Nghiên cứu một số đặc tính của virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại phía Bắc Việt Nam và giải pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh (tt)

Nghiên cứu một số đặc tính của virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại phía Bắc Việt Nam và giải pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh (tt)Nghiên cứu một số đặc tính của virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại phía Bắc Việt Nam và giải pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh (tt)Nghiên cứu một số đặc tính của virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại phía Bắc Việt Nam và giải pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh (tt)Nghiên cứu một số đặc tính của virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại phía Bắc Việt Nam và giải pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh (tt)Nghiên cứu một số đặc tính của virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại phía Bắc Việt Nam và giải pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh (tt)Nghiên cứu một số đặc tính của virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại phía Bắc Việt Nam và giải pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh (tt)Nghiên cứu một số đặc tính của virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại phía Bắc Việt Nam và giải pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh (tt)Nghiên cứu một số đặc tính của virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại phía Bắc Việt Nam và giải pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh (tt)Nghiên cứu một số đặc tính của virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại phía Bắc Việt Nam và giải pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh (tt)Nghiên cứu một số đặc tính của virus gây bệnh Marek ở gà nuôi công nghiệp tại phía Bắc Việt Nam và giải pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh (tt)

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM HÀ VĂN QUYẾT Tên đề tài: “NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC TÍNH CỦA VIRUS GÂY BỆNH MAREK Ở GÀ NI CƠNG NGHIỆP TẠI PHÍA BẮC VIỆT NAM VÀ GIẢI PHÁP NÂNG CAO HIỆU LỰC VẮC XIN PHỊNG BỆNH” TĨM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ THÚ Y THÁI NGUYÊN - 2017 Luận án hồn thành tại: TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM THÁI NGUYÊN Người hướng dẫn khoa học: GS.TS Nguyễn Quang Tuyên Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Phạm Công Hoạt Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án cấp Đại học Họp tại: Trường Đại học Nông Lâm - Đại học Thái Nguyên Vào hồi …… … ngày… tháng ……năm 2017 Có thể tìm hiểu luận án thư viện: - Thư viện quốc gia - Trung tâm học liệu - Đại học Thái Nguyên - Thư viện trường Đại học Nông Lâm - Đại học Thái ngun DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC CÓ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN Hà văn Quyết, Tạ Xuân Tề, Phạm Thi Tâm, Phạm Công Hoạt, Nguyễn Quang Tuyên “Phân lập xác định độc lực chủng virus gây bệnh Marek gà nuôi số tỉnh miền Bắc”, tạp chí Nơng nghiệp Phát triển nông thôn số 240 năm 2014 Hà văn Quyết, Phạm Thi Tâm, Phạm Công Hoạt, Nguyễn Quang Tuyên “Xác định đặc tính gây bệnh chủng virus gây bệnh gà ni”, tạp chí Nơng nghiệp Phát triển nông thôn số 282; 283 năm 2016 Hà văn Quyết, Phạm Thi Tâm, Phạm Công Hoạt, Nguyễn Quang Tuyên “Nghiên cứu ảnh hưởng interferonđến khả tạo đáp ứng miễn dịch bảo hộ vắc xin phòng bệnh Marek”, tạp chí Nơng nghiệp Phát triển nông thôn số 260 năm 2015 MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Trong năm qua, chăn ni gà nước ta có phát triển mạnh mẽ theo hướng chăn nuôi công nghiệp tập trung, đóng góp lớn cho phát triển kinh tế xã hội địa phương Theo báo cáo Tổng cục Thống kê (2016), năm 2016 nước có khoảng 252 triệu gà; với sản lượng 500 ngàn thịt, 8,5 tỷ trứng, cho thu nhập khoảng 63 ngàn tỷ đồng, chiếm 29,5% tổng giá trị ngành nông nghiệp, chiếm 3,15% GDP Tuy nhiên, chăn ni gà gặp nhiều rủi ro giá cả, thị trường, đặc biệt loại dịch bệnh tiềm ẩn, ảnh hưởng nhiều tới hiệu sản xuất Một bệnh phổ biến thường xuyên xảy đàn gà nuôi công nghiệp, đặc biệt đàn gà đẻ, bệnh Marek, Gallid herpesvirus gây ra, virus thường tồn biểu mơ nang lơng gà nên có khả lây lan nhanh mạnh qua đường hô hấp Bệnh Marek có hai biểu gây tăng sinh tổ chức lypmpho suy giảm miễn dịch gà Trên thực tế năm gần số trang trại chăn nuôi gà nông dân, công ty CP, Japfa comfeed,… miền Bắc tình hình nhiễm bệnh Marek phức tạp gây thiệt hại lớn cho người chăn ni Qua thực tế cho thấy việc phòng bệnh cho đàn gà vắc xin Marek nhập ngoại công ty hộ chăn nuôi thực tương đối đầy đủ, nhiên đáp ứng miễn dịch gà số trang trại không cao, tỷ lệ bảo hộ vắc xin chưa đảm bảo Hiện tượng gà bị bệnh sau tiêm vắc xin Marek có nhiều nguyên nhân nguyên nhân kỹ thuật phù hợp chủng quan trọng Các loại vắc xin sử dụng tạo từ chủng kinh điển, sử dụng lâu dài toàn giới khơng hồn tồn phù hợp với biến chủng mới, độc lực cao xuất thường xuyên vùng địa lý khác [(Baigent SJ et al., 2006); (Schat KA Baranowski E, 2007) Trong chưa có vắc xin phù hợp, đáp ứng yêu cầu hiệu bảo hộ thực tế, việc nâng cao hiệu vắc xin thương mại có vấn đề cần quan tâm Gần đây, giải pháp sử dụng phối hợp vắc xin với chất tăng cường đáp ứng miễn dịch, làm tăng khả bảo hộ chéo cho biến chủng virus thực địa có triển vọng khả quan ứng dụng rộng rãi Vấn đề đặt liệu lựa chọn chất tăng cường miễn dịch vắc xin phòng bệnh Marek nước ta Để bước đầu có sở khoa học thực tiễn cho ứng dụng này, tiến hành đề tài: “Nghiên cứu số đặc tính virus gây bệnh Marek gà nuôi công nghiệp phía Bắc Việt Nam giải pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh” Mục tiêu đề tài Phân lập, xác định số đặc tính virus gây bệnh Marek đàn gà nuôi công nghiệp tiêm vắc xin phòng bệnh Marek có biểu mắc bệnh số tỉnh phía Bắc Việt Nam Đánh giá khả gây bệnh, đặc điểm bệnh lý chủng virus phân lập nghiên cứu ứng dụng liệu pháp phối hợp chất tăng cường miễn dịch sử dụng vắc xin phòng bệnh Marek Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 3.1 Ý nghĩa khoa học đề tài - Nghiên cứu đặc tính sinh học độc lực chủng gây bệnh thực địa Việt Nam cung cấp sở khoa học cho việc đánh giá diễn biến tình hình dịch bệnh Mareck nước ta, đồng thời chủng phân lập nguồn gene virus cho phát triển nghiên cứu sinh bệnh học, chẩn đoán phát chế tạo vắc xin phòng bệnh Marek - Kết đánh giá hiệu bảo hộ dùng phối hợp chất tăng cường miễn dịch với vắc xin cung cấp sở khoa học đáp ứng miễn dịch học gia cầm (trong điều kiện thí nghiệm) định hướng cho phát triển nhóm chất bổ trợ vắc xin tương lai Mở hướng nghiên cứu nâng cao hiệu phòng bệnh vắc xin Marek nói riêng vắc xin phòng bệnh virus phổ biến gia cầm nói chung (trong điều kiện thực địa) 3.2 Ý nghĩa thực tiễn đề tài - Kết phân lập xác định đặc tính sinh học chủng virus Marek lưu hành Việt Nam nguồn gene phục vụ nghiên cứu mức độ tương đồng chủng vắc xin chế tạo vắc xin nội địa phòng bệnh Marek tương lai - Kết thử nghiệm xác định chất bổ trợ có tác dụng tăng cường hiệu lực vắc xin có ý nghĩa trước mắt ứng dụng kết hợp với vắc xin sẵn có làm tăng hiệu phòng bệnh Marek, giảm thiệt hại bệnh gây tăng thu nhập cho người chăn ni, góp phần thúc đẩy ngành chăn ni gia cầm phát triển; tục nghiên cứu lựa chọn chất tăng cường đáp ứng miễn dịch hiệu nhất, nâng cao hiệu giải pháp phòng bệnh Marek - Thơng tin tài liệu đề tài hỗ trợ nguồn thơng tin giúp người chăn nuôi cán thú y, nhà quản lý đào tạo cập nhật bệnh Marek gà giai đoạn Việt Nam nhằm hoạch định thực tốt biện pháp phòng chống bệnh với hiệu cao Những đóng góp đề tài - Chủng virus MDV 6.13 chủng virus gây bệnh Marek lần phân lập xác định đặc tính gene học, độc lực, gây bệnh cho gà Việt Nam - Lần đánh giá hiệu bảo hộ thực tế loại vắc xin đa giá nhập ngoại chủng virus phân lập Việt Nam - Bước đầu khám phá khả sử dụng chất bổ trợ tăng cường miễn dịch để nâng cao hiệu bảo hộ vắc xin thương mại, xác định chất phối hợp nâng cao hiệu sử dụng vắc xin phòng bệnh Marek gà Việt Nam Bố cục luận án Luận án gồm 102 trang (không kể phần tài liệu tham khảo phụ lục) Phần mở đầu trang, tổng quan tài liệu 26 trang, nội dung phương pháp nghiên cứu 11 trang, kết nghiên cứu thảo luận 60 trang, kết luận đề nghị trang Luận án có 21 bảng thể kết nghiên cứu, 35 hình ảnh biểu đồ, 131 tài liệu tham khảo (trong có 11 tài liệu tiếng việt 120 tài liệu tiếng nước ngoài) Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU Chương NỘI DUNG, ĐỐI TƯỢNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nội dung nghiên cứu 2.1.1 Phân lập virus gây bệnh Marek gà ni cơng nghiệp số tỉnh phía Bắc Việt Nam 2.1.2 Nghiên cứu xác định độc lực kết gây bệnh thực nghiệm virus phân lập giống lứa tuổi gà 2.1.3 Nghiên cứu đặc trưng gây bệnh lý virus phân lập gà thí nghiệm 2.1.4 Nghiên cứu thử nghiệm phối hợp chất bổ trợ tăng cường miễn dịch với vắc xin để tăng cường hiệu vắc xin phòng bệnh Marek 2.2 Đối tượng, nguyên liệu nghiên cứu 2.2.1 Đối tượng nghiên cứu - Virus gây bệnh Marek phân lập mẫu bệnh phẩm gà nuôi công nghiệp nghi mắc bệnh Marek số địa phương phía Bắc Việt Nam - Đáp ứng miễn dịch gà nuôi công nghiệp sau tiêm phòng vắc xin Marek kết hợp với chất bổ trợ tăng cường miễn dịch 2.2.2 Nguyên vật liệu - Trứng gà mua từ Công ty Vắc xin Sinh phẩm số I ấp nở điều kiện bệnh Gà sau nở ngày tuổi sử dụng thí nghiệm nghiên cứu - Bệnh phẩm lấy từ gà có biểu mắc bệnh Marek thành phố Hà Nội, tỉnh Vĩnh Phúc Phú Thọ - Vắc xin đa giá MD - Vac CFL chủng Rispens HVT hãng Zoetis Inc Mỹ sản xuất, nhập công ty TNHH TM & DP Sang, thành phố Hồ Chí Minh - Các chất tăng cường miễn dịch CPG ODN, Poly I:C, Interferon - γ chất sinh tổng hợp nhập ngoại sử dụng thí nghiệm 2.2.3 Mơi trường, hóa chất, thiết bị dùng nghiên cứu - Các Kit ELISA (ELISA Kit, code: Catalog No CSB - E10071Ch, Flarebio Biotech LLC) - Real - time PCR kit (Cat No./ID: 218073, Qiagen) - Các loại môi trường Thông dụng dùng nghiên cứu - Thiết bị dụng cụ thí nghiệm: Các máy móc dụng cụ thí nghiệm thơng dụng; máy ly tâm, tủ cấy tế bào, máy chạy phản ứng PCR, máy đọc kết ELISA, nồi hấp tiệt trùng, kính hiển vi điện tử, tủ lạnh… có phòng thí nghiệm trường Đại học Nông lâm Thái Nguyên khoa Công nghệ sinh học Viện Đại học Mở Hà Nội 2.3 Địa điểm thời gian nghiên cứu 2.3.1 Địa điểm nghiên cứu Trường Đại học Nông lâm Thái Nguyên, Khoa Công nghệ sinh học - Viện Đại học Mở Hà Nội 3.3.2 Thời gian nghiên cứu Từ tháng 1/2013 - 7/2016 2.4 Phương pháp nghiên cứu 2.4.1 Phương pháp thu thập xử lý mẫu Các mẫu máu chống đông, lách, thận, gan, lông vũ thu từ gà khoảng 60 - 100 ngày tuổi có biểu điển hình bệnh Marek thu từ trại gà nuôi tỉnh Vĩnh Phúc, Phú Thọ thành phố Hà Nội Các đàn gà sử dụng vắc xin lúc ngày tuổi Các mẫu sau lấy cho vào ống nghiệm túi nylon vơ trùng bảo quản lạnh nhanh chóng đưa phòng thí nghiệm 2.4.2 Các phương pháp nghiên cứu bố trí thí nghiệm - Phân lập virus Marek phương pháp nuôi cấy tế bào sơ phôi vịt - Phương pháp tiêm truyền qua phôi trứng để xác định độc lực virus gây bệnh Marek - Phản ứng PCR xác định gen Meq gây hình thành khối u virus gây bệnh Marek 12 13 Bảng 3.4 Mức độ gây bệnh chủng MDV phân lập giống gà độ tuổi khác Giốnggà Gàri Sốgà tỷlệcó cóbiểu biểu hiện Ngàybuổi bệnh bệnh Marek Marek (n) (%) Mộtngày 30 tuổi(n=30) 100,00 Mộttuần 27 tuổi(n=30) 90,00 Mộttháng 20 tuổi(n=30) 66,67 3tháng tuổi(n=30) 26,67 Triệuchứng củagà mắcbệnh Gầyốmmàotái Điloạngchoạng Liệt,sêcánh Liệtchân Viêmmốngmắt,mù Gầyốmmàotái Điloạngchoạng Liệt,sêcánh Liệtchân Viêmmốngmắt,mù Gầyốmmàotái Điloạngchoạng Liệt,sêcánh Liệtchân Viêmmốngmắt,mù Gầyốmmàotái Điloạngchoạng Liệt,sêcánh Liệtchân Viêmmốngmắt,mù Tỷlệ Sốgà Tỷlệ triệu chếtdo chếtdo chứng bệnh bệnhMarek bệnh Marek (%) Marek (n) (%) 100,00 100,00 73,33 16 53,33 20,00 3,33 90,00 76,67 43,33 13 43,33 10,00 66,67 26,67 26,67 10 33,33 3,33 26,67 13,33 13,33 3,33 3,33 GàLươngPhượng Tỷlệ Sốgà tỷlệcó Sốgà Tỷlệ cóbiểu biểu Triệuchứng triệu chếtdo chếtdo hiện củagà chứng bệnh bệnh bệnh bệnh mắcbệnh bệnh Marek Marek Marek Marek Marek (n) (%) (n) (%) (%) Gầyốmmàotái 100,00 Điloạngchoạng 100,00 30 100 Liệt,sêcánh 76,67 22 73,33 Liệtchân 26,67 Viêmmốngmắt,mù 6,67 Gầyốmmàotái 90,00 Điloạngchoạng 83,33 30 100 Liệt,sêcánh 50,00 15 50 Liệtchân 16,67 Viêmmốngmắt,mù Gầyốmmàotái 66,67 Điloạngchoạng 30,00 25 83,33 Liệt,sêcánh 26,67 13 43,33 Liệtchân 13,33 Viêmmốngmắt,mù Gầyốmmàotái 83,33 Điloạngchoạng 13,33 17 56,67 Liệt,sêcánh 6,67 6,67 Liệtchân 6,67 Viêmmốngmắt,mù Gà Ross 308 Sốgà tỷlệcó cóbiểu biểu Triệuchứng hiện củagà bệnh bệnh mắcbệnh Marek Marek (n) (%) 30 100 30 100 29 96,67 18 60 Gầyốmmàotái Điloạngchoạng Liệt,sêcánh Liệtchân Viêmmốngmắt,mù Gầyốmmàotái Điloạngchoạng Liệt,sêcánh Liệtchân Viêmmốngmắt,mù Gầyốmmàotái Điloạngchoạng Liệt,sêcánh Liệtchân Viêmmốngmắt,mù Gầyốmmàotái Điloạngchoạng Liệt,sêcánh Liệtchân Viêmmốngmắt,mù Tỷlệ Sốgà Tỷlệ chết chết triệu do chứng bệnh bệnh bệnh Mare Mare Marek k k(%) (%) (n) 100,00 100,00 83,33 26 86,67 53,33 13,33 96,67 90,00 53,33 19 63,33 36,67 3,33 76,67 33,33 33,33 16 53,33 30,00 83,33 16,67 13,33 26,67 13,33 - 14 3.3 Biểu bệnh tích gà thí nghiệm chủng MDV phân lập gây nên 3.3.1 Biểu bệnh tích đại thể tổ chức gà thí nghiệm Trong nghiên cứu này, biểu bệnh tích chủng MDV6.13 gây cho gà thí nghiệm phát dựa xuất khối u tượng viêm, sưng dây thần kinh Kết thu thể bảng 3.6 Bảng 3.6 Biểu bệnh tích MDV gây cho gà thí nghiệm Giống gà Số gà có bệnh tích điển hình (n) Tỷ lệ gà có bệnh tích điển hình (%) Gà Ri (n=120) 92 76,67 Gà Lương Phượng (n=120) 109 90,83 Gà Ross 308 (n=120) 118 98,33 Đối chứng (n=40) 0 Cơ quan có bệnh tích Gan Lách Thận Tim Dạ dày tuyến Thần kinh Gan Lách Thận Tim Dạ dày tuyến Thần kinh Gan Lách Thận Tim Dạ dày tuyến Thần kinh Gan Lách Thận Tim Dạ dày tuyến Thần kinh Tần suất xuất bệnh tích (%) 76,67 72,50 42,50 14,17 12,50 9,17 90,83 85,00 66,67 25,83 27,50 32,50 98,33 84,17 80,83 35,00 30,83 45,83 - 15 Tỷ lệ gà có biểu bệnh tích chiếm tới 76,67%, 90,83% 98,33% tương ứng với lô gà Ri, Lương Phượng Ross 308 Mặt khác, giống gà biến đổi gan trường hợp mổ khám chiếm tỷ lệ cao nhất, chiếm tới 76,67%, 90,83% 98,33% tương ứng với lô gà Ri, Lương Phượng Ross 308 (Hình 3.13) Hình 3.13 Hình ảnh bệnh tích tổ chức gà gây nhiễm với chủng MDV 6.13 (A Dây thần kinh đùi sưng to; B Dây thàn kinh xương chậu sưng to; D Lách sưng to, có u kết hạt; E F.Gan sưng to, có u kết hạt, u lan tỏa; G; Ống dẫn trứng sưng to, u lan tỏa) 3.3.2 Biểu bệnh tích vi thể tổ chức gà thí nghiệm Trong nghiên cứu này, mẫu tổ chức vi thể mô gan, thận, lách, tim, dày tuyến, dây thần kinh sử dụng để theo dõi 16 biến đổi sau gà gây nhiễm với chủng MDV 6.13 Kết trình bày bảng 3.7 Bảng 3.7 Tần suất xuất tổn thương vi thể tổ chức gà thí nghiệm Lồi gà Gan Lách Thận Gà ri 93,33 86,67 Gà Lương Phượng 93,33 93,33 Bà Ross 308 100,00 100,00 33,33 53,33 53,33 (Đơn vị tính: %) Dạ Thần dày Tim tuyế kinh n đùi 20,00 20,00 26,67 33,33 40,00 46,67 40,00 53,33 53,33 Kết bảng 3.7 cho thấy: tế bào lympho xâm nhiễm mạnh hai quan gan lách, tỷ lệ xuất gan 93,33%, 93,33% 100%; lách 86,67%, 93,33% 100% tương ứng với giống gà Ri, Lương Phượng, Ross 308 Theo dõi giống gà nhận thấy 100% gà Ross 308 có biểu xâm nhiễm lympho gan lách, điều chứng tỏ giống gà mẫn cảm với virus gây bệnh Marek hai giống gà lại Hình 3.25 Các biến đổi bệnh tích vi thể tổ chức gà thí nghiệm: Gan (A), lách (B), thận (C), dây thần kinh (D) 17 3.3.3 Kết xác định khả gây bệnh phơi gà MDV phân lập Thí nghiệm phôi gà 11 ngày tuổi cho thấy, 100% phôi bị gây nhiễm với MDV 6.13 bị chết sau 24 - 72 gây nhiễm (Bảng 3.8) Bên cạnh xuất nốt u màu trắng điển hình MDV, phơi có biểu xuất huyết tồn thân Bảng 3.8 Biểu bệnh tích MDV phơi gà 11 ngày tuổi Thí nghiệm Tỷ lệ phơi chết có bệnh tích (%) Thời gian bắt đầu gây chết phôi (gi ờ) Thời gian phôi chết hồn tồn (gi ờ) Trung bình số nốt u màng CAM MDV 6.13 (1000PFU/ml) (n=10) 100 24 72h 24,88 ± 1,27 Đối chứng âm (n=5) (*) Hình 3.22 Bệnh tích màng CAM phơi gà 14 tuổi MDV gây nên (A: Màng CAM bình thường, B: Màng CAM với nốt u trắng MDV gây nên) 3.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng yếu tố tăng cường miễn dịch đến hiệu bảo hộ vắc xin phòng bệnh Marek 18 Sau tháng theo dõi lơ gà thí nghiệm với công thức kết hợp tiêm vắc xin với chất tăng cường miễn dịch, bao gồm: IFN, poly I:C, CpG ODN ngày tuổi sau gà công cường độc với chủng MDV 6.13 với liều 2000 PFU/con 21 ngày tuổi thu kết ảnh hưởng yếu tố tăng cường miễn dịch đến hiệu bảo hộ vắc xin phòng bệnh Marek bảng 3.10 Bảng 3.10 Ảnh hưởng yếu tố tăng cường miễn dịch đến hiệu bảo hộ vắc xin phòng bệnh Marek Tỷ lệ gà chết sau công cường độc (%) Bố trí thí nghiệm HVT/Rispens + IFN 500 UI/con HVT/Rispens + poly I:C 400 µg/con HVT/Rispens + CpG OND 10 µg/con HVT/Rispens + poly I:C 200 µg/con+CpG OND µg/con Vắc xin đa giá HVT/Rispens Không sử dụng vắc xin Tỷ lệ gà có biểu lâm sàng sau công cường độc (%) Gà Gà Ross Gà Ri lương 308 phượng Gà Ri Gà lương phượng Gà Ross 308 3,33 3,33 16,67 3,33 3,33 20,00 3,33 6,67 16,67 3,33 10,00 20,00 0,00 3,33 6,67 0,00 3,33 6,67 0,00 3,33 10,00 0,00 3,33 10,00 10,00 30,00 40,00 20,00 40,00 50,00 70,00 80,00 80,00 100,00 100,00 100,00 Qua bảng 3.10 cho thấy lơ gà có sử dụng phối hợp chất tăng cường miễn dịch có tỷ lệ gà bảo hộ cao so với lô gà tiêm vắc-xin, làm giảm tỷ lệ chết tỷ lệ có biểu lâm sàng Nhìn chung chất có khả làm tăng hiệu bảo hộ vắc 19 xin virus Marek có độc lực cao Trong đó, vắc xin kết hợp với CpG ODN giúp lơ gà Ri khơng có gà có biểu lâm sàng khơng có bị chết; tỷ lệ tương ứng 3,33% 3,33% gà Lương Phượng; 6,67% 6,67% gà Ross 308 3.4.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng yếu tố tăng cường miễn dịch hình thành đáp ứng miễn dịch gà thí nghiệm với vắc xin phòng bệnh Marek 3.4.1.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng yếu tố tăng cường miễn dịch hình thành kháng thể bảo hộ vắc xin phòng bệnh Marek Qua bảng 3.11 cho thấy, lô gà tiêm vắc xin bổ sung CpG ODN phức hợp poly I:C - CpG ODN cho hiệu giá kháng thể trung hòa cao tháng thứ hai ba giống gà, đạt 1280, ngưỡng hiệu giá tiếp tục trì đến tháng thứ gà Lương Phượng Ross 308 Bảng 3.11 Ảnh hưởng yếu tố tăng cường miễn dịch đến hình thành kháng thể bảo hộ vắc xin phòng bệnh Marek Gà Ri Cơng thức thí nghiệm Tháng thứ HVT/Rispens + IFN - ϒ 640 500 UI/con HVT/Rispens + poly I:C 320 400 µg/con HVT/Rispens + CpG 640 OND 10 µg/con HVT/Rispens + poly I:C 200 µg/con +CpG 640 OND µg/con Vắc xin đa giá 230 HVT/Rispens Không sử dụng vắc xin Gà Lương Phượng Gà Ross 308 Tháng Tháng Tháng Tháng Tháng Tháng Tháng Tháng thứ thứ thứ thứ thứ thứ thứ thứ hai ba hai ba hai ba 320 320 640 640 320 640 320 320 640 320 640 640 640 640 640 640 1280 640 640 1280 640 1280 1280 640 1280 640 640 1280 1280 640 1280 1280 320 320 320 640 320 640 320 320 - 0 - 0 - 20 3.4.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng yếu tố tăng cường miễn dịch đến hình thành khối u tổ chức gà thí nghiệm cơng cường độc Sau tháng theo dõi thí nghiệm, tồn gà thí nghiệm mổ khám để xác định tần suất hình thành khối u Kết thí nghiệm trình bày hình bảng 3.18 Bảng 3.18 Ảnh hưởng yếu tố tăng cường miễn dịch đến hình thành khối u gà sau công cường độc (Tỷ lệ % gà có khối u) Vắc xin đa HVT/RispensHVT/Rispens Giống gà + IFN - ϒ giá + poly I:C thí nghiệm HVT/Rispens 500 UI/con 400 µg/con Gà Ri Gà Lương Phượng Gà Ross 308 HVT/Rispens HVT/Rispens + poly I:C Đối chứng + CpG 200 µg/con + khơng tiêm ODN 10 CpG ODN vắc xin µg/con µg/con 13,33 13,33 73,33 26,67 20,00 20,00 30,00 20,00 20,00 13,33 16,67 86,67 36,67 23,33 23,33 16,67 16,67 96,67 Qua bảng 3.18 nhận thấy: Ở gà tiêm vắc xin kết hợp chất bổ trợ giúp giảm mạnh tỷ lệ gà có bệnh tích hình thành khối u sau công cường độc với chủng MDV 6.13, cụ thể: - Các lô gà sử dụng bổ sung IFN - γ 500 UI/con poly I:C 400 µg/con có mức độ giảm tần suất xuất khối u tương đương nhau, cụ thể: giống gà Ri, Lương Phượng, Ross 308 là: 20%, 20% 23,33%; - Các lô gà sử dụng bổ sung CpG ODN 10 µg/con riêng lẻ kết hợp với poly I:C 400 µg/con cho mức độ giảm tần suất xuất khối u tương đương nhau: giống gà Ri, Lương Phượng, Ross 308 là: 13,33% 16,67% Như vậy, CpG ODN có hiệu hỗ trợ vắc xin ức chế hình thành khối u tốt so với poly I:C IFN Kết hoàn toàn logic với nghiên cứu nội dung trước mức độ bảo hộ, hiệu giá kháng thể trung hòa mức độ tổng hợp Cytokine liên quan đến đáp ứng miễn dịch tự nhiên chống lại MDV 21 3.4.3 Tỷ lệ giảm số copy gen Meq quan có chức miễn dịch gà thí nghiệm cơng cường độc sau sử dụng vắc xin chất tăng cường miễn dịch * Tỷ lệ giảm số copy gen Meq túi Fabricius Trong thí nghiệm cho thấy, túi Fabricius, mức độ giảm copy gen Meq phụ thuộc vào việc có hay khơng sử dụng chất tăng cường miễn dịch sử dụng bổ sung loại nào, kết thí nghiệm thể bảng 3.20 22 Bảng 3.20 Mức độ giảm copy gen Meq túi Fabricius Tháng theo dõi Vắc xin đa giá HVT/Rispens Giống gà Gà Ri Tháng thứ Gà Lương Phượng Gà Ross 308 Gà Ri Tháng thứ hai Gà Lương Phượng Gà Ross 308 Gà Ri Tháng thứ ba Gà Lương Phượng Gà Ross 308 HVT/Rispens + IFN -ϒ 500UI/con HVT/Rispens + poly I:C 400 µg/con HVT/Rispens + CpG ODN 10 µg/con Số copy Số lần giảm HVT/Rispens + poly I:C 200 µg/con + CpG ODN µg/con Số copy Số lần giảm Số copy Số lần giảm Số copy Số lần giảm 18.267.016 69,95 15.978.214 79,97 13.941.929 91,65 24.174.603 54,18 17.569.148 74,55 15.369.397 85,22 21.747.766 50,35 14.967.195 73,16 13.309.833 82,27 24.912.535 83,93 23.417.058 89,29 21.885.169 95,54 14.788.003 71,30 13.529.894 77,93 11.381.527 92,64 12.939.408 64,11 12.059.100 68,79 9.515.318 87,18 8.343.849 99,42 8.589.205 96,58 829.545.455 17.527.816 87,48 17.040.824 89,98 15.886.172 96,52 15.362.52 99,81 15.494.47 98,96 1.533.333.33 9.874.222 77,12 9.789.176 77,79 8.089.876 94,13 7.639.446 99,68 8.147.871 93,46 761.500.000 9.474.334 64,93 8.851.346 69,50 7.032.909 87,47 6.433.471 95,62 6.922.117 88,87 615.168.539 12.836.82 13.183.49 11.038.30 20.961.49 10.586.19 99,54 99,35 99,20 99,75 99,60 Số copy Đối chứng âm 12.854.90 13.341.95 11.493.65 21.193.07 10.814.20 Số lần giảm 99,40 98,17 95,27 98,66 97,50 1.277.777.77 1.309.780.00 1.095.000.00 2.090.909.09 1.054.384.61 23 Từ kết bảng 3.20 cho thấy, lô gà sử dụng vắc xin, tỷ lệ giảm số copy gen Meq túi Fabricius tháng thí nghiệm gà Ri 69,95%, 83,93%, 87,48%; gà Lương Phượng là: 54,18%, 71,30%, 77,12%; gà Ross 308 50,35%, 64,11%, 64,93% Các lô gà sử dụng kết hợp vắc xin CpG ODN µg/con cho tỷ lệ giảm ba tháng theo dõi số copy gen Meq túi Fabricius đạt cao nhất, cụ thể: lô gà Ri đạt 99,54 99,81%, gà Lương Phượng đạt 99,35 - 99,68% gà Ross 308 đạt 99,2 - 99,42% Các lô gà sử dụng bổ sung IFN - γ 500 UI/con không làm giảm số copy túi Fabricius gen Meq đáng kể so với lô gà sử dụng vắc xin * Tỷ lệ giảm số copy gen Meq tuyến ức gà thí nghiệm cơng cường độc sau sử dụng vắc xin chất tăng cường miễn dịch 24 Bảng 3.21 Mức độ giảm số copy gen Meq tuyến ức gà thí nghiệm cơng cường độc sau sử dụng vắc xin chất tăng cường miễn dịch Tháng theo dõi Tháng thứ Tháng thứ hai Tháng thứ ba Giống gà Gà Ri Gà Lương Phượng Gà Ross 308 Gà Ri Gà Lương Phượng Gà Ross 308 Gà Ri Gà Lương Phượng Gà Ross 308 HVT/Rispens + HVT/Rispens + poly I:C CpG 200 µg/con + CpG ODN 10 µg/con Đối chứng âm ODN µg/con Số lần Số lần Số lần Số lần Số lần Số copy Số copy Số copy Số copy Số copy giảm giảm giảm giảm giảm 21.717.820 67,01 18.655.443 78,01 16.020.598 90,84 14.627.712 99,49 14.649.800 99,34 1.455.311.111 Vắc xin đa giá HVT/Rispens HVT/Rispens + IFN - ϒ 500UI/con HVT/Rispens + poly I:C 400 µg/con 18.490.084 50,93 12.946.109 72,74 11.188.072 84,17 25.681.586 30.181.326 48,85 69,87 17.339.951 72,35 15.349.877 81,73 12.650.453 99,17 13.187.695 95,13 1.254.545.455 26.389.303 79,91 23.013.961 91,63 21.185.144 99,54 21.630.621 97,49 2.108.769.231 18.581.158 40,18 13.828.318 53,99 11.909.385 20.044.749 77,25 75,98 11.468.462 80,22 10.013.061 91,88 9.234.166 99,63 9.404.068 97,83 920.000.000 18.853.677 80,78 16.318.440 93,33 15.286.560 99,63 15.540.816 98,00 1.523.000.000 8.790.913 62,98 8.642.705 64,06 6.117.022 90,51 5.565.457 99,48 6.191.587 89,42 553.651.685 6.144.517 60,07 5.654.123 65,28 4.304.888 85,74 3.884.866 95,01 4.226.994 87,32 369.101.124 8.818.697 84,66 9.482.429 7.529.154 99,31 9.605.263 98,04 99,16 7.875.432 94,80 941.700.000 746.590.909 25 Qua theo dõi kết trên, tuyến ức, lô gà sử dụng vắc xin, tỷ lệ giảm số copy gen Meq tuyến ức tháng thí nghiệm gà Ri 67,01 - 75,98%, gà Lương Phượng là: 40,18 - 62,98%; gà Ross 308 48,85 - 77,25% Các lô gà sử dụng kết hợp vắc xin CpG ODN µg/con cho tỷ lệ giảm số copy gen Meq đạt cao nhất, cụ thể: lô gà Ri đạt 99,49 99,63%, gà Lương Phượng đạt 99,16 - 99,48% gà Ross 308 đạt 95,01 - 99,63 Như vậy, qua kết xác định tỷ lệ giảm số copy gen Meq lách, túi Fabricius tuyến ức gà thí nghiệm cơng cường độc sau sử dụng vắc xin chất tăng cường miễn dịch, số copy gen Meq tỷ lệ thuận với số lượng virus có mơ phân tích tốc độ nhân lên virus Các kết cho thấy CpG ODN có hiệu cao việc ức chế nhân lên MDV thể gà thí nghiệm KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận Từ kết đề tài luạn án thu trên, chúng tơi có số kết luận sau: 1.1 Phân lập virus Marek - Đã phân lập chủng virus Marek (MDV 6.13) gây bệnh cho gà số tỉnh phía Bắc Việt Nam, chủng virus phát triển ổn định sau đời ni cấy tế bào xơ phơi vịt có hiệu giá 3x107PFU/ml - Đã xác định trình tự gen Meq chủng MDV 6.13 tương đồng tới 95,0% so với gen Meq Gallid herpesvirus Gene bank Chủng MDV 6.13 phân lập có đặc tính di truyền gần giống với chủng virus Marek độc lực cao lưu hành Trung Quốc 1.2 Về độc lực khả gây bệnh - Chủng MDV 6.13 có độc lực mạnh,ổn định, có khả gây bệnh cho gà lứa tuổi giống gà Gà Ri có sức đề kháng với virus gây bệnh Marek cao giống gà Lương Phượng Ross 308 nhập ngoại 26 - Gà gây bệnh thí nghiệm với chủng MDV 6.13 có biểu triệu chứng lâm sàng bệnh tích đặc trưng tài liệu ngồi nước mơ tả Gà mắc bệnh Marek sống sót thải trùng mức cao đến tháng 1.3 Về gây tổn thương bệnh lý chủng virus MDV 6.13 - Các biến đổi bệnh lý đặc trưng gà thí nghiệm xuất khối u nội tạng, tỷ lệ cao gan (từ 93,33 - 100%); sau đến lách (86,67 - 100%), thấp thận (33,33 - 53,33%) dây thần kinh bị viêm, sưng to, phình đoạn với tỷ lệ từ 26,67 - 53,33% - Bệnh tích xuất tổ chức phụ thuộc vào giống gà, thấp gà Ri (76,67%), cao gà Lương Phượng (90,83%) cao gà Ross 308 (98,33%) - Các tổn thương vi thể chủ yếu xâm lấn tế bào lympho vào tổ chức, nhiều gan lách Mức độ xâm nhiễm tế bào lympho vào tổ chức phụ thuộc vào giống gà, thấp gà Ri cao gà Ross 308 - Chủng virus Marek MDV 6.13 gây nhiễm vào phôi gà ngày tuổi gây chết 100% phôi sau 24 - 72 - Trên tế bào xơ phôi vịt lớp, virus Marek phân lập hủy hoại tế bào mạnh sau 96 nuôi cấy tới 96 - 98% với liều gây nhiễm 1.000 PFU/ml 1.4 Nâng cao hiệu phòng bệnh vắc xin - Phối hợp tiêm vắc xin với chất tăng cường miễn dịch IFN - γ, CpG ODN, Poly I:C phòng bệnh Marek cho gà làm tăng tỷ lệ bảo hộ, giảm mức độ nhân lên virus giảm mức độ tổn thương gà bệnh; CpG ODN cho hiệu cao Kiến nghị - Tiếp tục nghiên cứu độc lực virus phân lập từ ổ dịch tiêm phòng vắc xin để có sở lựa chọn vắc xin phòng bệnh phù hợp Xác định liều lượng, thời điểm, phương thức bổ sung CpG ODN với vắc xin để đạt hiệu lực phòng bệnh Marek cao ... pháp nâng cao hiệu lực vắc xin phòng bệnh Mục tiêu đề tài Phân lập, xác định số đặc tính virus gây bệnh Marek đàn gà nuôi công nghiệp tiêm vắc xin phòng bệnh Marek có biểu mắc bệnh số tỉnh phía. .. dịch vắc xin phòng bệnh Marek nước ta Để bước đầu có sở khoa học thực tiễn cho ứng dụng này, tiến hành đề tài: Nghiên cứu số đặc tính virus gây bệnh Marek gà nuôi công nghiệp phía Bắc Việt Nam giải. .. cứu - Virus gây bệnh Marek phân lập mẫu bệnh phẩm gà nuôi công nghiệp nghi mắc bệnh Marek số địa phương phía Bắc Việt Nam - Đáp ứng miễn dịch gà nuôi công nghiệp sau tiêm phòng vắc xin Marek kết