Nghiên cứu ảnh hưởng của một số chất điều hòa sinh trưởng thực vật đến quá trình nhân nhanh in Vitro cây Đinh lăng lá nhỏ (Polyscias fructicosa (L.) Harms) (Khóa luận tốt nghiệp)

Nghiên cứu ảnh hưởng của một số chất điều hòa sinh trưởng thực vật đến quá trình nhân nhanh in Vitro cây Đinh lăng lá nhỏ (Polyscias fructicosa (L.) Harms) (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu ảnh hưởng của một số chất điều hòa sinh trưởng thực vật đến quá trình nhân nhanh in Vitro cây Đinh lăng lá nhỏ (Polyscias fructicosa (L.) Harms) (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu ảnh hưởng của một số chất điều hòa sinh trưởng thực vật đến quá trình nhân nhanh in Vitro cây Đinh lăng lá nhỏ (Polyscias fructicosa (L.) Harms) (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu ảnh hưởng của một số chất điều hòa sinh trưởng thực vật đến quá trình nhân nhanh in Vitro cây Đinh lăng lá nhỏ (Polyscias fructicosa (L.) Harms) (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu ảnh hưởng của một số chất điều hòa sinh trưởng thực vật đến quá trình nhân nhanh in Vitro cây Đinh lăng lá nhỏ (Polyscias fructicosa (L.) Harms) (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu ảnh hưởng của một số chất điều hòa sinh trưởng thực vật đến quá trình nhân nhanh in Vitro cây Đinh lăng lá nhỏ (Polyscias fructicosa (L.) Harms) (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu ảnh hưởng của một số chất điều hòa sinh trưởng thực vật đến quá trình nhân nhanh in Vitro cây Đinh lăng lá nhỏ (Polyscias fructicosa (L.) Harms) (Khóa luận tốt nghiệp)

I H C THÁI NGUYÊN I H C NÔNG LÂM NGUY N TH Tên tài: NGHIÊN C U NG TH C V NG C A M T S CH U HÒA SINH N QUÁ TRÌNH NHÂN NHANH IN VITRO (Polyscias fructicosa (L.) Harms) KHÓA LU N T T NGHI H o Chuyên ngành Khoa Khóa h c Gi ng d n IH C : Chính qui : Cơng ngh sinh h c : CNSH&CNTP : 2011 - 2015 : ThS TS Nguy i L IC hoàn thành lu nh c g ng n l c c a b c r t nhi u s nhi t tình c a th y cô giáo, b n bè i thân c h t em xin g i l i c i Ban giám hi i h c Nông lâm Thái Nguyên, Ban ch nhi m khoa Công ngh sinh h c Cơng ngh th c ph m tồn th th th t cho em nh ng ki n t th i gian h c t p rèn luy n t ih c Nông lâm Thái Nguyên Em xin bày t lòng bi n Duy TS Nguy ng d ng viên em su t trình làm khóa lu n cc B mơn Gi ng Công Ngh Sinh H c - Trung tâm Nghiên c u Tr ng Ch bi n thu c Hà N i - Vi u ki n thu n l c Li u, Ban em trình làm khoá lu n Cu i cùng, em xin g i l i c bên c em su t trình h c t p th c hi Em xin trân thành c Thái Nguyên, tháng Sinh viên Nguy n Th tài ii DANH M C CÁC B NG B ng 2.1: Các nguyên t B ng 4.1: K t qu ng d ng s d ng .20 ng c in vitro n kh (30 ngày) 38 B ng 4.2: K t qu ng c in vitro n kh (30 ngày) 40 B ng 4.3: K t qu ng c in vitro n kh (30 ngày) 42 B ng 4.4: K t qu ng c a lo in vitro (45 ngày, 60 ngày) 44 nhân nhanh ch B ng 4.5: K t qu ch B ng 4.6: K t qu ch B ng 4.7:K t qu ng Cytokinin t t nh t t i kh ng c a t h n kh in vitro (45 ngày) .45 ng c a t h n kh in vitro (45 ngày) .47 ng c n kh nh (30 ngày) 50 B ng 4.8:K t qu ng c n kh nh (30 ngày) 51 B ng 4.9: K t qu ng c a t h n kh hoàn ch nh (45 ngày) .53 B ng 4.10: K t qu ng c a t h p n kh hoàn ch nh (45 ngày) .55 B ng 4.11: K t qu c u qu công th c t o r in vitro n t l s ng u ki n ex vitro 58 iii DANH M C CÁC HÌNH Hình 2.1: Hình Vi t Nam .5 Hình 2.2: M t s hình nh nh n d Hình 4.1: M u l y t in vivo .39 Hình 4.2: Ch Hình 4.3: y 39 nh ch ng BAP công th c thí nghi m (ch p sau c y 30 ngày) 41 Hình 4.4: nh ch ng kinetin cơng th c thí nghi m (ch p sau c y 30 ngày) 43 Hình 4.5: C m ch i CT3 46 Hình 4.6: C m ch i CT4 46 Hình 4.7: Ch c c y hàng lo t o c m ch ng: MS + 2,5 mg/l BAP + 0,4 mg/l IBA .46 Hình 4.8: nh ch t h p BAP NAA cơng th c thí nghi m (ch p sau c y 45 ngày) 48 Hình 4.9: R ng b sung NAA ( nh ch p 45 ngày sau c y) 50 Hình 4.10: Tr ng thái r CT 3: MS + mg/l BAP (ch p sau c y 30 ngày) .52 Hình 4.11: Tr ng thái r CT 6: MS + 2,5 mg/l BAP (ch p sau c y 45 ngày) 52 Hình 4.12: Hình thái r CT2 (ch p sau c y 45 ngày) .54 Hình 4.13: Hình thái r CT3 (ch p sau c y 45 ngày) .54 Hình 4.14: Cây hồn ch nh công th c t t nh t (CT3: trái CT4: ph i) ( nh ch p sau c y 45 ngày) 56 Hình 4.15: Cây t CT (ch p sau tháng) 58 Hình 4.16: Cây t CT (ch p sau tháng) 58 iv DANH M C CÁC T , C M T BAP : 6-Benzylaminopurine Cs : C ng s CT : Công th c CV : Coeficient of Variation VI T T T i ch ng IBA : Indole butyric acid Kinetin : 6-Furfurylaminopurine LSD : Least Singnificant Difference Test MS : Murashige & Skoog (1962) MT NAA Zeatin ng -naphthalene acetic acid : 6-(4-hydoxy-3methylbut-2enyl) v M CL C PH N 1: M tv U 1.2 M c tiêu yêu c u c tài .2 1.2.1 M c tiêu c tài 1.2.2 Yêu c u c tài .2 tài .2 1.3 c 1.3 c ti n .2 PH N 2: T NG QUAN TÀI LI U .4 2.1 Gi i thi u v chi 2.1.1 Ngu n g c s phân b 2.1.2 V trí phân lo i 2.1.3 Các loài thu c chi Polyscias có Vi t Nam .4 2.2 Gi i thi u v 2.2.1 Mô t 2.2.2 Phân b , sinh thái 2.2.3 B ph n s d ng 2.2.4 Thành ph n hóa h c 2.2.5 Tác d c lý [2] .8 2.2.6 Tính v cơng d ng .9 2.2.7 Nhu c u s d ng kh n xu t n 10 2.3 T ng quan v nuôi c y mô t bào 12 2.3.1 Khái ni m 12 ng in vitro .12 lý lu n c mc ng in vitro .14 2.3.4 Quy trình nhân gi ng in vitro 17 2.3.5 ng d ng c a nhân gi ng in vitro nhân gi ng thu c 18 2.3.6 M t s y u t 2.4 Tình hình nghiên c u v n q trình ni c y mơ t bào th c v t 19 th gi i Vi t Nam 23 vi 2.4.1 Tình hình nghiên c u v th gi i 23 2.4.2 Tình hình nghiên c u v Vi t Nam 25 PH N 3: NG, N U 30 ng ph m vi nghiên c u 30 ng 30 3.1.2 Ph m vi nghiên c u .30 m th i gian ti n hành 30 m 30 3.2.2 Th i gian nghiên c u 30 3.3 N i dung nghiên c u 30 3.3.1 N i dung 1: Nghiên c u in vitro n kh 30 3.3.2 N i dung 2: Nghiên c u ng c a ch in vitro kh 3.3.3 N i dung 3: Nghiên c u kh ng c a n o n .30 ng c a ch n hoàn ch nh 31 u qu công th c t o r in vitro 3.3.4 N i dung 4: n t l s ng c a u ki n ex vitro .31 u 31 o m u vô trùng .31 trí thí nghi m 31 3.4.3 n hành thí nghi m 32 3.4 3.4.5 .36 lý s li u .37 PH N 4: K T QU NGHIÊN C U VÀ TH O LU N 38 4.1 K t qu nghiên c u ng c a n n kh in vitro .38 4.2 K t qu nghiên c u in vitro 4.2.1 K t qu nghiên c u vitro inh l ng c a ch n kh 40 ng c a n n kh in 40 vii 4.2.2 Nghiên c u ng c a n in vitro n kh .42 4.2.3 K t qu nghiên c u nhanh in vitro ng c a t h n kh 45 4.2.4 K t qu nghiên c u nhanh in vitro ng c a t h n kh 47 4.3 K t qu nghiên c u ng c a ch n kh hoàn ch nh 49 4.3.1 K t qu nghiên c u ng c a n n kh o inh hoàn ch nh 49 4.3.2 K t qu nghiên c u ng c a n IBA n kh o hoàn ch nh .51 4.3.3 K t qu nghiên c u ng c a t h n kh o hoàn ch nh .53 4.3.4.K t qu nghiên c u ng c a t h n kh o hoàn ch nh 55 4.4 K t qu giá hi u qu công th c t o r in vitro n t l s ng c a u ki n ex vitro 57 PH N 5: K T LU NGH 60 5.1 K t lu n 60 ngh .60 TÀI LI U THAM KH O 61 I Ti ng Vi t 61 II Ti ng Anh .63 III Internet 65 PH N M U 1.1 Polyscias fruticosa (L.) Harms) thu c h Cây (Araliaceae) m t thu cs d Nhân sâm i y h c c truy n Vi t Nam Nhi u nghiên c u cho th y tác d ng ch a b nh giá tr kinh t c Polyscias fruticosa (L.) Harms) c bi t r c inh ph n có ng saponin triterpenoid polyacetylen cao, có tác d c g n gi ng ng tr m c m ch ng oxy hóa Do v y, g Vi t Nam ng tr quy mô l nhu c u v gi nhi u vùng nên c nhân gi ng ch y u b n ch h s nhân gi ng th u ch cho r c cm ib tái sinh n th i tình t lúc tr - 10 ng - u xu t hi n t ph n g c c a ch i n thu ho u d c r c ph i m t kho ng m giá tr kinh t giá thành s n ph m c Do v cách t t nh i v i l y c g, rút ng n th i gian thu ho s d ng t nuôi c t c bi u Bên c c li u có b r có kh n thành r c t ngu n t nh t v m t di truy mb ov c yêu c u v xu t nguyên li u tính n s phát sinh hình xây d ng quy trình nhân gi ng in vitro c m ng ru ng th c v quy nh cho s n i Q trình ni c y in vitro có r t nhi u y u t thái c ng nt tc nghiên c u khâu vào ng c a ch u hòa n c a quy trình ni c y y u t nh s thành b i c a tồn b quy trình ni c y góp ph n hồn thi n quy trình nhân gi ng in Xu t phát t th c ti vitro , m t s ch xu ng th c v tài: Nghiên c u ng c a n trình nhân nhanh in vitro (Polyscias 1.2 Nghiên c c ng c a m t s ch trình nhân nhanh in vitro ng th c v n (Polyscias fructicosa (L.) Harms) 1.2.2 - Nghiên c vitro c ng c a n c ng c a ch in n kh - Nghiên c in vitro - Nghiên c ng n kh ng n kh c ng c a ch hoàn ch nh - giá c hi u qu công th c t o r in vitro n t l s ng c a u ki n ex vitro 1.3 1.3 K t qu nghiên c u s góp ph n xây d ng quy trình nhân gi inh y in vitro, b c li u có giá tr c minh ch ng v n kh ch ng c a ch u ti t sinh nh ch i, h s nhân nhanh ch i, phát sinh r t o hoàn ng c a giá th n kh ng c a in vitro 1.3 K t qu nghiên c u c b tài góp ph n hồn thi n quy trình nhân gi inh ng 63 23 Lê Th o, Hoàng H u Tu n, Mai Th Ti n Vinh, Tr n (2014) Nhân gi ch nh T b ng k thu t nuôi c y c li u, 19(1), Tr.46- 52 24 B ch Mai (2005), "Nghiên c u v s phát sinh hình thái ni c y in vitro phát tri n KH&CN, Polyscias fruticosa (L.) Harms", T p chí i h c Qu c Gia TP.HCM, 8(11), Tr 47-51 25 Nguy n Th Ng ng Tr Polyscias fruticosa (L.) Harms) có truy n t Vi t Nam b ng k thu t RAPD", T 26 Nguy n Th Ng c Trâm, Nguy c h c, 54(457), Tr 25-30 n, Hoàng Tuy t Minh, Ph m Th Th y (2014) Nghiên c u phát tri n ngu T mi n c h c, 54(462), Tr.30-36 c s c kh e xanh Báo cáo Khoa 27 Nguy h c h i th - nh ng góc nhìn - i thách th c" c a cơng ty c ph u tra kh o sát 28 tình hình tr ng tr t tiêu th - nh, Báo cáo t ng k hai huy n H i H tài, Vi c li u, D án Biotrade 29 (1999), Sinh lý th c v t ng d ng, Nxb Giáo d c, Hà n i 30 (1999), Sinh lý th c v t, Nxb Giáo d c, Hà n i 31 , Nguy n M ng Hùng, Lê H p (2009), Công ngh sinh h c t p 2-Công ngh sinh h c t bào, Nxb Giáo d c II 32 Bernard B.M., Pakianathan N and Divakar M.C (1998), ''On the antipyretic, anti-inflammatory, analgesic and molluscicidal properties of polyscias fruticosa (L) Harms'', Anc Sci Life 17(4), pp.313-9 33 Bernard B.M., Pakianathan N., Venkataswamy R and Divakar M.C (1998), ''A pharmacognostic report on the leaf and root of polyscias fruticosa (L.) Harms'', Anc Sci Life 18(2), pp.165-72 64 34 Bhojwani S.S and Razdan M.K (1980), Plant tissue culture- Theory and practice, Elsevier Academic Publ., Amsterdam 35 Bhojwani S.S., Razdan M.K (1983), Plant tissue culture - Theory and practice, Elsevier Academic Publ., Amsterdam 36 Chaboud A., Rougny A., Proliac A., Raynaud J and Fr Pharmazie 50(5), pp.371 37 oleanolic saponin from Polyscias fr Pharmazie 51(8), pp.611-612 discorea floribunda 38 Chaturvedi H.C., Sinha M (1979), , Ext Bull No6 NBRI Lucknow, India 39 Debergh P.C and Zimmeiman P.H (1991), Micropagation-Techniques and Application, Kenwer Academi Pube 40 Duy H.V., Yamamura S., Ohtani K., Kasai R., Yamasaki K., Nham N.T and Phytochemistry, 47(3), pp.451-457 41 Koffuor G.A.,Boye A., Ofori-Amoah J., Kyei S., Abokyi S., Nyarko R.A and Bangfu R.N Anti-inflammatory and safety assessment of Polyscias fruticosa (L.) Harms (Araliaceae) leaf extract in ovalbumin-induced asthma'', The Journal of Phytopharmacology, 3(5), pp 337-34 42 Murashige T., (1980), Plant growth Substances 1979, ed by F.Skoog Springer- Verlag, Berlin Heidelberg New York, pp 426 - 434 43 Murashige T and Skoog R bioassay Physiol Plant 15: 473-479 44 Murashige T., Serpa M.and Jones J.B Hortcience 9, pp.175-180 45 applied and Fundamental aspects of plants cell, tissue and Organ culture 65 Eds.J.Reinert and Y.P.S Bajaj Springer - Verlag, Berlin Heidelberg New York, pp 179 - 145 46 Nickell Hawaiian - Planters Record 58: 239 - 314 47 Salwa S.S., Saad S.M., El-Shamy M A and Abd Elhafez A.E (2014), ''In vitro Propagation of Polyscias fruticosa Plant'', International Journal of Plant & Soil Science 3(10):1254 -1265 48 Shad R.R and Dalal on of liquorice by axillary bud cultures , In: Plant tissue culture Genetic Manipulatin and somatic Hybridisation of plant cells Eds.P.S.Rao, M.R.Heble and MS Chadha Bhabha Atomic Research Centre, Bombay 49 Staritsky palm (Elaeis guineensis Jacq) as a Euphytica, pp.288-292 50 Varadharajan R and Rajalingam D (2011), ''Diuretic activity of polyscias fruticosa (L.) Harms'', International Journal of Innovative Drug Discovery 1(1), pp.15-18 III Internet 51 http://langnghehaihau.vn/tin-tuc/vung-duoc-lieu-trong-cay-dinh-lang.html#.V Web9c_tmko 52 53 http://www.lrchueuni.edu.vn/dongy/show_target.plx?url=/thuocdongy/D/ DinhLang.htm&key=&char=D 54 http://www.uphcm.edu.vn/caythuoc/index.php?q=node/314 55 http://www.caydinhlanglamthuoc.com PH L NG NUÔI C Y Table 1: Preparation of modified Bottle I II III IV V Component NH4NO3 KNO3 MgSO4.7H2O MnSO4.4H2O ZnSO4.7H2O CuSO4.5H2O CaCl2.2H2O KI CoCl2.6H2O KH2PO4 H3BO4 Na2MoO4.2H2O FeSO4.7H2O Na2EDTA.2H2O 82,5 95 37 2,23 1,058 0,0025 44 0,083 0,0025 17 0,62 0,025 2,784 3,724 mg/100ml 100 100 100 100 Sucrose 0,5 2,0 0,1 0,5 20.0000,0 Agar 5.000,0 Vitamin pH Nicotinic acid Glycine Thiamine acid Pyridocine HCl Stock Solution (g/l Amount to Final take concentratic preparation (mg/l) (ml) 1.650,0 20 1.900,0 370,0 22,3 10 10,6 0,025 440,0 10 0,83 0,025 170,0 10 6,2 0,25 27,85 10 37,25 5,6-5,8 0,5 2,0 0,1 0,5 PH L C 2: K T QU X LÝ S Thí nghi m 1: K t qu nghiên c u ng c a n tái sinh in vitro LI U n kh Thí nghi m 2: Kêt qu nghiên c u nhân nhanh in vitro ng c a n n kh Thí nghi m 3: Kêt qu nghiên c u in vitro ng c a n kinetin n kh Thí nghi m 4: K t qu nghiên c u in vitro ng c a t h p n kh Thí nghi m 5: K t qu nghiên c u kh in vitro ng c a t h n Thí nghi m 6: K t qu nghiên c u t hoàn ch nh ng c a n n kh Thí nghi m 7: K t qu nghiên c u t nh hoàn ch nh ng c a n IBA n kh Thí nghi m 8: K t qu nghiên c u ng c a t h p IBA Kinetin kh hoàn ch nh n Thí nghi m 9: K t qu nghiên c u ng c a t h hoàn ch nh n kh Thí nghi c giá hi u qu công th c t o r in vitro u ki n ex vitro n t l s ng ... nhân nhanh in vitro (Polyscias 1.2 Nghiên c c ng c a m t s ch trình nhân nhanh in vitro ng th c v n (Polyscias fructicosa (L.) Harms) 1.2.2 - Nghiên c vitro c ng c a n c ng c a ch in n kh - Nghiên. .. in vitro [12] in vitro in vitro ] 2.3.2 in vitro in vitro 13 nh [29 n [42] in vitro inh tái phân chia Các q trình có th tóm t Phân T bào phơi sinh T bào chun hóa 14 B n ch t c a trình m t q trình. .. nhân gi inh y in vitro, b c li u có giá tr c minh ch ng v n kh ch ng c a ch u ti t sinh nh ch i, h s nhân nhanh ch i, phát sinh r t o hoàn ng c a giá th n kh ng c a in vitro 1.3 K t qu nghiên