THỰC HÀNH hóa SINH học NGUYỄN văn mùi

WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON NH ƠN WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM ðẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI HƯ NG ĐẠ O TP Q UY NGU YỄN VĂN MÙI TR Ầ N THỰC HÀNH B ■ ■ '% Si M O DI Ễ N ĐÀ N TO ÁN -L Í- HĨ A 10 00 HỐ SINH HỌC NHÀ XUẤT BẢN ðẠI HỌC Q uốc GIA HÀ NỘI - 2001® ‘ Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú WWW.FACEBOOK.COM/BOIDUONGHOAHOCQUYNHON WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON DI Ễ N ĐÀ N TO ÁN -L Í- HÓ A 10 00 B TR Ầ N HƯ NG ĐẠ O TP Q UY NH ƠN WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú WWW.FACEBOOK.COM/BOIDUONGHOAHOCQUYNHON WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON NH ƠN WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM M ụ c lụ c TP Q UY t M ục l ụ c Lời n ó i đ ầ u C h n g H o c h ấ t v d u n g d ị c h ĐẠ O I K hái niệm hoá c h ấ t II ð ung dịch 13 III Nồng ñộ dung dịch 14 NG IV P dung dịch tiêu ch u ẩn ñể chu ẩn ñộ 22 HƯ V Cách tín h hệ sơ" điều c h ỉn h 25 VI Bài t ậ p 26 C h n g % P h n g p h p lâ y m ẫ u p h â n t í c h 29 TR Ầ N I Lấy m ẫu 29 II C huẩn bị m ẫu p h â n tíc h 31 III Cơ định m ẫ u 31 B C h n g P h n g p h p so m ầ u 34 00 í Phương pháp so m u 34 10 II ð ịnh lu ậ t L am bert-B eer 35 A III M àu dung dịch chọn bước sóng án h sáng (hay chọn kính lọc m u ) 37 HÓ C h n g P h n g ' p h p q u a n g p h ổ k ế 43 I Hấp th ụ tử ngoại loại cuvet khác n h a u 44 Í- II Q uang phổ hấp th ụ tử ngoại NAD+và N A D H 44 -L III Ước tính khơiiư ợn g N AD H 45 C h n g ð in h lư n g g lu x it 46 TO ÁN I ðịnh lượng ñưòng khử theo phương pháp B e rtra n d 46 II ðịnh lượng ñường khử theo phương pháp vi lượng R odzevich 50 III ð ịnh lượng glucozơ tron g m áu phương pháp N elso n 52 IV ðịnh lượng fructozơ dung dịch có lẫn đường khử khác .53 ĐÀ N V ðịnh lượng ñường kh phương pháp axit clinitro-salicylic (DN B) 55 VI ðịnh lượng sacarozơ theo phương pháp thuỷ phân a x it 56 VII ðịnh lượng tinh bột theo phương pháp.thuỷ phân a x it 57 N , DI Ễ VIII ð ịnh lượng xenlulozd 59 IX ð ịnh lượng pectin b ằng phương pháp canxi p e c ta t 60 X ð ịnh lượng ñextrin phương pháp kết tủ a vối cồn 61 Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú WWW.FACEBOOK.COM/BOIDUONGHOAHOCQUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON NH ƠN C h n g ð ịn h lư ợ n g l i p i t 63 I ð ịnh lượng lipit bằn g m áy S oxhlet 63 TP Q UY II Xác định sơ l i p i t 66 C h n g ð ịn h lư n g a x i t a m in v p r o t e i n 72 ĐẠ O I ð ịnh lượng axit a m in phương pháp ch u ẩn ñộ formol (phương pháp Sorensen) .~ II ð ịnh lượng axit am in b ằng n in h iñ rin 74 III ð ịnh lượng axit am in nhờ tạo th n h phức ch ấ t với ñồng (Phương pháp Pope S te v e n s) .- 76 IV ð ịnh lượng nitơ phương pháp R jeld ahl 78 V ð ịnh lượng pro tein bang phương pháp L o w ry 83 NG VI ð ịnh lượng protein tổng sô' album in globulin h u y ế t th a n h m áu phương p h p B iu re 84 HƯ VII ð ịnh lượng protein Coomasie B rillian t Blue G -250 86 TR Ầ N VIII ð ịnh lượng protein b ằng phương pháp quang p h ố .89 C h n g ð ịn h lư ợ n g a x it n u c le ic 92 I Phương p h p Schim idt T h a n n h a u se r 92 II Phương p h áp S chneider - 94 B III Phương p h áp O gur vằ R o s e n 95 A 10 00 IV Phương p h p quang p hổ 97 V ð ịnh lượng hợp ch ấ t photpho mô ru ộ t theo phương p h áp Schm idt T h an n h a u ser có sửa đ ổ i 98 HÓ VI ð ịnh lượng photpho theo phương pháp Horeclcer cộng 101 VII ð ịnh lượng photpho vô có nguồn gốc từ photpholỉpit theo phương pháp Delory Í- .7 101 -L VIII ð ịnh lượng ARN b ằng orxinol 102 IX ð ịnh lượng ADN phưñng pháp ñ ip h en y lam in 104 TO ÁN C h n g X c ñ ịn h h o t đ c ủ a m ô t sô e n z i m 106 I ð ịnh n g h ĩa ñơn vị h o ạt ñộ e n z im 106 II Chú ý k h i xác ñịnh h o t ñộ enzim 106 III Xác ñịnh h o t ñộ ascorbat oxidaza 107 ĐÀ N IV Xác ñịnh h o ạt ñộ a- amylaza theo Rukhliadeva G eriacheva 108 V Xác ñịnh h o t ñộ c a ta la z a 112 DI Ễ N VI Xác ñịnh h o t ñộ cholinesteraza huyết th a n h (ChE) - phương pháp sửa ñối H e strin 113 VII Xác ñ ịn h h o ạt ñộ glucoam ylaza 114 V II I Xác ñ ịn h h o t ñộ lip a z a 116 IX Xác ñịnh h o t ñộ p a p a in 118 X Xác ñịnh h o t ñộ pepsin phưdng pháp A n so n 121 Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú WWW.FACEBOOK.COM/BOIDUONGHOAHOCQUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON NH ƠN XI Xác ñm h h o t ñộ p e ro x id a z a 123 XII Xác ñỉnh h o t ñộ p h o h a ta z a kiềm taza axit theo phương p háp King A rm strong .125 XIII Xác ñỉnh hoạt ñộ proteinaza theo phương pháp Anson cải tiên 127 TP Q UY XIV Xác ñịnh h o t ñộ u rea za theo phương pháp chu ẩ n ñ ộ 130 C h n g 10 ð in h lư ợ n g v i t a m i n 132 I ð ịnh lượng v ita m in c theo phương pháp chuẩ n ñ ộ 132 II ð ịnh lượng vita m in B2 phương pháp huỳnh q u a n g 135 ĐẠ O III ð ịnh lượng v itam in B, b ằng phương pháp huỳnh qu an g 142 C h n g 11 ð ịn h lư ợ n g m ô t s ố n g u y ê n t ố 144 I ðịnh lượng p h o h o 144 NG II ðinh lượng Kali tổng sôTcủa thực vật Natri Cobantinitrit 150 HƯ III ð ịnh lượng Canxi Magie tổng sô' thực v ật trilon B 151 IV ð ịnh lừợng Canxi tro ng mô theo phương pháp R e tin x k i 152 V ð ịnh lượng s ắ t 154 TR Ầ N C h n g 12 P h ụ l ụ c ' 155 I Các dung dịch ñ ệ m .155 II D ung dịch pH c h u ẩ n 163 B III Nồng ñộ a x it am oniac thường g ặ p 163 00 IV Pha dung dịch p h ầ n tră m axit am oniac , , 164 10 V Khối lượng mol p h â n tử tỷ khối sô" a x i t 165 HÓ A VI Kiếm tra nồng r? ' dung dịch chuẩn ñộ ñã pha dung dịch ch ấ t gốc có nồng độ x c 165 VII Chỉ th ị m àu ax it - b a z .166 Í- VIII Cách ph a sử dụng m ột sô thuốc thử thị m àu thông thườ ng .' 167 -L IX Các dung dịch rử a dụng cụ bẩn phòng th í nghiệm .168 X Nguyên tử khốỉttủa sỗ' nguyên tô' 169 TO ÁN XI Nồng ñộ dung dịch amoni sunfat bão hồ nhiệt độ khác 170 XII Cách tín h lực ii t â m 170 XIII Các ký hiệu quy định kích thước p h ần th ập p h â n 170 ĐÀ N XIV Các chữ Hy L p 171 XV Các tín h c h ấ t m ột sơ đồng vị phóng xạ ứng dụng y sinh h ọ c 171 XVI Sự phụ thuộc tỷ khối sô" khúc xạ vào nồng ñộ dung d ịc h 172 DI Ễ N T ài liệ u t h a m k h ả o 173 Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú WWW.FACEBOOK.COM/BOIDUONGHOAHOCQUYNHON WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON DI Ễ N ĐÀ N TO ÁN -L Í- HĨ A 10 00 B TR Ầ N HƯ NG ĐẠ O TP Q UY NH ƠN WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú WWW.FACEBOOK.COM/BOIDUONGHOAHOCQUYNHON WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON TP Q UY NH ƠN WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM Lời nói đầu ĐẠ O Giáo trìn h “Thực h n h hoá sinh học” dùng cho sinh viên năm th ứ ba, ng ành Công nghệ Sinh học, khoa S inh học, trường ð ại học K hoa học Tự nhiên, ð ại học Quốc gia Hà Nội N HƯ NG Sinh viên tiê n h n h làm 20 b ài thự c h n h 11 chương khác nh au, tù y thuộc ñiểu kiện, sở v ậ t c h ấ t phòng thí nghiệm cho phép C án phụ trá c h thự c hành có thê lựa chọn p h ầ n như: cách tín h tốn loại nồng độ, xử lý m ẫu thí nghiệm , phương p háp so m àu, phương p háp quang phố kế, ñịnh lưựng gluxit, ñịnh lượng lipit,, ñịnh lượng a x it am in protein, ñịnh lượng axit nucleic, xác ñịnh hoạt ñộ enzim, ñịnh lượng vitam in, định lượng m ột số ngun tơ' kim loại B TR Ầ Ngồi ra, qun sách ñược dùng cho thực tậ p chuyên ñề sinh viên năm l.hứ tư phục vụ cho học viên cao học làm lu ậ n n thạc sĩ thuộc chuyên n g n h Hoá sinh học, trư ờng ð ại học Khoa học Tự nhiên, ð ại học Quốc gia H Nội Tác giả DI Ễ N ĐÀ N TO ÁN -L Í- HĨ A 10 00 Sách ñã ñược sửa chữa bổ sung m ột số phương p háp chương ñịnh lượng protein, xác ñịnh h o t ñộ m ột sơ enzim , định lượng m ột sơ ng uyên tô kim loại so vối Jan x u ất b án đầu Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú WWW.FACEBOOK.COM/BOIDUONGHOAHOCQUYNHON WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON DI Ễ N ĐÀ N TO ÁN -L Í- HĨ A 10 00 B TR Ầ N HƯ NG ĐẠ O TP Q UY NH ƠN WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú WWW.FACEBOOK.COM/BOIDUONGHOAHOCQUYNHON WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON NH ƠN WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM HOẢ CHẤT VÀ DUNG DỊCH ĩ KHÁI N IỆ M V Ề HOÁ CH Ấ T C ác c h ấ t h o học ĐẠ O TP Q UY C hương NG Các ch ấ t dùng ñể p h â n tích hố học, làm tiêu phòng th í nghiệm gọi hố chất Các hố c h ấ t chất rắn , lỏng, khí c:ó mức độ tin h k h iế t khác: HƯ - Sạch kỹ th u ậ t - Sạch p h â n tích '5‘- TR Ầ N - Sạch hố học Hố ch ấ t dóng chai lọ thuỷ tinh, nhựa có n h ã n ghi (Hình 1.1): B - T ên hố c h ấ t 00 - Cơng thức hố học 10 - Mức độ A - Khơi lượng họá chất HÓ - P h â n tử khối 'r ■' Í- - Nơi sả n x u ấ t TO ÁN -L - ðiều kiện bảo quẩn '4 CH3C O O C 2H5 M W 88.11 g/ml 0.90 99% By IR spectrum Minimum assay (GLC) Identity M axim um Limits o f Impurities 1% Water Non-volatile matter Acidity (CH 3COOH) Ethanol Heavy metals (as Pb) DI Ễ N ĐÀ N # Ethyl aceỉaỉe GPR Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú 0.005% 0.05% 0.5% 0002 % Hình 1.1 - Nhãn hố chất WWW.FACEBOOK.COM/BOIDUONGHOAHOCQUYNHON WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON NH ƠN WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM TR Ầ N HƯ NG ĐẠ O TP Q UY T ính cha't nguy hiểm hố ch ấ t cảnh báo b ằng ký hiệu in trê n n h ã n hoậ ch ất (H ình 1.2) C h ất có khói độc C h ấ t có phóng xạ 00 B C h ấ t độc 10 Hình 1.2- Các kỷ hiệu cảnh báo hoá chất nguy hiểm A A A A Í- A HĨ A T rong q u an nghiên cứu n h m áy sả n x u ấ t hoá ch ấ t có n hữ ng vùng nguy hiểm c ả n h báo ký hiệu (H ình 1.3), biển h iệu cấm (H ìn h l.4 ) biển hiệu ñiểu k iệ n a n to n (H ình 1.5) TO ÁN -L