ĐỀ TÀI "XÁC ĐỊNH OCHRATOXIN A TRONG NGŨ CỐC BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO" pptx

TỔNG QUAN VỀ OCHRATOXIN• Ochratoxin là độc tố vi nấm, được tạo ra từ một số loài nấm thuộc giống Aspergillus ochraceus và Penicillium viridicatum.. Độc tố nấm mốc thuộc nhóm na

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP TP.HCM

KHOA CÔNG NGHỆ HOÁ HỌC

TIỂU LUẬN MÔN PHÂN TÍCH THỰC PHẨM

BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG

HIỆU NĂNG CAO

BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG

HIỆU NĂNG CAO

GVHD: Ths Nguyễn Đức Vượng SVTH : Võ Thanh Danh

Huỳnh Thị Thu Hà Nguyễn Ngọc Tường Vy

Thành Phố Hồ Chí Minh tháng 5 - 2011

NỘI DUNG BÁO CÁO

XÁC ĐỊNH OCHRATOXIN A.

TỔNG QUAN VỀ OCHRATOXIN.

TỔNG QUAN VỀ OCHRATOXIN

• Ochratoxin là độc tố vi nấm, được tạo ra từ

một số loài nấm thuộc giống Aspergillus ochraceus và Penicillium viridicatum Độc tố

nấm mốc thuộc nhóm này gọi là Ochratoxin

• Trong số các loại ochratoxin, ochratoxin A (OTA) có tính độc cao nhất Ochratoxin A

có mặt trong khắp các loại nông sản thực phẩm: ngũ cốc, thảo dược, bia, cà phê

• Ochratoxin A gây độc đến gan, thận và có khả năng gây ung thư cho con người Ochratoxin A

đã thể hiện được yếu tố gây đột biến.

TỔNG QUAN VỀ OCHRATOXIN A

Nấm thuộc giống Aspergillus ochraceus

- Công thức phân tử: C20H18ClNO6

- Là tinh thể không màu, bền với nhiệt, tan trong dung môi hữu cơ phân cực như: chloroform, methanol, ethanol ít tan trong nước và tan trong pha đệm carbonat loãng Dễ bị phân hủy bởi ánh sáng, trong môi trường kiềm hoạt chất tẩy rửa.

TỔNG QUAN VỀ OCHRATOXIN A

Công thức phân tử Ochratoxin A

XÁC ĐỊNH OCHRATOXIN A

PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) LÀM SẠCH BẰNG SILICAGEL TCVN 7595-1:2007

PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) LÀM SẠCH BẰNG BICABONAT TCVN 7595-2:2007

1

2

PHƯƠNG PHÁP HPLC LÀM SẠCH

Phạm vi áp dụng

ochratoxin A với các hàm lượng lớn hơn 0.4µg/kg trong các mẫu ngũ cốc, quả khô, các hạt có dầu, đậu đỗ, cà phê nguyên liệu…

lượng ochratoxin A từ 0.4µg/kg đến 1.2µg/kg

Nguyên tắc

Sau khi đã axit hóa bằng axit HCl và bổ sung

Làm sạch dịch chiết trên cột silicagel và xác định OTA bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao trên cột pha đảo, nhận dạng và sửa đổi bằng detectơ huỳnh quang.

Điều kiện vận hành HPLC

băng = 49:49:2 (thay đổi tỉ lệ nếu cần)

Điều kiện đường chuẩn

thêm 25 ml dd hỗn hợp (toluen : acid acetic acetic băng = 99 :1 (V+V)), hòa tan mẫu, sau đó thêm hỗn hợp trên tới vạch, pha loãng thích hợp để thu được dung dịch 20µg/ml đến 30 µg/ml (dd1)

để được nồng độ 4µg/ml Sau đó lấy 5,10,25,50,100µl cho vào lọ nhỏ, cô khô dưới dòng nitơ sau đó thêm pha động để có nồng độ achratoxin cuối cùng 0.5;1;2.5;5;10 ng/25µl

Quy trình phân tích

+ 100 ml toluen (V1)

50ml dd (V2)

Cột chiết pha rắn

Hút 1 ml (V3)

HPLC

V bơm = 20µl (V4) Kết quả

Tính toán

được từ đường chuẩn, tính bằng nanogam

F : hệ số pha loãng

PHƯƠNG PHÁP HPLC LÀM SẠCH

Phạm vi áp dụng

ochratoxin A với các hàm lượng lớn hơn 3µg/kg trong các mẫu ngũ cốc như ngô hạt, cám, lúa mì…

hàm lượng ochratoxin A từ 3.0µg/kg đến 16.3µg/kg

Nguyên tắc

Ochratoxin A (OTA) được chiết ra khỏi ngũ cốc bằng axit phosphoric pha loãng trong clorofoc và được tách phân đoạn bằng dung dịch bicacbonat loãng Rửa giải bằng axit etyl axetat-metanol-axetat OTA được tách bằng HPLC pha đảo, rồi nhận biết

Điều kiện vận hành HPLC

49:49:2 (thay đổi tỉ lệ nếu cần)

Điều kiện đường chuẩn

thêm 25 ml dd hỗn hợp (toluen : acid acetic acetic

băng = 99 :1 (V+V)), hòa tan mẫu, sau đó thêm hỗn hợp trên tới vạch, pha loãng thích hợp để thu được

dung dịch 20µg/ml đến 30 µg/ml (dd1)

để được nồng độ 4µg/ml Sau đó lấy

5,10,25,50,100µl cho vào lọ nhỏ, cô khô dưới dòng nitơ sau đó thêm pha động để có nồng độ ochratoxin cuối cùng 0.5; 1; 2.5; 5; 10 ng/25µl

Quy trình phân tích

+ 10 ml NaHCO3 30g/l

Tính toán

được từ đường chuẩn, tính bằng nanogam

F : hệ số pha loãng

Tài liệu tham khảo

- TCVN 7595-1:2007

- TCVN 7595-2:2007

- Ths Phạm Luận, Cơ sờ lý thuyết phân tích sắc ký

lỏng hiệu năng cao, ĐHQGHN, 1999

Cám Ơn Thầy & Các Bạn đã

Lắng Nghe