Nghiên cứu đặc điểm thực vật và thành phần hóa học của hai loài thuộc chi euphorbia l , họ thầu dầu (euphorbiaceae)

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LÊ THỊ QUỲNH MAI NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA HAI LOÀI THUỘC CHI Euphorbia L., HỌ THẦU DẦU EUPHORBIACEAE KHÓA LUẬN TỐT

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

HAI LOÀI THUỘC CHI Euphorbia L.,

HỌ THẦU DẦU (EUPHORBIACEAE) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ

HÀ NỘI - 2017

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

LÊ THỊ QUỲNH MAI

NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT

VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA

HAI LOÀI THUỘC CHI Euphorbia L.,

HỌ THẦU DẦU (EUPHORBIACEAE)

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ

LỜI CẢM ƠN

Lời đầu tiên, tôi xin được bày tỏ lòng kính trọng và sự biết ơn sâu sắc tới

PGS.TS NGUYỄN THU HẰNG (Bộ môn Dược liệu - Trường đại học Dược Hà

Nội), người thầy đã luôn giành thời gian, tâm huyết để tận tình chỉ bảo, hướng dẫn, động viên và khích lệ tôi trong suốt quãng thời gian tôi thực hiện khóa luận tốt nghiệp này

Tôi cũng xin chân thành cảm ơn NCS Nguyễn Thanh Tùng đã luôn ở bên

hướng dẫn, giúp đỡ và động viên tôi để tôi có thể hoàn thành khóa luận một cách tốt nhất

Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới toàn thể thầy cô, các anh chị kỹ thuật viên của bộ môn Dược liệu trường Đại Học Dược Hà Nội đã tạo điều kiện giúp đỡ tôi trong quá trình hoàn thành khóa luận

Xin gửi lời cảm ơn đến Th.S Nghiêm Đức Trọng, DS Phạm Thị Linh Giang đã tạo điều kiện giúp đỡ cho tôi trong quá trình thực hiện khóa luận

Cuối cùng tôi muốn gửi lời cảm ơn chân thành tới những người thân yêu trong gia đình tôi, bạn Hương, bạn Vấn cũng như các anh chị, các bạn và các em sinh viên làm đề tài tại bộ môn Dược liệu đã luôn ủng hộ, giúp đỡ và chia sẻ những kinh nghiệm quý báu của bản thân trong quá trình nghiên cứu giúp tôi có thể hoàn thành đề tài của mình thuận lợi nhất

MỤC LỤC

ĐẶT VẤN ĐỀ 1

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN 2

1.1 Đặc điểm thực vật 2

1.1.1 Vị trí phân loại chi Euphorbia L 2

1.1.2 Đặc điểm thực vật và phân bố chi Euphorbia L 2

1.1.3 Đặc điểm thực vật và phân bố loài Euphorbia thymifolia L 4

1.1.4 Đặc điểm thực vật và phân bố loài Euphorbia prostrata Aiton 4

1.2 Thành phần hóa học 5

1.2.1 Thành phần hóa học loài Euphorbia thymifolia L 5

1.2.2 Thành phần hóa học loài Euphorbia prostrata Aiton 9

1.3 Tác dụng sinh học 10

1.3.1 Tác dụng sinh học của loài Euphorbia thymifolia L 10

1.3.2 Tác dụng sinh học của loài Euphorbia prostrata Aiton 12

1.4 Công dụng 14

1.4.1 Công dụng của loài Euphorbia thymifolia L 14

1.4.2 Công dụng của loài Euphorbia prostrata Aiton 14

CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15

2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị 15

2.1.1 Nguyên liệu 15

2.1.2 Hóa chất và dụng cụ 15

2.1.3 Thiết bị và máy móc sử dụng 15

2.2 Nội dung nghiên cứu 16

2.2.1 Nghiên cứu đặc điểm thực vật của mẫu M1 và M2 16

2.2.2 Nghiên cứu thành phần hóa học của mẫu M1 và M2 16

2.3 Phương pháp nghiên cứu 16

2.3.1 Phương pháp nghiên cứu thực vật 16

2.3.2 Phương pháp nghiên cứu thành phần hóa học 17

CHƯƠNG 3 THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ, BÀN LUẬN 18

3.1 Kết quả nghiên cứu về thực vật 18

3.1.1 Đặc điểm hình thái 18

3.1.2 Giám định tên khoa học 19

3.1.3 Đặc điểm hiển vi 21

3.2 Kết quả nghiên cứu thành phần hóa học 33

3.2.1 Kết quả định tính các nhóm hợp chất bằng phản ứng hóa học 33

3.2.2 Định tính bằng sắc ký lớp mỏng 34

3.2.3 Kết quả xác định chất chiết được bằng methanol trong dược liệu 36

3.3 Bàn luận 37

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO

PHỤ LỤC

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT

ALP Alkanile phosphatase

ALT Alanin Amino Transferase

AST Aspartate Amino Transferase

3.1 Kết quả định tính các nhóm hợp chất trong toàn cây 2 mẫu cỏ

DANH MỤC CÁC HÌNH

3.21 Ảnh chụp sắc ký đồ phân đoạn dịch chiết ethyl acetat với

hệ dung môi toluen-ethyl acetat-methanol-acid formic (7:4:1:1) 35

ĐẶT VẤN ĐỀ

Chi Euphorbia L thuộc họ Thầu dầu (Euphorbiaceae) là một chi lớn trên thế

giới với khoảng 2000 loài [67], trong đó 26 loài đã được ghi nhận tại Việt Nam [5], [6], [9], [11] Nhiều loài trong chi này được sử dụng trong y học dân gian làm thuốc chữa lỵ trực khuẩn, lỵ amip, tiêu chảy, viêm da, mẩn ngứa…[5] Theo các nghiên cứu

đã công bố, thành phần hóa học của chi Euphorbia L bao gồm các nhóm hợp chất

flavonoid, tanin, terpenoid, các acid phenolic…[38], [41], [52] với nhiều tác dụng sinh học đáng chú ý như kháng khuẩn [52], [54], chống viêm [52], giảm đau [52], hạ đường huyết [27], [59], [66] Trong quá trình thu thập mẫu, nhóm nghiên cứu nhận

thấy có hai mẫu cây thuộc chi Euphorbia L rất giống nhau về đặc điểm hình thái, dễ

gây nhầm lẫn và dự đoán có thể là hai loài khác nhau thuộc chi này

Vì vậy, đề tài: “Nghiên cứu đặc điểm thực vật và thành phần hóa học của hai loài thuộc chi Euphorbia L., họ Thầu dầu (Euphorbiaceae)” được thực hiện để có

thêm cơ sở khoa học nhận biết, tránh nhầm lẫn và tiêu chuẩn hóa hai loài nghiên cứu với mục tiêu như sau:

1 Nghiên cứu đặc điểm thực vật của hai mẫu cây thuộc chi Euphorbia L

2 Nghiên cứu thành phần hóa học của hai mẫu cây thuộc chi Euphorbia L

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN 1.1 Đặc điểm thực vật

1.1.1 Vị trí phân loại chi Euphorbia L

Theo hệ thống phân loại của Takhtajan (2009) [64], chi Euphorbia L có vị trí

chi phân loại như sau: Ngành Ngọc lan (Magnoliophyta); Lớp Ngọc lan (Magnoliopsida); Phân lớp Sổ (Dilleniidae); Bộ Thầu dầu (Euphorbiales);Họ Thầu dầu (Euphorbiaceae)

1.1.2 Đặc điểm thực vật và phân bố chi Euphorbia L

1.1.2.1 Đặc điểm chung của chi Euphorbia L

Cây thảo (hàng năm, hai năm, hoặc lâu năm), cây bụi, hoặc cây gỗ, rất hiếm khi là dây leo; đôi khi là thân rễ; lông đa bào mịn, thường không có, toàn cây có nhựa

mủ trắng, rất hiếm khi vàng; rễ dạng sợi hoặc củ Thân đôi khi mọng nước, hình trụ hoặc có nhiều màng mỏng hoặc dạng ống Lá so le hay đối nhau, hiếm khi mọc vòng;

có lá kèm hoặc không, đôi khi biến thành các tuyến tiết hoặc gai; cuống lá thường không rõ ràng hoặc không có; phiến lá thường nguyên, đôi khi khía răng cưa nhỏ hoặc răng cưa to Cụm hoa một hoặc nhiều ở đầu cành hoặc kẽ lá, xim 2 ngả hoặc xim một ngả, đơn tính, đôi khi lưỡng tính, cụm hoa gồm một chén ngược bao quanh một số hoa đực và 1 hoa cái ở trung tâm, lá bắc chia 4 hoặc 5 thùy, các tuyến (1-)4 hoặc 5 (-7), chủ yếu xen kẽ với lá bắc, thỉnh thoảng có cánh phụ hoặc một cặp sừng Hoa đực có một nhị, các chỉ nhị dính nhau nhiều hay ít ở gốc, được bao quanh những

lá bắc con mảnh Hoa cái có cuống, gồm một bầu nhụy, hiếm khi được bao quanh bởi cánh hoa và đài hoa; bầu 3 ô; mỗi ô đính 1 noãn; vòi nhụy 3, rời nhau, đôi khi dính nhau một phần Núm nhụy chia 2 thùy hoặc không, hình đầu hoặc không Quả nang,

vỡ thành 2- 3 mảnh, thường là nổ để tách ra, rất hiếm khi không tách Mỗi ô chứa 1 hạt, hình tròn, hình bầu dục hoặc hình trụ; có thể có mồng; nội nhũ nhiều; lá mầm lớn [67]

1.1.2.2 Phân bố và các loài thuộc chi Euphorbia L

Trên thế giới chi Euphorbia L có 2000 loài, phân bố ở các vùng khô hạn của

vùng khí hậu nhiệt đới như châu Phi, một số lượng lớn các loài tập trung ở vùng khí hậu ôn đới [67]

Ở Việt Nam, các tài liệu thực vật ghi nhận 26 loài thuộc chi Euphorbia L.,

trong số đó có 9 loài mang tên cỏ sữa:

Euphorbia chrysocoma H Lesv et Vaniot (Cỏ sữa lông vàng) [5], [6], [9] Euphorbia heyniana Spreng (Cỏ sữa lá tròn) [6], [9]

Euphorbia hirta L (Cỏ sữa lá lớn) [5], [6], [9], [11]

Euphorbia thymifolia L (Cỏ sữa lá nhỏ) [5], [6], [9], [11]

Euphorbia indica Lam (Cỏ sữa Ấn Độ) [5], [6], [9]

Euphorbia microphylla Heyne ex Roth (Cỏ sữa lá tròn nhỏ) [5]

Euphorbia prostrata Aiton (Cỏ sữa nằm) [5], [6], [9]

Euphorbia rosea Retz (Cỏ sữa hồng) [5], [6], [9]

Euphorbia sessiliflora Roxb (Cỏ sữa hoa không cuống) [5], [6], [9]

Ngoài ra, ở Việt Nam còn một số loài khác thuộc chi Euphorbia L.:

Euphorbia antiquorum L ( Xương rồng ông) [5], [6], [9], [11]

Euphorbia atoto J R Rorst et G Forst (Đại kích biển) [5], [6], [9]

Euphorbia capillaris Gagn ( Đại kích chỉ) [9]

Euphorbia coudercii Gagn ( Đại kích Couderc) [9]

Euphorbia cristata Heyne ex Roth ( Đại kích sóng) [9]

Euphorbia cyathophora Murr (Trạng nguyên lá nhỏ) [5], [6], [9]

Euphorbia heterophylla L (Cỏ mủ) [6], [9]

Euphorbia hypericifolia L (Lá hến) [5], [6]

Euphorbia lactea Haw (Xương rồng màu sữa) [5]

Euphorbia lathyris L (Tục tùy) [6], (Tục tùy tử) [5], [9], [11]

Euphorbia maculata L (Đại kích ngữa) [9]

Euphorbia milii Des Moul (Xương rắn) [5], [6], [9]

Euphorbia neriifolia Roxb (Xương rồng) [5], [6], [9]

Euphorbia pulcherrima Willd (Trạng nguyên) [5], [6], [9]

Euphorbia tirucalli L (Xương khô) [5], [6], [9], [11]

Euphorbia trigona Mill (Xương rồng cảnh) [5], [6], [9]

Euphorbia tithymaloides L (Thuốc giấu) [9], [11]

1.1.3 Đặc điểm thực vật và phân bố loài Euphorbia thymifolia L

Tên Việt Nam: Cỏ sữa lá nhỏ

Cây thảo nhỏ, sống hằng năm hoặc sống dai, có lông che chở, có nhựa mủ trắng Thân và cành mảnh, mọc tỏa rộng trên mặt đất, màu đỏ tím [5], [6], [9], [11], [15], có lông rất nhỏ [5], [6], [9], [15] Lá mọc đối, hình bầu dục, dài 7mm, rộng 4mm, gốc và đầu tù, mép có răng cưa nhỏ, mặt dưới phủ lông mịn [5], [6], [9], [11], [15], gân chính và gân bên rõ [15]; lá kèm nhỏ, hình dải [5], [15], dài cỡ 1mm, chẻ đôi, có lông mi [5] Cụm hoa mọc ở kẽ lá thành hình xim ít hoa [5], [6], [9], [11], [15]; tổng bao có cuống, phủ lông mịn, hình chuông, 5 thùy hình tam giác nhọn, 4 tuyến rất nhỏ, hình trái xoan [5], [15]; nhị nhiều, bao phấn nứt ngang [5], [15], nhị có chỉ nhị ngắn [5]; bầu có lông [15], cuống ngắn [5], [15], bầu hình vòm [5], vòi nhụy

3 rời nhau, uốn cong xuống dưới [15] Quả nang, đường kính khoảng 1.5 mm, có lông nhỏ, hạt nhẵn, có 4 cạnh [5], [6], [9], [11], [15], dài 0.7mm [6], [11], màu nâu hồng [5], số NST 2n=18 [9]

Mùa hoa quả: Tháng 5-10 [5], [6], [15]

Cỏ sữa lá nhỏ chủ yếu phân bố ở vùng nhiệt đới châu Á, Ấn Độ, Campuchia, Lào, Malaysia, Philipin, Indonesia, Brunei, Thái Lan, Trung Quốc và Việt Nam; cây cũng được ghi nhận ở một số nước vùng Nam Mỹ Cây ưa sáng và ẩm [15]; mọc hoang thành đám nhỏ khắp nơi ở bãi cỏ, sân vườn, ven đường đi, ở những nơi đất có sỏi đá, kẽ nứt của sân gạch hay tường bao, trong các chậu cây cảnh [5], [6], [9], [11], [15]

1.1.4 Đặc điểm thực vật và phân bố loài Euphorbia prostrata Aiton

Tên Việt Nam: Cỏ sữa nằm

Cỏ sống hằng năm hay 2 năm tạo thành thảm cao 1-5 cm, trục mảnh, ít phân nhánh, mọc nằm, có khi hơi đứng lên, không đâm rễ ở các mấu, dài 5-20 cm; màu lục

đỏ, hồng hay tía Lá xếp 2 dãy, hơi không cân; phiến lá hình bầu dục, thuôn hay trái xoan ngược ít khi hình trái xoan ngược hẹp hay hình tròn, dài 1,5-7,5 cm, rộng 0,5-4

cm, mặt trên màu lục sáng đến xanh lục có khi pha màu đỏ, không lông, mặt dưới màu lục trắng có khi pha màu đỏ; gân gốc 3 xếp hình chân vịt; mép có răng thấp; cuống dài 0.3-1.5 mm; lá kèm nhọn, nhỏ, ít khi tồn tại Cụm hoa ở nách, đơn độc, xếp thành 1 chén duy nhất; lá bắc hình bầu dục Chén hình nón ngược, 0,8x0,6 mm, nhẵn, cuống 0,3-1,5 mm; răng hình tam giác, có rìa lông; 4 tuyến hình tròn, phẳng, mang 1 phần phụ hơi hẹp hơn; 2-5 hoa đực có chỉ nhị ngắn và bao phấn hình bầu dục xiên Hoa cái có bầu hình tròn, đường kính 0,4 mm, cao 0,6 mm; vòi nhụy hầu như không có; đầu nhụy hình dải, chẻ 2 thùy sâu Quả có nang 3 góc, đường kính 1.4 mm, cao 1.2 mm, thường có lông ở các cạnh, hạt hình bầu dục có 4 cạnh dọc và 5-7 sóng ngang [5] Cây ra hoa kết quả quanh năm [5]

Cây có nguồn gốc ở Hamaica, nay lan tràn sang các xứ nhiệt đới, được thuần hóa rộng rãi như một loài cỏ dại, thường mọc dọc đường đi, trên các bãi hoang [5]

1.2 Thành phần hóa học

1.2.1 Thành phần hóa học loài Euphorbia thymifolia L

Các nhóm chất được phát hiện trong cỏ sữa lá nhỏ (Euphorbia thymifolia L.)

gồm tinh dầu, tanin, flavonoid, terpenoid, alcaloid, sterol và một số nhóm chất khác Trong đó, ba nhóm hợp chất được nghiên cứu nhiều nhất là flavonoid, terpenoid và tanin

2 Quercetin

[18], [31]

[6], [11], [13], [15], [31]

1.2.1.3 Tanin thủy phân

Có 16 hợp chất thuộc nhóm tanin thủy phân đã được phát hiện từ cỏ sữa lá nhỏ

được ký hiệu từ 25 đến 40 Đó là các hợp chất 2,3-Di-O-galloyl-D-glucose (25) [53]; 1,2,3-Tri-O-galloyl-β-D-glucose (26) [53]; 1,3,4,6-Tetra-O-galloyl-β-D-glucose (27) [24], [31], [53]; 1,2,3,4,6-Penta-O-galloyl-β-D-glucose (28) [53]; 2,3-S-

hexahydroxydiphenoyl-D-glucose (29) [53]; 3-O-Galloyl-4,6-(S)-

hexahydroxydiphenoyl-D-glucose (30) [23], [24], [31], [53]; Pedunculagin (31) [31], [53]; 1-Desgalloyleugeniin (32) [31], [53]; Eugeniin (33) [31], [53]; Rugosin B (34) [24], [31], [53]; Corilagin (35) [31], [53]; Geraniin (36) [31], [53]; Bixanin (37) [31],

[53]; 5-Desgalloylstachyurin (38) [31], [53]; Casuariin (39) [31], [53]; Isomallotinic acid (40) [31], [53]

1.2.1.4 Tinh dầu

Hàm lượng tinh dầu của BPTMĐ cỏ sữa lá nhỏ là 0.05% (tt/kl) [36] Tinh dầu

có sữa lá nhỏ có màu xanh, mùi hăng, vị khó chịu [29] Bằng phương pháp GC/MS,

đã phát hiện 21 thành phần của tinh dầu cỏ sữa lá nhỏ [6], [15], [31], [36] Trong đó các thành phần chính là n-hexadecanoic acid (33.03%), phytol (10.36%), tetradecanoic acid (6.58%) [36]

1.2.2 Thành phần hóa học loài Euphorbia prostrata Aiton

Các nhóm chất được phát hiện trong cây cỏ sữa nằm (Euphorbia prostrata

Aiton) gồm flavonoid, tanin, terpenoid, alcaloid, saponin và một số nhóm chất khác

1.2.2.1 Flavonoid

Các hợp chất thuộc nhóm flavonoid đã được phát hiện từ bộ phận trên mặt đất

của cây cỏ sữa nằm [31] gồm 4 hợp chất ký hiệu 1, 7, 10, 11 - các hợp chất này cũng

có trong thành phần cỏ sữa lá nhỏ (Bảng 1.1) Ngoài ra, trong cỏ sữa nằm còn có hợp chất Rhamnetin-3-galactosid (41) có công thức cấu tạo như sau:

1.2.2.2 Tanin

15 hợp chất thuộc nhóm tanin đã được phát hiện từ toàn cây cỏ sữa nằm được

ký hiệu từ 42 đến 56 Đó là các hợp chất gallic acid (42) [22], [31]; corilagin (43)

[22], [31]; 1,2,3-tri-O-galloyl-D-glucose (44) [22], [31]; geraniin (45) [22]; tellimagradin I (46) [22]; tellimagradin II (47) [22]; rugosin A (48) [22]; rugosin E (49) [22]; rugosin D (50) [22]; rugosin G (51) [22], [31]; prostratin A (52) [31]; prostratin B (53) [31]; prostratin C (54) [31]; euphorbins G (55) [31] và euphorbins

một số vi khuẩn: Escherichia coli [29], [33], [35], [42], Klebsiella pneumoniae [29], [35], [42], Staphylococcus aureus [33], [35], [42], Salmonella typhi [29], [35], Basillus subtilis [33], [35], Bacillus pumilus [42], Proteus mirabilis [33], [42], Pseudomonas aeruginosa [35], Streptococcus pneumoniae và Citrobacter freundii

[42] Nhựa mủ tươi, nước ép tươi [35], [42], nhựa mủ khô [35] và các dịch chiết ethyl acetat, butanol, cloroform [35], dịch chiết nước, ethanol, methanol, dicloromethan [42] của cây cỏ sữa lá nhỏ có tác dụng ức chế sự phát triển của một số chủng nấm:

Candida albicans, Aspergillus niger [35], [42] và Penicillium chrysozenous [35] trên

mô hình khuếch tán trên đĩa thạch

1.3.1.2 Tác dụng hạ đường huyết

Dịch chiết methanol của toàn cây cỏ sữa lá nhỏ có tác dụng hạ đường huyết trên mô hình sử dụng nghiệm pháp dung nạp glucose đường uống trên chuột Liều 400mg/kg thể trọng làm giảm 60,5% glucose máu, thuốc đối chứng glibenclamid liều 10mg/kg thể trọng làm giảm 48,6% glucose máu [39]

Dịch chiết ethanol của toàn cây cỏ sữa lá nhỏ có tác dụng hạ đường huyết ở chuột bị đái tháo đường gây ra bởi natri glutamat (MSG) và streptozotocin/ nicotinamid (STZ/NAD) Mức liều 800mg/kg cân nặng cho tác dụng mạnh nhất và làm giảm lượng đường máu ở nhóm bị đái tháo đường do MSG hoặc do STZ/NAD lần lượt là 43,8% và 48,07% (p < 0.05) [59]

Dịch chiết methanol của toàn cây cỏ sữa lá nhỏ còn có tác dụng cải thiện biến chứng thần kinh do bệnh đái tháo đường gây ra bởi Streptozotocin trên chuột Mức liều 400mg/kg cân nặng trong thử nghiệm cho tác dụng mạnh nhất [46]

1.3.1.3 Tác dụng chống viêm

Dịch chiết ethanol toàn cây cỏ sữa lá nhỏ có tác dụng chống viêm trên mô hình gây phù nề chân chuột bằng carrageenan Với liều 100mg/kg thể trọng, dịch chiết đã giảm phù nề chân chuột 64,64%; thuốc đối chứng Indomethacin liều 10mg/kg giảm 68,5% sau 6h so với nhóm đối chứng trong cùng điều kiện thí nghiệm [43] Trong một nghiên cứu khác, dịch chiết liều 200mg/kg làm giảm phù nề chân chuột 58,11%, thuốc đối chứng Ibuprofen liều 50mg/kg giảm 68,92% sau 3h Ngoài ra trong mô hình dùng viên bông cấy dưới da, dịch chiết ethanol liều 50, 100, 200 mg/kg trọng lượng cơ thể làm giảm sự hình thành u hạt lần lượt 32,1%, 40,8%, 45,4% so với nhóm chứng [49]

Với liều 40 mg/kg, thành phần phytosterol của phần trên mặt đất cây cỏ sữa lá nhỏ có tác dụng chống viêm, ức chế carrageenan- tác nhân gây phù nề chân và chống

viêm khớp gây bởi chất bổ trợ Freund trong thử nghiệm in vivo trên chuột [42]

1.3.1.4 Tác dụng giảm đau

Đánh giá tác dụng giảm đau của dịch chiết methanol toàn cây cỏ sữa lá nhỏ trên mô hình gây quặn đau bằng acid acetic Kết quả tại liều 400 mg/kg cân nặng, số lượng cơn đau quặn bụng ức chế của mẫu thử là 40,9% so với 49,0% khi dùng aspirin

liều 200mg/kg cân nặng [39]

Thành phần phytosterol trong cây cỏ sữa lá nhỏ có tác dụng giảm đau trên

chuột Trong thử nghiệm in vivo dùng phương pháp mâm nóng cho thấy liều 30, 40

mg/kg cân nặng có tác dụng giảm đau theo cơ chế giảm đau trung ương do phytosterol tương tác với recepter µ opioid [44]

1.3.1.5 Tác dụng bảo vệ gan

Dịch chiết ethanol toàn cây cỏ sữa lá nhỏ có tác dụng bảo vệ gan trên mô hình gây độc gan bằng CCl4 trên chuột nhắt trắng Trong một nghiên cứu cho thấy dịch chiết liều 100mg/kg thể trọng có tác dụng đáng kể trong việc đưa nồng độ AST, ALT, LPO huyết thanh trở về bình thường [49] Một nghiên cứu khác chỉ ra liều 100, 200 mg/kg thể trọng làm giảm nồng độ AST, ALT, ALP, billirubin so với nhóm chỉ dùng CCl4 [62]

1.3.1.6 Tác dụng chống virus HSV-2

Dịch chiết ethyl acetat toàn cây và chất phân lập hexahydroxyldiphenolyl-D-glucose của cây cỏ sữa lá nhỏ có tác dụng ức chế sự hoạt động của HSV-2 Trong đó, dịch chiết ethyl acetat và 3-O-alloyl-4,6- (S) -hexahydroxydiphenoyl-d-glucose với nồng độ 4.0 µg/ml, 0.5 µg/ml có tác dụng ức chế đáng kể virus [23] và có IC50 lần lượt là 7,42 và 3,51 µg/ml [24]

3-O-alloyl-4,6-(S)-1.3.1.7 Tác dụng khác

Một số tác dụng sinh học khác của cây cỏ sữa lá nhỏ đã được chứng minh bằng thực nghiệm là tác dụng lợi tiểu và nhuận tràng [51], tác dụng diệt giun [29], [50], [58], tác dụng giải lo âu và cải thiện rối loạn chức năng sinh sản [55], [56], [57], chống oxy hóa [24]

1.3.2 Tác dụng sinh học của loài Euphorbia prostrata Aiton

1.3.2.1 Tác dụng trị trĩ

Nghiên cứu trên 1836 bệnh nhân bị trĩ có chảy máu được dùng viên thuốc chứa 100mg chiết xuất khô cỏ sữa nằm trong 14 ngày cho thấy sự cải thiện tối đa trong 3 ngày đầu và đạt được sự cải thiện đáng kể ở đa số bệnh nhân khi kết thúc điều trị: lần lượt 71 bệnh nhân (3,9%), 86 bệnh nhân (4,7%), 144 bệnh nhân (6,2%), 77 bệnh nhân (4,2%) được báo cáo là có chảy máu, đau, sưng tấy và sung huyết so với 1640 bệnh nhân (89,3%) có chảy máu, 1470 bệnh nhân (80,1%) có đau, 1109 bệnh nhân (60,4%)

có sưng tấy và 879 bệnh nhân (47,9%) có sung huyết lúc bắt đầu nghiên cứu Kết

thúc điều trị có 505 bệnh nhân cải thiện hoàn toàn, 1153 bệnh nhân (63,2%) bệnh nhân cải thiện trung bình, 150 bệnh nhân (8,2%) cải thiện nhẹ và chỉ 17 bệnh nhân (0,9%) không có cải thiện [30]

Tại Ấn Độ, chiết xuất từ cây cỏ sữa nằm đã được bào chế dưới dạng thuốc viên hàm lượng 100mg dùng trong điều trị bệnh trĩ Tác dụng này do các thành phần flavonoid, tanin và acid phenolic có trong cây [20]

Sử dụng nghiệm pháp dung nạp glucose đường uống trên thỏ cho thấy

E.prostrata liều 17,5 mg/kg cân nặng làm giảm đỉnh đường huyết 13,9 %, thuốc đối

chứng tobutamid liều 40mg/kg cân nặng làm giảm đỉnh đường huyết 19,5% trong cùng điều kiện thí nghiệm [27]

1.3.2.4 Tác dụng kháng khuẩn

Dịch chiết ethanol toàn cây cỏ sữa nằm có tác dụng diệt khuẩn trên mô hình

gây tiêu chảy trên chuột bằng Shigella dysenteriae Với liều 40mg/kg cân nặng cho

tác dụng diệt khuẩn tương đương thuốc đối chứng nofloxacin liều 20mg/kg sau 6 ngày điều trị [36] Dịch chiết nước của toàn cây cỏ sữa nằm có tác dụng kháng một

số vi khuẩn: Salmonella typhi, Salmonella paratyphi A, Salmonella paratyphi B và Salmonella typhimurium với nồng độ ức chế tối thiểu MIC từ 1024 μg/ml đến 2048

μg/ml [26]

1.3.2.5 Tác dụng giảm đau

Thử nghiệm gây đau bằng nhiệt trên chuột cho thấy dịch chiết ethyl acetat và dịch chiết n-hexan lá cây cỏ sữa nằm có tác dụng giảm đau, trong đó dịch chiết ethyl acetat có tác dụng mạnh hơn dịch chiết n-hexan 60 phút sau khi uống, dịch chiết ethyl acetat với liều 1000 mg/kg cân nặng, thời gian phản ứng đau của chuột là 10,47s;

thuốc đối chứng diclofenac liều 10 mg/kg cân nặng cho thời gian phản ứng đau là 8,04s [21]

1.3.2.6 Tác dụng chống loét dạ dày

Nghiên cứu trên mô hình gây loét bằng indomethacin trên thỏ đực trắng trưởng thành cho thấy bột nghiền mịn của phần trên mặt đất cây cỏ sữa nằm có tác dụng chống loét Liều 240 mg bột /kg cân nặng có tác dụng tương đương thuốc ranitidin liều 10 mg/kg cân nặng [48]

1.3.2.7 Tác dụng khác

Một số tác dụng sinh học khác của cây cỏ sữa nằm đã được chứng minh bằng thực nghiệm là tác dụng hạ lipid máu [40] và diệt kí sinh trùng [16]

1.4 Công dụng

1.4.1 Công dụng của loài Euphorbia thymifolia L

Theo y học cổ truyền một số nước trên thế giới, cây được dùng chữa lỵ trực khuẩn, viêm ruột nhất là đối tượng trẻ em; dùng cho phụ nữ sinh đẻ thiếu sữa hoặc tắc tia sữa [5], [6], [11], [15] Cây chữa trĩ xuất huyết, sốt rét Dùng ngoài giã cây tươi đắp hoặc nấu nước rửa trị bệnh mẩn ngứa, viêm da dị ứng, ngứa ngáy ngoài da,viêm vú Rễ dùng cho người mất kinh [5], [6] Ngoài ra, cây dùng điều trị sán dây

và trị bệnh nấm ở Nigieria; dùng làm thuốc gây tẩy nhẹ, toàn cây giã nhỏ làm thành bột nhão đắp vào vết thương gây nên do đi bộ chân không vào mùa mưa ở Nepal [11], [15]

1.4.2 Công dụng của loài Euphorbia prostrata Aiton

Thân non ăn sống, lợi sữa; rễ trị đau mình Ở Quảng Tây (Trung Quốc), toàn cây được dùng làm thuốc trị lỵ, viêm ruột, trẻ em cam tích và thai độc Ở Indonexia, cây cũng được dùng làm thuốc như cỏ sữa lá nhỏ Ở Pôlinêđi thuộc Pháp, dân gian dùng trị bệnh đau tai và các nốt đốt của bọ chét trên cơ thể trẻ em [9]

CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị

Bảng 2.1 Số hiệu tiêu bản của các mẫu nghiên cứu

Ký hiệu mẫu Địa điểm Thời gian Số hiệu tiêu bản

M1 Tân Khang - Nông Cống -

Thanh Hóa 02/07/2016 HNIP/18486/17 M2 Thành Lợi -Vụ Bản -Nam Định 15/07/2016 HNIP/18487/17

Xử lý mẫu: Mẫu được phơi, sấy khô và được bảo quản riêng trong túi nilon,

để nơi khô ráo, thoáng mát

2.1.2 Hóa chất và dụng cụ

 Hóa chất dùng cho nghiên cứu đạt tiêu chuẩn phân tích, gồm có:

 Các dung môi hữu cơ: ethanol, methanol, ethyl acetat, toluen, n-hexan, acid formic, chloroform, ether dầu hỏa

 Hóa chất: NaOH, FeCl3, HCl, Mg, H2SO4, chì acetat, anhydrid acetic, acid acetic 5%, Javen, xanh methylen, son phèn, quercetin chuẩn

 Bản mỏng silica gel F254 tráng sẵn (Merck)

 Thuốc thử: Mayer, Dragendorff, Bouchardat, dd FeCl3 5%, dd gelatin 1%, dd chì acetat 10%, Lugol, Fehling A, Fehling B, AlCl3/ EtOH

 Dụng cụ thí nghiệm: Pipet, ống nghiệm, bình cầu, cốc cỏ mỏ, ống đong, phễu, bình gạn, bộ dụng cụ chiết hồi lưu

2.1.3 Thiết bị và máy móc sử dụng

 Cân phân tích Precisa XB 220A (Thụy Sĩ) độ chính xác 0,1 mg

 Cân kỹ thuật Sartorious độ chính xác 0,01g

 Tủ sấy Memmert (Đức)

 Kính hiển vi Leica (Đức)

 Kính lúp soi nổi Leica EZ4 (Đức)

 Máy cắt vi phẫu cầm tay

 Máy ảnh Canon

 Hệ thống chấm sắc ký và chụp ảnh CAMAG LINOMAT 5

2.2 Nội dung nghiên cứu

2.2.1 Nghiên cứu đặc điểm thực vật của mẫu M1 và M2

 Mô tả đặc điểm hình thái và giám định tên khoa học

 Mô tả đặc điểm vi phẫu thân, lá, rễ

 Mô tả đặc điểm bột thân, lá, hoa, quả, rễ

2.2.2 Nghiên cứu thành phần hóa học của mẫu M1 và M2

 Định tính các nhóm hợp chất bằng phản ứng hóa học

 Định tính phân đoạn dịch chiết ethyl acetat bằng sắc ký lớp mỏng (SKLM)

 Xác định chất chiết được trong dược liệu bằng methanol

2.3 Phương pháp nghiên cứu

2.3.1 Phương pháp nghiên cứu thực vật

 Quan sát, mô tả đặc điểm hình thái của các mẫu theo phương pháp mô tả phân

tích

 Căn cứ vào đặc điểm hình thái của mẫu nghiên cứu, đối chiếu với khóa phân loại

chi Euphorbia L và bản mô tả loài trong Thực vật chí Trung Quốc [67], Thực vật chí Thái Lan [65] và tài liệu Cây cỏ Việt Nam [9]để giámđịnh tên khoa học

 Mô tả đặc điểm vi phẫu thân, lá, rễ: mẫu thân, lá, rễ được cắt vi phẫu bằng máy cắt cầm tay Vị trí cắt: Thân cắt cách gốc 2 cm, rễ cắt cách gốc 2 cm, lá cắt ở 1/3 gân chính tính từ cuống lá Tẩy bằng Cloramin B, nhuộm theo phương pháp nhuộm kép Quan sát dưới kính hiển vi, chụp ảnh và mô tả các đặc điểm vi phẫu

 Mô tả đặc điểm bột thân, lá, hoa, quả, rễ: Sấy dược liệu (thân, lá, hoa, quả,rễ) trong tủ sấy ở nhiệt độ 60°C, sau đó dùng chày cối sứ nghiền nhỏ Rây lấy bột

mịn, dùng kim mũi mác lấy bột dược liệu cho lên phiến kính đã nhỏ sẵn một giọt nước cất, đặt lamen lên Quan sát dưới kính hiển vi, chụp ảnh và mô tả các đặc điểm bột Chụp ảnh các đặc điểm vi phẫu và bột bằng máy ảnh Canon Xử lý ảnh bằng phần mềm PHOTOSHOP CS6

2.3.2 Phương pháp nghiên cứu hóa học

 Định tính các nhóm hợp chất bằng phản ứng hóa học: Tiến hành theo phương pháp ghi trong tài liệu [2], [3], [10], [12]

 Định tính phân đoạn ethyl acetat bằng SKLM

Dược liệu (20g) được chiết hồi lưu với ethanol 70° trong 1 giờ, lọc bỏ bã dược liệu thu được dịch chiết ethanol Nhỏ từ từ khoảng 3 ml dung dịch chì acetat 30% vào dịch chiết, lọc qua giấy lọc thu được dịch lọc Dịch lọc được cô cách thủy đến còn 1/3 thể tích rồi phân tán trong nước nóng thu được dịch chiết nước Dịch chiết nước lần lượt được chiết lỏng - lỏng với các dung môi có độ phân cực tăng dần n-hexan, chloroform, ethyl acetat thu được các phân đoạn dịch chiết tương ứng là phân đoạn n-hexan, phân đoạn cloroform, phân đoạn ethyl acetat Cất thu hồi dung môi phân đoạn ethyl acetat dưới áp suất giảm rồi cô cách thủy đến khi còn khoảng 1ml thu được dung dịch thử để chấm sắc ký

 Bản mỏng silica gel F254 đã hoạt hóa ở 110°C trong 1 giờ

 Dung dịch đối chiếu: Dung dịch quercetin nồng độ 0.1mg/ml trong methanol

 Quan sát vết dưới ánh sáng tử ngoại ( UV254)

 Hiện vết bằng thuốc thử AlCl3/EtOH Quan sát vết sau khi phun thuốc thử dưới ánh sáng thường và ánh sáng tử ngoại (UV366)

 Xác định lượng chất chiết được trong dược liệu bằng phương pháp chiết nóng với

methanol quy định tại Dược điển Việt Nam IV (Phụ lục 12.10) [4]

2.3.3 Xử lý kết quả thực nghiệm

Kết quả thực nghiệm được xử lý bằng phần mềm Microsoft Excel

CHƯƠNG 3 THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ, BÀN LUẬN

3.1 Kết quả nghiên cứu về thực vật

3.1.1 Đặc điểm hình thái

3.1.1.1 Đặc điểm hình thái mẫu M1

Cây cỏ, sống hàng năm, dài 10-24 cm, mọc bò tỏa rộng trên mặt đất, có nhựa

mủ trắng Rễ cọc, màu vàng nâu, rễ chính dài 5-11 cm, đường kính 1-3 mm Thân nhỏ, hình trụ, đường kính 1-1.5 mm, màu đỏ, chia thành nhiều đốt, các đốt ở gần rễ thường ngắn hơn, dài 3-8 mm, các đốt phía trên dài 12-19 mm, các mấu giữa các đốt thân hơi phình ra Thân phân nhánh nhiều từ gốc và từ các mấu Trên thân có nhiều lông che chở đa bào màu trắng Lá mọc đối, 2 lá kèm hình tam giác, dài khoảng 1

mm Cuống lá ngắn, có lông Phiến lá hình bầu dục, thuôn hoặc hình tim không đều,

lá trưởng thành dài 3-7 mm, rộng 2-4 mm, 2 mặt lá có màu từ xanh đến đỏ, mặt dưới

có lông trắng Gốc lá không đối xứng, mép lá có răng cưa Cụm hoa hình chén, các cụm mọc tụ lại thành xim, mọc ở nách lá, cụm hoa có cuống ngắn, dài 0,3-0,4 mm,

có lông Chén của cụm hoa hình chuông bên trên có 4 thùy hình tai bèo màu đỏ tím, bên ngoài chén phủ lông dày trắng, kích thước 0,5-0,7x1 mm, có 4 tuyến tiết Hoa đực: hoa trần không cuống, nhị hoa thò Hoa cái: cuống ngắn, dài 0,3-0,5 mm, có lông, bầu nhụy có lông dày trắng, vòi nhụy có 3 vòi rời nhau, núm nhụy chia 2 thùy Quả nang 3 góc, kích thước 1x1x1 mm, có lông khắp bề mặt quả Mỗi ô chứa 1 hạt, hạt hình trứng hoặc tứ giác, màu đỏ nhạt, bề mặt có rãnh, không có mồng

Ảnh chụp mẫu M1 tại thực địa được trình bày ở hình 3.1 Ảnh chụp các đặc điểm mẫu M1 dưới kính lúp được trình bày ở hình 3.3

3.1.1.2 Đặc điểm hình thái mẫu M2

Cây cỏ, sống hàng năm, dài 10-21 cm, có nhựa mủ trắng, mọc tỏa rộng trên mặt đất Rễ cọc, rễ chính dài 4-7 cm, đường kính 1-2 mm Thân nhỏ, hình trụ, đường kính 1 mm, màu đỏ, chia nhiều đốt, các đốt ở rễ thường ngắn hơn, dài 3-6 mm, các đốt trên dài 10-15 mm, các mấu giữa các đốt thân hơi phình ra Thân chia nhánh nhiếu

từ gốc và từ các mấu thân Trên thân có 1 dải lông dày màu trắng Lá mọc đối, 2 lá kèm thường dính nhau thành hình tam giác dài 0,8-1mm, phần trên chia làm nhiều

thùy Cuống lá có lông Phiến lá hình bầu dục, lá trưởng thành kích thước 0,3-0,5x 0,6-0,9 mm, mặt dưới có lông trắng Mặt trên màu xanh, mặt dưới màu đỏ nhạt Gốc

lá không đều, mép lá có răng cưa nhỏ Cụm hoa thường đơn độc ở nách lá hoặc đôi khi thành chùm, cuống dài 1,5-2,5 mm, không có lông Chén hình chuông bên trên

có 4 thùy hình tai bèo mài đỏ tím, có lông ở phía miệng chén, kích thước 0,5x0,7 mm,

có 4 tuyến tiết Hoa đực: hoa trần không cuống, nhị hoa thò Hoa cái có cuống dài 0,8-1,2 mm, không có lông, bầu nhụy có lông ở 3 cạnh, vòi nhụy ngắn, núm nhụy chia 2 thùy Quả nang 3 góc, kích thước 1,2x1,2x1,2 mm, có lông ở cạnh Mỗi ô chứa

1 hạt, hạt hình trứng hoặc tứ giác, màu đỏ nhạt, bề mặt có vạch, không có mồng

Ảnh chụp mẫu M2 tại thực địa được trình bày ở hình 3.2 Ảnh chụp các đặc điểm mẫu M2 dưới kính lúp được trình bày ở hình 3.4

3.1.2 Giám định tên khoa học

Căn cứ vào đặc điểm hình thái của các mẫu nghiên cứu, đối chiếu với khóa

phân loại chi Euphorbia L và bản mô tả loài trong tài liệu Thực vật chí Trung Quốc [67], Thực vật chí Thái Lan [65] và tài liệu Cây cỏ Việt Nam [9] Kết quả:

- Mẫu M1 được giám định tên khoa học là Euphorbia thymifolia L., họ Thầu

dầu (Euphorbiaceae); tên Việt Nam là cỏ sữa lá nhỏ

- Mẫu M2 được giám định tên khoa học là Euphorbia prostrata Aiton, họ Thầu

dầu (Euphorbiaceae); tên Việt Nam là cỏ sữa nằm

Hình 3.1 Ảnh chụp mẫu M1 tại

thực địa

Hình 3.2 Ảnh chụp mẫu M2 tại

thực địa

Hình 3.3 Ảnh chụp các đặc điểm mẫu M1 dưới kính lúp

Chú thích: 1,2 Lá; 3 Cuống lá; 4 Thân; 5,6 Lá kèm; 7 Cành mang hoa;

8 Cụm hoa tổng; 9 Cụm hoa bóc tách; 10 Hoa cái; 11 Hoa đực; 12,13 Chỉ nhị; 14 Quả; 15 Quả cắt ngang; 16 Hạt

Hình 3.4 Ảnh chụp các đặc điểm mẫu M2 dưới kính lúp

Chú thích: 1,2 Phiến lá; 3 Thân cây; 4 Cành mang hoa; 5.Cuống lá; 6,7 Lá kèm;

8 Cụm hoa 9 Cụm hoa bóc tách; 10,11 Chỉ nhị; 12 Bao phấn;

13.Bầu; 14 Quả; 15 Quả cắt ngang; 16 Hạt.

3.1.3 Đặc điểm hiển vi

3.1.3.1 Đặc điểm hiển vi của cỏ sữa lá nhỏ (M1)

Đặc điểm vi phẫu

 Vi phẫu lá

 Phần gân lá: Biểu bì dưới (1) gồm 1 hàng tế bào xếp đều đặn Mô dày (2) gồm

4-5 hàng tế bào có thành dày, hình đa giác, xếp lộn xộn ở giữa biểu bì dưới và bó libe-gỗ Chính giữa gân lá là bó libe-gỗ hình gần tròn, libe (3) ở phía ngoài, gỗ (4) ở trong Bao quanh bó libe gỗ là một vòng tế bào mô mềm (5) có kích thước lớn Mô giậu (6) gồm 1 hàng tế bào nằm sát biểu bì trên Biểu bì trên (7) gồm 1 hàng hàng tế bào xếp đều đặn

 Phần phiến lá: Biểu bì dưới (10) gồm 1 hàng tế bào xếp đều đặn Mô mềm (11) gồm 3-4 hàng tế bào, kích thước không đều, xếp lộn xộn Mỗi bên phiến lá có 6-

7 bó libe-gỗ hình gần tròn, libe (9) ở dưới, gỗ (8) ở trên Bao quanh bó libe gỗ là một vòng tế bào mô mềm (14) có kích thước lớn Mô giậu (13) gồm 1 hàng tế bào nằm sát biểu bì trên Biểu bì trên (12) gồm 1 hàng tế bào xếp đều đặn Ảnh chụp vi phẫu lá cỏ sữa lá nhỏ dưới kính hiển vi được trình bày ở hình 3.5

 Vi phẫu thân

Mặt cắt thân hình gần tròn, từ ngoài vào trong có các đặc điểm: Biểu bì gồm

1 hàng tế bào hình trứng xếp đều đặn (2), mang lông che chở đa bào (1), mô mềm vỏ (3) gồm 5-8 hàng tế bào thành mỏng hình đa giác kích thước không đều, xếp lộn xộn Trụ bì hóa sợi thành từng cụm (4), tế bào hình đa giác uốn lượn, kích thước không đều Libe-gỗ xếp thành từng bó tạo thành vòng hướng tâm, mỗi bó gồm libe (5) ở phía ngoài, gỗ (6) ở phía trong, ngăn cách với libe bởi tầng phát sinh libe-gỗ Mô mềm ruột (7) ở giữa thân, gồm nhiều tế bào thành mỏng, hình gần tròn, càng vào trong các tế bào có kích thước càng lớn

Ảnh chụp vi phẫu thân cỏ sữa lá nhỏ dưới kính hiển vi được trình bày ở hình 3.6

 Vi phẫu rễ

Mặt cắt rễ hình gần tròn, từ ngoài vào trong có các đặc điểm: Bần (1) gồm nhiều lớp tế bào xếp thành vòng tròn đồng tâm và dãy xuyên tâm, có nhiều chỗ nứt,

rách, phía ngoài lồi lõm không đều Mô mềm vỏ (2) gồm 5-6 hàng tế bào thành mỏng, hình bầu dục, xếp lộn xộn, các tế bào ở phần ngoài bị ép bẹp Libe-gỗ xếp thành vòng hướng tâm hoặc , kích thước không đều, libe (3) ở phía ngoài, gỗ ở trong, ngăn cách với libe bởi tầng phát sinh libe-gỗ (4) Mạch gỗ (6) đa giác tròn, kích thước không đều, phân bố đều trong vùng mô mềm gỗ Mô mềm gỗ (5) bao quanh mạch kích thước nhỏ, mô mềm gỗ hóa sợi tế bào đa giác kích thước gần đều, xếp thành dãy xuyên tâm Ảnh chụp vi phẫu rễ cỏ sữa lá nhỏ dưới kính hiển vi được trình bày ở hình 3.7

Đặc điểm bột

 Bột lá

Bột lá có màu xanh xám, không mùi, vị hơi đắng Quan sát dưới kính hiển vi, bột lá có những đặc điểm sau: biểu bì dưới tế bào có vách uốn lượn nhiều mang lỗ khí (1), biểu bì trên các tế bào hình đa giác mang lỗ khí (2), mảnh phiến lá mang mạch dẫn (3), mạch vạch (4), mạch xoắn (5), lông che chở đa bào có 3-4 tế bào, đầu nhọn (6)

Ảnh chụp đặc điểm bột lá cỏ sữa lá nhỏ dưới kính hiển vi được trình bày ở hình 3.8

thường kết thành từng bó (7), hạt tinh bột hình trứng, hình chuông, hình đa giác có kích thước 3-6 µm (8)

Ảnh chụp đặc điểm bột rễ cỏ sữa lá nhỏ dưới kính hiển vi được trình bày ở hình 3.10

 Bột hoa

Bột có màu nâu, không mùi, không vị Quan sát bột dưới kính hiển vi, bột hoa

có những đặc điểm sau: mảnh cánh hoa mang mạch dẫn (1), (2), mạch xoắn (3), hạt phấn hoa hình gần tròn hoặc bầu dục màu vàng nhạt kích thước 20-25 µm (5), lông che chở đa bào gồm 2-3 tế bào, đầu hơi nhọn (4)

Ảnh chụp đặc điểm bột hoa cỏ sữa lá nhỏ dưới kính hiển vi được trình bày ở hình 3.11

 Bột quả

Bột có màu nâu, không mùi, không vị Quan sát bột dưới kính hiển vi, bột quả có những đặc điểm sau: mảnh nội nhũ màu vàng cam (1),(2), mảnh vỏ quả (3), mô mềm gồm các tế bào hình đa giác (4), mảnh mạch (5), sợi tụ thành bó sợi có thành dày (6), lông che chở đa bào gồm 3-4 tế bào, đầu hơi nhọn (7)

Ảnh chụp đặc điểm bột quả cỏ sữa lá nhỏ dưới kính hiển vi được trình bày ở hình 3.12

Hình 3.5 Ảnh chụp vi phẫu lá cỏ sữa lá nhỏ

Chú thích: 1,10 Biểu bì dưới 2 Mô dày 3,9 Libe 4,8.Gỗ

Hình 3.6 Ản h chụp vi phẫu

thân cỏ sữa lá nhỏ

Chú thích: 1 Lông 2 Biểu bì 3 Mô mềm

4 Sợi 5 Libe 6 Gỗ 7 Mô mềm ruột

Hình 3.7 Ảnh chụp vi phẫu rễ cỏ

sữa lá nhỏ

Chú thích: 1 Bần 2 Mô mềm vỏ

3 Libe 4 Tầng phát sinh libe - gỗ

5 Mô mềm gỗ hóa sợi 6 Mạch gỗ

Hình 3.8 Ảnh chụp các đặc điểm bột lá cỏ sữa lá nhỏ

Chú thích: 1,2 Biểu bì mang lỗ khí; 3 Mảnh phiến lá mang mạch dẫn;

4 Mạch vạch; 5 Mạch xoắn; 6 Lông che chở.

Hình 3.9 Ảnh chụp các đặc điểm bột thân cỏ sữa lá nhỏ

Chú thích: 1 Biểu bì 2,3 Mô mềm mang tinh bột 4 Mạch điểm

5 Mạch mạng 6,7 Mạch xoắn 8 Lông 9 Sợi 10 Tinh bột

Hình 3.10 Ảnh chụp các đặc điểm bột rễ cỏ sữa lá nhỏ

Chú thích: 1,2 Bần 3,4 Mô mềm mang tinh bột 5 Mạch gỗ

6 .Mạch điểm 7 Sợi 8 Hạt tinh bột

Hình 3.11 Ảnh chụp các đặc điểm bột hoa cỏ sữa lá nhỏ

Chú thích: 1,2 Mảnh cánh hoa mang mạch dẫn 3 Mạch xoắn

4 Lông che chở đa bào 5 Hạt phấn

Hình 3.12 Ảnh chụp các đặc điểm bột quả cỏ sữa lá nhỏ

Chú thích: 1,2 Mảnh nội nhũ 3 Mảnh vỏ quả 4 Mô mềm

5 Mảnh mạch 6 Sợi 7 Lông che chở