Nghiên cứu một số đặc tính của virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại phía Bắc Việt Nam và giải pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh (Luận văn thạc sĩ)

Nghiên cứu một số đặc tính của virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại phía Bắc Việt Nam và giải pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh (LV thạc sĩ)Nghiên cứu một số đặc tính của virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại phía Bắc Việt Nam và giải pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh (LV thạc sĩ)Nghiên cứu một số đặc tính của virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại phía Bắc Việt Nam và giải pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh (LV thạc sĩ)Nghiên cứu một số đặc tính của virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại phía Bắc Việt Nam và giải pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh (LV thạc sĩ)Nghiên cứu một số đặc tính của virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại phía Bắc Việt Nam và giải pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh (LV thạc sĩ)Nghiên cứu một số đặc tính của virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại phía Bắc Việt Nam và giải pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh (LV thạc sĩ)Nghiên cứu một số đặc tính của virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại phía Bắc Việt Nam và giải pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh (LV thạc sĩ)

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM HÀ VĂN QUYẾT NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC TÍNH CỦA VIRUS GÂY BỆNH MAREK Ở GÀ NI CƠNG NGHIỆP TẠI PHÍA BẮC VIỆT NAM VÀ GIẢI PHÁP NÂNG CAO HIỆU LỰC VẮC XIN PHÒNG BỆNH LUẬN ÁN TIẾN SĨ THÚ Y THÁI NGUYÊN - 2017 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM HÀ VĂN QUYẾT NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC TÍNH CỦA VIRUS GÂY BỆNH MAREK Ở GÀ NI CƠNG NGHIỆP TẠI PHÍA BẮC VIỆT NAM VÀ GIẢI PHÁP NÂNG CAO HIỆU LỰC VẮC XIN PHÒNG BỆNH Ngành: Ký sinh trùng Vi sinh vật học thú y Mã số: 9.64.01.04 LUẬN ÁN TIẾN SĨ THÚ Y Người hướng dẫn khoa học: GS.TS Nguyễn Quang Tuyên PGS.TS Phạm Công Hoạt THÁI NGUYÊN - 2017 i LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết luận án trung thực nguyên gốc, không trùng lặp với kết công bố Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc hoàn thành luận án cảm ơn, thơng tin trích dẫn luận án rõ nguồn gốc Tác giả luận án Hà Văn Quyết ii LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận án này, nhận nhiều quan tâm giúp đỡ thầy, cô, bạn đồng nghiệp, quan cơng tác đặc biệt gia đình Tôi xin trân trọng cảm ơn: Khoa Chăn nuôi - Thú y, trường Đại học Nông lâm - Đại học Thái Nguyên; Khoa Công nghệ sinh học, Viện Đại học mở Hà Nội tạo điều kiện tốt cho tơi suốt q trình học tập, nghiên cứu thực đề tài Hoàn thành luận án khoa học này, ngồi cố gắng thân, tơi ln nhận giúp đỡ tận tình, đầy trách nhiệm hết lòng khoa học thầy giáo: GS.TS Nguyễn Quang Tuyên, PGS.TS Phạm Công Hoạt, PGS.TS Nguyễn Viết Không PGS.TS Phạm Thị Tâm Tôi xin trân thành cảm ơn: giúp đỡ, tạo điều kiện cho thời gian học tập, nghiên cứu Huyện ủy, Hội đồng nhân dân, Ủy ban nhân dân huyện Lập Thạch, tỉnh Vĩnh Phúc; giúp đỡ nhiệt tình Chi cục Thú y tỉnh Vĩnh Phúc, Phú Thọ, Bắc Giang, Hà Nội khoa Công nghệ sinh học - Viện Đại học mở Hà Nội tạo điều kiện, giúp đỡ tơi q trình thí nghiệm thực luận án Nhân dịp này, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới: thầy, cô, bạn đồng nghiệp đặc biệt gia đình ln giúp đỡ, động viên, hỗ trợ suốt thời gian qua Thái Nguyên, tháng 12 năm 2017 Tác giả luận án Hà Văn Quyết iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN .ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU .vii DANH MỤC CÁC HÌNH ix MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu đề tài Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 3.1 Ý nghĩa khoa học đề tài 3.2 Ý nghĩa thực tiễn đề tài Những đóng góp đề tài Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tình hình lưu hành bệnh Marek nước giới 1.1.1 Tình hình lưu hành bệnh Marek Việt Nam 1.1.2 Tình hình lưu hành bệnh Marek giới 1.2 Cơ sở khoa học đề tài 1.2.1 Đặc tính sinh học virus gây bệnh Marek 1.2.2 Triệu chứng lâm sàng bệnh Marek 14 1.2.3 Bệnh tích bệnh Marek 15 1.2.4 Chẩn đoán bệnh Marek 18 1.2.5 Dịch tễ học bệnh Marek 19 1.2.6 Miễn dịch chống lại MDV 22 1.2.7 Vắc xin với việc kiểm sốt phòng ngừa bệnh Marek 26 1.2.8 Các giải pháp phòng trị bệnh Marek 27 Chương NỘI DUNG, ĐỐI TƯỢNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.1 Nội dung nghiên cứu 30 2.1.1 Phân lập virus gây bệnh Marek gà nuôi cơng nghiệp số tỉnh phía Bắc Việt Nam 30 iv 2.1.2 Nghiên cứu xác định độc lực gây bệnh thực nghiệm virus Marek phân lập giống lứa tuổi gà 30 2.1.3 Nghiên cứu đặc điểm bệnh lý đặc trưng virus Marek phân lập gà thí nghiệm 30 2.1.4 Nghiên cứu thử nghiệm phối hợp chất bổ trợ với vắc xin để tăng cường hiệu miễn dịch vắc xin phòng bệnh Marek 30 2.2 Đối tượng, nguyên liệu nghiên cứu 30 2.2.1 Đối tượng nghiên cứu 30 2.2.2 Nguyên liệu 30 2.2.3 Hóa chất, sinh phẩm môi trường nuôi cấy 31 2.3 Địa điểm thời gian nghiên cứu 33 2.3.1 Địa điểm nghiên cứu 33 2.3.2 Thời gian nghiên cứu 33 2.4 Phương pháp nghiên cứu 33 2.4.1 Phương pháp thu thập xử lý mẫu 33 2.4.2 Phương pháp phân lập MDV nhuộm Plaque 33 2.4.3 Phương pháp hóa mơ 35 2.4.4 Phương pháp xác định độc lực virus phôi trứng gà 35 2.4.5 Phương pháp PCR xác định trình tự gen Meq 36 2.4.6 Phương pháp Real-Time PCR định lượng số copy genome virus MDV 37 2.4.7 Bố trí thí nghiệm xác định khả gây bệnh MDV giống gà lứa tuổi gà 38 2.4.8 Bố trí thí nghiệm đánh giá ảnh hưởng chất tăng cường miễn dịch đến hiệu vắc xin HVT/Rispens 39 2.5 Phương pháp xử lý số liệu 40 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 41 3.1 Kết phân lập virus Marek 41 3.1.1 Kết mổ khám gà nghi mắc bệnh Marek số địa phương 41 3.1.2 Phân lập virus Marek 43 3.1.3 Đặc tính gene virus Marek chủng MDV 6.13 44 3.2 Khả gây bệnh chủng MDV phân lập 46 3.2.1 Khả gây bệnh MDV 6.13 giống gà thí nghiệm 46 v 3.2.2 Khả gây bệnh MDV phân lập giống gà thí nghiệm độ tuổi khác 51 3.2.3 Nghiên cứu thải virus từ gà thí nghiệm gây nhiễm virus gây bệnh MDV 58 3.3 Biểu bệnh tích gà thí nghiệm chủng MDV phân lập gây nên 60 3.3.1 Biểu tổn thương đại thể tổ chức gà thí nghiệm 60 3.3.2 Biểu tổn thương vi thể tổ chức gà thí nghiệm 66 3.3.3 Kết xác định khả gây bệnh phôi gà MDV phân lập 68 3.3.4 Kết xác định khả gây bệnh trên môi trường tế bào xơ phôi vịt lớp MDV phân lập 69 3.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất tăng cường miễn dịch đến hiệu bảo hộ vắc xin phòng bệnh Marek 70 3.4.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng yếu tố tăng cường miễn dịch hình thành đáp ứng miễn dịch gà thí nghiệm với vắc xin phòng bệnh Marek 73 3.4.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng yếu tố tăng cường miễn dịch đến hình thành khối u tổ chức gà thí nghiệm cơng cường độc 92 3.4.3 Tỷ lệ giảm số copy gen Meq quan có chức miễn dịch gà thí nghiệm cơng cường độc sau sử dụng vắc xin chất tăng cường miễn dịch 93 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 103 Kết luận 103 Kiến nghị 104 TÀI LIỆU THAM KHẢO 105 PHỤ LỤC 118 MỘT SỐ HÌNH ẢNH TRONG PHỊNG THÍ NGHIỆM 118 vi DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT ADC Antibody Dependent Cellmediated ADN Acide Deoxyribo Nucleotic APC Antigen Presenting Cell CAM Chorioat Antoid Membran CEF Chicken Embryo Fibroblast CKC Chicken Kidney Cell CMGF Chicken Myelomonocytic Growth Factor CPE Cytopathogenic Effect CPG-ODN Cytosine Phosphate Guanosine-Olygo Deoxy Nucleotide 10 Poly I:C Chuỗi mạch ARN đôi Polyriboinosinic Polyribocytidylic 11 DEF Duck Embryo Fibroblast 12 DHBV Duck Hepatitis B Virus 13 ELISA Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay 14 GDP Gross Domestic Product 15 HVT Herpesvirus of Turkey 16 IFN Interferon 17 IL Interleukin 18 MDV Marek Disease Virus 19 MHC Major Histocompatibility Complex 20 NKC Nature Killer Cell 21 PCR Polymerase Chain Reaction 22 PFU Plaque Forming Unit 23 RIF Resistance Inducing Factor 24 TLR Toll Like Receptor vii DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Bảng 1.1 Tình hình dịch bệnh Marek tỉnh phía Nam năm 2007 Bảng 3.1 Kết mổ khám gà nghi mắc bệnh Marek số địa phương 41 Bảng 3.2 Tương đồng gene Meq virus MDV 6.13 với MDV giới 45 Bảng 3.3 Gene Meq MDV 6.13 MDV cường độc giới chủng vắc xin 46 Bảng 3.4 Mức độ gây bệnh chủng MDV phân lập giống gà thí nghiệm 47 Bảng 3.5 Triệu chứng lâm sàng bệnh Marek qua tháng theo dõi 49 Bảng 3.6 Mức độ gây bệnh chủng MDV phân lập giống gà độ tuổi 54 Bảng 3.7 Số lượng copy gen Meq bình quân cá thể gà thải ngày (log10) 59 Bảng 3.8 Biểu bệnh tích MDV gây cho gà thí nghiệm 61 Bảng 3.9 Tần suất xuất tổn thương vi thể tổ chức gà thí nghiệm 66 Bảng 3.10 Biểu bệnh tích MDV phơi gà 11 ngày tuổi 69 Bảng 3.11 Biểu bệnh tích MDV 6.13 trên mơi trường tế bào xơ phôi vịt 70 Bảng 3.12 Ảnh hưởng yếu tố tăng cường miễn dịch đến hiệu bảo hộ vắc xin phòng bệnh Marek 71 Bảng 3.13 Ảnh hưởng yếu tố tăng cường miễn dịch đến hình thành kháng thể bảo hộ vắc xin phòng bệnh Marek 75 Bảng 3.14 Ảnh hưởng yếu tố tăng cường miễn dịch đến tổng hợp  - IFN 78 Bảng 3.15 Ảnh hưởng yếu tố tăng cường miễn dịch đến tổng hợp β - IFN 80 Bảng 3.16 Ảnh hưởng yếu tố tăng cường miễn dịch đến tổng hợp α-IFN 83 Bảng 3.17 Ảnh hưởng yếu tố tăng cường miễn dịch đến tổng hợp IL-4 86 Bảng 3.18 Ảnh hưởng yếu tố tăng cường miễn dịch đến tổng hợp IL-12p40 87 viii Bảng 3.19 Ảnh hưởng yếu tố tăng cường miễn dịch đến tổng hợp IL-10 90 Bảng 3.20 Ảnh hưởng yếu tố tăng cường miễn dịch đến hình thành khối u gà sau công cường độc (Tỷ lệ % gà có khối u) 92 Bảng 3.21 Mức độ giảm số copy gen Meq lách gà thí nghiệm cơng cường độc sau sử dụng vắc xin chất tăng cường miễn dịch 94 Bảng 3.22 Mức độ giảm copy gen Meq túi Fabricius gà thí nghiệm cơng cường độc sau sử dụng vắc xin chất tăng cường miễn dịch 97 Bảng 3.23 Mức độ giảm số copy gen Meq tuyến ức gà thí nghiệm cơng cường độc sau sử dụng vắc xin chất tăng cường miễn dịch 100 ... ĐẠI HỌC NÔNG LÂM HÀ VĂN QUYẾT NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC TÍNH CỦA VIRUS GÂY BỆNH MAREK Ở GÀ NI CƠNG NGHIỆP TẠI PHÍA BẮC VIỆT NAM VÀ GIẢI PHÁP NÂNG CAO HIỆU LỰC VẮC XIN PHÒNG BỆNH Ngành: Ký sinh trùng... dung nghiên cứu 30 2.1.1 Phân lập virus gây bệnh Marek gà nuôi công nghiệp số tỉnh phía Bắc Việt Nam 30 iv 2.1.2 Nghiên cứu xác định độc lực gây bệnh thực nghiệm virus Marek. .. 22 1.2.7 Vắc xin với việc kiểm sốt phòng ngừa bệnh Marek 26 1.2.8 Các giải pháp phòng trị bệnh Marek 27 Chương NỘI DUNG, ĐỐI TƯỢNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU