Nghiên cứu nhân giống cây bạch đàn lai U6 bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào (Khóa luận tốt nghiệp)

Nghiên cứu nhân giống cây bạch đàn lai U6 bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu nhân giống cây bạch đàn lai U6 bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu nhân giống cây bạch đàn lai U6 bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu nhân giống cây bạch đàn lai U6 bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu nhân giống cây bạch đàn lai U6 bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu nhân giống cây bạch đàn lai U6 bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu nhân giống cây bạch đàn lai U6 bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu nhân giống cây bạch đàn lai U6 bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào (Khóa luận tốt nghiệp)

i I H C THÁI NGUYÊN I H C NÔNG LÂM THÚY LINH NGHIÊN C U NHÂN GI NG CÂY B B Y MƠ T BÀO KHĨA LU N T T NGHI H o IH C : Chính quy Chuyên ngành : Công ngh sinh h c Khoa : CNSH - CNTP Khoá h c : 2011 - 2015 ii I H C THÁI NGUYÊN I H C NÔNG LÂM THÚY LINH NGHIÊN C U NHÂN GI NG CÂY B B Y MƠ T BÀO KHĨA LU N T T NGHI H o IH C : Chính quy Chuyên ngành : Công ngh sinh h c L p : K43 - CNSH Khoa : CNSH - CNTP Khoá h c : 2011 - 2015 Gi ng d n : ThS ThS Lê Th H o ng i L IC Qua tháng th c t p t i B môn Công Ngh T Bào, Vi n Khoa h c S S c k t qu em xin chân thành c ng, Ban ch nhi m khoa, Vi n Khoa H c S S u ki em th i gian qua Em xin bày t lòng bi Th.S Lê Th H i th c t i th y giáo Th.S i cô tr c ti em su t trình nghiên c u, h c t Cu i em xin chân thành c ng viên, ng, ng d n, t n tình ch b o giúp tài i thân, b em su t trình h c t p nghiên c u Em xin chân thành c ! Sinh viên th c hi n Thúy Linh ii DANH M C CÁC B NG B ng 4.1 K t qu ng c a n B n kh i b ch (sau 25 ngày nuôi c y) 32 B ng 4.2 K t qu ng c n kh ib U6 (sau 25 ngày nuôi c y) 35 B ng 4.3 K t qu nh ng c a s k t h p gi n kh ib B ng 4.4 K t qu y) 37 ng c n kh ch i b lai U6 (sau 20 ngày nuôi c y) 39 B ng 4.5 K t qu ng c n kh ch i b lai U6 (sau 20 ngày nuôi c y) 41 B ng 4.6 K t qu ng c n kh ch i b U6 (sau 20 ngày nuôi c y) 42 B ng 4.7.K t qu nghiên c u b ng c a m t s giá th n t l s ng c a ng) 45 iii DANH M C CÁC HÌNH Hình 4.1 Bi b th hi n ng c Hình 4.2 Bi th hi n n kh ng c Hình 4.3 Bi th hi n Hình 4.5 Bi b Hình 4.6 Bi Hình 4.6 34 n kh n kh ib 36 ng c a Kinetin k t h p v n kh 37 ng c a s k t h p gi ch i b b ib ng c ib Hình 4.4 Bi i 35 Hình 4.2 Hình 4.3 n kh 33 Hình 4.1 ch i b c ng c a B n kh 38 th hi n ng c n kh ch i 40 th hi n ng c n kh ch i 41 th hi n ng c ng c a m t s ch ch i c a gi ng b n kh u ti ch i b 43 n kh 44 iv DANH M C CÁC T VI T T T 2,4-D : 2,4-diclorophenolxy acetic acid BAP : Benzyl amino purin i ch ng Cs : C ng s CT : Công th c CV : Coeficient of Variation u ti tt ng t s ch IBA : Indole - - butylric acid Kinetin : 6-Furfurylaminopurine LSD : Least Singnificant Difference Test MS : Murashige & Skoog (1962) NAA : 1- Napthalene acetic acid NXB : Nhà xu t b n TB : Trung bình TDZ : Thidiazuron WPM : Woody Plant Medium v M CL C : : chung v urophylla 2.3.3 11 11 11 12 13 14 urophylla 14 14 19 20 20 21 2.5 2.5.1 21 21 vi 2.5.2 22 : 25 25 25 25 25 25 25 25 26 31 3.6 31 : 32 32 39 44 44 : 47 47 5.2 47 48 48 50 PH N M 1.1 U tv Trong nh n công nghi p c a Vi t Nam ngày phát tri n xu t gi công nghi g gia d ng M t s c tr ng phát tri i nhi u l i ích kinh t cịn g i b c Eucalyptus urophylla S.T Blake, B ch thu c h Sim Myrtaceae (Hoàng Th S n cs, 2009) [13].Là lo i m c t nhiên có ngu n g c t châu Úc, chúng có th sinh thái r p trung i m t ph vùng th p ven bi m c nh ng vùng cao (2000m so v i m t bi n) hay vùng khô c n (sa m c ho c bán sa m c) Vi ng b nh mi n Nam, B c Hi n b c hai c tr ng ph bi n mang l i nhi u l T u qu kinh t , nâng cao thu nh p c a nhi m nghèo mi n núi c a Vi t Nam ( th s d b m t s t nh cs, 2002) [5] Gi ng b urophylla lo i có kh r ng, d tr ng nhi u lo nhi sinh thái a hình khác nhau, có kh u gió bão có làm r ng phịng h , ch ng thân th ng p, t a cành t nhiên t t, không v t s o thân nên thu hút nhi i tr l i t s gi ng b ch , 2003) [6] B gia khác ho ch g p dài ngày c ta, b c ta c tr ng sau 7- làm nguyên li u ch bi n b t gi m t s qu c cho thu B khai thác làm g gia d ng, g xây d ng [14] Hi n nay, nhu c u s d ng c ng g gi y tiêu th ngày nhi c s n xu t v di n tích tr ng b yêu c u pd th ng gi yêu c u c i tr ng Mai cs, 2010) [10] ng cho th d ng, c n ph i có s ng s n xu t gi y s n xu ng gi ng v i ch m b o, gia nh c s n xu t gi ng b ng h t hay b ng công ngh giâm hom cho hi u qu s n xu nhân gi s , gi ng s n xu t khơng hồn tồn s ch b nh, s n xu t ph thu c vào th i v c v n chuy n gi t c a sau (Nguy n c Thành, 2000) [18] Nh ng nhu c u th c ti n trên, ti tài: u nhân gi ng b y mô t 1.2 M tài Nghiên c u nhân gi ng b ch c y mô t bào 1.3 Yêu c u c tài nh ng c a m t s ch u ti n kh ng c a m t s ch u ti n kh ib nh ch i b nh ng c a m t s giá th n t l s ng c a b ch 42 * Nh n xét: Qua b ng 4.4 hình 4.4, sau 20 ngày nuôi c y ta th y không b sung IAA ta th y s r khác, ng n n t 1,01 r /cây, r ng n, màu nâu M t ng có b sung IAA s r /cây chi u dài TB r t ng công th c 0,4 mg/l cho s r /cây cao nh t B ng 4.6 K t qu n theo ng b sung IAA v i n t 2,92 s r /cây, chi u dài r 1,6 cm ng c n kh ch i b lai U6 (sau 20 ngày nuôi c y) Công Chi u dài T l S r / IBA ( mg/l) r (%) (r ) 0,0 31.54 1.01 0.26 Nâu CT2 0,1 94.4* 3.8* 1.60* Tr ng CT3 0,2 83.3* 3.4* 2.00* Tr ng CT4 0,3 96.4* 4.3* 1.90* Tr ng CT5 0,4 83.2* 3.1* 1.60* Tr ng CT6 0,5 87.0* 3.6* 1.80* Tr ng LSD 5.03 0.95 0.12 CV% 3.50 1.60 4.20 th c N Ghi chú: (*) Ch t Ch ng r t t; ng r x u; (**) Ch TB r Màu s c r (cm) ng r trung bình; (***) 43 (sau 20 ngày nuôi c y) * Nh n xét: Qua b ng 4.6 hình 4.6, nh n th y t l r bi 31.54 n 96,40% Sau 20 ngày nuôi c y, IBA ta th y t l r ng r kém, r th y n IBA 0,3 mg/l cho t l r t t nh IBA t l r t 1.01 r , chi u dài r ng có b sung IBA, ta 4.30 r , chi u dài r cao, ch t 96,40 %, s r ng r t t, r có màu tr t 83,20% lên 87,00%, ch Theo tác gi cho gi ng b ng không b sung t 31.54%, s r ng n, ch ng t t n ng r trung bình u ni c y mô thành công 29C3 ng MS* b sung IBA n K t qu cho th y m ng r thích h p mơi 1.5mg/l t l r t 97.3% cs, 2002) [13] Darus H Ahmas thu c vi n nghiên c u lâm nghi k t qu r B cc E pellita Nh ng ch i nhân nhanh có chi u cao ng t o r ch ng t t nh t 44 cho t o r IBA 1000 ppm v i t l r 40% (O L Gamborg, G C Phillips, 1997) [26] So sánh k t qu nghiên c u c a v i cơng trình cơng b cho th y k t qu nghiên c u c a tác gi có s thích s khác bi t v gi ng b c a tác gi khác nên d u có th gi i thành ph ng n k t qu khác IBA 0,0mg/l IBA 0,3mg/l Hình 4.6 Ch i b ng r có b sung ch u ti ng (sau 25 ngày nuôi c y) 4.3 K t qu nghiên c u ng c a m t s giá th n t l s ng c a b n cu i c a quy trình nhân gi quy n hi u qu c a r , thân, t bình ni c l s ng cao hi u qu c a k thu t nhân gi ng l t ph c kh ng d ng cao 45 B ng 4.7.K t qu nghiên c u ng c a m t s giá th c a b Công CT1 CT2 (sau 60 ngày tr ng) Giá th th c t t ng B 50% t t ng B + 50% tr u hun CT3 50% t t ng B + 50% bã n m CT4 t t ng B+ 30% tr u hun + 20% bã n m CT5 50% n t l s ng t t ng B + 30% tr u hun + 20% phân gà T l s ng S S (cây) s ng (cây) 30 15 50,00 30 27 90,00 30 21 70,00 30 16 53,33 30 19 63,33 (%) sau 60 ngày CV% 5,9 LSD 7,3 * Nh n xét: Qua b ng 4.7 ta th y CT2 cho t l s ng cao nh s ng th p nh V i giá tr t 90%, CT t l t 50% sau 30 ngày nuôi c y t 7,3 cơng th c 2, cơng th c 3, công th c sai i ch ng Theo dõi k t qu sau 60 ngày tr ng, t l s ng c a in vitro giá th t t ng B + tr u hun ng phát tri n t t Trên giá th vàng, th i g c), t l s ng th Theo t 90% sinh t t ng B phát tri n nh t (lá t 50% Mai cs (2000 thích h p cho B ch t t ng B + 45% tr u hun + 10% phân chu ng hoai m c cho t l 46 phát tri t 93.33% ng phát tri n t t Mai cs,2000) [9] K t qu có th lý gi l t t ng B + tr u hun v i t p, giàu din ng d thích nghi, b úng hay th i r a, phát tri n t t Giá th có ch xu ch t d b sít c, r b ch c ng K t lu n: Giá th thích h p cho sinh tr ng phát tri n c a B ch t t ng B + tr u hun v i t l 1:1, cho t l s ng cao, phát tri n t t 47 PH N K T LU N VÀ KI N NGH 5.1 K t lu n ng MS* có b sung 30g/l saccarose + 100mg/l myo inositol + in 5,5g/l agar + BAP 0,6 mg/l; pH = 5,7 thích h p cho nhân nhanh ch i b vitro cho h s nhân ch t 3,55 l n chi u cao trung bình ch t 3,47cm ng MS* có b sung saccarose 30g/l + myo inositol 0,1g/l + agar 5,5g/l + IBA cho trung bình s r l r ng r thích h p t o hồn ch nh t 4,30 r /cây chi u dài trung bình r t 1,90 cm, t t 96,40% Giá th thích h p cho B nh t y mô cho t t ng B + tr u hun v i t l 1:1 cho t l s l s ng cao t 90,00 %, phát tri n t t 5.2 Ki n ngh C n ti p t r kh ng b ng, phát tri công ngh s n xu t b y mô s n xu t di n t ki m tra ch ng gi ng b ng k thu t nuôi c y mô quy mô công nghi p nh m cung c p gi ng ph c v s n xu m 48 TÀI LI U THAM KH O I Ti ng Vi t Nguy n Th Lý Anh cs (2008), Nhân gi ng b b ng k thu t th y canh, T p chí Khoa h c Phát tri n 2008: T p VI, S 4: 305-311 Ngơ Xn Bình (2010), Ni c y mơ t bào th c v t - lý lu n ng d ng, NXB Khoa h c - K thu t, Hà N i X lý k t qu thí nghi m máy tính b ng Ph m Ti IRRISTAT 4.0 Windows, NXB Nông Nghi p ng Ng c Hùng (2009), Nghiên c u nhân gi ng dòng b UE35 UE56 gi a Eucalyptus urophylla E Exserta b pháp nuôi c y mô, lu i h c Nông lâm Thái Nguyên cs (2002), Công ngh nhân gi ng s n xu t gi ng tr ng, gi ng lâm nghi p gi ng v t nuôi, NXB Nông nghi p, Hà N i, trang 166 - 182 (2003), Ch n t o nhân gi ng cho m t s loài tr ng r ng ch y u Vi t Nam, NXB Nông nghi p, Hà N i Nguy n Hoàng L c (2006), Giáo trình cơng ngh t bào, Nhà xu t b n h c Hu , TP Hu Mai (2004), Báo cáo k t qu th c hi tài: KC.04.08 Hồn thi n quy trình nhân nhanh gi ng tr ng r ng t cao b ng công ngh nuôi c y mô t bào th c v t cho m t s dòng keo lai, b ch , Vi n Khoa h c Lâm nghi p Vi t Nam Mai cs (2000), K t qu b 2000 u v nhân gi ng b y mô phân sinh, T p chí Lâm Nghi p, s 10 - 49 Mai cs (2010), Báo cáo t ng h p k t qu khoa h c, Nghiên 10 c u nhân nhanh gi ng keo lai t nhiên, keo lai nhân t o, b b o( m i ch n t o) lát hoa b ng công ngh t bào, Vi n Khoa h c Nông nghi p Vi t Nam 11 Nga, 1997,Trung tâm nghiên c u nguyên li u gi y Phù Ninh, ng d ng công ngh nuôi c y mô nhân hom lâm nghi p Vi n Khoa h c Nông nghi p Vi t Nam Ch n gi ng b 12 Nguy ng kháng b nh us theo sinh Vi t Nam, NXB Nông nghi p, Hà N i 13 Hồng Th S n cs (2009), Giáo trình Phân lo i h c th c v t, NXB Giáo d c Nhân gi ng m t s loài tr ng r 14 ch ng cao b t, háp nuôi c y mô, Vi n Khoa h c Nông nghi p Vi t Nam 15 Nguy n Ng c Tân, Tr n H Quang (1997).Nhân gi ng lai gi a b ch u b ng b y mô.K t qu nghiên 117 c u Khoa h c v ch n gi ng r ng.Nhà xu t b n nông nghi p, trang 103- 107 16 Nguy n Ng c Tân cs (1997) Nhân gi ng Keo Lai b ng nuôi c y mô phân sinh.K t qu nghiên c u Khoa h c v ch n gi ng r ng T p 2, Ch Nhà xu t b n Nông nghi p, trang 147 - 152 17 Nguy n Quang Th ch (2000), Giáo trình sinh lý th c v t, NXB Nơng nghi p, Hà N i 18 Nguy c Thành (2000), Nuôi c y mô t bào th c v t - nghiên c u ng d ng, NXB Nông nghi p, Hà N i 19 Nguy n Kim Thanh (2005), Giáo trình sinh lý h c th c v t, Nxb Giáo d c, Hà N i 50 công ngh sinh h c, 20 Nguy n Quang Th ch cs (2009), Nxb Nông Nghi p, Hà N i Công ngh sinh h c tr ng, Nxb Nông Nghi p, 21 Hà N i cs (2008), Giáo trình cơng ngh sinh h c, Nxb Giáo D c 22 II Ti ng Anh 23 Bhat K M and Hwanok Ma (2002), Teak growers unite, in ITTO tropical forest update, pp - 24 Dodd J H., Roberts L W.(1999), Experiments in plant tissue culture, Cambridge University press, United Kingdom 25 Eldridge K, J Davidson, C Harwood and G van Wyk (1996) Eucalyptus provenances for short rotation forestry Experiment Station, HARC, April 10,1996 25 Harwood, C E., 1998 Eucalyptus pellita, An annotated Biography CSIROnForestry and Forest Products, Australia 70 pp 26 Gamborg O L, culture- Plant Cell, Tissue and Organ , Lab Manual 27 Higa, A.R., & Resende, M D V., 1994 Breeding acacia mearnsii in Southern Brazil.Australia Tree Species Research in China ACIAR Proceedings, No.48, Ed A G Brown, pp 158 - 160 28 Sharma J K (1994), Pathological investigations in forest nurseries and plantations in Vietnam, FAO VIE/92/022 Hanoi, Vietnam 46 p 29 Trindate, H Ferreina, J G Pais, M S Aloni, R (1990), The role of Cytokinin and auxin in rapid multiplication of shoots of Eucalyptus globolus grown in vitro, Aust For 53(4), pp 221-223 K t qu ng c n kh ib K t qu ng c a Kinetin n kh ib K t qu ng c a s k t h p gi a BAP v nhân nhanh ch i b n kh K t qu ng c a N n kh c a ch i b K t qu ng c a IB n kh c a ch i b K t qu ng c n kh c a ch i b ... thành cơng khác M t nguyên t c nuôi c y mô t bào v t li u nuôi c y non kh y, t bào mô phôi non tri n v ng nh M sinh d nh ng n t bào c ur nh sinh bào Noãn t bào t bào h t ph n n non (Nguy n Ng... u, cách trình bày m t báo khoa h c +S d ch y mô t bào nh m nâng cao h s nhân ng b - i c ti n: Nâng cao hi u qu nhân gi ng b g pháp nuôi c y mô t bào, làm gi cung c p gi ng b t, ch i th ng ng... vi nghiên c u Gi ng b n nhân nhanh t i phòng thí nghi m B mơn Cơng Ngh T bào, Vi n Khoa h c S S i h c Nông lâm Thái Nguyên Nghiên c u ng c a m t s ch ch i b bào nghiên c u u ti ng ng pháp nuôi