NT3 1864 22.73 Grouping Information Using Tukey Method and 95.0% Confidence Nghiệm thức N Mean Grouping NT3 1864 A NT2 1816 A NT1 1791 A ĐC (-) 1666 B ĐC (+) 1258 C Means that not share a letter are significantly different General Linear Model: FCR 29-56 ngày versus Nghiệm thức Factor Type Levels Values Nghiệm thức fixed ĐC (-), ĐC (+), NT1, NT2, NT3 Analysis of Variance for FCR 29-56 ngày, using Adjusted SS for Tests Source DF Seq SS Adj SS Adj MS F P Nghiệm thức 2.40420 2.40420 0.60105 165.82 0.000 Error 10 0.03625 0.03625 0.00362 Total 14 2.44045 Least Squares Means for FCR Nghiệm thức Mean SE Mean ĐC (-) 3.465 0.03476 ĐC (+) 4.440 0.03476 NT1 3.283 0.03476 NT2 3.539 0.03476 NT3 3.708 0.03476 29-56 ngày Grouping Information Using Tukey Method and 95.0% Confidence Nghiệm thức N Mean Grouping ĐC (+) 4.440 A NT3 3.708 B NT2 3.539 C ĐC (-) 3.465 C NT1 3.283 D Means that not share a letter are significantly different 222 General Linear Model: FCR 1-56 ngày versus Nghiệm thức Factor Nghiệm thức Type fixed Levels Values ĐC (-), ĐC (+), NT1, NT2, NT3 Analysis of Variance for FCR 0-56 ngày, using Adjusted SS for Tests Source Nghiệm thức Error Total DF 10 14 Seq SS 1.52635 0.03138 1.55773 Adj SS 1.52635 0.03138 Adj MS 0.38159 0.00314 F 121.59 P 0.000 Least Squares Means for FCR 1-56 ngày Nghiệm thức Mean SE Mean ĐC (-) 2.887 0.03234 ĐC (+) 3.690 0.03234 NT1 2.806 0.03234 NT2 2.930 0.03234 NT3 3.033 0.03234 Grouping Information Using Tukey Method and 95.0% Confidence Nghiệm thức N Mean Grouping ĐC (+) 3.690 A NT3 3.033 B NT2 2.930 B C ĐC (-) 2.887 B C NT1 2.806 C Means that not share a letter are significantly different General Linear Model: Thuc an 1-56 ngày versus Nghiệm thức Factor Nghiệm thức Type fixed Levels Values ĐC (-), ĐC (+), NT1, NT2, NT3 Analysis of Variance for Thuc an 0-56 ngày, using Adjusted SS for Tests Source DF Seq SS Adj SS Adj MS F P Nghiệm thức 928683 928683 232171 166.98 0.000 Error 10 13904 13904 1390 Total 14 942587 Least Squares Means for Thuc an 1-56 ngày Nghiệm thức Mean SE Mean ĐC (-) 2435 21.53 ĐC (+) 1961 21.53 NT1 2589 21.53 NT2 2583 21.53 NT3 2633 21.53 Grouping Information Using Tukey Method and 95.0% Confidence Nghiệm thức N Mean Grouping NT3 2633 A NT1 2589 A NT2 2583 A ĐC (-) 2435 B ĐC (+) 1961 C Means that not share a letter are significantly different 223 General Linear Model: tang 1-56 ngày versus Nghiệm thức Factor Nghiệm thức Type fixed Levels Values ĐC (-), ĐC (+), NT1, NT2, NT3 Analysis of Variance for tang 0-56 ngày, using Adjusted SS for Tests Source Nghiệm thức Error Total DF 10 14 Seq SS 308927 413 309340 Adj SS 308927 413 Adj MS 77232 41 F 1870.33 P 0.000 Least Squares Means for tang 1-56 ngày Nghiệm thức Mean SE Mean ĐC (-) 843.2 3.710 ĐC (+) 525.9 3.710 NT1 922.7 3.710 NT2 881.5 3.710 NT3 868.0 3.710 Grouping Information Using Tukey Method and 95.0% Confidence Nghiệm thức N Mean Grouping NT1 922.7 A NT2 881.5 B NT3 868.0 B ĐC (-) 843.2 C ĐC (+) 525.9 D Means that not share a letter are significantly different General Linear Model: tỉ lệ chết 1-56 ngày versus Nghiệm thức Factor Nghiệm thức Type fixed Levels Values ĐC (-), ĐC (+), NT1, NT2, NT3 Analysis of Variance for tỉ lệ chết 0-56 ngày, using Adjusted SS for Tests Source DF Seq SS Adj SS Adj MS F P Nghiệm thức 2574.81 2574.81 643.70 86.90 0.000 Error 10 74.07 74.07 7.41 Total 14 2648.89 Least Squares Means for tỉ lệ chết 1-56 ngày Nghiệm thức Mean SE Mean ĐC (-) 5.556 1.571 ĐC (+) 42.222 1.571 NT1 7.778 1.571 NT2 14.444 1.571 NT3 16.667 1.571 Grouping Information Using Tukey Method and 95.0% Confidence Nghiệm thức N Mean Grouping ĐC (+) 42.222 A NT3 16.667 B NT2 14.444 B C NT1 7.778 C D ĐC (-) 5.556 D Means that not share a letter are significantly different 224 ... DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ LÊ THỊ HẢI YẾN TUYỂN CHỌN CHỦNG BACILLUS SUBTILIS ỨNG DỤNG TRONG PHÕNG BỆNH NHIỄM KHUẨN ĐƢỜNG TIÊU HÓA TRÊN GÀ LUẬN ÁN TIẾN SĨ CHUYÊN NGÀNH BỆNH LÝ HỌC VÀ... thực đề tài ii TÓM LƢỢC Đề tài Tuyển chọn chủng Bacillus subtilis ứng dụng phòng bệnh nhiễm khuẩn đường tiêu hóa gà thực với mục đích phân lập chủng vi khuẩn B subtilis có tiềm probiotic thích... B subtilis đa dạng đặc tính sinh học nên khơng phải tất chủng sử dụng làm probiotic chủng probiotic phù hợp có hiệu sử dụng cho đối tượng định Đề tài Tuyển chọn chủng Bacillus subtilis ứng dụng