Nghiên cứu thành phần hóa học thân rễ ngãi đen (kaempferia parviflora wall ex baker)

64 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ VÂN 1201694 BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC THÂN RỄ NGÃI ĐEN (Kaempferia parviflora Wall.ex Baker) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI- 2017 i BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LỜI CẢM ƠN Trong thời gian làm khóa luận tốtTHỊ nghiệp, em nhận quan tâm, động NGUYỄN VÂN viên, giúp đỡ tận tình từ thầy cơ, gia đình bạn bè 1201694 Cho phép em gửi lời cảm ơn chân thành tới TS Lê Việt Dũng, TS Đỗ Thị Hà - Viện Dược liệu giao đề tài quan tâm hướng dẫn, giúp đỡ em tận tình NGHIÊN CỨU q trình thực khóa luận Viện Dược liệu Với lòng kính trọng biết ơn sâu sắc, em xin gửi lời cảm ơn tới PGS.TS THÀNH PHẦN HÓA HỌC Vũ Văn Điền–người thầy tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện cho em thực hồn thành khóa luận Viện Dược liệu THÂN RỄ NGÃI ĐEN Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới ThS Trần Thanh Hà vàcác chị, (Kaempferia parviflora Wall.ex Baker) bạn khoa Hóa thực vật 2- Viện Dược liệu hướng dẫn, bảo nhiệt tình lý thuyết lẫn thực hành cho em suốt thời gian làm nghiên cứu Viện LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Trường đại học Em xinKHĨA chân thành cảm ơn thầy mơn Thực vậtDược Hà Nội TS.Trần Thế Bách- Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật nhiệt tình giúp đỡ em nghiên cứu đặc điểm thực vật xác định tên khoa học Lấu Cuối cùng, em xin gửi lời biết ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè, ln bên em, chia sẻ khó khăn, động viên, giúp đỡ em học tập sống Người hướng dẫn: TS Hà Vân Oanh M CL C PGS.TS Đỗ Thị Hà DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT2.TẮT i Nơi thực hiện: DANH MỤC BẢNG i Khoa Hóa thực vật LỜI CẢM ƠN Viện Dược liệu Để hoàn thành luận văn này, tơi xin bày2.tỏBộlòng kính trọng ơn sâu mơn Dược họcvà cổbiết truyền Trường Đại học Dược Hà Nội ii sắc tới TS Hà Vân Oanh - người thầy tận tình hướng dẫn, bảo cho tơi suốt trình thực đề tài LỜI CẢM ƠN Để hồn thành luận văn này, tơi xin bày tỏ lòng kính trọng biết ơn sâu sắc tới TS Hà Vân Oanh - người thầy tận tình hướng dẫn, bảo cho tơi suốt q trình thực đề tài Tôi xin gửi lời cảm ơn đến PGS TS Đỗ Thị Hà cán bộ, nhân viên khoa Hóa Thực vật, Viện Dược liệu tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ trình thực đề tài Tơi xin gửi lời cám ơn đến Ths Lê Thị Loan - người giúp đỡ tơi q trình thực đề tài Tơi xin cảm ơn tới người tài trợ kinh phí cho đề tài "Khai thác phát triển nguồn gen thuốc Sâm tố nữ (Pueraria candollei Grah ex Benth var mirifica Airy Shaw & Suv.) Ngải đen (Kaempferia parviflora Wall ex Baker)" Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình, người thân, bạn bè bên cạnh động viên giúp đỡ tơi hồn thành luận văn iii MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT i DANH MỤC BẢNG ii DANH MỤC HÌNH ẢNH ii ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG I - TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Kaempferia 1.1.1 Vị trí phân loại 1.1.2 Đặc điểm thực vật 1.1.3 Đa dạng phân bố 1.1.4 Thành phần hóa học 1.1.5 Tác dụng sinh học công dụng 1.2.Tổng quan loài Kaempferia parviflora Wall Ex Baker 10 1.2.1.Đặc điểm thực vật 10 1.2.2 Phân bố 10 1.2.3 Thành phần hóa học 11 1.2.4 Tác dụng sinh học 13 CHƯƠNG II - ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 Nguyên liệu, dung mơi, hóa chất 18 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 18 2.1.2.Dung mơi, hóa chất 18 2.1.3 Dụng cụ, thiết bị, máy móc 18 2.2 Phương pháp nghiên cứu 18 2.2.1 Định tính nhóm chất thường gặp phản ứng hóa học đặc trưng 19 2.2.2 Chiết xuất, phân lập hợp chất từ Ngãi đen 23 2.2.3 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập 24 CHƯƠNG III - THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 25 i 3.1 Thực nghiệm, kết .25 3.1.1 Kết định tính nhóm chất hữu thường gặp phản ứng hóa học đặc trưng 25 3.1.2 Chiết xuất, phân lập hợp chất từ thân rễ Ngãi đen 26 3.1.3 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập 31 3.2 Bàn luận 41 3.2.1 Về kết định tính nhóm chất hữu thường gặp 41 3.2.2 Về kết chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc 41 CHƯƠNG IV - KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 43 4.1 Kết luận 43 4.2 Kiến nghị .43 TÀI LIỆU THAM KHẢO ……………………………………………….44 PHỤ LỤC ii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT 13 C-NMR H-NMR DCM DEPT HMBC Phổ cộng hưởng từ hạt nhân cacbon 13 (Cacbon 13 Nuclear Magnetic Nesonance Spectroscopy) Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton (Proton Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy) Diclomethan Phổ DEPT (Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer) Phổ cộng hưởng từ hạt nhân hai chiều (Heteronuclear Multiple Bond Coherence) IC50 Nồng độ ức chế 50% KPE Dịch chiết ethanol Kaempferia parviflora Wall Ex Baker MS Phổ khối lượng phân tử (Mass Spectrometry) PDE Phosphodiesterase Ppm 10-6(parts per million) SKLM Sắc ký lớp mỏng TT Thuốc thử TLTK Tài liệu tham khảo i DANH MỤC BẢNG Tên bảng Bảng 1.1 Phân bố số loài thuộc chi Kaempferiaở Việt Nam Bảng 1.2 Bảng tóm tắt thành phần hóa học chi Kaempferia L Bảng 1.3 Bảng tóm tắt tác dụng sinh học chi Kaempferia Bảng 1.4 Các flavonoid phân lập từ thân rễ Ngãi đen (Kaempferia parviflora Wall ex Baker) Bảng tóm tắt tác dụng sinh học thân rễ Kaempferia parviflora Wall ex Baker Kết định tính sơ nhóm chất có dược liệu Bảng 1.5 Bảng 3.1 Bảng 3.2 Bảng 3.3 Bảng so sánh liệu phổ D4 5,3-dihydroxy-3,7,4'trimethoxyflavon Bảng so sánh liệu phổ D6 3,5,7trimethoxyflavon i Trang 3 11 16 25 35 40 DANH MỤC HÌNH ẢNH Tên hình Hình 1.1 Hình 1.2 Hình 1.3 Hình 1.4 Hình 1.5 Hình 1.6 Hình 1.7 Hình 1.8 Hình 1.9 Các hợp chất phân lập từ tinh dầu số lồi thuộc chi Kaempferia Cấu trúc hóa học flavonoid phân lập từ số loài thuộc chi Kaempferia Cấu trúc hóa học steroid phân lập từ lồi Kaempferia angustifolia Cấu trúc hóa học ester phân lập từ lồi Kaempferia angustifolia Cấu trúc hóa học ester phân lập từ lồi Kaempferia rotunda Cấu trúc hóa học kaempfolienol, panduratin A, βsitosterol, daucosterol Cấu trúc hóa học chung flavonoid Ngãi đen Cấu trúc hóa học số flavonoid dạng glycosid phân lập từ thân rễ Kaempferia parviflora Wall ex Baker Cấu trúc hóa học số glycosid phân lập từ thân rễ Kaempferia parviflora Wall ex Baker Trang 5 6 7 11 12 13 Hình 1.10 Cấu trúc hóa học củaβ-sitosterol, daucosterol 13 Hình 3.1 Sơ đồ chiết xuất cao phân đoạn 27 Hình 3.2 Hình 3.3 Hình 3.4 Hình 3.5 SKLM cao phân đoạn diclomethan sử dụng hệ dung môi khác Sơ đồ phân lập chất từ phân đoạn diclomethan Ngãi đen SKLM cao phân đoạn diclomethan chất phân lập hệ n-hexan:ethylacetat (2 :1) SKLM cao phân đoạn diclomethan chất D4, D6 hệ diclomethan : methanol (40:1) 28 30 30 31 Hình 3.6 Tín hiệu phổ 13C hợp chất D4 32 Hình 3.7 Phổ proton giãn rộng hợp chất D4 33 ii Hình 3.8 Phổ HSQC hợp chất D4 34 Hình 3.9 Phổ HMBC hợp chất D4 34 Hình 3.10 Phổ EI-MS hợp chất D4 35 Hình 3.11 Cấu trúc hóa học D4 35 Hình 3.12 Tín hiệu phổ 13C hợp chất D6 37 Hình 3.13 Phổ proton giãn rộng hợp chất D6 38 Hình 3.14 Phổ HSQC hợp chất D6 38 Hình 3.15 Phổ HMBC hợp chất D6 39 Hình 3.16 Phổ EI-MS hợp chất D6 39 Hình 3.17 Cấu trúc hóa học D6 40 iii ĐẶT VẤN ĐỀ Ngãi đen có tên khoa học làKaempferia parviflora Wall ex Baker, họ Gừng(Zingiberaceae) loài thảo dược lâu năm Cây phân bố chủ yếu Ấn Độ, Trung Quốc, Malaisia, Thái Lan Lào [12], [21] Ở Việt Nam loài phát tỉnh ĐăkLăk, Gia Lai Thanh Hóa [1] Ở vùng Đơng Bắc Thái Lan, thân rễ Kaempferia parviflora Wall ex Bakerđã sử dụng để điều trị bệnh đường miệng [11], đau bụng, đầy hơi, rối loạn tiêu hóa [36], rối loạn colic, loét dày, tá tràng [37], tăng cường sinh lực điều trị gút, áp xe [38] Trên giới có nhiều nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng dược lý Các nghiên cứu hoạt tính sinh học cho thấy lồi Kaempferia parviflora Wall ex Bakercó nhiều tác dụng chống viêm [24], [25], [34], kháng khuẩn[8], chống dị ứng [35], bảo vệ dày [22], giãn mạch [33], ức chế phosphodiesterase [32], ức chế xanthin oxidase [19].Các nghiên cứu nước thành phần hóa học từ lồi Kaempferia parvifloria cho biết nhóm chất chủ yếu gồm flavonoid[10],[25], chalcon, tecpenoid [17],[37] Kaempferia parviflora Wall ex Bakerlà loài tiềm nghiên cứu ứng dụng Tại Việt Nam, có nghiên cứu thành phần hóa học thử tác dụng chống oxy hóa tác dụng độc tế bào thực Bùi Kim Anh cộng (2017)[1] Tuy nhiên, nghiên cứu chưa xác định nhóm chất cây, số lượng chất phân lập khiêm tốn so với nghiên cứu nước Xuất phát từ thực tế trên, đề tài “Nghiên cứu thành phần hóa học từ thân rễ Ngãi đen (Kaempferia parviflora Wall ex Baker)” thực với mục tiêu sau: Định tính nhóm chất phản ứng hóa học Chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc số hợp chất III IV V Phụ lục 1.3 Phổ DEPT Phụ lục 1.4 Phổ1H-NMR VI VII Phụ lục 1.5: Phổ 13C-NMR VIII Phụ lục 1.6: Phổ MS PHỤ LỤC 2: Phổ chất D6 Cấu trúc hóa học của D6 Phụ lục 2.1 Phổ HSQC IX Phụ lục 2.2 Phổ HMBC X 10 XI Phụ lục 2.3 Phổ DEPT 11 XII Phụ lục 2.4 Phổ1H-NMR 12 XIII Phụ lục 2.5: Phổ 13C-NMR Phụ lục 2.6: Phổ MS 13 XIV PHỤ LỤC 3: Kết định tính nhóm chất hữu Ngãi đen phản ứng hóa học 1.Phản ứng Cyanidin 6.Phản ứng với chì acetat 10% 2.Phản ứng với kiềm 7.Phản ứng với đồng acetat 3.Phản ứng với FeCl3 5% (định tính flavonoid) 8.Phản ứng với Ninhydrin 3% 4.Phản ứng với FeCl3 5% (định 9.Phản ứng Liebermann tính tanin) 5.Phản ứng với gelatin 1% Burchardat 14 – I PHỤ LỤC 4: Phiếu giám định tên khoa học II PHỤ LỤC 5:Danh sách loài thuộc chi Kaempferia ST T Loài ST T 21 22 23 10 11 Kaempferia alboviolacea Ridl Kaempferia angustifolia Roscoe Kaempferia attapeuensis Picheans & Koonterm Kaempferia candida Wall Kaempferia champasakensis Pichean s & Koonterm Kaempferia chayanii Koonterm Kaempferia cuneata Gagnep Kaempferia elegans (Wall.) Baker Kaempferia evansii Blatt Kaempferia fallax Gagnep Kaempferia filifolia K.Larsen 12 Kaempferia fissa Gagnep 32 13 14 Kaempferia galanga L Kaempferia galanga var latifolia (D onn) Gagnep Kaempferia gigantiphylla Picheans & Koonterm Kaempferia gilbertii W.Bull Kaempferia glauca Ridl 33 34 15 16 17 18 19 20 Kaempferia grandifolia Saensouk & Jenjitt Kaempferia harmandiana Gagnep Kaempferia koratensis Picheans 24 25 26 27 28 29 30 31 35 36 37 Loài Kaempferia laotica Gagnep Kaempferia larsenii Sirirugsa Kaempferia lopburiensis Pichea ns Kaempferia ovalifolia Roxb Kaempferia parviflora Wall ex BakerWall ex Baker Kaempferia philippinensis Merr Kaempferia pulchra Ridl Kaempferia purpurea J.Koenig Kaempferia roscoeana Wall Kaempferia rotunda L Kaempferia saraburiensis Piche ans Kaempferia sawanensis Pichean s & Koonterm Kaempferia siamensis Sirirugsa Kaempferia simaoensis Y.Y.Qia n Kaempferia sisaketensis Pichea ns & Koonterm Kaempferia spoliata Sirirugsa Kaempferia undulata Teijsm & Binn I ... chất phân lập khiêm tốn so với nghiên cứu nước Xuất phát từ thực tế trên, đề tài Nghiên cứu thành phần hóa học từ thân rễ Ngãi đen (Kaempferia parviflora Wall ex Baker) thực với mục tiêu sau:... phân lập từ thân rễ Kaempferia parviflora Wall ex Baker Cấu trúc hóa học số glycosid phân lập từ thân rễ Kaempferia parviflora Wall ex Baker Trang 5 6 7 11 12 13 Hình 1.10 Cấu trúc hóa học củaβ-sitosterol,... tóm tắt thành phần hóa học chi Kaempferia L Bảng 1.3 Bảng tóm tắt tác dụng sinh học chi Kaempferia Bảng 1.4 Các flavonoid phân lập từ thân rễ Ngãi đen (Kaempferia parviflora Wall ex Baker) Bảng