Nghiên cứu một số đặc tính của virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại phía Bắc Việt Nam và giải pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh (LV thạc sĩ)Nghiên cứu một số đặc tính của virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại phía Bắc Việt Nam và giải pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh (LV thạc sĩ)Nghiên cứu một số đặc tính của virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại phía Bắc Việt Nam và giải pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh (LV thạc sĩ)Nghiên cứu một số đặc tính của virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại phía Bắc Việt Nam và giải pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh (LV thạc sĩ)Nghiên cứu một số đặc tính của virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại phía Bắc Việt Nam và giải pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh (LV thạc sĩ)Nghiên cứu một số đặc tính của virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại phía Bắc Việt Nam và giải pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh (LV thạc sĩ)Nghiên cứu một số đặc tính của virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại phía Bắc Việt Nam và giải pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh (LV thạc sĩ)
Trang 1ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN
TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM
HÀ VĂN QUYẾT
NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC TÍNH CỦA VIRUS GÂY BỆNH MAREK Ở GÀ NUÔI CÔNG NGHIỆP TẠI PHÍA BẮC VIỆT NAM VÀ GIẢI PHÁP NÂNG CAO HIỆU LỰC VẮC XIN PHÒNG BỆNH
LUẬN ÁN TIẾN SĨ THÚ Y
THÁI NGUYÊN - 2017
Trang 2ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN
TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM
HÀ VĂN QUYẾT
NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC TÍNH CỦA VIRUS GÂY BỆNH MAREK Ở GÀ NUÔI CÔNG NGHIỆP TẠI PHÍA BẮC VIỆT NAM VÀ GIẢI PHÁP NÂNG CAO HIỆU LỰC VẮC XIN PHÒNG BỆNH
Ngành: Ký sinh trùng và Vi sinh vật học thú y
Mã số: 9.64.01.04
LUẬN ÁN TIẾN SĨ THÚ Y
Người hướng dẫn khoa học:
1 GS.TS Nguyễn Quang Tuyên
2 PGS.TS Phạm Công Hoạt
THÁI NGUYÊN - 2017
Trang 3i
LỜI CAM ĐOAN
Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi Các số liệu, kết quả trong luận án này là trung thực và nguyên gốc, không trùng lặp với những kết quả đã được công bố
Tôi xin cam đoan mọi sự giúp đỡ cho việc hoàn thành luận án này đã được
cảm ơn, các thông tin trích dẫn trong luận án đều đã được chỉ rõ nguồn gốc
Tác giả luận án
Hà Văn Quyết
Trang 4
đề tài
Hoàn thành luận án khoa học này, ngoài sự cố gắng của bản thân, tôi luôn nhận được sự giúp đỡ tận tình, đầy trách nhiệm và hết lòng vì khoa học của thầy giáo: GS.TS Nguyễn Quang Tuyên, PGS.TS Phạm Công Hoạt, PGS.TS Nguyễn Viết Không và PGS.TS Phạm Thị Tâm
Tôi xin trân thành cảm ơn: sự giúp đỡ, tạo điều kiện cho tôi về thời gian học tập, nghiên cứu của Huyện ủy, Hội đồng nhân dân, Ủy ban nhân dân huyện Lập Thạch, tỉnh Vĩnh Phúc; sự giúp đỡ nhiệt tình của Chi cục Thú y các tỉnh Vĩnh Phúc, Phú Thọ, Bắc Giang, Hà Nội và khoa Công nghệ sinh học - Viện Đại học mở Hà Nội
đã tạo điều kiện, giúp đỡ tôi trong quá trình thí nghiệm và thực hiện luận án này
Nhân dịp này, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới: các thầy, các cô, các bạn đồng nghiệp và đặc biệt là gia đình đã luôn giúp đỡ, động viên, hỗ trợ tôi trong suốt thời gian qua
Thái Nguyên, tháng 12 năm 2017
Tác giả luận án
Hà Văn Quyết
Trang 5iii
MỤC LỤC
LỜI CAM ĐOAN i
LỜI CẢM ƠN ii
MỤC LỤC iii
DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT vi
DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU vii
DANH MỤC CÁC HÌNH ix
MỞ ĐẦU 1
1 Tính cấp thiết của đề tài 1
2 Mục tiêu của đề tài 2
3 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài 2
3.1 Ý nghĩa khoa học của đề tài 2
3.2 Ý nghĩa thực tiễn của đề tài 3
4 Những đóng góp mới của đề tài 3
Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 4
1.1 Tình hình lưu hành bệnh Marek ở trong nước và trên thế giới 4
1.1.1 Tình hình lưu hành bệnh Marek ở Việt Nam 4
1.1.2 Tình hình lưu hành bệnh Marek trên thế giới 5
1.2 Cơ sở khoa học của đề tài 6
1.2.1 Đặc tính sinh học cơ bản của virus gây bệnh Marek 6
1.2.2 Triệu chứng lâm sàng bệnh Marek 14
1.2.3 Bệnh tích của bệnh Marek 15
1.2.4 Chẩn đoán bệnh Marek 18
1.2.5 Dịch tễ học bệnh Marek 19
1.2.6 Miễn dịch chống lại MDV 22
1.2.7 Vắc xin với việc kiểm soát và phòng ngừa bệnh Marek 26
1.2.8 Các giải pháp phòng và trị bệnh Marek 27
Chương 2 NỘI DUNG, ĐỐI TƯỢNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30
2.1 Nội dung nghiên cứu 30
2.1.1 Phân lập virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại một số tỉnh phía Bắc Việt Nam 30
Trang 6iv
2.1.2 Nghiên cứu xác định độc lực và gây bệnh thực nghiệm virus Marek
phân lập được trên các giống và lứa tuổi gà 30
2.1.3 Nghiên cứu đặc điểm bệnh lý đặc trưng do virus Marek phân lập được đối với gà thí nghiệm 30
2.1.4 Nghiên cứu thử nghiệm phối hợp chất bổ trợ với vắc xin để tăng cường hiệu quả miễn dịch của vắc xin phòng bệnh Marek 30
2.2 Đối tượng, nguyên liệu nghiên cứu 30
2.2.1 Đối tượng nghiên cứu 30
2.2.2 Nguyên liệu 30
2.2.3 Hóa chất, sinh phẩm và môi trường nuôi cấy 31
2.3 Địa điểm và thời gian nghiên cứu 33
2.3.1 Địa điểm nghiên cứu 33
2.3.2 Thời gian nghiên cứu 33
2.4 Phương pháp nghiên cứu 33
2.4.1 Phương pháp thu thập và xử lý mẫu 33
2.4.2 Phương pháp phân lập MDV và nhuộm Plaque 33
2.4.3 Phương pháp hóa mô 35
2.4.4 Phương pháp xác định độc lực của virus trên phôi trứng gà 35
2.4.5 Phương pháp PCR và xác định trình tự gen Meq 36
2.4.6 Phương pháp Real-Time PCR định lượng số copy genome của virus MDV 37
2.4.7 Bố trí thí nghiệm xác định khả năng gây bệnh của MDV trên các giống gà và lứa tuổi gà 38
2.4.8 Bố trí thí nghiệm đánh giá ảnh hưởng của các chất tăng cường miễn dịch đến hiệu quả của vắc xin HVT/Rispens 39
2.5 Phương pháp xử lý số liệu 40
Chương 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 41
3.1 Kết quả phân lập virus Marek 41
3.1.1 Kết quả mổ khám gà nghi mắc bệnh Marek ở một số địa phương 41
3.1.2 Phân lập virus Marek 43
3.1.3 Đặc tính gene của virus Marek chủng MDV 6.13 44
3.2 Khả năng gây bệnh của chủng MDV phân lập được 46
3.2.1 Khả năng gây bệnh của MDV 6.13 trên các giống gà thí nghiệm 46
Trang 7v
3.2.2 Khả năng gây bệnh của MDV phân lập được trên các giống gà thí
nghiệm ở các độ tuổi khác nhau 51
3.2.3 Nghiên cứu sự bài thải của virus từ gà thí nghiệm gây nhiễm virus gây bệnh MDV 58
3.3 Biểu hiện bệnh tích ở gà thí nghiệm do chủng MDV phân lập được gây nên 60
3.3.1 Biểu hiện tổn thương đại thể ở các tổ chức của gà thí nghiệm 60
3.3.2 Biểu hiện tổn thương vi thể ở các tổ chức của gà thí nghiệm 66
3.3.3 Kết quả xác định khả năng gây bệnh trên phôi gà của MDV phân lập 68
3.3.4 Kết quả xác định khả năng gây bệnh trên trên môi trường tế bào xơ phôi vịt một lớp của MDV phân lập 69
3.4 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của các chất tăng cường miễn dịch đến hiệu quả bảo hộ của vắc xin phòng bệnh Marek 70
3.4.1 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của các yếu tố tăng cường miễn dịch sự hình thành đáp ứng miễn dịch của gà thí nghiệm với vắc xin phòng bệnh Marek 73
3.4.2 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của các yếu tố tăng cường miễn dịch đến sự hình thành khối u trong các tổ chức của gà thí nghiệm công cường độc 92
3.4.3 Tỷ lệ giảm số bản copy của gen Meq trong các cơ quan có chức năng miễn dịch của gà thí nghiệm công cường độc sau khi sử dụng vắc xin và các chất tăng cường miễn dịch 93
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 103
1 Kết luận 103
2 Kiến nghị 104
TÀI LIỆU THAM KHẢO 105
PHỤ LỤC 118
MỘT SỐ HÌNH ẢNH TRONG PHÒNG THÍ NGHIỆM 118
Trang 8vi
DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT
1 ADC Antibody Dependent Cellmediated
2 ADN Acide Deoxyribo Nucleotic
3 APC Antigen Presenting Cell
4 CAM Chorioat Antoid Membran
5 CEF Chicken Embryo Fibroblast
6 CKC Chicken Kidney Cell
7 CMGF Chicken Myelomonocytic Growth Factor
8 CPE Cytopathogenic Effect
9 CPG-ODN Cytosine Phosphate Guanosine-Olygo Deoxy
Nucleotide
10 Poly I:C Chuỗi mạch ARN đôi Polyriboinosinic và
Polyribocytidylic
11 DEF Duck Embryo Fibroblast
12 DHBV Duck Hepatitis B Virus
13 ELISA Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay
14 GDP Gross Domestic Product
15 HVT Herpesvirus of Turkey
16 IFN Interferon
17 IL Interleukin
18 MDV Marek Disease Virus
19 MHC Major Histocompatibility Complex
20 NKC Nature Killer Cell
21 PCR Polymerase Chain Reaction
22 PFU Plaque Forming Unit
23 RIF Resistance Inducing Factor
24 TLR Toll Like Receptor
Trang 9vii
DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU
Bảng 1.1 Tình hình dịch bệnh Marek tại các tỉnh phía Nam năm 2007 5Bảng 3.1 Kết quả mổ khám gà nghi mắc bệnh Marek ở một số địa phương 41Bảng 3.2 Tương đồng gene Meq virus MDV 6.13 với MDV trên thế giới 45Bảng 3.3 Gene Meq MDV 6.13 và MDV cường độc trên thế giới và chủng
vắc xin 46Bảng 3.4 Mức độ gây bệnh của chủng MDV phân lập trên các giống gàthí nghiệm 47Bảng 3.5 Triệu chứng lâm sàng bệnh Marek qua từng tháng theo dõi 49Bảng 3.6 Mức độ gây bệnh của chủng MDV phân lập được trên các giống
gà ở các độ tuổi 54
Bảng 3.7 Số lượng bản copy của gen Meq bình quân trên 1 cá thể gà bài thải
trong 1 ngày (log10) 59Bảng 3.8 Biểu hiện bệnh tích do MDV gây cho gà thí nghiệm 61Bảng 3.9 Tần suất xuất hiện các tổn thương vi thể trong các tổ chức của gà
thí nghiệm 66Bảng 3.10 Biểu hiện bệnh tích do MDV trên phôi gà 11 ngày tuổi 69Bảng 3.11 Biểu hiện bệnh tích do MDV 6.13 trên trên môi trường tế bào xơ
phôi vịt 70Bảng 3.12 Ảnh hưởng các yếu tố tăng cường miễn dịch đến hiệu quảbảo hộ
của vắc xin phòng bệnh Marek 71Bảng 3.13 Ảnh hưởng của các yếu tố tăng cường miễn dịch đến sự hình
thành kháng thể bảo hộ của vắc xin phòng bệnh Marek 75Bảng 3.14 Ảnh hưởng của các yếu tố tăng cường miễn dịch đến sự tổng hợp - IFN 78Bảng 3.15 Ảnh hưởng của các yếu tố tăng cường miễn dịch đến sự tổng hợp
các β - IFN 80Bảng 3.16 Ảnh hưởng của các yếu tố tăng cường miễn dịch đến sự tổng hợp α-IFN 83Bảng 3.17 Ảnh hưởng của các yếu tố tăng cường miễn dịch đến sự tổng hợp IL-4 86Bảng 3.18 Ảnh hưởng của các yếu tố tăng cường miễn dịch đến sự tổng hợp
IL-12p40 87
Trang 10viii
Bảng 3.19 Ảnh hưởng của các yếu tố tăng cường miễn dịch đến sự tổng hợp IL-10 90Bảng 3.20 Ảnh hưởng của các yếu tố tăng cường miễn dịch đến sự hình
thành khối u ở gà sau công cường độc (Tỷ lệ % gà có khối u) 92
Bảng 3.21 Mức độ giảm số bản copy của gen Meq trong lách gà thí nghiệm
công cường độc sau khi sử dụng vắc xin và các chất tăng cường miễn dịch 94
Bảng 3.22 Mức độ giảm các bản copy của gen Meq trong túi Fabricius của gà
thí nghiệm công cường độc sau khi sử dụng vắc xin và các chất tăng cường miễn dịch 97
Bảng 3.23 Mức độ giảm số bản copy của gen Meq trong tuyến ức của gà thí
nghiệm công cường độc sau khi sử dụng vắc xin và các chất tăng cường miễn dịch 100
Trang 11ix
DANH MỤC CÁC HÌNH
Hình 2.1 Bản đồ hệ gene của MDV 8
Hình 3.1 Hình ảnh nuôi cấy phân lập MDV trên trên môi trường tế bào xơ phôi vịt 43
Hình 3.2 Trình tự gene Meq virus chủng phân lập MDV 6.13 44
Hình 3.3 Mức độ gây bệnh và gây chết của chủng MDV 6.13 ở gà thí nghiệm 50
Hình 3.4 Các biểu phiện tổn thương thần kinh của gà gây nhiễm với MDV 6.3 51
Hình 3.5 Tỷ lệ gà mắc bệnh và chết do chủng virus MDV 6.13trên các giống gà thí nghiệm ở các độ tuổi 52
Hình 3.6 Gà 6 tuần tuổi bại liệt sau khi gây nhiễm bằng chủng MDV 6.13 55
Hình 3.7 Tỷ lệ xuất hiện các biểu hiện tổn thương thần kinh do chủng virus MDV 6.13 trên các giống gà thí nghiệm ở các độ tuổi 56
Hình 3.8 Mức độ bài thải virus MDV 6.13 của các giống gà thí nghiệm ở các độ tuổi 58
Hình 3.9 Hình ảnh bệnh tích đại thể ở gà thí nghiệm do chủng MDV phân lập được gây nên 60
Hình 3.10 Tần suất xuất hiện bệnh tích trong các cơ quan của gà thí nghiệm 62
Hình 3.11 Tỷ lệ gà thí nghiệm có tổn thương ở lách 63
Hình 3.12 Tỷ lệ gà thí nghiệm có tổn thương ở thận 63
Hình 3.13 Tỷ lệ gà thí nghiệm có tổn thương ở tim 64
Hình 3.14 Tỷ lệ gà thí nghiệm có tổn thương ở dạ dày tuyến 65
Hình 3.15 Tỷ lệ gà thí nghiệm có tổn thương ở dây thần kinh ngoại biên 65
Hình 3.16 Tần suất xuất hiện các tổn thương vi thể trong các tổ chức của gà thí nghiệm 67
Hình 3.17 Bệnh tích trên màng CAM phôi gà 14 ngày tuổi do MDV gây nên 69
Hình 3.18 Hình ảnh gây hiệu ứng hủy hoại trên môi trường tế bào xơ phôi vịt 1 lớp do MDV MDV 6.13 qua các đời tiếp truyền sau 96 giờ 70
Hình 3.19 Phản ứng trung hòa virus Marek với kháng thể thu được 73
Hình 3.20 Ảnh hưởng của các yếu tố tăng cường miễn dịch đến sự hình thành kháng thể bảo hộ của vắc xin phòng bệnh Marek 76
Hình 3.21 Ảnh hưởng của các yếu tố tăng cường miễn dịch đến sự tổng hợp - IFN 79
Trang 12x
Hình 3.22 Ảnh hưởng của các yếu tố tăng cường miễn dịch đến sự tổng hợp
các β - I 81 Hình 3.23 Ảnh hưởng của các yếu tố tăng cường miễn dịch đến sự tổng hợp α-IFN 84 Hình 3.24 Ảnh hưởng của các yếu tố tăng cường miễn dịch đến sự tổng hợp IL-4 86 Hình 3.25 Ảnh hưởng của các yếu tố tăng cường miễn dịch đến sự tổng hợp
IL - 12p40 88 Hình 3.26 Ảnh hưởng của các yếu tố tăng cường miễn dịch đến sự tổng hợp
IL-10 91 Hình 3.27 Tỷ lệ giảm số bản copy của gen Meq trong lách gà thí nghiệm công
cường độcsau khi sử dụng vắc xin và các chất tăng cường miễn dịch 95 Hình 3.28 Tỷ lệ giảm số bản copy của gen Meq trong túi Fabricius của gà thí
nghiệm công cường độc sau khi sử dụng vắc xin và các chất tăng cường miễn dịch 98 Hình 3.29 Tỷ lệ giảm số bản copy của gen Meq trong tuyến ức của gà thí
nghiệm công cường độc sau khi sử dụng vắc xin và các chất tăng cường miễn dịch 101
Trang 13Luận văn đủ ở file: Luận văn full