bài báo cáo sắc ký lỏng hiệu năng cao (hplc)

ĐẠI HỌC CẦN THƠ BỘ MƠN CƠNG NGHỆ HĨA HỌC Bài báo cáo SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) GVHD: TS ĐẶNG HUỲNH GIAO Nội dung GIỚI THIỆU CHUNG CƠ SỞ LÝ THUYẾT MÁY SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO THỰC HÀNH GIỚI THIỆU CHUNG Sắc ký nhóm phương pháp hóa lý dùng để tách thành phần hỗn hợp Sự tách sắc ký dựa phân chia khác chất khác vào hai pha ln tiếp xúc khơng hòa lẫn vào nhau: pha tĩnh pha động Sắc ký lỏng phương pháp tách sắc ký, pha động chất lỏng chảy qua pha tĩnh chứa cột CƠ SỞ LÝ THUYẾT 2.1 Khái niệm HPLC phương pháp chia tách pha động chất lỏng pha tĩnh chứa cột chất rắn phân chia dạng tiểu phân chất lỏng phủ lên chất mang rắn, hay chất mang biến đổi liên kết hóa học với nhóm hữu Sắc ký lỏng tiến hành chủ yếu dựa chế hấp phụ, phân bố khối lượng, trao đổi ion, loại trừ theo kích thước (sắc ký rây phân tử) tương tác hóa học lập thể 2.2 Phân loại sắc ký ứng dụng Căn vào cấu tạo pha tĩnh thành phần pha động người ta đưa số cách phân loại sắc ký khác 2.2.1 Phân loại theo độ phân cực 2.2.2 Phân loại theo chế phân tách + Sắc ký hấp phụ + Sắc ký phân bố lỏng lỏng + Sắc ký pha liên kết - Sắc ký pha đảo (RP-HPLC) - Sắc ký pha thuận (NP-HPLC) - Sắc ký trao đổi ion (IE-HPLC) + Sắc ký rây phân tử (sắc ký gel) 2.3 Nguyên tắc trình sắc ký cột 2.4 Các đại lượng đặc trưng Kết trình tách chất detector phát hiện, phóng đại ghi thành sắc ký đồ: 4.4 Cách đo HPLC Vận hành máy đo máy khác theo Hướng dẫn nhà sản xuất Cách đo tuân thủ quy định sau: + Chạy máy với dung môi động trước tiên phải đuổi bọt khí có hệ thống trước vào cột, đặt điều kiện chạy theo quy định chạy dung môi động để cân cột ổn định hệ thống tới đường thẳng, lấy đường theo điểm thực + Cài đặt điều kiện sắc ký theo quy trình phân tích + Xác định khả thích hợp hệ thống sắc ký (system suitability) + Tiêm dung dịch thử điều kiện với dung dịch chuẩn + Định tính: So sánh thời gian lưu, thời gian lưu tương đối, phổ UV, purity, similar factor ) + Định lượng: Dựa vào diện tích chiều cao pic chuẩn, thử, chuẩn nội (nếu có) 4.5 Cách tính kết Dựa vào diện tích pic Dựa vào chiều cao pic Phương pháp dùng chuẩn ngoại Phương pháp dùng chuẩn nội Phương pháp thêm chuẩn Phương pháp chuẩn hóa (tính theo% diện tích pic) 4.6 Những điều cần lưu ý sử dụng cột HPLC - Lọc đuổi khí dung mơi trước dùng: lọc qua giấy lọc 0,45 µm - Tất chất tương tác thêm vào pha động (muối, đệm, chất tạo cặp ion ) phải đạt độ tinh khiết cao (dùng cho HPLC ) - Phải tính đến độ hòa tan chất hòa tan trường hợp chạy Gradient dung môi Khi tăng thành phần đệm pha động phải đảm bảo nồng độ muối tương thích (khơng bị kết tủa lại) pha động sau - Đối với mẫu có chứa thành phần tạp lưu giữ mạnh cột phải xử lý mẫu trước để loại thành phần - Nhiệt độ cột pH pha động phải tuân theo Catalog kèm theo cột - Áp suất cột: không để cột làm việc liên tục áp suất cao (> 200 bar) - Phải rửa hết dung dịch đệm cột bảo quản cột dung mơi thích hợp sau sử dụng, Đậy chặt đầu cột - Tránh tác động vật lý sử dụng sai: đánh rơi, gõ đập mạnh hay vặn chặt lắp cột - Sử dụng tiền cột thích hợp cho loại cột - Khi tiến hành phân tích phải đảm bảo chắn dung mơi pha động trộn lẫn với dung môi bảo quản cột Khi cột bị khơ bảo quản q trình vận chuyển phải phục hồi cột cách cho chạy qua cột hỗn hợp dung môi tinh khiết với số lượng dung mơi sử dụng gấp 10 - 20 lần thể tích cột, sau tiến hành cân cột pha động - Phục hồi cột HPLC nên tham khảo khuyến cáo nhà sản xuất (theo Catalog kèm theo cột tài liệu NSX cung cấp) Cám ơn Cô bạn ý lắng nghe ... tách + Sắc ký hấp phụ + Sắc ký phân bố lỏng lỏng + Sắc ký pha liên kết - Sắc ký pha đảo (RP-HPLC) - Sắc ký pha thuận (NP-HPLC) - Sắc ký trao đổi ion (IE-HPLC) + Sắc ký rây phân tử (sắc ký gel)...Nội dung GIỚI THIỆU CHUNG CƠ SỞ LÝ THUYẾT MÁY SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO THỰC HÀNH GIỚI THIỆU CHUNG Sắc ký nhóm phương pháp hóa lý dùng để tách thành phần hỗn hợp Sự tách sắc ký dựa phân chia... kích thước hạt nhồi 3 MÁY SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO 3.1 Sơ đồ cấu tạo Bình chứa dung mơi động Bơm cao áp Bộ phận tiêm mẫu Cột HPLC (pha tĩnh) Detector Máy ghi tín hiệu