Hoàn thiện hệ thống nhân giống vi thủy canh cây hoa cúc trắng (Chrysanthemum morifolium) (LÀ tiến sĩ)Hoàn thiện hệ thống nhân giống vi thủy canh cây hoa cúc trắng (Chrysanthemum morifolium) (LÀ tiến sĩ)Hoàn thiện hệ thống nhân giống vi thủy canh cây hoa cúc trắng (Chrysanthemum morifolium) (LÀ tiến sĩ)Hoàn thiện hệ thống nhân giống vi thủy canh cây hoa cúc trắng (Chrysanthemum morifolium) (LÀ tiến sĩ)Hoàn thiện hệ thống nhân giống vi thủy canh cây hoa cúc trắng (Chrysanthemum morifolium) (LÀ tiến sĩ)Hoàn thiện hệ thống nhân giống vi thủy canh cây hoa cúc trắng (Chrysanthemum morifolium) (LÀ tiến sĩ)Hoàn thiện hệ thống nhân giống vi thủy canh cây hoa cúc trắng (Chrysanthemum morifolium) (LÀ tiến sĩ)Hoàn thiện hệ thống nhân giống vi thủy canh cây hoa cúc trắng (Chrysanthemum morifolium) (LÀ tiến sĩ)Hoàn thiện hệ thống nhân giống vi thủy canh cây hoa cúc trắng (Chrysanthemum morifolium) (LÀ tiến sĩ)Hoàn thiện hệ thống nhân giống vi thủy canh cây hoa cúc trắng (Chrysanthemum morifolium) (LÀ tiến sĩ)
MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Hệ thống vi thủy canh (VTC) hệ thống nhân giống kết hợp vi nhân giống (VNG) thủy canh, phương pháp có tiềm sản xuất giống Phương pháp kế thừa nhiều ưu điểm kỹ thuật thủy canh phương pháp VNG, khắc phục số hạn chế phương pháp nhân giống truyền thống Hahn cs (1996, 1998, 2000) báo cáo hoa cúc hệ thống tăng trưởng mạnh so với hệ thống nuôi cấy in vitro Trong nghiên cứu Nhut cs (2005b) đưa mơ hình VTC với giá thể film nylon cho thấy cúc tăng trưởng tốt so với hệ thống nhân giống in vitro Theo xu hướng nay, hệ thống nghiên cứu cải tiến theo hai xu hướng: (1) đại hóa thiết bị nhằm tối ưu hóa điều kiện ni cấy; (2) đơn giản hóa với thiết bị, vật liệu đơn giản, rẻ tiền đảm bảo phát triển tốt cây, nâng cao chất lượng giống, dễ dàng áp dụng quy mơ lớn Vì vậy, xu hướng thứ hai lựa chọn nhằm đơn giản quy trình sản xuất dễ ứng dụng vào thực tiễn sản xuất Đề tài “Hoàn thiện hệ thống nhân giống vi thủy canh hoa cúc trắng (Chrysanthemum morifolium)” thực nhằm đánh giá khả tăng trưởng hoa cúc hệ thống VTC, đánh giá hiệu nhân giống, đưa mơ hình sản xuất giống hệ thống VTC phù hợp nhân giống với số lượng lớn Bên cạnh đó, vai trò ánh sáng đơn sắc nano bạc bổ sung vào môi trường nuôi cấy nghiên cứu Mục tiêu yêu cầu đề tài Đề tài thực để đánh giá ảnh hưởng số yếu tố (tiền xử lý auxin, thể tích, mật độ, điều kiện thống khí, nano bạc, ánh sáng, ) lên tăng trưởng cúc trắng (Chrysanthemum morifolium) hệ thống VTC khả thích nghi, tăng trưởng hoa giai đoạn vườn ươm Từ kết nghiên cứu này, luận án đề xuất hệ thống nhân giống VTC hoa cúc Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Ý nghĩa khoa học Kết nghiên cứu luận án cung cấp dẫn liệu khoa học có giá trị việc đưa hệ thống nhân giống VTC hoa cúc Đồng thời luận án tài liệu tham khảo hữu ích cho nghiên cứu giảng dạy lĩnh vực nhân giống thực vật Ý nghĩa thực tiễn Đây hướng nghiên cứu có tiềm ứng dụng lĩnh vực nhân giống thực vật Đề tài đưa mô hình VTC phù hợp, tạo nguồn giống đồng với số lượng lớn Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu đề tài Đối tượng nghiên cứu Hệ thống VTC sử dụng để nghiên cứu trình tăng trưởng hoa cúc trắng (Chrysanthemum morifolium) Phạm vi nghiên cứu Đề tài thực nhằm đánh giá khả tăng trưởng hoa cúc trắng hệ thống VTC điều kiện nuôi cấy khác nhau, vai trò nano bạc vấn đề kháng khuẩn ánh sáng đơn sắc nâng cao chất lượng giống; qua đó, đưa hệ thống VTC lớn hơn, dễ dàng đóng gói, vận chuyển thương mại Ngồi ra, đề tài tiến hành trồng thử nghiệm điều kiện đồng ruộng Những đóng góp luận án Nghiên cứu đưa hệ thống VTC đánh giá khả tăng trưởng hoa cúc Xây dựng quy trình nhân giống cúc trắng từ giai đoạn giống hệ thống VTC đến giai đoạn thương phẩm Đánh giá vai trò nano bạc lên gia tăng khả tăng trưởng kháng lại số vi sinh vật môi trường ni cấy VTC vai trò ánh sáng đơn sắc nâng cao chất lượng giống Kết cấu luận án Luận án gồm 141 trang (kể tài liệu tham khảo) chia thành phần: Phần mở đầu trang; Chương 1: Tổng quan tài liệu 33 trang; Chương 2: Vật liệu, nội dung phương pháp nghiên cứu 14 trang; Chương 3: Kết nghiên cứu 47 trang; Chương 4: Bàn luận 23 trang; Phần kết luận đề nghị trang; Các công trình cơng bố liên quan đến luận án trang; Phần tài liệu tham khảo 16 trang với 140 tài liệu tham khảo tiếng Việt, tiếng Anh Internet Luận án có 14 bảng, 31 hình 12 biểu đồ Chƣơng I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU Luận án tham khảo tổng kết vấn đề với nội dung liên quan đến: (1) Thủy canh; (2) VTC; (3) Sơ lược hoa cúc; (4) Các phương pháp nhân giống hoa cúc; (5) Ảnh hưởng điều kiện môi trường lên tăng trưởng cây; (6) Nano bạc; (7) Hệ thống chiếu sáng đơn sắc Chƣơng II: VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu 2.1.1 Vật liệu thực vật Nguồn mẫu cúc trắng (Chrysanthemum morifolium) nguồn gốc từ Nhật Bản cấy chuyền nhiều lần, có chiều cao từ 10 – 12 cm 2.1.2 Thiết bị, dụng cụ hóa chất Thiết bị dụng cụ: Cân điện tử, máy cất nước, máy đo pH, nồi hấp vô trùng, tủ cấy vô trùng, dao cấy, đĩa cấy, panh cấy, kéo, bình ni cấy 100 ml 250 ml, Dụng cụ khử trùng autoclave 121C, atm 30 phút Máy đo SPAD-502, tủ sấy Sanyo MOV-112, cân kỹ thuật Prescisa (Nhật Bản) Hóa chất: Dung dịch nano bạc Viện Công nghệ Môi trường cung cấp với hạt nano bạc có kích thước trung bình ≤ 20 nm Nồng độ dung dịch nano bạc 500 ppm (Chau et al., 2008) Agar, sucrose, IBA, acetone ≥ 99,5% 2.1.3 Thiết bị chiếu sáng Ánh sáng đèn huỳnh quang (FL), 100% LED đỏ (R), 10% LED xanh + 90% LED đỏ (10B:90R), 20% LED xanh + 80% LED đỏ (20B:80R), 30% LED xanh + 70% LED đỏ (30B:70R), 40% LED xanh + 60% LED đỏ (40B:60R), 50% LED xanh + 50% LED đỏ (50B:50R), 60% LED xanh + 40% LED đỏ (60B:40R), 100% LED xanh (B), 100% LED vàng (Y) 100% LED xanh (G) Tỷ lệ kết hợp LED xanh LED đỏ phụ thuộc vào số bóng kết hợp chúng theo phương pháp Nhut (2002) Cường độ chiếu sáng đèn LED huỳnh quang (45 µmol.m-2.s-1) điều chỉnh cho cường độ điều kiện khác tương đương 2.1.4 Giá thể film nylon Bìa kiếng A4 (kích thước khoảng 20 × 30 cm), sản xuất Việt Nam (Flexoffice, Tập đồn Văn phòng phẩm Thiên Long, Việt Nam) Sử dụng cho văn phòng, đóng bìa sách, tài liệu, hồ sơ, Bìa sáng bóng đạt tiêu chuẩn chất lượng, quy cách khổ A4, độ dày 1,5 mm, đóng gói 100 tờ/xấp, suốt không thấm nước Bảo quản nhiệt độ: 10 – 55ºC, độ ẩm: 55 – 95% tránh xa nguồn nhiệt 2.1.5 Hệ thống ni cấy Hộp nhựa tròn Đại Đồng Tiến (HT) có chiều cao 8,5 cm, đường kính miệng 12 cm đường kính đáy cm Mỗi HT chứa 15 ống film nylon Hộp nhựa hình chữ nhật nhỏ (HCN1) có kích thước đáy 20 cm × 28 cm, kích thước miệng 25 cm × 32 cm có chiều cao 7,5 cm Mỗi hộp nhựa HCN1 chứa 300 film nylon Hộp nhựa hình chữ nhật Duy Tân (HCN2) có chiều cao 16,1 cm, rộng 31,8 cm dài 45,7 cm Mỗi hộp nhựa HCN2 chứa 600 film nylon 2.1.6 Môi trường nuôi cấy Môi trường in vitro: mơi trường ½MS, khơng bổ sung chất điều hòa sinh trưởng pH 5,8 Mơi trường VTC: mơi trường ½MS, khơng bổ sung chất điều hòa sinh trưởng, pH = 5,8, không hấp khử trùng 2.2 Nội dung nghiên cứu 2.2.1 Thiết lập hệ thống VTC 2.2.2 Nghiên cứu ảnh hưởng số yếu tố lên khả tăng trưởng cúc hệ thống VTC HT 2.2.3 Nghiên cứu ảnh hưởng nano bạc lên khả kháng khuẩn môi trường VTC HT 2.2.4 Nghiên cứu ảnh hưởng hệ thống chiếu sáng LED lên gia tăng sinh trưởng cúc hệ thống VTC HT 2.2.5 Đánh giá hiệu nhân giống phương pháp VTC so với phương pháp nhân giống in vitro 2.2.6 Trồng thử nghiệm cúc hệ thống VTC vườn ươm đến giai đoạn hoa 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 2.3.1 Phương pháp bố trí thí nghiệm 2.3.1.1 Nghiên cứu ảnh hưởng tiền xử lý IBA lên khả rễ cúc hệ thống VTC HT 2.3.1.2 Nghiên cứu ảnh hưởng thể tích mơi trường ni cấy lên tăng trưởng cúc hệ thống VTC HT 2.3.1.3 Nghiên cứu ảnh hưởng mật độ mẫu cấy lên tăng trưởng cúc hệ thống VTC HT 2.3.1.4 Nghiên cứu ảnh hưởng điều kiện thống khí lên tăng trưởng cúc hệ thống VTC HT 2.3.1.5 Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ nano bạc môi trường nuôi cấy VTC HT đến khả tăng trưởng cúc 2.3.1.6 Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ nano bạc môi trường nuôi cấy VTC HT đến khả kháng vi sinh vật 2.3.1.7 Nghiên cứu ảnh hưởng nano bạc môi trường nuôi cấy VTC HT đến khả tăng trưởng cúc giai đoạn vườn ươm 2.2.1.8 Nghiên cứu ảnh hưởng loại ánh sáng khác lên tăng trưởng cúc hệ thống VTC HT 2.2.1.9 Nghiên cứu ảnh hưởng loại ánh sáng khác lên khả tích lũy chlorophyll cúc hệ thống VTC HT 2.2.1.10 Đánh giá hiệu phương pháp VTC VNG cúc 2.2.1.11 Nghiên cứu ảnh hưởng hệ thống VTC HT HCN lên tăng trưởng cúc 2.2.1.12 Trồng thử nghiệm cúc hệ thống VTC vườn ươm đến giai đoạn hoa 2.3.2 Phương pháp theo dõi tiêu 2.3.3 Phương pháp xử lý thống kê 2.4 Điều kiện nuôi cấy 2.5 Địa điểm thời gian tiến hành thí nghiệm Chƣơng III: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Thiết lập hệ thống VTC Hệ thống VTC với giá thể film nylon thiết lập Hình 3.1 Que kim loại 20 cm 30 cm (1) (2) (3) 1,5 cm cm (6) Đèn cồn (4) (5) Hình 3.1 Sơ đồ thiết lập giá thể film nylon dùng hệ thống VTC (1): Film nylon; (2): Quấn quanh ống nghiệm thủy tinh đường kính 1,5 cm; (3): Hàn dính que kim loại; (4): Cắt bỏ phần thừa; (5): Cắt thành ống ngắn; (6): Giá thể dùng hệ thống VTC Quy trình tiến hành thí nghiệm thực Hình 3.2 Hình 3.2 Các bước tiến hành thí nghiệm (1): Thu nhận chồi in vitro; (2): Tiền xử lý với IBA; (3): Rửa lại nước cất; (4): Thu nhận chồi in vitro sau tiền xử lý; (5, 6): Cho giá thể vào hộp nhựa; (5’, 6’): Cho chồi cúc vào hệ thống VTC; HT: Hộp nhựa tròn; HCN: Hộp nhựa hình chữ nhật 3.2 Ảnh hƣởng số yếu tố tác động lên khả tăng trƣởng chồi cúc hệ thống VTC HT 3.2.1 Ảnh hưởng tiền xử lý IBA lên khả rễ cúc hệ thống VTC HT Sau tuần nuôi cấy tuần theo dõi vườn ươm, kết ghi nhận cho thấy cúc tiền xử lý với IBA (500 ppm) cho hiệu rễ tốt, khả thích nghi tăng trưởng tốt so với cúc xử lý với nước cất bổ sung IBA (500 ppm) trực tiếp vào môi trường nuôi cấy (Bảng 3.1 3.2) Bảng 3.1 Cây cúc hệ thống VTC HT sau tuần nuôi cấy Xử lý rễ Tiền xử lý IBA a Nƣớc cất Bổ sung IBA b 4,46b Chiều cao (cm) 5,00 * 4,56 Số rễ/cây 7,20a 2,40b 1,40b Tỷ lệ rễ (%) 100a 60b 20c Số lá/cây 6,40a 5,80ab 5,60b Chiều dài rễ (cm) 1,24a 0,26b 0,18b Chiều dài (cm) 1,28a 1,18a 1,22a Chiều rộng (cm) 1,08a 1,00a 1,04a Khối lƣợng tƣơi (mg) 273,40a 234,20b 241,20b Khối lƣợng khô (mg) 22,80a 19,80c 21,11bc Ghi chú: *Các chữ a, b,… hàng thể khác biệt có ý nghĩa với P < 0,05 phép thử Duncan Bảng 3.2 Cây cúc HTVTC HT sau tuần vườn ươm Xử lý rễ Tiền xử lý IBA a Nƣớc cất b Bổ sung IBA 7,78c* Chiều cao (cm) 14,24 Số rễ/cây 55,20a 47,45b 41,60bc Tỷ lệ sống sót (%) 100a 60b 20c Số lá/cây 15,40a 13,33ab 11,67b Chiều dài rễ (cm) 5,72a 5,21b 4,48b Chiều dài (cm) 3,26a 2,88a 2,42a Chiều rộng (cm) 2,86a 2,33a 2,14a Khối lƣợng tƣơi (mg) 2.837,65a 2.341,26b 1.945,67b Khối lƣợng khô (mg) 232,72a 217,30b 181,33c 10,86 Ghi chú: *Các chữ a, b,… hàng thể khác biệt có ý nghĩa với P < 0,05 phép thử Duncan 3.2.2 Ảnh hưởng thể tích mơi trường ni cấy lên tăng trưởng cúc hệ thống VTC HT Sự tăng trưởng cúc hệ thống VTC đạt cao mơi trường ni cấy tích 40 ml Ở nghiệm thức cho thấy vượt trội so với nghiệm thức lại tiêu chiều cao (6,61 cm), số rễ/cây (14,00 rễ), chiều dài rễ (1,40 cm), khối lượng tươi (475 mg) khối lượng khô (32,50 mg) (Bảng 3.3) Bảng 3.3 Ảnh hưởng thể tích mơi trường lên tăng trưởng cúc hệ thống VTC HT sau tuần ni cấy Thể tích (ml/hộp) 30 40 c 50 a 60 b 70 c 5,25d Chiều cao (cm) 5,53 * 6,61 Số lá/cây 7,67a 7,67a 7,67a 7,33a 7,33a Số rễ/cây 9,67c 14,00a 12,33b 7,33d 0,00e Chiều dài rễ (cm) 1,12b 1,40a 1,00b 0,67b 0,00c Chiều dài (cm) 1,20a 1,68a 1,22a 1,14a 1,00a Chiều rộng (cm) 1,07a 1,40a 1,12a 1,07a 0,90a Khối lƣợng tƣơi (mg) 293b 475a 350b 287b 259b Khối lƣợng khô (mg) 22,80c 32,50a 28,33b 22,67c 21,10c 5,86 5,61 Ghi chú: *Các chữ a, b… hàng thể khác biệt có ý nghĩa với P < 0,05 phép thử Duncan Sự thay đổi thể tích mơi trường ni cấy hệ thống VTC ghi nhận sau tuần nuôi cấy (Biểu đồ 3.1) Chiều cao cúc nuôi cấy hệ thống VTC với thể tích mơi trường 40 ml/hộp cao nghiệm thức lại (25,90 cm) sau tuần vườn ươm (Biểu đồ 3.2) 10 Biểu đồ 3.1 Sự thay đổi thể tích mơi trường ni cấy hệ thống VTC HT sau tuần nuôi cấy 30 Chiều cao (cm) 25,90a 20 19,67b 19,07b 17,77c 15,90d 10 30 ml 40 ml 50 ml 60 ml 70 ml Biểu đồ 3.2 Chiều cao cúc hệ thống VTC HT với thể tích mơi trường khác sau tuần vườn ươm 3.2.3 Ảnh hưởng mật độ mẫu cấy lên tăng trưởng cúc hệ thống VTC HT Mật độ 15 chồi/hộp cho kết tốt chiều cao (5,18 cm), chiều dài rễ (2,33 cm), khối lượng tươi (326,00 mg) khối lượng khô (28,33 mg) sau tuần nuôi cấy (Bảng 3.4) Khi chuyển vườn ươm sau tuần, cúc nuôi cấy hệ thống 11 VTC với mật độ 15 chồi/hộp cho tăng trưởng tối ưu cúc mật độ khác (Biểu đồ 3.3) Bảng 3.4 Ảnh hưởng mật độ mẫu cấy lên tăng trưởng cúc hệ thống VTC HT sau tuần nuôi cấy Mật độ (chồi/hộp) 10 15 20 25 Chiều cao (cm) 4,59b* 5,18a 4,71b 4,67b Số lá/cây 6,80a 6,70ab 6,10b 6,30b Số rễ/cây 10,90a 8,10b 4,90c 3,30c Chiều dài rễ (cm) 1,88b 2,33a 0,64c 0,32c Khối lƣợng tƣơi (mg) 270,67b 326,00a 270,00b 277,67b Khối lƣợng khô (mg) 24,33b 28,33a 25,00b 25,67b pH 6,50 6,10 6,20 5,94 Ghi chú: *Các chữ a, b… hàng thể khác biệt có ý nghĩa với P < 0,05 phép thử Duncan Chiều cao (cm) 40 30 27,73b 29,20a 21,40c 18,27d 20 10 10 chồi/hộp 15 chồi/hộp 20 chồi/hộp 25 chồi/hộp Biểu đồ 3.3 Chiều cao cúc hệ thống VTC HT với mật độ khác sau tuần vườn ươm 12 3.2.4 Ảnh hưởng điều kiện thống khí lên tăng trưởng cúc hệ thống VTC HT Sau tuần nuôi cấy, tăng trưởng cúc hệ thống ni cấy VTC có điều kiện thống khí có khác biệt so với hộp nhựa thông thường (Bảng 3.5) Sự thay đổi độ ẩm tương đối hệ thống VTC với điều kiện thống khí khác sau tuần nuôi cấy ghi nhận (Biểu đồ 3.4) Bảng 3.5 Ảnh hưởng điều kiện thống khí lên tăng trưởng cúc hệ thống VTC HT sau tuần nuôi cấy Điều kiện thống khí Khơng TK b Màng Millipore a lỗ TK 5,07a Chiều cao (cm) 4,66 * 5,18 Số rễ/cây 4,70b 10,20a 8,90a Số lá/cây 6,60a 6,70a 6,70a Chiều dài rễ (cm) 0,42b 2,33a 2,52a Khối lƣợng tƣơi (mg) 280,33b 378,67a 332,33ab Khối lƣợng khô (mg) 24,33c 30,67a 28,00b * Ghi chú: Các chữ a, b… cột thể khác biệt có ý nghĩa với P < 0,05 phép thử Duncan; TK: Thống khí Biểu đồ 3.4 Sự thay đổi độ ẩm tương đối hệ thống VTC với điều kiện thống khí khác sau tuần ni cấy 13 Sự tăng trưởng cúc sau tuần giai đoạn vườn ươm cho thấy cúc ni cấy điều kiện thống khí màng Millipore tốt so với cúc ni cấy khơng thống khí (Biểu đồ 3.5) Chiều cao (cm) 40 32,07a 30,40b 27,23c 30 20 10 Khơng thống khí Màng Millipore lỗ thống khí Biểu đồ 3.5 Chiều cao cúc hệ thống VTC HT với điều kiện thống khí khác sau tuần vườn ươm 3.3 Ảnh hƣởng nồng độ nano bạc lên khả tăng trƣởng kháng khuẩn môi trƣờng VTC HT 3.3.1 Ảnh hưởng nồng độ nano bạc lên khả tăng trưởng cúc hệ thống VTC HT Sau tuần nuôi cấy hệ thống VTC HT bổ sung nồng độ khác nano bạc, kết ghi nhận Bảng 3.6 Bảng 3.6 Ảnh hưởng nồng độ nano bạc lên khả tăng trưởng cúc hệ thống VTC HT sau tuần nuôi cấy NĐ nano bạc (ppm) 2,5 5,0 7,5 10 Chiều cao (cm) 5,53b 4,96c 5,59b 6,98a 4,72d Số lá/cây 7,33b 7,00c 7,33b 7,67a 7,00c Số rễ/cây 12,00b 11,00c 12,33ab 13,00a 7,33d Chiều dài rễ (cm) 1,22b 0,84d 1,14c 1,48a 0,75e Chiều dài (cm) 1,07d 1,20c 1,30b 1,73a 1,00e 14 Chiều rộng (cm) 1,10c 1,13bc 1,20b 1,57a 0,83d Khối lƣợng tƣơi (mg) 289,67d 320,67c 405,33b 516,00a 270,00d Khối lƣợng khô (mg) 26,00e 31,67c 39,67b 48,67a 28,00d Ghi chú: *Các chữ a, b,… hàng thể khác biệt có ý nghĩa với P < 0,05 phép thử Duncan; NĐ: Nồng độ Trong thí nghiệm này, tiêu hàm lượng chlorophyll ghi nhận (Biểu đồ 3.6) Biểu đồ 3.6 Tích lũy chlorophyll cúc HTVTC HT bổ sung nồng độ nano bạc khác sau tuần nuôi cấy 3.3.2 Ảnh hưởng nồng độ nano bạc đến khả kháng vi sinh vật môi trường nuôi cấy VTC HT Kết định danh loài vi khuẩn loài nấm mốc định lượng hàm lượng chúng môi trường dinh dưỡng lại hệ thống VTC dựa phương pháp thử BMDB, ISO 16266, NHS-F15 ISO 21527-1 (Bảng 3.7) 15 Bảng 3.7 Định danh định lượng vi sinh vật môi trường VTC HT bổ sung nồng độ nano bạc khác sau tuần nuôi cấy Nồng độ nano bạc (ppm) PP thử Corynebacterium sp Enterobacter sp Arthrobacter sp Agrobacterium sp BMDB BMDB BMDB BMDB 2,5 7,3×10 4,6×10 1,7×10 2,1×10 4,5×10 5,0 9,6×10 7,5 < 10 5,4×10 6,7×10 9,0×10 2,7×10 10