Nghiên cứu một số đặc tính của virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại phía Bắc Việt Nam và giải pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh (LA tiến sĩ)

Nghiên cứu một số đặc tính của virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại phía Bắc Việt Nam và giải pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh (La tiến sĩ)Nghiên cứu một số đặc tính của virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại phía Bắc Việt Nam và giải pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh (La tiến sĩ)Nghiên cứu một số đặc tính của virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại phía Bắc Việt Nam và giải pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh (La tiến sĩ)Nghiên cứu một số đặc tính của virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại phía Bắc Việt Nam và giải pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh (La tiến sĩ)Nghiên cứu một số đặc tính của virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại phía Bắc Việt Nam và giải pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh (La tiến sĩ)Nghiên cứu một số đặc tính của virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại phía Bắc Việt Nam và giải pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh (La tiến sĩ)Nghiên cứu một số đặc tính của virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại phía Bắc Việt Nam và giải pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh (La tiến sĩ)Nghiên cứu một số đặc tính của virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại phía Bắc Việt Nam và giải pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh (La tiến sĩ)

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM

HÀ VĂN QUYẾT

NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC TÍNH CỦA VIRUS GÂY BỆNH MAREK

Ở GÀ NUÔI CÔNG NGHIỆP TẠI PHÍA BẮC VIỆT NAM VÀ GIẢI PHÁP NÂNG CAO HIỆU LỰC VẮC XIN PHÒNG BỆNH

LUẬN ÁN TIẾN SĨ THÚ Y

THÁI NGUYÊN - 2017

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM

HÀ VĂN QUYẾT

NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC TÍNH CỦA VIRUS GÂY BỆNH MAREK

Ở GÀ NUÔI CÔNG NGHIỆP TẠI PHÍA BẮC VIỆT NAM VÀ GIẢI PHÁP NÂNG CAO HIỆU LỰC VẮC XIN PHÒNG BỆNH

Ngành: Ký sinh trùng và Vi sinh vật học thú y

Mã số: 62.64.01.04

LUẬN ÁN TIẾN SĨ THÚ Y

Người hướng dẫn khoa học:

1 GS.TS Nguyễn Quang Tuyên

2 PGS.TS Phạm Công Hoạt

THÁI NGUYÊN - 2017

LỜI CAM ĐOAN

Tôi xin cam đoan rằng: Đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi Các số liệu, kết quả trong luận án này là trung thực và nguyên gốc, không trùng lặp với những kết quả đã được công bố

Tôi xin cam đoan rằng: Mọi sự giúp đỡ cho việc hoàn thành luận án này đã

được cảm ơn, các thông tin trích dẫn trong luận án đều đã được chỉ rõ nguồn gốc

Tác giả luận án

Hà Văn Quyết

Hoàn hành luận án khoa học này, ngoài sự cố gắng của bản thân, tôi luôn nhận được sự giúp đỡ tận tình, đầy trách nhiệm và hết lòng vì khoa học của thầy giáo: GS.TS Nguyễn Quang Tuyên, PGS.TS Phạm Công Hoạt, PGS.TS Nguyễn Viết Không và PGS.TS Phạm Thị Tâm

Tôi xin trân thành cảm ơn: sự giúp đỡ, tạo điều kiện cho tôi về thời gian học tập, nghiên cứu của Huyện ủy - Hội đồng nhân dân - Ủy ban nhân dân huyện Lập Thạch, tỉnh Vĩnh Phúc; sự giúp đỡ nhiệt tình của Chi cục Thú y các tỉnh Vĩnh Phúc, Phú Thọ, Hà Nội và khoa Công nghệ sinh học - Viện Đại học mở Hà Nội đã tạo điều kiện, giúp đỡ tôi trong quá trình thí nghiệm và thực hiện luận án này

Nhân dịp này, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới: các thầy, các cô, các bạn đồng nghiệp và đặc biệt là gia đình đã luôn giúp đỡ, động viên, hỗ trợ tôi trong suốt thời gian qua

Thái Nguyên, ngày 06 tháng 10 năm 2017

Tác giả luận án

Hà Văn Quyết

MỤC LỤC

LỜI CAM ĐOAN i

LỜI CẢM ƠN ii

MỤC LỤC iii

DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT vi

DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU vii

DANH MỤC CÁC HÌNH viii

MỞ ĐẦU 1

1 Tính cấp thiết của đề tài 1

2 Mục tiêu của đề tài 2

3 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài 2

4 Những đóng góp mới của đề tài 3

Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 4

1.1 Tình hình lưu hành bệnh Marek ở trong nước và trên thế giới 4

1.1.1 Tình hình lưu hành bệnh Marek ở Việt Nam 4

1.1.2 Tình thình lưu hành bệnh Marek trên thế giới 5

1.2 Cơ sở khoa học của đề tài 6

1.2.1 Đặc tính sinh học cơ bản của virus gây bệnh Marek 6

1.2.2 Triệu chứng lâm sàng bệnh Marek 13

1.2.3 Bệnh tích của bệnh Marek 14

1.2.4 Chẩn đoán bệnh Marek 17

1.2.5 Dịch tễ học bệnh Marek 19

1.2.6 Miễn dịch chống lại MDV 21

1.2.7 Vắc xin với việc kiểm soát và phòng ngừa bệnh Marek 25

1.2.8 Các giải pháp phòng và trị bệnh Marek 26

Chương 2 NỘI DUNG, ĐỐI TƯỢNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 29

2.1 Nội dung nghiên cứu 29

2.1.1 Phân lập virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại một số tỉnh phía Bắc Việt Nam 29

2.1.2 Nghiên cứu xác định độc lực và gây bệnh thực nghiệm virus Marek phân lập được trên các giống và lứa tuổi gà 29

2.1.3 Nghiên cứu đặc điểm bệnh lý đặc trưng do virus Marek phân lập được

đối với gà thí nghiệm 29

2.1.4 Nghiên cứu thử nghiệm phối hợp chất bổ trợ với vắc xin để tăng cường hiệu quả miễn dịch của vắc xin phòng bệnh Marek 29

2.2 Đối tượng, nguyên liệu nghiên cứu 29

2.2.1 Đối tượng nghiên cứu 29

2.2.2 Nguyên liệu 29

2.2.3 Hóa chất, sinh phẩm và môi trường nuôi cấy 30

2.3 Địa điểm và thời gian nghiên cứu 32

2.3.1 Địa điểm nghiên cứu 32

2.3.2 Thời gian nghiên cứu 32

2.4 Phương pháp nghiên cứu 32

2.4.1 Phương pháp thu thập và xử lý mẫu 32

2.4.2 Phương pháp phân lập MDV và nhuộm Plaque 32

2.4.3 Phương pháp hóa mô 34

2.4.4 Phương pháp xác định độc lực của virus trên phôi trứng gà 34

2.4.5 Phương pháp PCR và xác định trình tự gen Meq 34

2.4.6 Phương pháp Real-Time PCR định lượng số copy genome của virus MDV 36

2.4.7 Bố trí thí nghiệm xác định khả năng gây bệnh của MDV trên các giống gà và lứa tuổi gà 36

2.4.8 Bố trí thí nghiệm đánh giá ảnh hưởng của các chất tăng cường miễn dịch đến hiệu quả của vắc xin HVT/Rispens 38

2.5 Phương pháp xử lý số liệu 39

Chương 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 40

3.1 Kết quả phân lập virus Marek 40

3.1.1 Kết quả mổ khám gà nghi mắc bệnh Marek ở một số địa phương 40

3.1.2 Phản ứng PCR xác định gen đặc hiệu của virus Marek 40

3.1.3 Nuôi cấy phân lập virus Marek 41

3.1.4 Kết quả xác định trình tự gen Meq 43

3.2 Khả năng gây bệnh của chủng MDV phân lập được 46

3.2.1 Khả năng gây bệnh của MDV 6.13 trên các giống gà thí nghiệm 46

3.2.2 Khả năng gây bệnh của MDV phân lập được trên các giống gà thí nghiệm ở các độ tuổi khác nhau 50

3.2.3 Nghiên cứu sự bài thải của virus từ gà thí nghiệm gây nhiễm virus gây

bệnh MDV 57

3.3 Biểu hiện bệnh tích ở gà thí nghiệm do chủng MDV phân lập được gây nên 59

3.3.1 Biểu hiện tổn thương đại thể ở các tổ chức của gà thí nghiệm 59

3.3.2 Biểu hiện tổn thương vi thể ở các tổ chức của gà thí nghiệm 65

3.3.3 Kết quả xác định khả năng gây bệnh trên phôi gà của MDV phân lập 68

3.3.4 Kết quả xác định khả năng gây bệnh trên tế bào xơ phôi vịt một lớp của MDV phân lập 69

3.4 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của các chất tăng cường miễn dịch đến hiệu quả bảo hộ của vắc xin phòng bệnh Marek 71

3.4.1 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của các yếu tố tăng cường miễn dịch sự hình thành đáp ứng miễn dịch của gà thí nghiệm với vắc xin phòng bệnh Marek 73

KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 103

1 Kết luận 103

2 Kiến nghị 104

TÀI LIỆU THAM KHẢO 105 PHỤ LỤC Error! Bookmark not defined.

DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT

1 ADC Antibody Dependent Cellmediated

2 ADN Acide Deoxyribo Nucleotic

3 APC Antigen Presenting Cell

4 CAM Chorioat Antoid Membran

5 CEF Chicken Embryo Fibroblast

6 CKC Chicken Kidney Cell

7 CMGF Chicken Myelomonocytic Growth Factor

8 CPE Cytopathogenic Effect

9 CPG-ODN Cytosine Phosphate Guanosine-Olygo Deoxy Nucleotide

10 Poly I:C Chuỗi các mạch ARN đôi gồm Polyriboinosinic và

Polyribocytidylic

11 DEF Duck Embryo Fibroblast

12 DHBV Duck Hepatitis B Virus

13 ELISA Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay

14 GDP Gross Domestic Product

15 HVT Herpesvirus of Turkey

16 IFN Interferon

17 IL Interleukin

18 MDV Marek Disease Virus

19 MHC Major Histocompatibility Complex

20 NKC Nature Killer Cell

21 PCR Polymerase Chain Reaction

22 PFU Plaque Forming Unit

23 RIF Resistance Inducing Factor

24 TLR Toll Like Receptor

DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU

Bảng 1.1 Tình hình dịch bệnh Marek tại các tỉnh phía Nam năm 2007 5

Bảng 3.1 Kết quả mổ khám gà nghi mắc bệnh Marek ở một số địa phương 40

Bảng 3.2: Mức độ gây bệnh của chủng MDV phân lập trên các giống gà thí nghiệm 46

Bảng 3.3: Kết quả theo dõi triệu chứng lâm sàng bệnh Marek 48

qua từng tháng theo dõi 48

Bảng 3.4: Mức độ gây bệnh của chủng MDV phân lập được trên các giống gà ở các độ tuổi 53

Bảng 3.5: Số lượng bản copy của gen Meq bình quân trên 1 cá thể gà bài thải trong 1 ngày (log10) 58

Bảng 3.6: Biểu hiện bệnh tích do MDV gây cho gà thí nghiệm 60

Bảng 3.7: Tần suất xuất hiện các tổn thương vi thể trong các tổ chứccủa gà thí nghiệm 66

Bảng 3.8: Biểu hiện bệnh tích do MDV trên phôi gà 11 ngày tuổi 69

Bảng 3.9: Biểu hiện bệnh tích do MDV 6.13 trên tế bào xơ phôi vịt 70

Bảng 3.10: Ảnh hưởng các yếu tố tăng cường miễn dịch đến hiệu quả 71

bảo hộ của vắc xin phòng bệnh Marek 71

Bảng 3.11: Ảnh hưởng của các yếu tố tăng cường miễn dịch đến sự hình thành kháng thể bảo hộ của vắc xin phòng bệnh Marek 75

Bảng 3.12: Ảnh hưởng của các yếu tố tăng cường miễn dịch đến sự tổng hợp  - IFN 78

Bảng 3.13: Ảnh hưởng của các yếu tố tăng cường miễn dịch đến sự tổng hợp các β - IFN 80 Bảng 3.14: Ảnh hưởng của các yếu tố tăng cường miễn dịch đến sự tổng hợp α-IFN 83

Bảng 3.15: Ảnh hưởng của các yếu tố tăng cường miễn dịch đến sự tổng hợp IL-4 86

Bảng 3.16: Ảnh hưởng của các yếu tố tăng cường miễn dịch 87

đến sự tổng hợp IL-12p40 87

Bảng 3.17: Ảnh hưởng của các yếu tố tăng cường miễn dịch đến sự tổng hợp IL-10 90

Bảng 3.18: Ảnh hưởng của các yếu tố tăng cường miễn dịch đến sự hình thành khối u ở gà sau công cường độc (Tỷ lệ % gà có khối u) 92

Bảng 3.19: Mức độ giảm số bản copy của gen Meq trong lách gà thí nghiệm công cường độcsau khi sử dụng vắc xin và các chất tăng cường miễn dịch 94

Bảng 3.20: Mức độ giảm các bản copy của gen Meq trong túi Fabricius của gà thí nghiệm công cường độcsau khi sử dụng vắc xin và các chất tăng cường miễn dịch 97

Bảng 3.21: Mức độ giảm số bản copy của gen Meq trong tuyến ức của gà thí nghiệm công cường độc sau khi sử dụng vắc xin và các chất tăng cường miễn dịch 100

DANH MỤC CÁC HÌNH

Hình 3.1: Hình ảnh điện di sản phẩm PCR phát hiện gen Meq 41

Hình 3.2: Hình ảnh nuôi cấy phân lập MDV trên tế bào xơ phôi vịt 42

Hình 3.3: Hình ảnh Plaque do MDV gây trên tế bào xơ phôi vịt

sau 5 ngày gây nhiễm 42

Hình 3.4: Kết quả khuếch đại gen Meq của chủng MDV 6.13 43

Hình 3.5: Kết quả tách plasmid từ khuẩn lạc trắng 44

Hình 3.6: Bảng tổng hợp các trình tự tương đồng của Gene bank với gen Meq của chủng MDV 6.13 45

Hình 3.7: Mức độ gây bệnh và gây chết của chủng MDV 6.13 ở gà thí nghiệm 49

Hình 3.8: Các biểu hiện tổn thương thần kinh của gà gây nhiễm với MDV 6.3 50

Hình 3.9: Tỷ lệ gà mắc bệnh và chết do chủng virus MDV 6.13trên các

giống gà thí nghiệm ở các độ tuổi 51

Hình 3.10: Gà 6 tuần tuổi bại liệt sau khi gây nhiễm bằng chủng MDV 6.13 54

Hình 3.11: Tỷ lệ xuất hiện các biểu hiện tổn thương thần kinh do chủng virus MDV 6.13 trên các giống gà thí nghiệm ở các độ tuổi 55

Hình 3.12: Mức độ bài thải virus MDV 6.13của các giống gà thí nghiệm

ở các độ tuổi 57

Hình 3.13 Hình ảnh bệnh tích đại thể ở gà thí nghiệm do chủng MDV phân lập được gây nên 59

Hình 3.14: Tần suất xuất hiện bệnh tích trong các cơ quan của gà thí nghiệm 61

Hình 3.15: Tỷ lệ gà thí nghiệm có tổn thương ở lách 62

Hình 3.16: Tỷ lệ gà thí nghiệm có tổn thương ở thận 62

Hình 3.17: Tỷ lệ gà thí nghiệm có tổn thương ở tim 63

Hình 3.18: Tỷ lệ gà thí nghiệm có tổn thương ở dạ dày tuyến 64

Hình 3.19: Tỷ lệ gà thí nghiệm có tổn thương ở dây thần kinh ngoại biên 65

Hình 3.20: Tần suất xuất hiện các tổn thương vi thể trong các tổ chứccủa gà thí nghiệm 66 Hình 3.21: Các biến đổi tổn thương vi thể trong: Gan (A), lách (B), thận (C) và dây thần kinh (D) ở gà thí nghiệm 67

Hình 3.22: Bệnh tích trên màng CAM phôi gà 14 ngày tuổi do MDV gây nên 69

Hình 3.23: Hình ảnh gây hiệu ứng hủy hoại tế bào xơ phôi vịt 1 lớp do MDV MDV

6.13 qua các đời tiếp truyền sau 96 giờ 70

Hình 3.24: Phản ứng trung hòa virus Marek với kháng thể thu được 73

Hình 3.25: Ảnh hưởng của các yếu tố tăng cường miễn dịch đến sự hình thành kháng thể bảo hộ của vắc xin phòng bệnh Marek 76

Hình 3.26: Ảnh hưởng của các yếu tố tăng cường miễn dịch đến sự

tổng hợp  - IFN 79

Hình 3.27: Ảnh hưởng của các yếu tố tăng cường miễn dịch đến sự

tổng hợp các β - IF 81

Hình 3.28: Ảnh hưởng của các yếu tố tăng cường miễn dịch đến sự

tổng hợp α-IFN 84

Hình 3.29: Ảnh hưởng của các yếu tố tăng cường miễn dịch đến sự tổng hợp IL-4 86 Hình 3.30: Ảnh hưởng của các yếu tố tăng cường miễn dịchđến sự

tổng hợp IL - 12p40 88

Hình 3.31: Ảnh hưởng của các yếu tố tăng cường miễn dịch đến sự

tổng hợp IL-10 91

Hình 3.32: Tỷ lệ giảm số bản copy của gen Meq trong lách gà thí nghiệm công cường độcsau khi sử dụng vắc xin và các chất tăng cường miễn dịch 95

Hình 3.33: Tỷ lệ giảm số bản copy của gen Meq trong túi Fabricius của gà thí nghiệm công cường độcsau khi sử dụng vắc xin và các chất tăng cường miễn dịch 98

Hình 3.34: Tỷ lệ giảm số bản copy của gen Meq trong tuyến ức của gà thí nghiệm công cường độcsau khi sử dụng vắc xin và các chất tăng cường

miễn dịch 101

MỞ ĐẦU

1 Tính cấp thiết của đề tài

Trong những năm qua, chăn nuôi gà ở nước ta có sự phát triển mạnh mẽ theo hướng chăn nuôi công nghiệp tập trung, đóng góp lớn cho sự phát triển kinh

tế xã hội ở các địa phương Theo báo cáo của Tổng cục Thống kê (2016) [12], năm 2016 cả nước có khoảng 252 triệu con gà; với sản lượng trên 500 ngàn tấn thịt, 8,5 tỷ quả trứng, cho thu nhập khoảng 63 ngàn tỷ đồng, chiếm 29,5% trong tổng giá trị ngành nông nghiệp, chiếm 3,15% trong GDP Tuy nhiên, chăn nuôi gà còn gặp nhiều rủi ro về giá cả, thị trường, đặc biệt là các loại dịch bệnh luôn tiềm

ẩn, ảnh hưởng nhiều tới hiệu quả sản xuất Một trong những căn bệnh khá phổ biến thường xuyên xảy ra trên đàn gà nuôi công nghiệp, đặc biệt là đàn gà đẻ, đó

là bệnh Marek, do Gallid herpesvirus gây ra, virus thường tồn tại trên biểu mô của

nang lông của gà nên có khả năng lây lan nhanh và mạnh qua đường hô hấp

Bệnh Marek có hai biểu hiện chính là gây tăng sinh các tổ chức lypmpho và suy giảm miễn dịch ở gà Cho đến nay bệnh Marek vẫn chưa có thuốc điều trị đặc hiệu, việc phòng bệnh phải dùng vắc xin tiêm cho gà Trên thực tế những năm gần đây một số trang trại chăn nuôi gà của nông dân, công ty CP, Japfa comfeed,… ở miền Bắc tình hình nhiễm bệnh Marek khá phức tạp gây thiệt hại lớn cho người chăn nuôi Qua thực tế cho thấy việc phòng bệnh cho đàn gà bằng vắc xin Marek nhập ngoại được các công ty và hộ chăn nuôi thực hiện tương đối đầy đủ, tuy nhiên đáp ứng miễn dịch của gà ở một số trang trại không cao, tỷ lệ bảo hộ của vắc xin chưa đảm bảo Ở nước ta, những năm gần đây, hầu hết các cơ sở sản xuất gà giống, mặc dù đã dùng vắc xin song bệnh vẫn xuất hiện làm ảnh hưởng đến chất lượng con giống (Phan Văn Lục, 2008) [7]

Hiện tượng gà vẫn bị bệnh sau khi tiêm vắc xin Marek có nhiều nguyên nhân trong đó nguyên nhân kỹ thuật về sự phù hợp chủng là quan trọng Các loại vắc xin hiện đang sử dụng được tạo ra từ những chủng kinh điển, sử dụng lâu dài trên toàn thế giới không hoàn toàn phù hợp với các biến chủng mới, độc lực cao xuất hiện

thường xuyên ở các vùng địa lý khác nhau [(Baigent SJ et al., 2006) [25]; (Schat

KA và Baranowski E, 2007) [100]

Trong khi chưa có một vắc xin phù hợp, đáp ứng yêu cầu về hiệu quả bảo hộ thực tế, việc nâng cao hiệu quả của vắc xin thương mại hiện có là vấn đề cần được quan tâm Gần đây, giải pháp sử dụng phối hợp vắc xin với các chất tăng cường đáp ứng miễn dịch, làm tăng khả năng bảo hộ chéo cho các biến chủng virus trên thực địa có những triển vọng khả quan và đang được ứng dụng rộng rãi Vấn đề đặt ra là liệu có thể lựa chọn được chất tăng cường miễn dịch của vắc xin trong phòng bệnh Marek ở nước ta Để giải quyết vấn đề này, trước hết cần có chủng virus gây bệnh Marek đang lưu hành, sau đó sử dụng chủng virus này để thử nghiệm với vắc xin có

và không có chất bổ trợ tăng cường miễn dịch Trong bối cảnh chưa sẵn có nguồn gene virus Marek cường độc, để bước đầu có những cơ sở khoa học và thực tiễn

cho những ứng dụng này, chúng tôi tiến hành đề tài: “Nghiên cứu một số đặc tính của virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại phía Bắc Việt Nam và giải pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh”

2 Mục tiêu của đề tài

Phân lập, xác định một số đặc tính của virus gây bệnh Marek trên đàn gà nuôi công nghiệp đã được tiêm vắc xin phòng bệnh Marek nhưng vẫn có biểu hiện mắc bệnh tại một số tỉnh phía Bắc Việt Nam Đánh giá khả năng gây bệnh, đặc điểm gây bệnh lý của chủng virus phân lập được và nghiên cứu ứng dụng liệu pháp phối hợp chất tăng cường miễn dịch trong sử dụng vắc xin phòng bệnh Marek

3 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài

3.1 Ý nghĩa khoa học của đề tài

- Nghiên cứu đặc tính sinh học và độc lực của chủng gây bệnh trên thực địa tại Việt Nam sẽ cung cấp cơ sở khoa học cơ bản nhất cho việc đánh giá diễn biến tình hình dịch bệnh Mareck ở nước ta, đồng thời chủng phân lập cũng là nguồn gene virus cho sự phát triển các nghiên cứu tiếp theo về sinh bệnh học, chẩn đoán phát hiện và chế tạo vắc xin phòng bệnh Marek

- Kết quả đánh giá hiệu quả bảo hộ khi dùng phối hợp các chất tăng cường miễn dịch với vắc xin cung cấp cơ sở khoa học về đáp ứng miễn dịch học ở gia cầm (trong điều kiện thí nghiệm) và định hướng cho phát triển nhóm chất bổ trợ vắc xin trong tương lai Mở ra một hướng nghiên cứu nâng cao hiệu quả phòng bệnh của vắc xin Marek nói riêng và vắc xin phòng bệnh virus phổ biến ở gia cầm nói chung (trong điều kiện thực địa)

3.2 Ý nghĩa thực tiễn của đề tài

- Kết quả phân lập và nghiên cứu đặc tính sinh học của chủng virus Marek

lưu hành ở Việt Nam có thể là nguồn gene phục vụ nghiên cứu mức độ tương đồng của chủng vắc xin và chế tạo vắc xin nội địa phòng bệnh Marek trong tương lai

- Kết quả thử nghiệm xác định chất bổ trợ có tác dụng tăng cường hiệu lực

của vắc xin có ý nghĩa trước mắt là có thể ứng dụng kết hợp với vắc xin sẵn có làm tăng hiệu quả phòng bệnh Marek, giảm thiệt hại do bệnh này gây ra và tăng thu nhập cho người chăn nuôi, góp phần thúc đẩy ngành chăn nuôi gia cầm phát triển;

kế đó có thể tiếp tục nghiên cứu lựa chọn chất tăng cường đáp ứng miễn dịch hiệu quả nhất, nâng cao hiệu quả của giải pháp phòng bệnh Marek

- Thông tin và tài liệu của đề tài có thể hỗ trợ nguồn thông tin giúp người chăn nuôi và cán bộ thú y, các nhà quản lý và đào tạo cập nhật về bệnh Marek ở gà trong giai đoạn hiện nay ở Việt Nam nhằm hoạch định và thực hiện tốt hơn các biện pháp phòng chống bệnh với hiệu quả cao

4 Những đóng góp mới của đề tài

- Chủng virus MDV 6.13 là chủng virus gây bệnh Marek lần đầu tiên được phân lập và xác định đặc tính gene học, độc lực, gây bệnh cho gà ở Việt Nam

- Lần đầu tiên chúng tôi đánh giá hiệu quả bảo hộ thực tế của một loại vắc xin đa giá nhập ngoại bằng chủng virus phân lập tại Việt Nam

- Bước đầu khám phá khả năng sử dụng các chất bổ trợ tăng cường miễn dịch để nâng cao hiệu quả bảo hộ của vắc xin thương mại, xác định được chất phối hợp nâng cao hiệu quả sử dụng vắc xin phòng bệnh Marek trên gà tại Việt Nam

Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU

1.1 Tình hình lưu hành bệnh Marek ở trong nước và trên thế giới

Bệnh Marek (Marek’s Disease: MD) được gọi theo tên người (József Marek) phát hiện bệnh và mô tả đầu tiên vào năm 1907 Virus gây bệnh Marek (Marek’s

disease virus - MDV) hoặc Gallidherpesvirus 2 (GaHV - 2) là tác nhân gây bệnh

Marek ở gà, virus gây nên tình trạng tăng sinh nhanh chóng tế bào lympho, gây hình thành các khối u ở các cơ quan nội tạng và tổ chức thần kinh dẫn tới bại liệt

(Biggs et al., 1965) [29] Mặc dù được mô tả bởi Joseph Marek từ năm 1907 nhưng

đến năm 1967 virus gây bệnh Marek mới được phân lập tại Anh và Mỹ (Churchill

et al.,1967) [46]

1.1.1 Tình hình lưu hành bệnh Marek ở Việt Nam

Theo Phan Văn Lục và cs (2008) [7] ở Việt Nam, bệnh Marek bùng phát mạnh vào những năm 80 như ở Châu Thành năm 1982, Cầu Diễn năm 1984 buộc phải hủy cả đàn gà Trước tình hình đó, Liên hiệp các xí nghiệp gia cầm Việt Nam

đã đưa vắc xin Marek vào lịch tiêm phòng cho các đàn gà giống Giai đoạn từ 1993 trở đi, bệnh có chiều hướng giảm do sử dụng vắc xin và biện pháp vệ sinh phòng bệnh Những năm gần đây, ở hầu hết các cơ sở mặc dù đã dùng vắc xin, song bệnh vẫn xuất hiện khoảng 3 - 5% làm ảnh hưởng đến chất lượng con giống Ngoài ra, bệnh còn gây chết trên nhiều trại gà đẻ và gà ta nuôi tập trung trên một số địa bàn Nam Bộ như Đồng Nai, Bình Dương, Long An và Tiền Giang Những số liệu thống kê của Bộ Nông nghiệp và Phát triển Nông thôn cho thấy mức độ phân bố của bệnh Marek ở hầu khắp các tỉnh thành trên cả nước Tuy không phải là bệnh gây bùng phát dịch hàng năm nhưng bệnh Marek vẫn liên tục gây ra các thiệt hại cho người chăn nuôi gà ở các mức độ khác nhau, trực tiếp gây thiệt hại về kinh tế cho sản xuất Thậm chí, đã có nhiều trường hợp được ghi nhận sự bùng phát thành dịch của bệnh Marek, khiến phải thiêu hủy toàn bộ đàn gia cầm nuôi Trong trường hợp này, những thiệt hại mà bệnh Marek gây ra không chỉ là về kinh tế, mà đó còn là những hệ lụy về môi trường và xã hội

Theo nghiên cứu của Phan Văn Lục và cs (2008) [7] theo dõi đàn gà giống tại trại gà Liên Ninh từ năm 2002 - 2005 cho thấy, mặc dù đàn gà giống được nuôi

đủ điều kiện và quy trình tiêu chuẩn Việt Nam nhưng bệnh Marek vẫn xảy ra với tỷ

lệ từ 2,28 - 3,32% trong năm 2002 - 2004 và 2,50 - 2,63% trong năm 2005

Theo Cục Thú y, từ ngày 26 - 10 - 2007, dịch bệnh trên gà đã xảy ra ở 15 hộ chăn nuôi gà hậu bị của một số xã, phường thuộc thị xã Tân An, tỉnh Long An, số chết và tiêu hủy 1.360 con Từ ngày 2 - 10 - 2007, bệnh đã xảy ra ở 43 hộ chăn nuôi

gà đẻ thuộc huyện Chợ Gạo, tỉnh Tiền Giang, số gà mắc bệnh và chết do dân khai báo là 38.100 con Cơ quan Thú y vùng VI đã chẩn đoán xét nghiệm trong phòng thí nghiệm, xác định là số gà chết nói trên mắc bệnh Marek (Bảng 1.1)

Bảng 1.1 Tình hình dịch bệnh Marek tại các tỉnh phía Nam năm 2007

(Nguồn: Cơ quan thú y vùng VI)

Theo báo cáo của Chi cục Thú y tỉnh Vĩnh Phúc, Phú Thọ, thành phố Hà Nội

từ năm 2010 - 2015 và một địa phương ở phía Bắc Của Việt Nam, một số trang trại nuôi gà đẻ theo hướng công nghiệp, mặc dù đàn gà đã được tiêm phòng bằng vắc xin Marek nhưng vẫn có hiện tượng gà mắc bệnh Marek gây thiệt hại lớn về kinh tế

cho người chăn nuôi

1.1.2 Tình thình lưu hành bệnh Marek trên thế giới

Theo tổ chức Thý y thế giới (OIE, 2016) [63] tính từ năm 2005 trở lại đây,

93 nước và vùng lãnh thổ thuộc tất cả các châu lục trên thế giới đã báo cáo phát hiện có Marek lưu hành Trong số đó có cả các nước có ngành chăn nuôi phát triển mạnh như: Mỹ, Anh, Canada, Pháp, Đức Cũng theo tổ chức Thú y thế giới, số liệu thống kê từ năm 2005 đến 2014 cho thấy 25% các quốc gia trên thế giới xuất hiện bệnh Marek, bao gồm: Angola, Argentina, Australia, Bangladesh, Belarus, Bolivia, Brazil, Cameroon, Canada, Chile, Trung Quốc, Đài Loan, Colombia, Costa Rica, Cuba, Đan Mạch, Cộng Hòa Dominica, Phần Lan, Pháp, Đức, Hồng Kông, Hungary, Indonesia, Iraq, Ireland, Israel, Nhật Bản, Jordan, Kenya, Hàn Quốc, Madagascar, Malawi, Malaysia, Myanmar, Nepal, Hà Lan, New Zealand, Oman,

Pakistan, Paraguay, Philippines, Ba Lan, Russia, Suriname, Anh, Mỹ, Uruguay, Zambia và Zimbabwe, Việt Nam

Ở Rumani, một ổ dịch Marek đã xảy ra vào năm 2009 gây chết 12.000 gà giống

hướng thịt trong vòng 6 tuần Theo số liệu điều tra của Ionica et al (2009) [64] cho

thấy tỷ lệ gà chết ở khu vực có dịch lên tới 12,06%, trong đó 9,0% là do MDV

Tại Ấn Độ, Arulmozhi et al (2011) [21] đã xác định được ổ dịch bệnh

Marek trên gà Leghorn trắng đã được tiêm vắc xin nuôi tại huyện Namakkal, tỉnh Tamil Nadu, bệnh đã gây chết từ 10 - 40% tổng lượng gia cầm ở địa phương này

Ở Ethiopia, năm 2014, Lobago et al (2014) [80] đã thực hiện điều tra trên

đàn gà 8.500 con có dấu hiệu lâm sàng và biểu hiện chết của bệnh Marek đã chứng minh được rằng 46% tổng đàn gà 14 tuần tuổi chết do MDV Báo cáo này cũng chỉ

ra rằng, với tình trạng quản lý chăn nuôi kém, gà không được sử dụng vắc xin bênh Marek sẽ gây thiệt hại lớn cho nghề nuôi gà ở quốc gia này

Theo Xinyu et al (2015) [129] năm 2015 ở Trung Quốc dịch bệnh Marek nổ

ra ở tỉnh An Huy, trên gà Broiler 24 - 30 tuần tuổi đã được tiêm phòng vắc xin, các dấu hiệu lâm sàng xuất hiện từ tuần tuổi thứ 24 và tỷ lệ gà có khối u đạt cao nhất ở tuần tuổi thứ 30, tỷ lệ gà mắc bệnh và chết tương ứng là 5% và 80%

1.2 Cơ sở khoa học của đề tài

1.2.1 Đặc tính sinh học cơ bản của virus gây bệnh Marek

1.2.1.1 Đặc điểm hình thái, cấu trúc của virus gây bệnh Marek

Theo Churchill (1967) [46] virus gây bệnh Marek gồm có nhân cấu tạo bởi ADN và vỏ bọc hình khối lục giác với 6 cạnh Virus trưởng thành được bao bọc bởi một đôi màng mỏng và virus hoàn chỉnh có kích thước từ 80 - 100 nm Nhân có độ lớn 40 -50 nm, trong nguyên sinh chất của tế bào bị virus xâm nhập gặp cả những virus chưa hoàn chỉnh có kích thước nhỏ hơn virus trưởng thành (70 - 80 nm) Chúng tập trung quanh Riboxom từ đó di chuyển và ký sinh trong nhân tế bào ký chủ Tại đây chúng sinh sản bằng phương pháp nảy chồi Họ cũng đã chứng minh được rằng virus bệnh Marek (MDV) là loại virus gắn chặt tế bào ký chủ Ra khỏi tế

bào sống virus dễ dàng bị tiêu diệt Biggs et al (1965) [29] đã chứng minh đặc tính

lây lan của virus phụ thuộc trực tiếp vào số lượng tế bào sống trong đó chứa MDV, virus chứa trong các tế bào bị phá hủy hoặc tế bào sống còn nguyên vẹn khi ra khỏi môi trường sống sẽ bị giảm độc lực hoặc bị triệt tiêu khả năng gây bệnh

Calnek và Hitchner (1970) [39] cũng đã chứng minh duy nhất chỉ có tế bào chân lông có thể bảo tồn sự sống và khả năng truyền bệnh của virus Marek trong thời gian khá dài Ngày nay trên thế giới đã phân lập được rất nhiều chủng virus từ những vùng khác nhau Virus gây bệnh Marek bị tiêu diệt bởi tác dụng của Ete, Chloroform Nhưng hoàn toàn đề kháng với 5-iod-2-dezoxiuridin Virus có thể phát hiện ở trong máu, tại các cơ quan có biến đổi khối u đặc biệt là ở thận và các

tế bào biểu bì hóa sừng chân lông chứa các virus trưởng thành và tại đó là nơi duy nhất đào thải virus có khả năng gây bệnh ra môi trường bên ngoài Trong các tổ chức khác như gan, lách, buồng trứng tinh hoàn virus nằm trong trạng thái chưa hoàn chỉnh và không có yếu tố đề kháng (RIF - Resistance Inducing Factor)

1.2.1.2 Độc lực của virus Marek (MDV)

Những chủng MDV được phân lập từ những vùng có địa lý khác nhau, có độc lực khác nhau Một số MDV có độc lực cao luôn gây bệnh Marek ác tính, số khác có độc lực trung bình chỉ gây bệnh Marek cổ điển ở thể da, mắt, và một số khác có độc lực kém hoặc không độc lực được các tác giả sử dụng vào mục đích chế tạo văc xin như:

Theo Dunn et al (2014) [52] có mối tương quan giữa mức độ sao chép nhân

lên của virus và độc lực, các chủng MDV có độc lực cao hơn thì mức độ sao chép

và nhân lên cũng nhanh hơn

1.2.1.3 Cấu trúc kháng nguyên của virus Marek (MDV)

Người ta đã chứng minh MDV chỉ có 3 serotype và chúng có các loại kháng nguyên: Kháng nguyên A là kháng nguyên nhân khuếch tán, đó là một Glucoprotein đóng vai trò quyết định độc lực của virus, sau 10 lần cấy truyền MDV qua các đời tế bào xơ phôi độc lực bắt đầu giảm dần và mất đi với sự tăng

dần các đời cấy truyền Kháng nguyên B là kháng nguyên Cytoplassma (tương bào) khuếch tán và kháng nguyên C cũng là kháng nguyên Cytoplassma nhưng ở dạng hạt Các kháng nguyên này tồn tại không những ở bản thân virus mà cả trong các tế bào sống chứa MDV Ở nước ta, Hồ Đình Chúc (1984) [1] đã chế tạo thành công kháng nguyên phục vụ cho công tác chẩn đoán và nghiên cứu bệnh Marek

Theo Baigent et al (2004) [23] virus gây bệnh Marek là virus có 2 mạch ADN lớn (~180kb), nó thuộc họ Herpesviridae, phân họ Alphaherpesvirinae và chi Mardivirus (MDV được phân loại thành 3 serotype dựa trên sự khác biệt về kiểu

gen và kháng nguyên, bao gồm: serotype 1 (MDV-1) gây ra các khối u điển hình của bệnh Marek, serotype 2 (MDV-2) và serotype 3 (MDV-3) được xem xét không

gây hình thành khối u và được sử dụng để phát triển vắc xin (Calnek et al.,1970)

[39] Dựa vào mức độ gây bệnh, serotype 1 được được phân loại kỹ hơn thành 4

nhóm độc lực: Trung bình, độc, rất độc và cực độc (Witter et al.,(2001) [122] Theo cách gọi tên phổ biến hiện tại, MDV-1 được gọi là Gallid herpesvirus 2 (GaHV-2), MDV-2 là Gallid herpesvirus 3 (GaHV-3), và MDV-3 được xếp là Meleagrid herpesvirus 1 (MeHV-1)

Theo Cebrian et al (1982) [43] bộ gen của 3 serotype mang tính tương đồng

đáng kể, tuy nhiên, chúng có những khác biệt rõ rệt ở cấu trúc của endonuclease (RE) Genome của MDV-1 là lớn nhất (174,076 bp), sau đó là MDV-2 (164,270 bp)

và MDV - 3 (160,673 bp) Hiện nay, trình tự nucleotid của cả 3 serotype đã được giải mã, tỷ lệ G + C của 3 serotype MDV khác nhau, dao động lần lượt là 43,9%, 53,6% và 47,6% tương ứng với các serotype 1, 2 và 3

1.2.1.4 Sức đề kháng của virus gây bệnh Marek

Trong chuồng trại, MDV tồn tại từ 19 đến 44 ngày, trong tế bào nang lông gà hoặc đã thoát ra khỏi cơ thể gà chúng tiếp tục sống 28-42 ngày, trong chất độn chuồng MDV tồn tại 28 - 112 ngày và nếu ở nhiệt độ chuồng 25oC, độ ẩm 65 - 75% chúng tồn tại trên 8 tháng

Những muối amoniac, phenol không có khả năng tiêu diệt MDV nhưng formalin 0,5%, các chế phẩm 1% iod có thể tiêu diệt chúng trong thời gian 5 phút đến 2 giờ

Theo nghiên cứu của Nguyễn Bá Hiên và cs (2011) [5], virus Marek bất hoạt

và bị tiêu diệt ở môi trường có độ pH = 3 sau 10 phút Ở ngoài môi trường virus tồn tại

được ở 37o

C trong 18 giờ; ở 60oC trong 10 phút và đặc biệt trong vảy da bong tróc, nang lông gà bệnh, rác, chất độn chuồng virus có thể tồn tại từ 4 - 8 tháng

1.2.1.5 Đặc tính gây bệnh của MDV

Trong cơ thể vật chủ, quá trình nhân lên của MDV trải qua 4 giai đoạn: xâm

nhập, nhân lên (tiềm ẩn), phá tế bào, phóng thích xâm nhập tế bào mới (Calnek et al., 1970) [39]

* Giai đoạn xâm nhập và tan tế bào

Con đường lây nhiễm tự nhiên thông qua việc hít phải các MDV trong không

khí có nhiễm virus và lông mang mầm bệnh (Beasley et al.,1970) [27] hoặc các dịch

tiết mắt và miệng (Davidson, 2002) [49]

Theo Adldinger et al (1973) [18] ở phổi, MDV có thể bị tiêu diệt bởi các tế

bào nhu mô Trong suốt giai đoạn đầu, khoảng 2 - 7 ngày kể từ khi bị xâm nhiễm, MDV tấn công vào các tế bào lympho B, sau đó xâm nhập vào các tế bào lympho T gây thiểu năng miễn dịch, tăng sinh tế bào mang virus trong máu, Đến thời điểm này có thể chuyển sang dạng nhiễm virrus tiềm ẩn ở rất nhiều nội quan hoặc ở thể

gây chuyển dạng tế bào CD4-Tcell, gây ung thư và gây chết (Schat et al., 2008)

[102] Bộ gen của MDV chứa một đoạn gen lai là viral interleukin - 8 (vIL - 8) tương đồng với IL - 8, yếu tố này đóng vai trò như là một chất kích thích hiệu quả, điều khiển sự tập trung của các tế bào lympho T đã hoạt hóa tại khác khu vực bị xâm nhiễm, tạo điều kiện cho việc chuyển đổi việc xâm nhiễm từ tế bào lympho B sang tế bào lympho T Trong suốt giai đoạn tan tế bào, virus tự do không được tạo

ra, tuy nhiên tác động ảnh hưởng qua lại giữa các tế bào đã bị xâm nhiễm tạo điều kiện cho MDV phát tán từ tế bào này qua tế bào kia với sự lây lan mạnh nhất trong khoảng 4 - 7 ngày sau lây nhiễm, giai đoạn xâm nhập và gây tan tế bào từ 7 - 8 ngày

sau lây nhiễm (Buscaglia et al.,1988) [36]

* Giai đoạn tiềm ẩn

Herpesviruses mang đặc trưng bởi việc xâm nhập tiềm ẩn ở bên trong tế bào

chủ, từ đó virus có thể tái hoạt hóa và gây bệnh Volpini et al (1995) [118] đã chỉ ra

rằng Interferon I có thể ức chế MDV trong ống nghiệm, đây có thể là nguyên nhân

dẫn hiện tượng tiềm ẩn của virus trong cơ thể Theo Cantello et al (1997) [42] các

gen LATs của MDV bao gồm 2 mảnh RNAs nhỏ có tên là Marek’s disease virus small RNAs (MSRs) và 1 đoạn 10 kb RNA khác, các gen này đối mã với gen tổng

hợp protein nội bào ICP4 là yếu tố ức chế quá trình tan bào Parcells et al (2003)

[93] khẳng định, trong suốt quá trình tiềm ẩn, MDV biểu hiện 1 số lượng gen gồm: pp14, Meq và latency - associated transcripts (LATs); trong số những gen khác

nhau của MDV trong suốt quá trình tiềm ẩn thì Meq là gen duy nhất luôn luôn được

biểu hiện ở các type huyết thanh gây bệnh, nó ức chế quá trình tự chết (apoptosis) của tế bào lympho T CD4+ nhiễm bệnh ở giai đoạn tiềm ẩn và hoạt hóa sự biểu hiện

các gen gây duy trì mức độ tiềm tan Liên kết dimer giữa hai gen Meq có liên quan

đến sự biểu hiện của gen pp38 gây duy trì mức độ tiềm tan đồng thời hoạt hóa sự sao chép của các gen khối u

Theo Faiz et al (2016) [54] virus gây bệnh Marek là một herpesvirus gây ra

khối u lympho và ức chế miễn dịch ở gà Ức chế miễn dịch do virus Marek gây ra được chia thành hai pha, pha đầu xảy ra chủ yếu ở gà thiếu kháng thể bẩm sinh chống lại virus bệnh Marek và liên quan đến teo cơ quan lympho; pha tiếp theo là gây ra ức chế miễn dịch xẩy ra khi virus Marek đi vào tiềm ẩn và phát triển khối u

* Giai đoạn tan tế bào và phát tán virus

MDV có thể tái hoạt hóa trong cơ thể gà mẫn cảm với bệnh Marek tạo ra một đợt làm tan tế bào thứ 2 sau khi hình thành khối u khoảng 2 - 3 tuần sau đợt lây nhiễm đầu tiên Sau khi các khối u hình thành, sự giải phóng virus có thể gây hiện tượng tan bào, làm hoại tử các mô, gây hiện tượng teo cơ (Calnek (1986) [38) Điều này dẫn đến việc suy giảm miễn dịch vĩnh viễn ở cơ thể mẫn cảm, nguyên nhân của hiện tượng này được cho là các tế bào nhiễm virus ở giai đoạn tiềm ẩn có chứa virus

được đưa đến các mô khác nhau thông qua các mạch lympho ngoại biên (Baigent et al., 2004) [23]

Theo Cantello et al (1994) [41] LATs cũng có thể liên quan đến việc biển

đổi cấu trúc tế bào do tần số xuất hiện nhiều trong các dòng tế bào khối u của gà nhiễm MDV Hơn thế nữa, các nghiên cứu về hóa sinh và sinh học phân tử cũng đã

đưa ra nhận định rằng Meq là gen chính gây hình thành khối u của MDV (Parcells

et al., 2001) [92] MDV có thể gây ra khối u phân bố ở nhiều cơ quan khác nhau

trong cơ thể bao gồm: thận, lách, tuyến sinh dục và hệ thống tiêu hóa Trong đó, lách được xem là nơi tập trung sự gia tăng số lượng tế bào khối u Những nghiên

cứu invitro chỉ ra rằng các gen của virus MDV như ICP4 và Meq liên quan đến quá trình biến đổi của tế bào (Lupiani et al., 2001), Levy et al., 2005) [82,79]

Sự biến đổi của các tế bào dẫn đến việc phát triển của các tổn thương lymphomatous có thể xuất hiện sớm từ khoảng 12 - 14 ngày lây nhiễm, và kết quả

là gây mù, bại liệt và chết (Calnek (2001) [40] Có một số thông tin cho rằng có thể

có sự hình thành khối u liên kết kháng nguyên hoặc khối u đặc hiệu kháng nguyên, tuy nhiên, người ta đã xác định được kháng nguyên CD30 trên bề mặt các tế bào khối u do MD gây nên CD30 thuộc nhóm các yếu tố thụ cảm typ II gây hoại tử khối u, nó biểu hiện ở mức độ rất thấp ở các tế bào bạch cầu không nhiễm virus và

không biểu hiện trong các tế bào lympho T thông thường (Burgess et al., 2002)

[35] Bên cạnh đó, trên các tế bào nhiễm MDV có sự thay đổi các dấu ấn bề mặt, những tế bào này có thể sản sinh các yếu tố miễn dịch trung gian Ví dụ, các tế bào ung thư do MDV có thể làm giảm đáp ứng miễn dịch thông qua việc biểu hiện của

IL - 10 và IL - 10 receptor, những yếu tố này giải thích cho cơ chế lẩn tránh, giúp

virus thoát khỏi hệ thống miễn dịch của cơ thể vật chủ (Buza et al., 2007) [37]

Theo Moriguchi et al (1987) [87], Abdul Careem et al (2008) [14] mặc dù

một vài loại tế bào và mô có thể bị xâm nhiễm bởi MDV nhưng nang lông là thứ duy nhất có thể gây phát tán virus trưởng thành từ cá thể này sang cá thể khác Sự nhiễm MDV trong nang lông có thể được phát hiện sớm khoảng 4 ngày sau gây

nhiễm bằng kỹ thuật PCR phát hiện gen Meq Đáp ứng của vật chủ đối với virus có

thể được đánh giá bởi sự xuất hiện các tế bào của phản ứng viêm, bao gồm các tế bào lympho và heterophils ở bên trong tủy lông cũng như sự biểu hiện của các Cytokine thuộc phản ứng viêm như IL - 6, IL - 8 and IFN - γ Sự tăng lên hay giảm xuống của các hạt virus tự do không chịu ảnh hưởng bởi yếu tố di truyền hay sự bảo

hộ của vắc xin

1.2.1.6 Đặc điểm nuôi cấy

MDV có thể nhân lên trong tế bào thận gà (chicken kidney cell - CKC), xơ phôi gà (Chicken embryo fibroblast - CEF), tế bào xơ phôi vịt (Duck embryo fibroblast - DEF) hoặc phôi gà, gà mới nở

* Trên phôi gà

Von Bullow et al (1977) [119] đã dùng máu toàn phần của gà bị bệnh (đã xử

lý chống đông bằng 0,5% dung dịch Natri citrate) tiêm vào lòng đỏ của phôi gà 4 -

5 ngày tuổi rồi tiếp tục ấp thêm 7 - 9 ngày nữa, tức là vào ngày thứ 11 - 12 sau khi

ấp thì trên màng niệu phôi (CAM - Chorioat Antoid Membran) sẽ xuất hiện những

nốt sần trắng to bằng đầu kim có kích thước 1 - 2mm gọi là Fox Nếu trên màng CAM có dưới 6 Fox thì coi như kết quả âm tính Từ 6 - 20 Fox kết quả là nghi ngờ

và trên 20 Fox kết quả mới được khẳng định là dương tính

Katz et al (1971) [74] gọi phương pháp của Von Bullow là Embrion test và

chứng minh khi sử dụng nguyên liệu xét nghiệm chỉ có bạch cầu thì kết quả thu được sẽ khá hơn và Embrion test rất tiện lợi trong việc chẩn đoán, phân lập, xác định và giữ virus Marek (MDV)

* Nuôi cấy trên tế bào

Nuôi cấy virus Marek trên tế bào được thực hiện trong phòng thí nghiệm thí nghiệm đã mở ra một trang mới trong các nghiên cứu về MDV với tính ưu việt hơn hẳn test của Von Bullow (1977) [119] Phương pháp này cho phép theo dõi được quá trình nhân lên của virus, xác định được độc lực và những đặc tính hình thái, sinh học virus Đồng thời ta cũng có điều kiện quan sát được những biến đổi của tế bào bị virus Marek xâm nhập

Nuôi cấy MDV trên tế bào thận gà

Năm 2003, Witter đã dùng thận gà 5 - 35 ngày tuổi không bị nhiễm MDV, sau khi tách tế bào thận trong dung dịch 0,25% trypsin, các tế bào được thu lại rửa sạch hồng cầu, bạch cầu và các tạp tổ chức khác bằng dung dịch PBS nhiều lần, lọc qua gạc và ly tâm 800 vòng/ phút trong 5 phút (Witter and Schat, 2003) [124] Tế bào thu được được nuôi trong bình Roux, trong môi trường MEM hoặc 199 có bổ sung huyết thanh bào thai bê Các bình nuôi tế bào được đặt trong tủ ấm 370C và 3 - 4% CO2 Tùy thuộc vào thiết diện bình để cho số lượng tế bào và môi trường vừa

đủ Trong tất cả các phòng thí nghiệm, việc nuôi cấy phải được thực hiện ở điều kiện vô trùng tuyệt đối

Sau 48 - 72 giờ các tế bào thận đã bám vào đáy bình và mọc thành một lớp thì có thể cấy virus Marek và quan sát các biến đổi bệnh lý tế bào (Cytopathogenic Effect - CPE)

Bệnh tích tế bào do MDV gây nên có biểu hiện: tế bào biến đổi từ hình thoi, hình sợi sang hình tròn hoặc hình ellip tròn có kích thước khổng lồ, các tế bào bệnh

lý thường nằm kề sát nhau tạo thành 1 đám như chùm nho (gọi là Plaque) Khi quan sát dưới kính hiển vi các đám Plaque này bị khúc xạ ánh sáng Tế bào bệnh lý có nhiều nhân nhưng không quá 5 nhân Nếu tiếp tục cấy truyền thì CPE thay đổi kiểu

như Herpes virus typ B, nhân tế bào to lên gấp bội và các cơ quan nội nhân cũng

tăng lên về khối lượng Căn cứ vào độ lớn Plaque mà Spenser et al (1970) [108] đã

chia chúng thành 2 loại CPE: micro CPE chỉ chứa số ít tế bào bệnh tích và macro CPE có lượng lớn tế bào bệnh tích

Nuôi cấy tế bào MDV trên xơ phôi gà, vịt

Solomon (1968) [107] đã cấy chuyển thành công MDV trên tế bào xơ phôi

gà (Chicken Embryo Fibroblast - CEF) và xơ phôi vịt (Duck Embryo Fibroblast - DEF)

Theo Kottaridis et al (1968) [76] để tiếp tục giữ những tế bào sống có virus

thì cần phải tiếp tục nuôi lặp lại cách nhau 4 ngày và CPE sẽ xuất hiện sau lần thứ 3

Quy trình thực hiện nuôi cấy MDV cũng lần lượt các bước như nuôi cấy tế bào thận, chỉ khác dùng tế bào xơ phôi gà tách từ phôi 11 ngày tuổi và tế bào xơ phôi vịt tách từ phôi 13 ngày tuổi Các tác giả đều thống nhất rằng muốn tiếp tục giữ virus Marek (MDV) thì cần phải đảm bảo những tế bào có bệnh tích (CPE) trong Ni tơ lỏng (-1960

C) hoặc tiêm trực tiếp cho gà con 1 ngày tuổi hoặc đông khô chúng lại và bảo quản ở 40C

1.2.2 Triệu chứng lâm sàng bệnh Marek

Theo Lê Văn Năm (2003) [9] bệnh Marek có 2 thể biểu hiện: mãn tính

(Marek cổ điển) và thể cấp tính Trong quá trình tiến hóa bệnh, các nghiên cứu về

bệnh Marek đã mô tả rất tỉ mỉ, kỹ càng diễn tiến và biểu hiện bệnh Thông thường 2 thể này đều có có những đặc điểm tổn thương chung, nhưng ở mức độ khác nhau,

cụ thể là:

1.2.2.1 Các triệu chứng thần kinh

Các dấu hiệu về thần kinh do bệnh Marek thường rất đặc trưng: gà từ bán liệt hoặc bại liệt hẳn chân hoặc cánh Gà sã cánh theo chu kỳ 1 trong 2 cánh rồi dần dần bệnh nặng gây liệt hoặc bán liệt Các ngón chân gà chụm lại, gà đi loạc choạc hoặc ngã, gà lười đi lại, hay ngồi hoặc nằm, nhưng bao giờ cũng thấy các ngón chân quắp lại (chụm lại), đôi khi gà nằm trong tư thế duỗi 1 trong 2 chân

Trong trường hợp bệnh nặng dần, 1 trong 2 chân hoặc cánh bị bại liệt hoàn toàn, gà nằm với tư thế rất điển hình: một chân duỗi thẳng căng lên phía trước, chân còn lại duỗi thẳng ra phía sau, bàn chân ngửa lên trời, 1 số gà chân choãi ra các phía Vì bị liệt, gà đi lại khó khăn nên ở cơ đùi, cơ ngực thường thấy các vết xước

Thông thường những gà bệnh bại liệt vẫn muốn ăn uống và chúng uống nước bình thường Song vì không thể tự kiếm được thức ăn, nước uống, chúng gầy nhanh, suy nhược, yếu dần rồi chết đói, chết khát hoặc bị gà khỏe dẫm đạp Một số khác bị bệnh ghép thứ phát thì có thể chết sớm hơn

Bên cạnh đó, gà có các biểu hiện tổn thương thần kinh, thể hiện: gà ốm ủ rũ,

sã cánh nhẹ, loạng choạng đi không vững Khi khối u ở thần kinh và phổi xuất hiện thì gà thở khó, thở nhanh, tiếng kêu yếu ớt Gà bệnh gầy dần, cơ bắp teo lại, mào gà sụt xuống nhợt nhạt thiếu máu Gà chết do bệnh Marek thường rất gầy và xơ xác vì vậy còn gọi là bệnh teo cơ gà, đây là một biểu hiện quan trọng của Marek cấp tính

1.2.2.2 Những biểu hiện ở da và mắt

Bên cạnh thể thần kinh, gà mắc bệnh Marek còn có biểu hiện ở thể mắt, biểu hiện con ngươi ở một trong hai mắt của gà bị hẹp lại hoặc biến dạng hình sao 3, 5, 7 cạnh hoặc có hình tam giác Bình thường mống mắt có màng da cam ở gà lớn và màu xanh đen ở gà con với đồng tử tròn to, khi bị bệnh do tổn thương thần kinh thị giác đồng tử bị biến dạng, sưng đục, mống mắt chuyển thành màu vàng lưu huỳnh hoặc mất màu từng đám hoặc theo hình vòng tròn, vùng điểm phát quang của mắt vẩn đục màu xám gọi là mắt xám Vì các đặc điểm này, một số tác giả gọi bệnh Marek là “bệnh mắt xanh ghi” hoặc “bệnh mắt cá”

Bệnh với các biểu hiện ở da và mắt thường ở thể mãn tính, ít có khối u nội tạng

- Thể u lan tỏa: Gan sưng rất to do tăng sinh của tế bào lympho Màu của gan chuyển từ màu nâu đỏ sang nâu nhạt, đôi khi nâu xám hoặc trắng xám Màng gan căng và gan căng cứng hơn bình thường

- Thể hỗn hợp giữa u kết hạt và u lan tỏa: là sự kết hợp của thể u kết hạt và u lan tỏa, là thể thường gặp, ít khi thấy các biến đổi riêng rẽ ở gan mà thông thường kèm theo các biến đổi do khối u ở các cơ quan khác nhau như u lách, tim, cơ, dạ dày, thận, phổi, da

1.2.3.4 Bệnh tích ở tim

Trong các trường hợp bệnh Marek cổ điển thì các biến đổi ở tim rất ít gặp Trong khi đó ở Marek ác tính, tỷ lệ biến đổi bệnh tích ở tim chiếm khoảng 4,76 - 26,51% Các khối u ở tim có độ lớn khác nhau từ 0,2 - 0,5 cm, ít khi ở trong tim mà thường chồi ra từ màng tim trông rất rõ Nhiều trường hợp khối u làm cho đỉnh tim

tù lại và biến dạng

1.2.3.5 Bệnh tích ở phổi

Phổi gà mắc bệnh Marek thường bị sưng và rắn cứng Lúc đầu phổi có màu

đỏ nâu, sau chuyển sang nâu trắng và xám trắng Khi cắt phổi ra ta luôn thấy phổi bị ướt Đây là điểm phân biệt với các trường hợp viêm phổi khác

1.2.3.6 Bệnh tích ở dạ dày tuyến

Tỷ lệ có khối u ở dạ dày tuyến do bệnh Marek chiếm tỷ lệ khá cao, từ 44,66 - 64,20% Dạ dày tuyến sưng to, các khối u ở trong niêm mạc có đỉnh viêm loét, xuất huyết, chỗ viêm loét có thể được phủ một lớp biểu bì hóa sừng

Xuất huyết dạ dày tuyến có thể gây nhầm lẫn với xuất huyết Gumboro hoặc của Newcastle Tuy nhiên, xuất huyết do bệnh Newcastle chỉ có ở đỉnh lỗ tuyến và thường tập trung nơi ngăn cách giữa dạ dày cơ và dạ dày tuyến theo dải hàng ngang Đối với

bệnh Gumboro, dạ dày tuyến xuất huyết nhưng không sưng kèm theo xuất huyết ở cơ đùi, cơ ngực và có các điểm xuất huyết hoặc có các chất như bã đậu ở túi Fabricius

1.2.3.7 Bệnh tích ở buồng trứng và tinh hoàn

Những biến đổi đại thể do bệnh Marek ở buồng trứng và tinh hoàn phụ thuộc vào giai đoạn phát triển của khối u Trong giai đoạn bệnh mới phát triển, khối u ở dạng tăng sinh, màu hồng nhạt Giai đoạn sau màu hồng nhạt biến mất, một số trứng non có màu trắng xám Càng về sau khối u càng rõ, có kích thước từ hạt đỗ đến quả trứng gà Trong trường hợp nặng, cả buồng trứng là một khối u giống bán cầu não đẩy ruột ra phía sau, chèn dạ dày tuyến và gan làm bụng gà phình to ra và thường thấy

gà bị sệ bụng

Tinh hoàn cũng có khối u và chủ yếu ở thể u lan tỏa làm cho tinh hoàn lớn gấp 2 - 5 lần bình thường với màu xám trắng Gà mái do mẫn cảm với MDV hơn gà trống nên khối u buồng trứng thường gặp nhiều hơn khối u tinh hoàn

1.2.3.10 Bệnh tích ở túi Fabricius

Túi Fabricius là một trong những cơ quan bị tổn thương đầu tiên do bệnh Marek Túi Fabricius sưng to, rắn, không hình thành u rõ rệt Bổ đôi túi Fabricius thấy có bã đậu khô và dễ nát, niêm mạc túi có màu trắng xám hoặc hồng nhạt, các nếp gấp sưng rất to và không đều (sưng đều ở gà mắc bệnh Gumboro); giữa các nếp gấp có các khối u với các kích thước rất khác nhau từ 0,1 - 3 mm

1.2.3.11 Bệnh tích ở tuyến ức

Những biến đổi của tuyển ức trong thực tế cũng thường gặp Giai đoạn đầu, tuyến ức có màu hồng nhạt, trên bề mặt xuất hiện một số nốt sần trắng (khối u) màu trắng xám Về lâm sàng, ức gà bị bệnh lympho sưng to, thậm chí rất to Tần suất xuất hiện khối u ở tuyến ức dao động trong khoảng 4,38 - 8,88% trên gà bệnh

1.2.3.13 Bệnh tích ở cơ

Trong bệnh Marek, rất ít khi gặp các khối u do bệnh Marek gây ra ở cơ (4,76

- 12,5), nếu có gặp chỉ xuất hiện ở cơ đùi và cơ ngực Những trường hợp mổ khám thấy có khối u ở cơ thì cũng có khối u ở nội tạng Khối u cơ, tuy không có danh giới

rõ ràng với tổ chức bình thường, nhưng làm cho cơ căng lồi, có thể phát hiện được khi sờ nắn

1.2.3.14 Bệnh tích ở dây thần kinh ngoại biên

Trong tất cả các thể bệnh Marek đã biết đến nay, những biến đổi ở dây thần kinh được cho là đặc điểm quan trọng nhất để phân biệt giữa các hiện tượng liệt do bệnh Marek với các bệnh khác hoặc dùng nó để phân biệt giữa khối u của Marek với Lơcô

Các dây thần kinh bị bệnh sưng to đều hoặc phình to ở một vài vùng khác nhau và chỉ ở một trong hai dây, ít khi gặp biến đổi ở cả 2 dây thần kinh đối xứng

Độ bóng láng kém hẳn đi, thay vào đó là màu trắng xám loang lổ Có trường hợp cả dây thần kinh đùi sưng to và có màu vàng trắng

1.2.4.2 Phương pháp lâm sàng học

Các triệu chứng điển hình của bệnh Marek bao gồm: xù lông sã cánh, hay ngồi với các ngón chân chụm lại, gầy xọp và teo cơ Gà bị suy nhược nhanh rồi chết trong trạng thái vẫn muốn ăn và uống

Những biến đổi u ở da và mắt chỉ thấy ở bệnh Marek cổ điển từ 8 - 10 tháng tuổi

1.2.4.3 Phương pháp giải phẫu bệnh lý

Ở mức độ đại thể, bệnh Marek có khối u ở hầu hết các cơ quan: gan, lách, thận, phổi, dạ dày tuyến, ruột kể cả màng treo ruột, buồng trứng, túi Fabricius, cơ đầu, da mắt, thần kinh đùi, tủy xương trong khi bệnh Lơcô chỉ có khối u ở gan, lách, buồng trứng, túi Fabricius Khối u của bệnh Marek không có ranh giới rõ rệt với cơ quan hình thành ra khối u Khi cắt khối u ra ta thấy khối u khô, màu sắc không đều, đôi lúc thấy điểm hoặc vệt xuất huyết, tụ huyết hoặc hoại tử

Ở mức độ vi thể, trong khối u của bệnh Marek gồm các loại tế bào: lymphô

đa nhân, đa hình thái (tế bào nhiễm virus Marek), tế bào lưới (mô hình liên kết), tế bào chưa biệt hóa (tế bào khối u), tế bào bạch cầu, thực bào và tiền sinh (plasmatic)

Sự tập trung tế bào u ở dây thần kinh trung ương và ngoại biên (đặc biệt là dây thần kinh đùi) là cơ sở quan trọng để chẩn đoán phân biệt bệnh Marek với bệnh Leukosis

1.2.4.4 Phương pháp huyết thanh học

Trong chẩn đoán bệnh Marek, người ta thường sử dụng Phản ứng kết tủa trên thạch (AGID) của Spencer and Calnek (1970) [108], ELISA phát hiện kháng thể

(Zelnik et al., 2004) [131]

1.2.4.5 Phương pháp virus học

Lấy mẫu bệnh phẩm từ gan, lách, thận gà bệnh xử lý vô trùng rồi tiêm dưới

da gà khỏe hoặc bắp cho gà con 1 ngày tuổi Bệnh tích có thể thấy sau 103 ngày Cũng với mẫu máu vô trùng từ tim gà bệnh tiêm vào túi phôi 4 - 5 ngày tuổi, sau 10

- 12 ngày trên phôi có các nốt sần trắng nằm rải rác trên màng nhung niệu

1.2.4.6 Phương pháp sinh học phân tử

- Phương pháp giải trình tự gen của Afonso (2001) [19], Lee (2010) [78]

- Phương pháp Real - time PCR (Islam et al., 2004) [65], Baigent et al (2006) [25], Abdul Careem et al (2006) [13])

- Phương pháp PCR xác định các serotype 1, 2, 3 của Beckey et al (1992) [28], Bumstead et al (1997) [34]

- Phương pháp PCR lồng cặp phát hiện virus Marek ở lông gà của Wozniakowski et al (2014) [127]

1.2.5 Dịch tễ học bệnh Marek

1.2.5.1 Nguồn bệnh và sự lây truyền bệnh

Khi xâm nhập vào cơ thể gà, virus Marek (MDV) sống và tồn tại cho đến suốt đời Vì thế gà ốm và gà khỏe bị nhiễm MDV là nguồn bệnh có tính tiềm tàng lâu dài, nguy hiểm cho quá trình lây lan bệnh

Sevoian et al (1963) [103] đã chứng minh bệnh lan truyền bằng mọi cách

như tiếp xúc trực tiếp giữa gà khỏe và gà ốm thông qua thức ăn, nước uống, hô hấp

và dụng cụ chuồng trại bị ô nhiễm, trong đó hô hấp là đường chủ yếu Gà mang mang mầm bệnh bài thải virus Marek ra môi trường qua đường bài tiết và nang lông

(Witter et al., 1971) [126] Trong chuồng nuôi gà, Calnek (1970) [39] đã xác định

virus Marek giữ nguyên độc lực và tồn tại tới trên 8 tháng

Mikami et al (1970) [83] phát hiện trứng gà bị Marek và lò ấp đóng vai trò

lan truyền bệnh Theo các tác giả này trứng gà lấy từ những đàn gà mẹ có bệnh Marek nếu không được khử trùng tiêu độc mà đưa vào ấp thì gà con nở ra vẫn có thể bị bệnh Marek Mặc dù vậy, nếu trứng được khử trùng tốt và gà con nở ra được

nuôi cách ly thì không quan sát thấy bệnh Marek Tuy nhiên, Witter et al (1971)

[126] đã thực nghiệm trên 1.180 phôi gà cùng với 1.480 gà con từ đàn gà mẹ bị

Marek và chứng minh được rằng bệnh Marek không truyền qua phôi Brewer et al

(1969) [31] cũng đã chứng minh muỗi không có khả năng truyền bệnh Marek

1.2.5.2 Sự mẫn cảm của gia cầm đối với virus Marek

Trong điều kiện tự nhiên, bệnh chủ yếu xuất hiện ở gà nuôi, đặc biệt là nuôi theo lối tập trung Tuy nhiên, cũng có thông tin bệnh được phát hiện ở những loại

gà khác Witter et al (1970) [125] đã phân lập được virus Marek ở gà tây trong khi chúng hoàn toàn khỏe mạnh Burgess et al (2002) [35] đã mô tả bệnh Marek ở vịt,

chim trời, chim cút, vẹt và chim sẻ

Theo Sevoian et al (1962) [104] trong quá trình phân lập virus Marek chủng

JM đã khẳng định tính mẫn cảm của gà đối với bệnh Marek phụ thuộc vào tính di truyền của dòng, giống và chủng loại gà Giống gà Cornell là giống gà rất dễ mẫn cảm với bệnh Marek Nhưng gà Cornell dòng R có sức đề kháng tốt hơn dòng C và con lai của chúng có sức đề kháng trung bình giữa 2 dòng nói trên

Biggs et al (1968) [30] đã chứng minh những dòng gà thuần chủng có sức đề

kháng bệnh Marek tốt hơn gà lai Cole (1968) [47] cũng đã chứng minh bệnh Marek

không những phụ thuộc vào giống gà mà còn phụ thuộc vào giới tính, trong cùng một đàn gà, một giống gà thì gà trống có sức chịu đựng cao hơn gà mái Cũng trong kết quả nghiên cứu này, Cole đã lai tạo được giống gà có khả năng đề kháng với bệnh Marek

Ở Việt Nam, nghiên cứu của Lê Văn Năm (2003) [9] trên các giống gà Rhode, Hybro, Leghorn, Plymut và các con lai của chúng đã cho thấy gà lai Rhode

x Ri có sức đề kháng tự nhiên tốt nhất trong khi đó gà Lowgo và Hybro mẫn cảm hơn với bệnh Marek

1.2.5.3 Ảnh hưởng của tuổi và giới tính gà đến tỷ lệ bệnh Marek

Khả năng nhiễm bệnh của virus Marek (MDV) bị giảm rất nhanh với sự tăng

lên của tuổi gà Các nghiên cứu của Biggs (1968) [30], Calnek et al (1970) [39] đã

khẳng định gà mẫn cảm nhất với virus Marek ở độ tuổi 1 - 30 ngày, gà con 1 ngày tuổi mẫn cảm hơn từ 1.000 - 10.000 lần gà 14 - 16 ngày tuổi Thời gian ủ bệnh của bệnh Marek cũng phụ thuộc vào tuổi gà, với cùng một chủng virus Marek khi gây bệnh cho gà con 1 ngày tuổi thì thời gian ủ bệnh là 33 ngày, ở gà 5 ngày tuổi là 122 ngày

Hầu hết các chủng virus Marek gây bệnh có thời kỳ ủ bệnh bình quân là 22 -

28 ngày, trừ một vài chủng có độc lực cao khi tiêm trực tiếp vào tĩnh mạch có thể gây bệnh sau 7 - 10 ngày

Trong điều kiện tự nhiên bệnh thường quan sát thấy ở gà 3 - 5 tháng tuổi Ở thể cấp tính bệnh có thể thấy ở tuổi gà sớm hơn Nhưng nếu bệnh ở dạng cổ điển thì thường thấy ở gà lớn hơn 6 - 8 tháng tuổi

Ở Việt Nam, Hồ Đình Chúc (1984, 1987) [1, 2] cho biết bệnh Marek xuất hiện ở gà 1,5 - 2 tháng tuổi được nuôi theo phương thức tập trung Nghiên cứu của

Lê Văn Năm (2003) [9] cho thấy bệnh Marek xảy ra ở gà 6 - 8 tháng tuổi và chủ yếu ở thể cổ điển, thể u mắt, u da ở gà trên 10 tháng tuổi Tuy nhiên, trong giai đoạn

từ năm 1988 - 1995, gà bị bệnh Marek chủ yếu ở thể cấp tính và tập trung ở gà 3 - 5 tháng tuổi, gà mái dễ mắc bệnh và chết nhiều hơn gà trống

1.2.5.4 Mối liên quan giữa bệnh Marek và các bệnh khác

Biggs (1965) [29] cho rằng cầu trùng gà đóng vai trò thúc đẩy xuất hiện các triệu chứng bệnh Marek Khi gây bệnh thực nghiệm, tác giả đã chứng minh được tỷ

lệ mắc bệnh Marek cao hơn 8 - 10% ở những lô có bệnh cầu trùng

Những năm sau đó có rất nhiều nghiên cứu về mối tương quan giữa bệnh Marek và cầu trùng Sự có mặt của cầu trùng đã làm giảm khả năng đề kháng của

cơ thể gà đối với bệnh Marek, ngược lại virus Marek đã thúc đẩy làm tăng độ mẫn cảm của gà đối với cầu trùng

Ngoài ra, bệnh Marek sẽ phức tạp và nặng nề hơn khi gà bị nhiễm các bệnh CRD, viêm phế quản truyền nhiễm, nấm cúc phổi, các bệnh khác do virus gây ra

Theo Lê Văn Năm (2003) [9] khi đàn gà bị nấm cúc phổi (Aspergilosis) và dịch phó thương hàn (Salmonellosis) thì bệnh Marek tăng lên 40% Cũng theo tác

giả trên, sự mẫn cảm đối với bệnh Marek của những đàn gà được ăn thức ăn nghèo protein cao hơn hẳn những đàn gà ăn thức ăn giàu protein Bên cạnh đó, tỷ lệ chết

do bệnh Marek còn phụ thuộc vào các điều kiện chăm sóc nuôi dưỡng như mật độ, thông thoáng, nhiệt độ chuồng, độ ẩm không khí

Ở Mỹ, Kennedy et al (2015) [75] đã theo dõi và đánh giá từ năm 1961 đến

năm 2015 cho thấy đa số các đàn gà bị mắc bệnh Marek đều có liên quan hoặc bị ghép với bệnh Leucosis

1.2.6 Miễn dịch chống lại MDV

Khả năng miễn dịch để chống lại bệnh Marek hiệu quả cần sự tham gia và phối hợp của các cơ chế miễn dịch bẩm sinh và miễn dịch thu được Hậu quả của việc xâm nhiễm không chỉ được xác định dựa trên độc lực của virus mà còn bởi kết quả của sự kết hợp qua lại giữa các thành phần của 2 hệ thống đáp ứng miễn dịch của vật chủ bao gồm: các Cytokine, kháng thể, đại thực bào, tế bào diệt tự nhiên (NK), tế bào lympho T helper (TH), tế bào lympho T độc (CTLs) và các yếu tố có

vai trò như nitric oxide (NO) (Abdul et al., 2007) [15]

1.2.6.1 Đáp ứng miễn dịch bẩm sinh

MDV xâm nhập vào cơ thể gà qua đường hô hấp mặc dù cơ chế xâm nhập của virus vào tế bào còn chưa được làm rõ Các phân tử liên quan đến tác nhân gây bệnh của virus được nhận diện bởi các yếu tố tăng cường thụ thể (toll - like receptors - TLRs) có mặt trên hoặc trong tế bào khác nhau trong cơ thể Phân tích

hệ gen cho thấy sự có mặt của các yếu tố TLRs 1, 2, 3, 4, 5, 7, 9, 15, 21 (Kano et al., 2009) [71], Haq et al., 2010) [61], Theo Tovey et al (2010) [114] các TLR 3,

7, 8, và 9 (hoặc TLR21 ở gà) nhận diện nucleic acid của virus và sản sinh IFNs type I Việc sản sinh lớp IFN này có liên quan đến các yếu tố điều hòa interferon giúp cơ thể chống lại sự phát tán virus từ tế bào nhiễm sang tế bào lành

Jarosinski et al (2001) [66] đã sử dụng IFN - α tái tổ hợp để tiêm vào phôi

gà gây nhiễm MDV và làm rõ được vai trò của IFN - α trong việc ức chế sự nhân

lên của MDV Nghiên cứu của Morgan et al (2001) [86]; Karaca et al (2004) [72]

đã xác định phát hiện được sự tăng lên của các yếu tố điều hòa interferon IRF - 1 và IRF - 3 ở phôi gà gây nhiễm với HVT Trên mô hình gà được gây nhiễm MDV

Quéré et al (2005) [99] đã phát hiện IFN - α được tăng cường tổng hợp ở mức độ đáng kể Nghiên cứu của Abdul et al (2007) [15] đã xác định được có sự gia tăng

các yếu tố TLR3 và TLR7 ở phổi gà được gây nhiễm MDv qua đường hô hấp

Các nghiên cứu invitro và in vivo đều chứng minh được vai trò của đại thực bào trong đáp ứng miễn dịch chống MDV (Djeraba et al., 2002) [51], Barrow et al., 2003) [26] Đại thực bào có thể ức chế sự nhân lên của virus hoặc thực bào các

tế bào nhễm MDV Hơn nữa, các tế bào này cung cấp các Cytokine của quá trình viêm đồng thời các tế bào đại thực bào được hoạt hóa bởi virus sẽ tiết ra các chất

có hoạt tính kháng virus như NO, yếu tố này được phát hiện thấy trong lách, não

và phổi của gà nhiễm MDV (Abdul Careem et al., 2009) [16]

Nghiên cứu của Sharma et al (1977) [106] đã báo cáo sự gia tăng mức độ

biểu hiện của NK - lysin và perforin trong gà bị nhiễm bệnh Marek, điều này giúp đưa ra nhận định về tác dụng của granzyme/perforin trong đáp ứng miễn dịch chống lại sự xâm nhiễm của MDV Các nghiên cứu khác cũng đã chỉ rõ sự gia tăng hoạt động kháng lại bệnh Marek của tế bào diệt tự nhiên ở lô gà sử dụng vắc xin so với lô

không dùng vắc xin Một nghiên cứu invitro cũng đã chứng minh các tế bào diệt tự

nhiên có vai trò chống lại các khối u do bệnh Marek, kết quả này gợi ra rằng các tế bào diệt tự nhiên có thể có tác dụng trong suốt quá trình biến đổi tế bào và tấn công

các tế bào nhiễm MDV (Queré et al., (2005) [99] Các tế bào diệt tự nhiên (Nature

Killer Cell - NKC) nằm trong hệ thống miễn dịch bẩm sinh đóng vai trò then chốt trong việc ngăn chặn sự xâm nhập của virus Herpes thông qua thông qua phản ứng chết theo chương trình (apoptosis), quá trình này được thực hiện bởi hai phương thức: (1) gắn vào các điểm thụ cảm của các tế bào nhiễm virus và (2) giải phóng các thành phần chứa trong tế bào hạt Các granzyme thuộc nhóm serine protease và perforin

thuộc nhóm protein gây chọc thủng màng tế bào (Paludan et al., 2011) [91]

1.2.6.2 Đáp ứng miễn dịch thu được

Ngoài đáp ứng miễn dịch bẩm sinh chính, đáp ứng miễn dịch thu được bao gồm đáp ứng miễn dịch qua trung gian tế bào và kháng thể trung hòa có vai trò chủ đạo trong hoạt động miễn dịch chống lại virus Herpes Bằng khả năng đáp ứng với

các kháng nguyên đặc hiệu, kháng thể tạo thành sẽ gây trung hòa MDV đồng thời

có sự tương tác giữa các điểm thụ cảm của các tế bào T CD4+ và CD8+ với phức hợp protein quyết định tính đặc hiệu mô (major histocompatibility complex - MHC) trên các tế bào nhiễm MDV

* Vai trò của kháng thể

Mặc dù cơ chế của đáp ứng miễn dịch dịch thể của gà đối với MDV vẫn chưa được làm rõ, tuy nhiên kháng thể có khả năng bảo vệ cơ thể chống lại MDV Các kháng thể này được chứng minh rằng có khả năng trung hòa virus tự do và hoạt động theo cơ chế gây độc tế bào qua trung gian tế bào phụ thuộc kháng thể (antibody - dependent cell - mediated cytoxicity - ADCC) Gà con có thể nhận kháng thể thụ động qua lòng đỏ trứng từ gà mẹ được tiêm chủng vắc xin hoặc nhiễm bệnh vì vậy có

thể giảm nguy cơ nhiễm bệnh cũng như biểu hiện bệnh (Witter et al., 1984) [123]

* Đáp ứng miễn dịch tế bào

Nghiên cứu của Abdul et al (1996) [17] lần đầu tiên xác định được hoạt

động gây độc của tế bào lympho T CD8+ chống lại các tế bào biểu hiện kháng

nguyên MDV như pp38, Meq, ICP4 and gB, nghiên cứu này cũng chỉ ra rằng các tế

bào lympho T CD4+ và γδ T không có vai trò đáng kể trong việc loại bỏ các tế bào

trình diện kháng nguyên của MDV Theo Omar et al (1998) [89] một số nghiên

cứu khác cũng đã xác nhận hiệu quả của CD8+ CTL chống lại các glycoprotein của các chủng virus gây bệnh Marek khác nhau

Kết quả nghiên cứu của Faiz et al (2016) [54] đã cho thấy rằng quy trình

tiêm vắc xin tạo ra mức độ bảo hộ chống lại việc tạo các khối u do virus gây bệnh Marek gây ra nhưng không bảo hộ chống lại được ức chế miễn dịch trên cơ thể gà; như vậy, đàn gia cầm có thể bị ức chế miễn dịch ngay cả khi hoàn toàn không có khối u Kết quả này cho thấy cơ chế suy giảm miễn dịch luôn liên quan đến sự phát triển của khối u, tuy nhiên không phải là yếu tố duy nhất

1.2.6.3 Biểu hiện của Cytokine kết hợp với việc xâm nhiễm của MDV

Các Cytokine thực sự cần thiết cho việc hoạt hóa, biệt hóa và điều khiển của

hệ thống đáp ứng miễn dịch Cytokine đã được chứng minh là những chất trung gian có liên quan mật thiết đến các đáp ứng miễn dịch tế bào đối với sự xâm nhiễm của MDV, chúng được tiết ra trong quá trình tương tác với tế bào lympho T nhận biết thông qua các phức hợp trình diện kháng nguyên

Trong đáp ứng miễn dịch chống lại sự xâm nhiễm của MDV, mức độ biểu hiện gen của các Cytokine có thể thay đổi trong các giai đoạn khác nhau của bệnh lý bệnh Marek, hệ gen của gà cũng như các mô hoặc các loại tế bào khác nhau

Theo Xing et al (2001) [128], Djeraba et al (2002) [51] thì IFN- γ luôn ở mức độ cao trong lách gà bị nhiễm MDV Theo nghiên cứu của Kaiser et al (2003)

[69] thì IL - 6 và IL - 8 gia tăng đáng kể trong mô lách của gà nhạy cảm với MDV

Tuy nhiên, Quéré et al (2005) [99] đã phát hiện thấy sự suy giảm hàm lượng IFN -

γ trong máu gà nhiễm bệnh, còn IL - 1β và IL - 8 tăng ở gà có khả năng đề kháng

với MD Theo Jarosinski et al (2001) [66] những phát hiện này chứng minh rằng

biểu hiện của gen mã hóa IL - 6 và IL - 8 có liên quan đến sự mẫn cảm với bệnh Marek, trong khi IL - 1β và IL - 8 liên quan tới khả năng đề kháng với bệnh Marek Tác giả này đã đánh giá sự biểu hiện của IFN - γ, IL - 1β, IL - 6, and IL - 8 trong não của gà bị nhiễm bệnh và tìm thấy sự tương quan giữa biểu hiện của gen Cytokine với độc lực của MDV Các con gà bị nhiễm bệnh với MDV cường độc đã cảm ứng cho biểu hiện các Cytokine cao gà được cảm ứng với chủng MDV có độc

lực trung bình Nghiên cứu của Abdul - Careem et al (2007) [15] chỉ ra rằng những

con gà bị lây nhiễm MDV cường độc bị liệt sau thời gian ngắn có biểu hiện tăng cao hàm lượng IL - 6, IL - 12 và IFN - γ trong màng não

Djeraba et al (2002) [51] đã thông báo sự gia tăng biểu hiện của IFN - γ

trong các mô lách gà đã được tiêm vắc xin HVT và công cường độc với chủng

cường độc RB1B Những nghiên cứu của Abdul Careem et al (2007) [15] đã cho

thấy việc tiêm vắc xin MDV liên quan tới sự gia tăng trong biểu hiện IFN - γ Các

Cytokine cũng đóng vai trò hỗ trợ bảo vệ cơ thể của vắc xin Theo Kano et al

(2009) [71] khi kiểm tra sự biểu hiện của gen mã hóa Cytokine trong các mô lách từ những con gà đã được tiêm chủng với CVI988 và thử thách với chủng virus cường độc MDV (RB1B) và đã chứng minh IFN - γmRNA được gia tăng ở những gà đã được tiêm vắc xin

Vai trò của IFN - γ đối với sự ức chế MDV đã được chỉ ra trong thí nghiệm

invitro của Levy et al (2005) [79] Tuy nhiên, IFN - γ có thể kháng virus gián tiếp

qua hoạt động đại thực bào và cảm ứng sản sinh nitric oxide (NO) cũng như hoạt động của các tế bào lympho T độc, TCD8+ để tiêu diệt các tế bào bị nhiễm virus

(Whitmire et al., 2005) [120] Nitric oxide, được sản xuất bởi sự kích hoạt của IFN

- γ lên các đại thực bào, đóng vai trò quan trọng trong hệ thống đáp ứng miễn dịch

do các hoạt động kháng virus, tiêu diệt khối u

1.2.7 Vắc xin với việc kiểm soát và phòng ngừa bệnh Marek

Vắc xin đầu tiên thành công trong việc chống lại bệnh Marek sử dụng chủng MDV không gây hình thành khối u sử dụng chủng virus vắc xin HVT, đây là loại duy nhất cho đến hiện nay vẫn được sử dụng kết hợp với các chủng virus vắc xin khác để phòng bệnh Marek (Witter, 2001) [122] Sau thời gian dài sử dụng, sự xuất hiện của chủng virus MDV cường độc đã đòi hỏi sự ra đời của một loại vắc xin đa giá có hiệu quả hơn, có sự kết hợp của serotyp 2 và 3 Theo Osterrieder (2006) [90]

từ những năm 1970, việc sử dụng vắc xin phòng bệnh đã đem lại thành công đáng

kể trong việc kiểm bệnh Marek Mặc dù các vắc xin phòng bệnh Marek đã được sử dụng trong gần 40 năm qua, cơ chế sản sinh miễn dịch của vắc xin vẫn chưa thực sự được hiểu rõ

Theo Bacon et al (2001) [22] thông thường vắc xin được tiêm dưới da ngay

sau khi nở, hiệu lực bảo vệ của vắc xin phòng bệnh Marek phụ thuộc vào một số yếu tố, bao gồm: giống gà, sự tổn dư của kháng thể thụ động, độc lực của chủng virus xâm nhiễm và liều tiêm vắc xin Gimeno (2008) [56] cho rằng vắc xin đã làm giảm đáng kể thiệt hại do bệnh gây nên, tuy nhiên, ngày càng có sự gia tăng suy giảm hiệu quả vắc xin do hiện tượng biến chủng của virus bệnh

Theo nghiên cứu của Zhenhua Gong et al (2013) [132] chủng virus gây

bệnh Marek SD2012-1 phân lập được ở tỉnh Sơn Đông, Trung Quốc đã được xác định có độc lực rất cao, nó có thể vượt qua sự bảo vệ do vaccine HVT và vaccine HVT SB-1 tạo ra, virus dường như có một thời gian tiềm ẩn lâu dài và gây ra các biến đổi bệnh lý đại thể khác nhau khi mổ khám giữa gà chết sớm và gà chết muộn

Nghiên cứu của Park et al (2009) [94] về hiệu quả bảo vệ của chất bổ trợ

của IL - 2 và IFN - γ đã chứng minh đối với bursal disease virus (IBDV) Nghiên

cứu của Djeraba et al (2002) [51] cho thấy sử dụng yếu tố tăng trưởng - chicken

myelomonocytic growth factor (CMGF) ở gà đã cải thiện hiệu quả bảo vệ của HVT Các con gà được can thiệp với CMGF có thời gian sống sót dài hơn và hình thành khối u ít hơn sau thử thách với chủng virus MDV cường độc Các tác giả trên đã chứng minh vai trò của các Cytokine trong việc điều chỉnh các đáp ứng thông qua việc hoạt hóa hoặc biệt hóa các tế bào miễn dịch, những chế phẩm này đã được sử

dụng như thành công trong bổ trợ thành phần vắc xin cho người, nay thử nghiệm trong phối hợp phòng chống bệnh Marrek ở gà

Để tăng cường hiệu lực của vắc xin, một số hãng sản xuất đã tập trung vào việc nghiên cứu lựa chọn chất bổ trợ Các chất bổ trợ truyền thống như CpG ODN, muối nhôm, dầu Freund’s và chất bổ trợ dầu đã được chứng minh giúp tăng cường tổng hợp các Cytokine như IFNs, IL - 2, IL - 12 và IL - 18 Những yếu tố này có tác dụng quan trọng trong đáp ứng miễn dịch bẩm sinh, nó cũng kích thích việc kích hoạt đáp ứng miễn dịch thu được

IFN - γ gà có thể đáp ứng các phản ứng miễn dịch và ức chế sự nhân lên của virus, khi kết hợp với kháng nguyên, IFN - γ cho đáp ứng thứ cấp mạnh hơn và thời gian dài hơn Việc phối hợp giữa virus viêm gan vịt (duck hepatitis B virus - DHBV) với IFN - γ để sản xuất vắc xin đã làm gia tăng đáng kể hiệu quả bảo vệ của vắc xin này với bệnh viêm gan vịt (Long và cs., 2005) [81]

1.2.8 Các giải pháp phòng và trị bệnh Marek

1.2.8.1 Vệ sinh thú y

Như các bệnh truyền nhiễm khác, đối với bệnh Marek biện pháp phòng bệnh bắt đầu từ khâu vệ sinh thú y, chăn nuôi Đây là biện pháp tổng hợp nhằm ngăn chặn sự lây lan truyền bệnh của Marek Để phù hợp với các điều kiện tập trung hóa, chuyên môn hóa chăn nuôi như hệ thống chọn giống, nhân giống, kỹ thuật chăn nuôi với định hướng chăn nuôi thâm canh, cơ cấu lao động, năng suất lao động, trình độ tay nghề đồng thời bảo vệ được môi trường, cần có một biện pháp tổng hợp, liên hoàn và chặt chẽ từ các khâu:

* Nhập gà từ nước ngoài

Trước năm 1970, bệnh Marek chưa xuất hiện trên gà nuôi ở Việt Nam Sau gần 10 năm phát triển chăn nuôi gà công nghiệp, Nguyễn Văn Hạnh (1985) [3] thông báo về hội chứng khối u Vào thập kỷ 80 của thế kỷ XX, Lê Văn Năm và Hồ Đình Chúc đều công bố về bệnh Marek tại hầu hết các xí nghiệp chăn nuôi gà công nghiệp và bệnh đã trở lên trầm trọng vào thập kỷ 90 (Hồ Đình Chúc, 1984 [1]; Lê Văn Năm, 2003 [9])

Lý do khiến bệnh Marek lan tràn vào nước ta là do việc nhập ồ ạt gà con từ nước ngoài Việc quản lý khâu nhập gà còn chưa được chú trọng, chưa xem xét kỹ

từ cơ sở nhập giống Để ngăn chặn mầm bệnh, trứng nhập khẩu cần được xông

formol cùng với thuốc tím trước khi đưa vào lò ấp Gà con nở ra từ những lô trứng phải được nuôi cách ly và được theo dõi chặt chẽ trong suốt thời gian nuôi (tối thiểu

từ 6 - 8 tháng) Dùng các biện pháp lâm sàng học, giải phẫu học, đặc biệt là Test của Von Bullow để phát hiện bệnh Marek, tùy thuộc mức độ nhiễm mà xử lý tiêu diệt gà bệnh

* Ngăn chặn bệnh Marek lây lan

Để ngăn chặn mầm bệnh MDV lây lan từ cơ sở sản xuất này đến cơ sở sản xuất khác cần phải tách xa riêng biệt từng khu nuôi gà mái đẻ và khu nuôi gà con, tối thiểu từ 2 - 3 km

Trong quá trình sản xuất công nghiệp phải tuyệt đối theo nguyên tắc: cùng nhập cùng xuất Sau khi xuất gà, phải tiến hành vệ sinh tẩy uế chuồng trại, dụng cụ

và môi trường chăn nuôi bằng các loại thuốc khử trùng diệt virus như formol 2%, NaOH 5% Bỏ trống chuồng trại ít nhất từ 1 - 2 tháng không chăn nuôi Trước khi nhập và nuôi đợt gà mới từ 5 - 7 ngày, phải khử trùng tiêu độc cho chuồng trại và dụng cụ lần nữa

Vận chuyển trứng phải có xe chuyên dùng Trước và sau khi vận chuyển, cần tẩy rửa và phun thuốc khử trùng cho xe Trứng được bảo quản trong kho và thường xuyên phải xông khử trùng trước khi ấp

Thức ăn, nước uống phải đảm bảo sạch sẽ theo các chỉ tiêu kỹ thuật Phân gà phải được xử lý khử trùng đúng kỹ thuật

Trước khi ra vào khu sản xuất, người chăn nuôi phải tắm rửa thay quần áo, giầy dép cẩn thận; không tự tiện đi lại trong khu chăn nuôi

1.2.8.2 Chọn lọc lai tạo dòng, giống gà có sức đề kháng tự nhiên phòng chống bệnh Marek

Trên thực thế, đã phát hiện được có sự khác nhau về khả năng kháng bệnh giữa các dòng, giống gà khác nhau Trong cùng một đàn gà, các cá thể khác nhau có

sự mẫn cảm khác nhau với bệnh Marek

1.2.8.3 Phòng bệnh Marek bằng vắc xin

Tiêm vắc xin phòng bệnh Marek bắt buộc cho gà con 1 ngày tuổi dùng để sinh sản (gà ông bà, bố mẹ, gà nuôi lấy trứng) tại cơ sở ấp trứng

Purchase et al (1971) [98] đã phân lập được chủng virus Marek ở gà tây viết

tắt là HVT (Herpes Virus of Turkey) và đã chứng minh được HVT có triển vọng để ứng dụng trong sản xuất vắc xin với các đặc điểm:

- Có khả năng nhân lên nhanh chóng trong cả tế bào xơ phôi lẫn trong cơ thể gà

- Có tính kháng nguyên ổn định, không có kháng nguyên A, không gây độc, không gây bệnh tích ở mức độ đại thể và vi thể trong cơ thể gà

- HVT tồn tại hầu như suốt đời trong cơ thể gà, không bài thải ra môi trường

do đó chúng không có khả năng truyền ngang

Việc phân lập và xác định những đặc tính sinh học của HVT đã giúp Purchase

et al (1971) [98] và Witter et al (1971) [126] là những người đầu tiên dùng HVT để

sản xuất vắc xin Marek Từ đó vắc xin Marek chính thức được sử dụng rộng rãi Trước năm 1990 ở Tây Âu, chủng HVT được sử dụng rộng rãi nhất là chủng HVT - FC126, còn ở Đông Âu là chủng CZ1

Lúc đầu, vắc xin Marek ở dạng tươi, chứa các tế bào có virus HVT Sau này Calnek (1970) [39] đã tách HVT ra khỏi tế bào xơ phôi gà hoặc vịt và chế ra vắc xin đông khô Những nghiên cứu khả năng bảo hộ của vắc xin mà Purchase (1971) [98] cho thấy chỉ cần 1 PFU đã có một số gà trong đàn tạo được miễn dịch kháng bệnh, với 100 PFU thì tất cả gà trong đàn đã có miễn dịch

Để đảm bảo mức độ bảo hộ, Zanella (1974) [130] đã đề xuất một liều vắc xin tươi chứa ít nhất là 1.000 PFU và vắc xin đông khô chứa 1.500 - 2.000 PFU Tất cả các loại vắc xin tươi hoặc vắc xin đông khô đều phải tiêm cho gà con lúc 1 ngày tuổi ngay trong lò ấp

Theo Gimeno et al (2012) [57] đã chứng minh rằng tiêm nhắc lại lần hai

bằng vắc xin Marek khác loại đã tạo ra bảo hộ tốt hơn so với tiêm vắc xin một lần hoặc khi tiêm nhắc lại bằng vắc xin cùng loại

Nghiên cứu của Geerling et al (2013) [55] đã khẳng định chủng virus dùng

để sản xuất vắc xin CVI 988 rất phù hợp khi nuôi cấy trên nền tế bào JBJ-1 và kết luận rằng dòng tế bào JBJ-1 là chất nền thích hợp cho sản xuất vắc xin phòng chống bệnh Marek hiện nay

Chương 2 NỘI DUNG, ĐỐI TƯỢNG, NGUYÊN LIỆU

VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nội dung nghiên cứu

2.1.1 Phân lập virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại một số tỉnh phía Bắc Việt Nam

2.1.2 Nghiên cứu xác định độc lực và gây bệnh thực nghiệm virus Marek phân lập được trên các giống và lứa tuổi gà

2.1.3 Nghiên cứu đặc điểm bệnh lý đặc trưng do virus Marek phân lập được đối với gà thí nghiệm

2.1.4 Nghiên cứu thử nghiệm phối hợp chất bổ trợ với vắc xin để tăng cường hiệu quả miễn dịch của vắc xin phòng bệnh Marek

2.2 Đối tượng, nguyên liệu nghiên cứu

2.2.1 Đối tượng nghiên cứu

- Virus gây bệnh Marek phân lập được ở mẫu bệnh phẩm của gà nuôi công nghiệp nghi mắc bệnh Marek tại một số địa phương phía Bắc Việt Nam

- Đáp ứng miễn dịch ở gà nuôi công nghiệp sau khi được tiêm phòng bằng vắc xin Marek kết hợp với các chất bổ trợ tăng cường miễn dịch

2.2.2 Nguyên liệu

- Trứng gà sạch được mua từ Công ty Vắc xin và Sinh phẩm số I được ấp nở trong điều kiện sạch bệnh Gà sau khi nở 1 ngày tuổi được sử dụng trong các thí nghiệm của nghiên cứu

- Bệnh phẩm được lấy từ gà có biểu hiện mắc bệnh Marek ở thành phố Hà Nội, tỉnh Vĩnh Phúc và Phú Thọ

- Vắc xin đa giá MD - Vac CFL chủng Rispens và HVT do hãng Zoetis Inc của Mỹ sản xuất, được nhập khẩu bởi công ty TNHH TM & DP Sang, thành phố Hồ Chí Minh

- Các chất tăng cường miễn dịch CPG ODN, Poly I:C, Interferon - , α, β là các chất sinh tổng hợp nhập ngoại được sử dụng trong thí nghiệm