Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng và nồng độ interleukin 8 trong dịch cổ tử cung ở thai phụ dọa đẻ non tại BV phụ sản hà nội

1 ĐẶT VẤN ĐỀ Dọa đẻ non đẻ non ln vấn đề lớn y học nói chung sản khoa nói riêng Dọa đẻ non xem giai đoạn khởi phát chuyển đẻ non Theo tiến triển dẫn tới chuyển đẻ non thực hậu đời sơ sinh non tháng Sơ sinh non tháng có nguy bị bệnh tử vong cao nhiều so với sơ sinh đủ tháng Ở Việt Nam nay, tỷ lệ đẻ non vào khoảng từ 6,5% - 16% [1], [2 ], [3], tỷ lệ tử vong sơ sinh non tháng chiếm từ 75,3% - 87,5% tử vong sơ sinh [4] Hiện nay, với tiến y học ni sống trẻ có trọng lượng tuổi thai nhỏ song để thực điều tốn nhiều cơng sức, nhân lực, tài chính, đồng thời tỷ lệ mắc bệnh trẻ lớn lên cao Do hạn chế tỷ lệ dọa đẻ non đẻ non mục đích y học nhằm cho đời trẻ chất khỏe mạnh, thơng minh Trên giới Việt Nam có nhiều cơng trình khoa học nghiên cứu ngun nhân, yếu tố nguy cơ, triệu chứng lâm sàng, cận lâm sàng phương pháp điều trị để hạn chế tỷ lệ đẻ non [1], [3], [5], [6], [7], [8] Chính năm gần tỷ lệ đẻ non tỷ lệ bệnh tật tỷ lệ tử vong sơ sinh theo tuổi thai giảm nhiều [1], [3], [6], [9], [10] Vấn đề quan trọng để hạn chế tỷ lệ đẻ non dự phịng, phát sớm điều trị kịp thời cho sản phụ có nguy đẻ non cao, tiên lượng xác cho tình trạng dọa đẻ non đẻ non nhằm đưa biện pháp điều trị phù hợp có hiệu Với phát triển miễn dịch học, năm gần nhà khoa học giới tìm hiểu sâu sắc chế đẻ non tìm chất hóa học tham gia vào chế đẻ non Interleukin-8 [11], [12], [13] Việc phát sớm thay đổi nồng độ chất dịch cổ tử cung dự báo sớm dọa đẻ non phụ nữ có thai Nhờ bác sỹ can thiệp sớm kịp thời cho thai phụ để tránh bị đẻ non Ở Việt Nam có cơng trình nghiên cứu Interleukin-8 dịch cổ tử cung vai trị dự phịng, chẩn đốn, điều trị dọa đẻ non Vì chúng tơi thực đề tài “Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng nồng độ Interleukin-8 dịch cổ tử cung thai phụ dọa đẻ non bệnh viện Phụ Sản Hà Nội” nhằm mục tiêu sau: Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng số yếu tố liên quan thai phụ dọa đẻ non bệnh viện Phụ Sản Hà Nội Định lượng nồng độ Interleukin-8 dịch cổ tử cung thai phụ dọa đẻ non bệnh viện Phụ Sản Hà Nội CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Định nghĩa dọa đẻ non Từ trước đến có nhiều tác giả đưa định nghĩa khác đẻ non Định nghĩa thay đổi theo thời gian phụ thuộc vào khả nuôi dưỡng trẻ đẻ non sau sinh Theo định nghĩa tổ chức y tế giới (WHO) năm 1961: đẻ non trẻ đẻ có trọng lượng 2500g tuổi thai 37 tuần Từ 2004, định nghĩa WHO đẻ non trẻ đẻ có tuổi thai từ 22 đến trước 37 tuần Ở Việt Nam, theo tài liệu chuẩn quốc gia dịch vụ chăm sóc sức khỏe sinh sản Bộ Y tế ban hành năm 2009: đẻ non đẻ diễn từ tuần 22 đến hết 37 tuần [14] Cịn dọa đẻ non tình trạng đe dọa chuyển đẻ xảy thai phụ có tuổi thai từ 22 tuần đến hết 37 tuần [14] 1.2 Cơ chế bệnh sinh dọa đẻ non Cơ chế bệnh sinh dọa đẻ non đẻ non đến cịn nhiều tranh cãi chưa có giả thuyết coi tối ưu Trong số có số giả thuyết chấp nhận rộng rãi là: - Cơ chế viêm vai trò chất hóa học trung gian: chế viêm chất trung gian hóa học chế quan trọng gây chuyển Quá trình chín muồi cổ tử cung (CTC) giai đoạn đầu chuyển nhìn nhận trình viêm đặc trưng tập trung bạch cầu mô liên kết CTC [15] Sự xâm nhập tế bào viêm bạch cầu đa nhân, đại thực bào,… vào mô liên kết CTC bắt đầu trước chuyển xảy Các tế bào bạch cầu tham gia làm chín muồi CTC cách giải phóng enzym phân hủy protein proteinase elastase [16] Các tế bào bạch cầu đồng thời tiết cytokine chemokine để tiếp tục hóa ứng động tế bào bạch cầu máu đến tập trung CTC hoạt hóa tế bào bạch cầu Các tế bào viêm đồng thời xâm nhập vào vị trí khác tử cung bắt đầu chuyển bánh rau, màng rụng, nội sản mạc trình chuyển đóng vai trị tượng vỡ ối sớm - Kích hoạt sớm trục nội tiết hạ đồi -tuyến yên -tuyến thượng thận mẹ thai nhi: nghiên cứu Copper cộng Mỹ 2593 thai phụ nhận thấy căng thẳng thể chất tâm lý người mẹ có liên quan đến đẻ non trẻ có cân nặng thấp [17], [18] Nghiên cứu nhận thấy tỷ lệ đẻ non phụ nữ có thai bị trầm cảm tăng gấp đơi so với nhóm phụ nữ khơng bị trầm cảm, tỷ lệ đẻ non tăng lên theo mức độ trầm cảm phụ nữ [19] Cơ chế gây đẻ non kích hoạt trục nội tiết do: tăng tổng hợp giải phóng corticotropin-releasing hormon (CRH) [20] tăng giải phóng adrenocorticotropic hormon (ACTH) thai nhi (ACTH kích thích sản xuất estrogen bánh rau, gián tiếp làm tăng co tử cung) [21] CRH đóng vai trị quan trọng chuyển đẻ đủ tháng non tháng Bình thường CRH tuyến đồi tiết suốt thời kỳ thai nghén, CRH chủ yếu tế bào màng rụng, tế bào màng ối rau thai tiết [21] CRH kích thích tuyến yên tiết ACTH, ACTH kích thích tuyến thượng thận tiết cortisol Ở thai nghén bình thường người mẹ, cortisol có tác dụng feedback âm tính, ức chế tuyến đồi tiết CRH tuyến yên tiết ACTH Tuy nhiên CRH tiết màng rụng màng rau, CRH kích thích liên tục trục nội tiết hạ đồi - tuyến yên - tuyến thượng thận mà không bị ức chế cortisol [22] Mặt khác, CRH kích thích tổng hợp prostaglandin (PG) màng rụng, màng ối nước ối Ngược lại PG có tác dụng feedback dương tính kích thích tổng hợp CRH Những feedback dương tính tạo thành vịng xoắn kích thích lẫn để dẫn đến hậu cuối chuyển [22], [23] Ở thai nghén bình thường, chín muồi trục nội tiết hạ đồi - tuyến yên - tuyến thượng thận phát triển tuyến thượng thận thai kỳ làm tăng nồng độ cortisol thai nhi tăng tổng hợp CRH từ rau thai Khi thai nghén đủ tháng, nồng độ CRH PG tăng đủ cao để gây chuyển thai kỳ PG có tác dụng gây co tử cung làm tăng enzym protease đường sinh dục (matrix metalloproteinases - MMPs) để làm chín muồi cổ tử cung, gây chuyển [24] Nếu lý đó, trục nội tiết chín muồi sớm bình thường gây đẻ non Một nghiên cứu định lượng nồng độ CRH huyết 860 phụ nữ mang thai từ 17 đến 30 tuần cho thấy nồng độ CRH tăng cao gấp đôi thai phụ sau chuyển đẻ non so với thai phụ chuyển đẻ đủ tháng [25] Vai trò estrogen: ACTH tiết từ tuyến n thai nhi có tác dụng kích thích tuyến thượng thận tổng hợp dehydroepiandrosterone sulfat (DHEA) Sau gan thai nhi chuyển DHEA thành 16 hydroxy-DHEA CRH bánh rau tiết có khả kích thích trực tiếp tuyến thượng thận tiết hormon [26] Các androgen sau bánh rau chuyển hóa thành estrone (E1), estradiol (E2), estriol (E3) Những estrogen sau bánh rau tổng hợp gắn với receptor estrogen alpha, phát huy tác dụng làm hoạt hóa tử cung có xuất oxytocin, prostaglandin enzym kích thích co (myosin chain kinase, calmodulin) Nghiên cứu nồng độ E3 phụ nữ có thai từ 24-34 tuần cho thấy nồng độ E3 thai phụ đẻ non cao thai phụ đẻ đủ tháng nồng độ E3 tăng cao rõ rệt vòng 3-4 tuần trước chuyển Điều gợi ý vai trò E3 chế chuyển đẻ [27] - Viêm đường sinh dục: liệu lâm sàng cận lâm sàng có mối liên quan rõ rệt nhiễm khuẩn đường sinh dục chuyển đẻ non Khi có xâm nhập vi khuẩn vào đường sinh dục, receptor màng tế bào màng rụng, màng ối, cổ tử cung bánh rau gắn với vi khuẩn tiết cytokine nội sinh Đáp ứng với hóa động học chất cytokine, bạch cầu đa nhân trung tính, đại thực bào hoạt hóa tập trung vùng có nhiễm khuẩn với nhiều chất trung gian hóa học interleukin 1,6,8; yếu tố hoại tử u (Tumor Necrosis Factor - TNF), MMPs, Trong chất trung gian hóa học có hai chất quan trọng IL-1 TNF Hai chất kích thích tổng hợp prostaglandin cách kích thích tiết COX-2 vào màng rụng nước ối ức chế emzym chuyển hóa prostaglandin (15-hydroxy-prostaglandin dehydrogenase) màng đệm [11], [12] Prostaglandin có hai tác dụng gây chuyển đẻ non trực tiếp gây co tử cung làm chín muồi cổ tử cung (CTC), làm CTC mềm dễ bị xóa mở chuyển Ngồi ra, IL-1 TNF cịn có tác dụng kích thích giải phóng MMPs cổ tử cung, có tác dụng phân hủy liên kết ngoại bào cổ tử cung màng ối, làm CTC mềm dễ bị xóa mở có tác động co tử cung [28] TNF đóng vai trị quan trọng việc kích thích q trình chết theo chương trình tế bào (apotosis) Vì thế, tăng nồng độ TNF màng ối CTC làm chết tế bào biểu mô màng ối dẫn đến vỡ ối sớm [29] Hơn nữa, nhiễm khuẩn ối thường xuất với tăng chất miễn dịch màng rụng IL-8 CSF-2 (CSF – Colony Stimulating Factor) Những chất cytokine thu hút bạch cầu đa nhân đến giải phóng lượng lớn IL-1 beta, TNF, MMPs, CSF-2 IL-8 vào màng rụng Cơ chế dẫn đến tổn thương hoại tử tế bào biểu mô màng ối gây vỡ ối sớm Nhiễm khuẩn ối làm tăng sản suất IL-6 màng ối, màng rụng đồng thời kích thích tổng hợp prostaglandin tăng chế tiết G-CSF để thu hút bạch cầu đa nhân Như vậy, có xâm nhập vi khuẩn, trình viêm tiến triển người mẹ thai nhi hậu cuối tăng giải phóng chất trung gian hóa học gây viêm có tác dụng kích thích chuyển Ngược lại, có xâm nhập vi khuẩn khơng có đáp ứng mẹ thai nhi khơng có chất gây viêm không dẫn đến chuyển [30] - Chảy máu màng rụng: máu âm đạo từ màng rụng thời kỳ mang thai làm tăng nguy đẻ non vỡ ối sớm Khi có chảy máu màng rụng làm tăng nồng độ chất trung gian hóa học chất đông máu màng rụng Trong chất trung gian hóa học thrombin có vai trị quan trọng Trong chế đông máu, thrombin gắn với receptor hoạt hóa proteinase màng rụng để tăng hoạt động proteinase MMPs [31], [32] Ngoài ra, thrombin chất cảm ứng tế bào màng rụng tiết IL-8 IL-8 thu hút bạch cầu đa nhân trung tính đến, gây phá vỡ liên kết ngoại bào màng ối gây vỡ ối sớm cho dù khơng có nhiễm khuẩn [13] Một nghiên cứu thăm dò 23 thai phụ từ 24-33 tuần nhập viện điều trị dọa đẻ non cho thấy nồng độ thrombin hoạt hóa tăng cao cách rõ rệt thai phụ chuyển đẻ vòng tuần so sánh với thai phụ đẻ đủ tháng thai phụ không chuyển tuần [33] - Tử cung bị căng mức: đa thai, đa ối nguyên nhân khác làm cho tử cung bị căng mức yếu tố nguy gây đẻ non Khi tử cung bị căng mức làm xuất kênh kết nối màng tế bào tử cung, tăng cao bất thường receptor oxytocin bề mặt tế bào, tăng sản xuất prostaglandin E2, F2 tử cung, tăng enzym kích thích gây co Tất tác dụng làm thúc đẩy co tử cung xóa mở cổ tử cung [33] Sự căng giãn khoang ối góp phần hoạt hóa tử cung Khi màng ối bị căng kích thích tiết cytokine, prostaglandin collagenase từ màng ối [34], [35] 1.3 Các yếu tố liên quan đến dọa đẻ non Thông thường, yếu tố liên quan đến vấn đề xét theo khía cạnh, nhóm yếu tố nguy cơ, nhóm cịn lại yếu tố có tính chất bảo vệ Tuy nhiên dọa đẻ non, yếu tố trái ngược với yếu tố nguy yếu tố bảo vệ theo chế sinh học, khơng có yếu tố đe dọa đến dọa đẻ non, trình thai nghén chuyển diến tiến theo trình sinh lý bình thường Theo thống kê chung, có khoảng 50% số trường hợp dọa đẻ non khơng rõ nguyên nhân yếu tố nguy gây Dọa đẻ non khởi phát nhiều chế, bao gồm nhiễm trùng viêm, thiếu máu cục tuần hoàn tử cung-rau xuất huyết, tử cung căng phồng mức, căng thẳng, trình miễn dịch trung gian khác Không thể thiết lập chế xác cho hầu hết trường hợp, có nhiều yếu tố nguy liên quan đến dọa đẻ non, khơng có quan hệ nhân rõ ràng 1.3.1 Tiền sử sản khoa đẻ non Tiền sử đẻ non yếu tố nguy lớn để tiên lượng cho đẻ non lần mang thai Nguy đặc biệt tăng cao lần mang thai gần đẻ non thai phụ có nhiều lần đẻ non trước [36], [37] Đặc biệt tỷ lệ đẻ non lần mang thai tăng cao tỷ lệ thuận với số lần đẻ non trước Với thai phụ có tiền sử lần đẻ non, tỷ lệ đẻ non lần mang thai 14-22% Tỷ lệ đẻ non lần thai phụ có tiền sử hai lần đẻ non 28-42% Tỷ lệ đẻ non tăng lên rõ rệt thai phụ có ba lần đẻ non trước (67%) [38], [39] 1.3.2 Đa thai Ước tính có 2-3% trường hợp mang thai đa thai số trẻ đẻ non tỷ lệ trẻ sinh từ bà mẹ mang đa thai chiếm 17% số trẻ đẻ non trước 37 tuần 23% số trẻ đẻ non trước 32 tuần [40] Hiện nay, kỹ thuật hỗ trợ sinh sản ngày phát triển mở rộng định làm cho số lượng thai phụ chửa đa thai ngày nhiều, nguy dọa đẻ non số trẻ đẻ non đa thai ngày tăng lên Cơ chế gây dọa đẻ non đa thai tử cung bị căng mức đa thai sản xuất nhiều estrogen, progesteron steroid so với thai [41] Chính nồng độ cao chất hóa học góp phần vào chế gây dọa đẻ non 1.3.3 Ra máu âm đạo Chảy máu màng rụng với triệu chứng lâm sàng máu âm đạo từ lỗ CTC ba tháng đầu ba tháng thai nghén yếu tố nguy cho dọa đẻ non vỡ ối sớm Thai phụ máu âm đạo kéo dài có nguy dọa đẻ non đẻ non cao thai phụ máu âm đạo thời gian ngắn [42] Trong ba tháng cuối thai kỳ, máu âm đạo rau bám thấp, rau tiền đạo rau bong non Những nguyên nhân yếu tố nguy dọa đẻ non 1.3.4 Nhiễm khuẩn Đã có nhiều nghiên cứu tìm mối liên quan mật thiết nhiễm khuẩn đẻ non Những nghiên cứu giải phẫu bệnh nuôi cấy vi sinh bánh rau cho thấy tỷ lệ nhiễm khuẩn màng rau bánh rau 20-75% ca đẻ non tỷ lệ ni cấy bánh rau dương tính 30-60% [43], [44] Cơ chế gây dọa đẻ non nhiễm khuẩn q trình nhiễm khuẩn trực tiếp sản xuất prostaglandin sản xuất phospholipase A2 Phospholipase A2 làm giải phóng acid arachidonic từ màng phospholipid màng tế bào hậu tăng sản xuất prostaglandin Prostaglandin vừa có tác dụng gây co tử cung, vừa có tác dụng làm mềm CTC [45] Ngoài 10 ra, vi khuẩn gây viêm từ âm đạo gây đáp ứng viêm từ thể người mẹ làm thu hút bạch cầu đến âm đạo CTC, làm tăng nồng độ cytokine, interleukin - Nhiễm khuẩn tiết niệu: Một nghiên cứu can thiệp tổ chức y tế giới khẳng định điều trị kháng sinh cho thai phụ bị nhiễm khuẩn tiết niệu dù khơng có triệu chứng lâm sàng làm giảm tỷ lệ đẻ non thai nhẹ cân [46] - Viêm quanh chân răng: nhiều nghiên cứu cho thấy mối liên quan viêm quanh chân dọa đẻ non Những tác nhân hay gặp gây viêm quanh chân Bacteroides forsythus, Porphyromonas gingivalis, Actinobacillus actinomycetemcomitans, Treponema denticola, and Fusobacterium nucleatum Những loại vi khuẩn tìm thấy dịch ối thai phụ đẻ non có viêm quanh chân Cơ chế gây dọa đẻ non viêm quanh chân vi khuẩn đến gây nhiễm khuẩn ối qua đường máu viêm quanh chân gây phản ứng viêm toàn thân gây dọa đẻ non [47] - Viêm đường sinh dục yếu tố nguy dọa đẻ non Theo tác giả Phạm Bá Nha, tỷ lệ xét nghiệm dương tính với tác nhân gây viêm nhiễm đường sinh dục nhóm đẻ non 93,9%, nhóm khơng đẻ non 65,8% [48] Một số loại vi sinh vật gây viêm âm đạo gây dọa đẻ non Group B streptococci [49], Chlamydia trachomatis [50], Neisseria gonorrhea [51], Trichomonas vaginalis [52] 1.3.5 Các yếu tố xã hội - Công việc hoạt động thể chất: phụ nữ mang thai hoạt động thể chất nhiều có cơng việc nặng nhọc có nguy bị dọa đẻ non cao bình thường Cơ chế gây dọa đẻ non hoạt động thể chất nặng giảm dòng máu đến tử cung làm tăng nồng độ hormon không tốt cho thai nghén (corticotropin-releasing hormone, catecholamines) Một nghiên cứu cho thấy phụ nữ mang thai có công việc phải lại hoạt - HC: ……………… - Nitrit: …………… - Protein: ………… - Glucose: ………… 8.3 Siêu âm: - Ngôi: [ ], 1=ngôi đầu, 2= ngược, 3=ngơi vai - Đường kính lưỡng đỉnh:………… ( mm) - Nhịp tim thai trung bình:………….( chu kỳ/ phút) - Nước ối: 1= bình thường; [ ], - Vị trí rau bám: [ ], 1= đáy, 2= thiểu ối; 2= mặt trước, 3= dư ối 3= mặt sau - Đường kính ngang trung bình bụng:…………… (mm) - Chiều dài xương đùi:…………………………….(mm) - Chiều dài cổ tử cung: [ ] 1=≤ 32mm 2= > 32mm 8.4 Xét nghiệm dịch cổ tử cung: Nồng độ IL-8: ……………… Ngày tháng năm 2014 Người lập phiếu Cộng hòa xã hội chủ nghĩa Việt Nam Độc lập – Tự – Hạnh phúc ĐƠN TÌNH NGUYỆN THAM GIA NGHIÊN CỨU Tên là:…………………………………………………………………… Ngày tháng năm sinh:………………………………………………………… Nghề nghiệp:………………………………………………………………… Hiện điều trị tại:………………………… Bệnh viện Phụ Sản Hà Nội Sau nghe bác sỹ giải thích tìm hiểu nghiên cứu: “ Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng, nồng độ Interleukin-8 dịch cổ tử cung thai phụ dọa đẻ non Bệnh viện Phụ Sản Hà Nội” Tôi xin xác nhận: ………………………………………………………………………………… Hà Nội, ngày … tháng … năm 2014 Ký tên Phụ lục Quy trình lấy mẫu cơng thức tính nồng độ IL-8 dịch cổ tử cung Quy trình lấy mẫu xét nghiệm + Dung dịch đệm pha chế phòng xét nghiệm Trung tâm nghiên cứu Y dược học quân - Học viện Quân y theo tiêu chuẩn quy định thống Nhật Bản, thời hạn sử dụng vòng tháng kể từ ngày pha Ống đựng mẫu có sẵn 01ml dung dịch đệm bảo quản nhiệt độ 4oC chưa sử dụng + Sử dụng tăm vô khuẩn lấy mẫu IL-8 theo tiêu chuẩn Nhật Bản, phía Nhật Bản cung cấp sẵn lấy mẫu cho bệnh nhân (mỗi tăm dùng 01 lần cho 01 bệnh nhân) + Dùng tăm vô khuẩn quét quanh lỗ cổ tử cung bệnh nhân thời gian tối thiểu 10 giây cho tăm ướt đẫm dịch cổ tử cung, sau ngâm tăm bơng dung dịch đệm bảo quản nhiệt độ thích hợp trước chuyển xử lý kết Phương pháp phân tích định lượng IL-8 Sử dụng phương pháp ELISA, cụ thể sau: Nồng độ IL-8 xác định Kit ELISA, quy trình tiến hành theo hướng dẫn nhà sản xuất Tăm thấm đẫm dịch cổ tử cung tích 0,16ml, độ pha loãng dịch nhầy cổ tử cung dung dịch đệm từ 0,161,16 Khi lắc dung dịch đệm 1ml 65% IL-8 tăm pha lỗng vào dung dịch đệm, 35% cịn lại tăm bơng Nồng độ IL8 tính dựa vào độ thấm IL-8 vào tăm lấy ống cổ tử cung (0,16ml) mức độ pha loãng tăm dung dịch đệm (0,65) theo công thức Saito: Nồng độ IL-8 = [IL-8 dung dịch đệm x (1 + 0,16)/0,16]/0,65 Quy trình định lượng IL-8 dịch cổ tử cung - Nơi thực hiện: Trung tâm nghiên cứu Y dược học quân – Học viện quân Y - Phương pháp: ELISA - Máy đo: DTX 880 hãng Beckman Coulter – Mỹ - Các bước quy trình: Bước 1: Che phủ kháng thể lần (1st Ab: anti – IL-8 human, Mouse R&D, MAB208 [500µg]) 100µl/giếng Kháng thể thứ Dung dịch đệm che phủ (pH 9.6) 40µl 80µl 8ml 18ml Trữ 4oC qua đêm 37oC 1h Bước 2: Khóa (1% BSA-PBS) 200µl/giếng BSA 0.5g PBS 50ml Ủ 37oC 40 phút Bước 3: Rửa lần (PBS 0.1%) 200µl/giếng Bước 4: Pha lỗng chuẩn nồng độ dung dịch std BSA – PBS lượng lấy 40µl std 30 0.03 (ng/ml) 0.3 36 28 160 120 28 160 28 120 160 120 160(µl) 32 32 32 32 Bước 5: Cho mẫu bệnh phẩm vào giếng ủ Dung dịch chuẩn mẫu bệnh phẩm 100µl/giếng Mẫu dịch cổ tử cung 3.4µl 1% BSA-PBS 96µl Ủ 37 oC 40 phút Bước 6: Rửa lần 200µl/giếng Bước 7: Ủ kháng thể lần 100µl/giếng (2nd Ab: Anti-Human IL-8 affinity purified, PEP, 500-P28[100µg]) 2nd Ab 30µl 40µl 1% BSA-PBS 2.97ml 3.96ml Ủ 37oC 40 phút Bước 8: Rửa lần 200µl/giếng Bước 9: Ủ với kháng Ig chuột 100µl/giếng (Kháng Ig chuột: Rabbit immunoglobulins, Dako, PO 399[1ml]) Anti – Rabbit 3µl 4µl 1% BSA-PBS 3ml 4ml Ủ 37oC 40 phút Bước 10: Rửa lần 200µl/giếng Bước 11: Chuẩn bị dung dịch OPD dung dịch OPD dự trữ rã đông phút 0.1M citric acid 6ml 0.2M Na2HP4 6ml DW 13ml Viên nén OPD viên nén/ 25ml Bước 12: Phản ứng enzyme Dung dịch OPD 100ml/giếng Dung dịch OPD 3ml 4ml 30% H2O2 4.8µl 6.4µl Chờ 2.5 phút Bước 13: Bất hoạt 1N H2SO4 50µl/giếng Bước 14: Phân tích kết máy đo BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI BI C QUYT NGHIÊN CứU ĐặC ĐIểM LÂM SàNG, CậN LÂM SàNG Và NồNG Độ INTERLEUKIN-8 TRONG DịCH Cổ Tử CUNG THAI PHụ DọA Đẻ NON TạI BệNH VIệN PHụ SảN Hà NộI Chuyờn ngnh Mó s : Sn phụ khoa : 60720131 LUẬN VĂN THẠC SỸ Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS NGUYỄN DUY ÁNH HÀ NỘI -2014 LỜI CẢM ƠN Trong trình học tập hồn thành luận văn này, tơi nhận giúp đỡ chân thành thầy giáo, cô giáo, nhà khoa học, bạn bè đồng nghiệp Với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc, tơi xin chân thành cảm ơn: TS.Nguyễn Duy Ánh, Giám đốc Bệnh viện Phụ Sản Hà Nội, Phó chủ nhiệm môn Phụ sản Trường Đại học Y Hà Nội Thầy quan tâm, hướng dẫn tận tình cho tơi suốt q trình học tập làm luận văn Tơi xin gửi lời cảm ơn tới TS.Nguyễn Viết Trung chủ nhiệm khoa Sản Bệnh viện 103 – Chủ nhiệm đề tài Nghị định thư tạo điều kiện cho tơi tham gia đề tài Tơi xin bày tỏ lịng cảm ơn tới: Ban Giám hiệu, Khoa sau Đại học, Bộ môn Phụ sản Trường Đại học Y Hà Nội Ban Giám đốc, Phòng Kế hoạch tổng hợp Bệnh viện Phụ sản Hà Nội Trung tâm nghiên cứu y dược học quân - Học viện quân y Đã tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình học tập nghiên cứu Cuối cùng, tơi bày tỏ lịng biết ơn tới gia đình, người thân, bạn bè đồng nghiệp chia sẻ khó khăn khích lệ để yên tâm học tập nghiên cứu Hà Nội, 12 tháng 12 năm 2014 Bùi Đức Quyết LỜI CAM ĐOAN Tôi Bùi Đức Quyết, Cao học khóa 21, Trường Đại học Y Hà Nội, chuyên ngành Sản phụ khoa, xin cam đoan Đây Luận văn thân trực tiếp thực hướng dẫn thầy TS.Nguyễn Duy Ánh Cơng trình khơng trùng lặp với nghiên cứu khác công bố Việt Nam Các số liệu thông tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực khách quan, xác nhận chấp nhận sở nơi nghiên cứu Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm trước pháp luật cam kết Hà Nội, ngày 12 tháng 12 năm 2014 Người viết cam đoan Bùi Đức Quyết DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT IL : Interleukin TC : tử cung CTC : cổ tử cung CCTC : co tử cung hCG : human chorionic gonadotropin CRH : corticotropin-releasing hormon ACTH : adrenocorticotropic hormone PG : prostaglandin MMPs : matrix metalloproteinases DHEA : dehydroepiandrosterone sulfat TNF : Tumor Necrosis Factor CSF : Colony Stimulating Factor OR : odds ratio CI : confidence interval MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Định nghĩa dọa đẻ non 1.2 Cơ chế bệnh sinh dọa đẻ non 1.3 Các yếu tố liên quan đến dọa đẻ non 1.3.1 Tiền sử sản khoa đẻ non 1.3.2 Đa thai 1.3.3 Ra máu âm đạo 1.3.4 Nhiễm khuẩn 1.3.5 Các yếu tố xã hội 10 1.3.6 Các yếu tố cổ tử cung tử cung 11 1.4 Triệu chứng lâm sàng, cận lâm sàng dọa đẻ non, tiêu chuẩn chẩn đoán dọa đẻ non 12 1.4.1 Triệu chứng lâm sàng 12 1.4.2 Triệu chứng cận lâm sàng 13 1.4.3 Tiêu chuẩn chẩn đoán 14 1.5 Tiên lượng dọa đẻ non 15 1.5.1 Khám quản lý thai nghén định kỳ 15 1.5.2 Chỉ số dọa đẻ non 15 1.5.3 Chỉ số Bishop 16 1.5.4 Đánh giá cổ tử cung 16 1.5.5 Xét nghiệm fibronectin 17 1.5.6 Định lượng hCG cổ tử cung 17 1.5.7 Định lượng Interleukin-8 số chất khác 17 1.6 Vai trò Interleukin-8 dọa đẻ non 18 1.6.1 Interleukin-8 gì? 18 1.6.2 Vai trò Interleukin-8 dọa đẻ non 20 1.6.3 Dịch tiết cổ tử cung Interleukin-8 dịch cổ tử cung 21 1.7 Tình hình nghiên cứu ngồi nước 21 1.7.1 Các nghiên cứu dọa đẻ non 21 1.7.2 Các nghiên cứu vai trò Interleukin-8 với dọa đẻ non 22 CHƯƠNG : ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.1 Đối tượng nghiên cứu 24 2.1.1 Tiêu chuẩn chọn bệnh nhân 24 2.1.2 Tiêu chuẩn loại trừ bệnh nhân 24 2.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 25 2.2.1 Địa điểm nghiên cứu 25 2.2.2 Thời gian nghiên cứu 25 2.3 Phương pháp nghiên cứu 25 2.3.1 Thiết kế nghiên cứu 25 2.3.2 Cỡ mẫu 25 2.3.3 Nội dung nghiên cứu 25 2.4 Sai số nghiên cứu 30 2.4.1 Các sai số mắc phải nghiên cứu 30 2.4.2 Cách khắc phục sai số 31 2.5 Xử lý số liệu 31 2.6 Đạo đức nghiên cứu 32 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 33 3.1 Đặc điểm chung nhóm nhiên cứu 33 3.1.1 Đặc điểm tuổi mẹ 33 3.1.2 Đặc điểm nghề nghiệp 33 3.1.3 Đặc điểm trình độ học vấn 34 3.1.4 Đặc điểm địa dư 34 3.2 Đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng, yếu tố liên quan đến dọa đẻ non 35 3.2.1 Đặc điểm lâm sàng nhóm nghiên cứu 35 3.2.2 Đặc điểm cận lâm sàng nhóm nghiên cứu 38 3.2.3 Đặc điểm số yếu tố liên quan đến dọa đẻ non 40 3.3 Kết định lượng nồng độ IL-8 dịch cổ tử cung 43 3.3.1 Kết định lượng nồng độ IL-8 dịch cổ tử cung nhóm nghiên cứu 43 3.3.2 Khảo sát mối liên quan nồng độ IL-8 dịch cổ tử cung với số yếu tố nguy 44 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 48 4.1 Đặc điểm chung 48 4.1.1 Tuổi mẹ nhóm nghiên cứu 48 4.1.2 Đặc điểm nghề nghiệp nhóm nghiên cứu 48 4.1.3 Đặc điểm trình độ học vấn nhóm nghiên cứu 49 4.1.4 Đặc điểm phân bố địa dư nhóm nghiên cứu 50 4.1.5 Tuổi thai nhóm nghiên cứu 50 4.2 Đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng số yếu tố nguy 51 4.2.1 Đặc điểm lâm sàng dọa đẻ non 51 4.2.2 Đặc điểm cận lâm sàng dọa đẻ non 54 4.2.3 Một số yếu tố nguy dọa đẻ non 56 4.3 Định lượng nồng độ Interleukin-8 dịch cổ tử cung 58 4.3.1 Nồng độ trung bình IL-8 dịch cổ tử cung nhóm nghiên cứu 58 4.3.2 Về liên quan nồng độ IL-8 dịch cổ tử cung với yếu tố nguy 59 KẾT LUẬN 62 KHUYẾN NGHỊ 64 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Bảng 1.2 Bảng 3.1 Bảng 3.2 Bảng 3.3 Bảng 3.4 Bảng 3.5 Bảng 3.6 Bảng 3.7 Bảng 3.8 Bảng 3.9 Bảng 3.10 Bảng 3.11 Bảng 3.12 Bảng 3.13 Bảng 3.14 Bảng 3.15 Bảng 3.16 Bảng 3.17 Bảng 3.18 Bảng 3.19 Bảng 3.20 Bảng 3.21 Bảng 3.22 Bảng 4.1 Bảng số Gruber 15 Bảng số Bishop 16 Tuổi mẹ trung bình 33 Đặc điểm nghề nghiệp nhóm nghiên cứu 33 Đặc điểm trình độ học vấn nhóm nghiên cứu 34 Đặc điểm địa dư nhóm nghiên cứu 34 Triệu chứng nhóm nghiên cứu 35 Tần số co tử cung hai nhóm nghiên cứu 36 Độ mở cổ tử cung hai nhóm nghiên cứu 37 Số lượng bạch cầu xét nghiệm công thức máu hai nhóm nghiên cứu 38 Tỷ lệ bạch cầu trung tính hai nhóm nghiên cứu 38 Sự xuất bạch cầu nước tiểu nhóm nghiên cứu 39 Kết xét nghiệm hồng cầu niệu nhóm nghiên cứu 39 Đặc điểm chiều dài CTC siêu âm nhóm nghiên cứu 40 Đặc điểm hút thuốc, uống rượu, viêm quanh nhóm nghiên cứu 40 Tiền sử sảy thai nhóm nghiên cứu 41 Đặc điểm tiền sử thai lưu nhóm nghiên cứu 41 Tiền sử phá thai nhóm nghiên cứu 42 Tiền sử đẻ non nhóm nghiên cứu 42 Tiền sử bệnh phụ khoa nhóm nghiên cứu 43 Nồng độ trung bình IL-8 dịch cổ tử cung nhóm nghiên cứu 43 NĐTB IL-8 dịch cổ tử cung nhóm nghiên cứu theo tiền sử đẻ non 44 NĐTB IL-8 dịch cổ tử cung nhóm nghiên cứu theo tiền sử bệnh phụ khoa 45 NĐTB IL-8 dịch cổ tử cung nhóm nghiên cứu theo chiều dài cổ tử cung 45 So sánh kết với tác giả khác 52 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 Tỷ lệ nhóm tuổi thai nhóm dọa đẻ non 35 Biểu đồ 3.2 So sánh triệu chứng nhóm nghiên cứu 36 Biểu đồ 3.3 Tương quan nồng độ IL-8 dịch cổ tử cung tuổi thai 46 Biểu đồ 3.4 Tương quan nồng độ IL-8 dịch cổ tử cung với tuổi thai 47 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Mơ hình cấu trúc phân tử Interleukin-8 20 ... trị dọa đẻ non Vì thực đề tài ? ?Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng nồng độ Interleukin- 8 dịch cổ tử cung thai phụ dọa đẻ non bệnh viện Phụ Sản Hà Nội? ?? nhằm mục tiêu sau: Nghiên cứu đặc điểm. .. đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng số yếu tố liên quan thai phụ dọa đẻ non bệnh viện Phụ Sản Hà Nội Định lượng nồng độ Interleukin- 8 dịch cổ tử cung thai phụ dọa đẻ non bệnh viện Phụ Sản Hà Nội 3... khám lâm sàng, cận lâm sàng Lấy dịch cổ tử cung xét nghiệm IL -8 Mô tả đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng, nồng độ IL -8 thai phụ dọa đẻ non 27 2.3.3.2 Quy trình lấy mẫu quy trình định lượng nồng độ