ĐỘC tố AFLATOXIN TRONG nấm

ĐH NƠNG LÂM TPHCM BM CƠNG NGHỆ HĨA HỌC Mơn: ĐỘC TỐ TRONG SẢN PHẨM NÔNG NGHIỆP Tên Chuyên đề: ĐỘC TỐ AFLATOXIN TRONG NẤM ĐẶT VẤN ĐỀ Ngộ độc thực phẩm thực phẩm bị biến chất, ôi thiu, thực phẩm bị nhiễm hay có chứa độc tố vi khuẩn, virus, nấm… Ngộ độc thực phẩm nấm mốc gây vấn đề lo ngại cho người toàn xã hội Chúng gây nên bệnh lý mãn tính dẫn đến ung thư gan, còi cọc, suy nhược thể, dẫn đến tử vong trường hợp ngộ độc cấp tính - Là vi sinh vật chân hạch, thể tản, tb khơng có diệp lục tố - Sống dị dưỡng (hoại sinh, ký sinh, cộng sinh), vách tb cấu tạo chủ yếu chitin - Là loại vi sinh vật thường thấy xuất nông sản, thực phẩm - Có loại có lợi cho q trình chế biến tạo sản phẩm làm tăng mùi thơm nấm mốc làm tương có loại làm hư hỏng thực phẩm, gây độc cho người - Là loại độc tố biết nhiều nhất, sản sinh từ chủng Aspergillus flavus , Aspergillus parasiticus, thường sống thực phẩm có dầu ngơ loại hạt đỗ, lạc - Aflatoxin bao gồm nhóm :B1, B2, G1, G2 - Aflatoxin B1 loại cực độc Một lượng 0,03 ppm aflatoxin B1 từ khô lạc gây ra  u gan AFLOTOXIN - Aflatoxin sinh ngũ cốc trước thu hoạch, thu hoạch sau thu hoạch ngũ cốc không bảo quản cách hay sinh thức ăn chăn nuôi trước sử dụng - Khi aflatoxin sinh ra, khó làm để loại bỏ chúng khỏi ngũ cốc hay thức ăn chăn nuôi - Các loại độc tố có cấu tạo hố học ổn định khơng bị phá huỷ nhiệt, ánh sáng, axít, xử lý kiềm, hay kéo dài thời gian lưu trữ Dùng thử nghiệm sinh hóa phát độc tố Aflatoxin – Thử nghiệm vịt ngày tuổi – Thử nghiệm cá vàng – Thử nghiệm ấu trùng giáp xác – Thử nghiệm phôi gà – Thử nghiệm nòng nọc Phương pháp đại Đo mật độ huỳnh quang Sắc ký lỏng hiệu cao • Aflatoxin có mẫu thủy sản bao gồm nhóm B1, B2, G1 G2 chiết tách clorofom • Dịch chiết đựơc làm phương pháp chiết pha rắn (SPE) silicagel • Hàm lượng aflatoxin có dịch chiết xác định hệ thống HPLC với đầu dò huỳnh quang theo phương pháp ngoại chuẩn • Aflatoxin chiết tách từ mẫu thử clorofoc Dịch chiết lọc phần dịch lọc làm qua cột silicagen • Làm bay dung dịch rửa giải hoà cặn với clorofoc hỗn hợp benzen – axetonitril • Sau chấm phần xác định mẫu thử lên mỏng,chạy sắc ký so sánh Rf CHUẨN BỊ MẪU • Nghiền mẫu cho qua rây có lỗ 1mm • Điều kiện tiến hành : phòng mát, tránh ánh sáng • Chú ý : với mẫu thử có hàm lượng chất béo lớn 5%, cần loại chất béo cách chiết với dung môi ete dầu hỏa sau hồn thành cơng đoạn nghiền TIẾN HÀNH XÉT NGHIỆM • Cân 50g mẫu nghiễn nhỏ cho vào bình nút mài 500ml • Cho tiếp 25ml nước, 25g celite 545, 250ml clorofoc, đậy nút chặt • Lắc 30 phút lọc qua giấy lọc gấp cạnh • Bỏ 10ml dịch lọc đầu, sau lấy 50ml dịch lọc TIẾN HÀNH XÉT NGHIỆM Chuẩn bị cột sắc ký: • Trộn 50ml dịch lọc với 150ml n – hexan, đổ cẩn thận vào cột sắc ký chuẩn bị • Cho tiếp 150ml ête êtylic khan, loại bỏ dung dịch chảy • Làm bay dung dịch rửa máy cất quay chân không nhiệt độ thấp 500 C khoảng – ml • Chuyển sang ống nghiệm 10ml, tráng rửa bình cầu clorofoc làm bay đến khô nồi cách thuỷ nhiệt độ thấp 500C • Đậy kín ống nghiệm có cặn để chạy sắc ký lớp mỏng TIẾN HÀNH XÉT NGHIỆM • Làm bay dung dịch rửa máy cất quay chân không nhiệt độ thấp 500 C khoảng – ml Chuyển sang ống nghiệm 10ml, tráng rửa bình cầu clorofoc làm bay đến khô nồi cách thuỷ nhiệt độ thấp 500C • Đậy kín ống nghiệm có cặn để chạy sắc ký lớp mỏng TIẾN HÀNH XÉT NGHIỆM • • • • Lấy 2; 5;10; 20 m l dung dịch chuẩn B Lấy 10 m l dịch chiết với 10 m l dung dịch chuẩn B Lấy 10, 20 m l dịch chiết Khai triển sắc ký chỗ tối với hệ dung mơi clorofoc – axeton (9: 1) • Sau tiếp tuyến dung môi chạy lên khoảng 10cm (khoảng 30 phút), lấy sắc ký để bay dung mơi nhiệt độ phòng, tránh ánh sáng • Sau soi đèn tử ngoại với bước sóng 365 nm Các vết aflatoxin B1, B2 có huỳnh quang màu xanh da trời; G1, G2 có huỳnh quang màu xanh KẾT QUẢ ***Rf vết aflatoxin hệ dung mơi clorofóc - axêtơn (9:1) có trị số trung bình sau: •Aflatoxin B : 0,72 •Aflatoxin B : 0,67 •Aflatoxin G : 0,59 •Aflatoxin G : 0,54 ĐÁNH GIÁ • Độ nhạy phương pháp : m g / kg (5 ppm) • Hệ số thu hồi phương pháp : 90 ± 5% • Sai số trung bình phương pháp : ± 10% TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Thị Hiền, Phan Thị Kim, Trương Thị Hòa, Lê Thị Lan Chi (2009), Vi sinh vật nhiễm tạp lương thực- thực phẩm, Đại Học Bách Khoa Hà Nội, trang 66- 81 Trường DH Y Hà Nội(2004), Dinh dưỡng vệ sinh an toàn thực phẩm, Nhà xuất Giao dục,trang 367- 369 Bộ môn Dược lý – Vệ sinh an tồn thực phẩm( 2011), Giao trình vệ sinh an toàn thực phẩm, Đại học Thái Nguyên,trang 45 – 52 Bhatnagar, D., S P McCormick, L S Lee, and R A Hill 1987, Identification of Omethylsterigmatocystin as an aflatoxin B1/Gl precursor in Aspergillus parasiticus, Appi Environ Microbiol ...ĐẶT VẤN ĐỀ Ngộ độc thực phẩm thực phẩm bị biến chất, ôi thiu, thực phẩm bị nhiễm hay có chứa độc tố vi khuẩn, virus, nấm Ngộ độc thực phẩm nấm mốc gây vấn đề lo ngại cho người... dầu ngơ loại hạt đỗ, lạc - Aflatoxin bao gồm nhóm :B1, B2, G1, G2 - Aflatoxin B1 loại cực độc Một lượng 0,03 ppm aflatoxin B1 từ khô lạc gây ra  u gan AFLOTOXIN - Aflatoxin sinh ngũ cốc trước... lợi cho q trình chế biến tạo sản phẩm làm tăng mùi thơm nấm mốc làm tương có loại làm hư hỏng thực phẩm, gây độc cho người - Là loại độc tố biết nhiều nhất, sản sinh từ chủng Aspergillus flavus