Nghiên cứu so sánh khả năng hấp thụ thuốc cimetidin của màng cellulose vi khuẩn lên men từ một số môi trường

TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH - KTNN ====== ĐỖ THỊ THOAN NGHIÊN CỨU SO SÁNH KHẢ NĂNG HẤP THỤ THUỐC CIMETIDIN CỦA MÀNG CELLULOSE VI KHUẨN LÊN MEN TỪ MỘT SỐ MÔI TRƢỜNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Sinh lý học ngƣời động vật Ngƣời hƣớng dẫn khoa học ThS PHẠM THỊ KIM DUNG HÀ NỘI - 2017 LỜI CẢM ƠN Với lòng trân trọng biết ơn sâu sắc, xin chân thành cảm ơn ThS Phạm Thị Kim Dung, người thầy tận tình hướng dẫn, giúp đỡ suốt trình thực khóa luận Tôi xin bày tỏ lời cảm ơn tới thầy cô khoa Sinh - KTNN thầy cô Trung tâm Nghiên cứu khoa học Chuyển giao công nghệ trường Đại học Sư phạm Hà Nội tạo điều kiện thụận lợi giúp đỡ hoàn thành khóa luận Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn tới người thân, bạn bè bên động viên, giúp đỡ khích lệ hoàn thành khóa luận Mặc dù có nhiều cố gắng để hoàn thành khóa luận cách hoàn chỉnh Tuy nhiên buổi đầu làm quen với công việc nghiên cứu khoa học hạn chế kiến thức kinh nghiệm nên tránh khỏi thiếu sót định mà thân chưa thấy Tôi mong góp ý quý thầy cô để khóa luận hoàn chỉnh Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, Ngày 15 tháng năm 2017 Sinh viên Đỗ Thị Thoan LỜI CAM ĐOAN Tôi xin khẳng định kết khóa luận “Nghiên cứu so sánh khả hấp thụ thuốc Cimetidin màng cellulose vi khuẩn lên men từ số môi trường” kết nghiên cứu cá nhân hướng dẫn trực tiếp ThS Phạm Thị Kim Dung, giảng viên khoa Sinh - KTNN trường Đại học Sư phạm Hà Nội Đề tài chưa công bố đâu hoàn toàn không trùng với công trình nghiên cứu tác giả khác Hà Nội, Ngày 15 tháng năm 2017 Sinh viên Đỗ Thị Thoan MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục đích nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Đối tượng phạm vi nghiên cứu Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan màng cellulose vi khuẩn 1.1.1 Vi khuẩn sản sinh cellulose vi khuẩn 1.1.2 Cấu trúc màng cellulose vi khuẩn tạo A xilynum 1.1.3 Đặc tính màng cellulose vi khuẩn tạo A xylinum 1.1.4 Chức sinh lý cellulose vi khuẩn tạo A xylinum 1.1.5 Môi trường nuôi cấy A xylinum nhằm thụ màng cellulose vi khuẩn 1.1.6 Ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng 1.2 Tổng quan thuốc cimetidine 1.2.1 Công thức 1.2.2 Tính chất lý hóa 1.2.3 Tác dụng cimetidine 1.2.4 Đặc điểm động học 1.2.5 Dược lực học cimetidine 10 1.2.6 Tác dụng phụ cimetidine 10 1.3 Tình hình nghiên cứu màng cellulose vi khuẩn Việt Nam giới 11 1.3.1 Tình hình nghiên cứu màng cellulose vi khuẩn Việt Nam 11 1.3.2 Tình hình nghiên màng cellulose vi khuẩn giới 12 1.4 Tình hình nghiên cứu Việt Nam giới cimetidine 13 1.4.1 Tình hình nghiên cứu Việt Nam cimetidine 13 1.4.2 Tình hình nghiên cứu giới cimetidine 13 CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Vật liệu nghiên cứu 14 2.1.1 Giống vi khuẩn 14 2.1.2 Nguyên liệu hóa chất 14 2.2 Thiết bị dụng cụ 14 2.2.1 Thiết bị sử dụng nghiên cứu 14 2.2.2 Dụng cụ sử dụng nghiên cứu 15 2.3 Môi trường lên men thụ màng cellulose vi khuẩn 15 2.4 Phương pháp nghiên cứu 16 2.4.1 Phương pháp lên men thụ màng từ cellulose vi khuẩn số môi trường 16 2.4.2 Phương pháp xử lý màng cellulose vi khuẩn trước hấp thụ thuốc 16 2.4.3 Phương pháp đánh giá độ tinh khiết màng cellulose vi khuẩn 18 2.4.4 Phương pháp dựng đường chuẩn cimetidine 18 2.4.5 Phương pháp xác định lượng thuốc cimetidine hấp thụ vào màng cellulose vi khuẩn 20 2.4.6 Phương pháp xử lý thống kê 22 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 23 3.1 Tạo màng cellulose vi khuẩn A xylinum ba môi trường 23 3.2 Thụ màng cellulose vi khuẩn thô ba môi trường 24 3.3 Quá trình xử lý màng cellulose vi khuẩn trước hấp thụ thuốc 24 3.4 Xác định điều kiện nuôi cấy để có độ dày màng cellulose vi khuẩn thích hợp 26 3.5 Kiểm tra độ tinh khiết màng cellulose vi khuẩn 27 3.6 Khảo sát khả hấp thụ thuốc màng cellulose vi khuẩn 27 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO 36 DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT A xylinum Acetobacter xylinum CNM Cao nấm men cs cộng ĐHSP Đại học Sư phạm MT1 Môi trường MT2 Môi trường MT3 Môi trường FDA Cục quản lý thực phẩm dược phẩm Hoa Kỳ OD Mật độ quang phổ Nxb Nhà xuất DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cấu trúc hóa học cellulose vi khuẩn Hình 1.2 Công thức cấu tạo thuốc cimetidine Hình 2.1 Sơ đồ quy trình thụ nhận màng cellulose vi khuẩn 17 Hình 2.2 Phương trình đường chuẩn cimetidine 19 Hình 3.1 Màng cellulose vi khuẩn nuôi môi trường nước dừa già 22 Hình 3.2 Màng cellulose vi khuẩn nuôi môi trường chuẩn 23 Hình 3.3 Màng cellulose vi khuẩn nuôi môi trường nước vo gạo 23 Hình 3.4 Thu màng cellulose vi khuẩn thô khoảng thời gian khác MT2 24 Hình 3.5 Màng cellulose vi khuẩn thô ngâm NaOH 3% 25 Hình 3.6 Màng cellulose vi khuẩn ngâm HCl 25 Hình 3.7 Màng cellulose vi khuẩn rửa vòi nước 25 Hình 3.8 Màng cellulose vi khuẩn tinh khiết 24 Hình 3.9 Kết thử diện đường glucose 26 Hình 3.10 Chuẩn bị hấp thụ thuốc cimetidine độ dày 0,3cm màng cellulose vi khuẩn 27 Hình 3.11 Màng cellulose vi khuẩn hấp thụ thuốc 27 Hình 3.12 Dung dịch lấy để đo quang phổ 27 Hình 3.13 Biểu đồ so sánh hiệu suất hấp thụ màng cellulose vi khuẩn lên men từ môi trường với thao tác không sấy 32 Hình 3.14 Biểu đồ so sánh hiệu suất hấp thụ màng cellulose vi khuẩn lên men từ môi trường với thao tác sấy 50% 33 Hình 3.15 Biểu đồ so sánh hiệu suất hấp thụ màng cellulose vi khuẩn lên men từ môi trường với thao tác sấy 100% 33 Hình 3.16 Biểu đồ so sánh hiệu suất hấp thụ màng cellulose vi khuẩn lên men từ môi trường với với độ dày 0,3 cm 34 Hình 3.17 Biểu đồ so sánh hiệu suất hấp thụ màng cellulose vi khuẩn lên men từ môi trường với với độ dày 0,5 cm 34 DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Thành phần nước dừa già Bảng 1.2 Thành phần dinh dưỡng nước vo gạo Bảng 2.1 Môi trường lên men tạo màng cellulose vi khuẩn 15 Bảng 2.2 Nồng độ cimetidine giá OD tương ứng (n = 3) 19 Bảng 3.1 Kết thụ màng cellulose vi khuẩn tươi độ dày khác 26 Bảng 3.2 Giá trị OD hấp thụ thuốc màng cellulose vi khuẩn môi trường chuẩn (n = 3) 28 Bảng 3.3 Giá trị OD hấp thụ thuốc màng cellulose vi khuẩn môi trường nước dừa già (n = 3) 29 Bảng 3.4 Giá trị OD hấp thụ thuốc màng cellulose vi khuẩn môi trường nước vo gạo (n = 3) 29 Bảng 3.5 Lượng thuốc hấp thụ vào màng cellulose vi khuẩn thời điểm 30 Bảng 3.6 Hiệu suất thuốc hấp thụ vào màng cellulose vi khuẩn khác với độ dày màng khác 2h 32 MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Đau bao tử hay loét dày bệnh phổ biến, thường gặp nước ta giới, bệnh hiệu ứng ăn da acid pepsin làm lớp niêm mạc dày hành tá tràng lan xuống lớp niêm mạc, lớp chí đến lớp mạc gây thủng dày Cimetidine thuốc kháng H2 đời lựa chọn đầu tay bác sĩ năm 80 kỉ trước để chữa đau bao tử hay loét dày Cimetidine lần có mặt thị trường Anh năm 1976, sau 12 năm nghiên cứu tập đoàn dược phẩm Smith, Kline French (SK & F GlaxoSmithKline) Các nhà khoa học SK & F nhận thấy vai trò kích thích tiết acid dày histamin thể từ năm 1964, thời điểm kháng histamin cổ điển tác dụng để ức chế hoạt động Và kể từ họ chứng minh diện receptor histamin H2 tế bào thành dày, mục đích nhóm nghiên cứu tìm chất có khả ức chế cạnh tranh với histamin, gắn vào receptor histamin H2 lại ức chế tiết acid Chất chất kháng histamin H2 [9], [22] Vào tháng 11 năm 1976, cimetidine sau trải qua hàng loạt thử nghiệm với kết thành công mỹ mãn, mắt thị trường với tên Tagamet Vào ngày 01 tháng 01 năm 1979, cimetidine thức Cục quản lí dược mỹ phẩm Hoa Kỳ kê đơn [9] Tuy nhiên, khả hòa tan nước cimetidine thấp làm giảm hiệu điều trị, sinh khả dụng thực tế cimetidine người đau dày khoảng 56 - 68%, nửa đời thải trừ cimetidine [25] Trong năm gần đây, có ý đặc biệt việc sử dụng vật liệu sinh học sản phẩm chăm sóc sức khỏe khả tái tạo, tương thích sinh học phân hủy sinh học chúng Một vật liệu sinh học có đặc tính ý cellulose Cellulose vi khuẩn hay màng sinh học sản phẩm loài vi khuẩn, đặc biệt chủng A xylinum Cellulose vi khuẩn có số tính chất hóa lí đặc biệt như: độ bền học khả thấm hút cao, độ polymer hóa lớn, có khả phục hồi độ ẩm ban đầu, bị phân hủy enzyme … Vì cellulose vi khuẩn ứng dụng nhiều lĩnh vực công nghệ như: thực phẩm, công nghệ giấy, công nghệ pin, lĩnh vực y học cellulose vi khuẩn dùng làm màng trị bỏng, mặt nạ dưỡng da [2], [6] Ngoài ra, cellulose vi khuẩn hàng rào cản oxi sinh vật khác, ngăn cản phân hủy chất tế bào ngăn cản tác động UV, ổn định kích thước hướng, màng cellulose vi khuẩn có ý nghĩa giữ thuốc kéo dài thời gian giải phóng thuốc [10], [12] Các nghiên cứu cho thấy màng cellulose vi khuẩn tạo từ nguyên liệu rẻ tiền, dễ kiếm, sản xuất quy mô công nghiệp Môi trường nuôi cấy vi khuẩn Acetobacter xylinum đa dạng nước dừa già, nước mía, nước vo gạo … Với mục đích tạo màng cellulose vi khuẩn dựa loài vi khuẩn thuộc chủng Acetobacter xylinum, từ chế tạo màng sinh học để khắc phục tác dụng phụ thuốc cimetidine chữa trị bệnh viêm loét dày môi trường thích hợp nhất, chọn đề tài: “Nghiên cứu so sánh khả hấp thụ thuốc cimetidin màng cellulose vi khuẩn lên men từ số môi trường” Mục đích nghiên cứu So sánh khả hấp thụ thuốc cimetidine từ số môi trường nhằm tìm môi trường hấp thụ nhiều thuốc nhất, phát huy hiệu tốt chữa trị bệnh viêm loét dày người 3.2 Thu màng cellulose vi khuẩn thô ba môi trƣờng Các màng cellulose vi khuẩn nằm bề mặt môi trường, dễ tách khỏi môi trường nuôi cấy Màng chứa nhiều nước, chất dẻo dai Với thời gian độ dày môi trường khác thụ màng độ dày mỏng khác Như chế tạo màng cellulose vi khuẩn có độ dày theo ý muốn, hình 3.4 (a) (b) Hình 3.4 Thu màng cellulose vi khuẩn thô khoảng thời gian khác MT2 (a): Màng cellulose vi khuẩn thô có độ dày 0,3 cm với thời gian nuôi cấy ngày (b): Màng cellulose vi khuẩn có độ dày 0,5 cm với thời gian nuôi cấy ngày 3.3 Quá trình xử lý màng cellulose vi khuẩn trƣớc hấp thụ thuốc Bước 1: Thụ màng cellulose vi khuẩn thô, rửa vòi nước Bước 2: Ngâm màng cellulose vi khuẩn thô NaOH 3% sau 48h thụ màng cellulose vi khuẩn có màu vàng nâu (Hình 3.5) Bước 3: Tiếp tục ngâm màng cellulose vi khuẩn vào HCl 3% sau 48h thụ màng cellulose vi khuẩn có màu trắng ngà, không mùi (Hình 3.6) 24 Hình 3.5 Màng cellulose vi Hình 3.6 Màng cellulose vi khuẩn thô ngâm khuẩn ngâm HCl NaOH 3% Bước 4: Ngâm màng cellulose vi khuẩn vào nước 48h để trung hòa hết acid, sau lấy màng rửa vòi nước ta thụ màng cellulose vi khuẩn có màu trắng (Hình 3.7 Hình 3.8) Hình 3.7 Màng cellulose vi Hình 3.8 Màng cellulose vi khuẩn rửa vòi nước khuẩn tinh khiết 25 3.4 Xác định điều kiện nuôi cấy để có độ dày màng cellulose vi khuẩn thích hợp Mục đích: thụ màng cellulose vi khuẩn độ dày khác sử dụng màng cho thí nghiệm giai đoạn sau Nguyên tắc: vi khuẩn A xylinum cho vào môi trường sử dụng chất dinh dưỡng môi trường để tổng hợp nên cellulose Màng cellulose dày lên dần ngưng lại thời điểm định, môi trường hết chất dinh dưỡng Độ dày màng tùy thụộc lượng môi trường thời gian nuôi cấy Thực hiện: môi trường cho vào bình nuôi cấy với thể tích môi trường khác sau: Cách tiến hành: môi trường cho vào bình nuôi cấy với thể tích môi trường 150ml Lô 1: Môi trường nuôi cấy có chứa thành phần cao nấm men (MT1) Lô 2: Môi trường nuôi cấy có chứa thành phần nước dừa (MT2) Lô 3: Môi trường nuôi cấy có chứa thành phần nước vo gạo (MT3) Mỗi lô có - bình nuôi cấy, sau khoảng thời gian - ngày tiến hành thu màng lần (mỗi lô thu khoảng - bình) lúc màng có độ dày khoảng 0,25 - 0,3cm Tiếp tục nuôi cấy tĩnh bình lại lô - ngày thu màng lúc màng có độ dày khoảng 0,45 - 0,5cm Kết thu màng tươi độ dày khác dày khác thể qua bảng 3.1 Bảng 3.1 Kết thụ màng cellulose vi khuẩn tươi độ dày khác Lô Thời gian nuôi cấy (ngày) 3-5 6-8 3-5 6-8 3-5 6-8 Thể tích môi trƣờng nuôi cấy (ml) 150 150 150 26 Độ dày màng thụ đƣợc (cm) 0,3 05 0,3 0,5 0,3 0,5 3.5 Kiểm tra độ tinh khiết màng cellulose vi khuẩn Mục đích: Kiểm tra diện đường glucose nồng độ cao môi trường nuôi cấy Nguyên tắc: Dùng thuốc thử Fehling pha để phát diện đường D - glucose, có xuất kết tủa màu nâu đỏ Tiến hành: - Mẫu thử: Dịch thử màng cellulose vi khuẩn loại sau xử lý hóa học - Mẫu đối chứng: Là H2O cất dung dịch D- glucose - Cho vào ống nghiệm chứa mẫu thử ống nghiệm ml thụốc thử Fehling Đun cách thủy 10 phút - Quan sát kết tủa xuất ống nghiệm - Kết quả: Không phát glucose diện màng thể hình 3.9 Hình 3.9 Kết thử diện đường glucose Mẫu thử 1: màng 0,3cm Mẫu thử 2: màng 0.5cm 3.6 Khảo sát khả hấp thụ thuốc màng cellulose vi khuẩn Cho màng cellulose vi khuẩn vào bình có chứa 100ml dung dịch (gồm 20mg thuốc cimetidine dẫn dung dịch HCl 0,1N đến 100ml) thể hình 3.10 27 Sau cho màng vào dung dịch cimetidine, đặt bình vào máy lắc với chế độ lắc 180 vòng/phút thể hình 3.11 Sau khoảng thời gian 30 phút, giờ, 1,5 giờ, lấy dung dịch đo quang phổ máy UV - 2450 để xác định lượng thuốc hấp thụ vào màng thể hình 3.12 Hình 3.10 Chuẩn bị hấp Hình 3.11 Màng Hình 3.12 Dung dịch thụ thuốc cimetidine độ cellulose vi khuẩn lấy để đo quang phổ dày 0,3cm màng cellulose hấp thụ thuốc vi khuẩn Kết đo quang phổ trình bày bảng 3.2, bảng 3.3, bảng 3.4 3.6.1 Màng chuẩn Bảng 3.2 Giá trị OD hấp thụ thuốc màng cellulose vi khuẩn môi trường chuẩn (n = 3) Độ dày màng 0,3cm 0,5cm Đặc điểm màng Thời gian hấp thụ (giờ) 0,5 1,5 Màng giữ nguyên 0,337 0,0026 0,301 0,0016 0,288 0,0017 0,276 0,0016 Màng sấy 50% 0,303 0,0027 0,278 0,0032 0,266 0,0034 0,251 0,0024 Màng sấy 100% 0,281 0,0014 0,244 0,0018 0,227 0,0017 0,211 0,0022 Màng giữ nguyên 0,437 0,0024 0,398 0,0028 0,335 0,0021 0,304 0,0014 Màng sấy 50% 0,396 0,0022 0,334 0,0021 0,301 0,0012 0,274 0,0019 Màng sấy 100% 0,371 0,0035 0,318 0,0027 0,286 0,0026 0,237 0,0013 28 3.6.2 Màng dừa Bảng 3.3 Giá trị OD hấp thụ thuốc màng cellulose vi khuẩn môi trường nước dừa già (n = 3) Độ dày Đặc điểm màng màng 0,5 1,5 Màng giữ nguyên 0,345 0,0016 0,326 0,0012 0,322 0,0029 0,312 0,0029 Màng sấy 50% 0,324 0,0022 0,317 0,0022 0,302 0,0023 0,293 0,0023 Màng sấy 100% 0,289 0,0034 0,278 0,0020 0,265 0,0015 0,258 0,0017 Màng giữ nguyên 0,372 0,0015 0,356 0,0017 0,332 0,0018 0,327 0,0028 Màng sấy 50% 0,347 0,0027 0,331 0,0034 0,319 0,0022 0,314 0,0021 Màng sấy 100% 0,311 0,0029 0,291 0,0026 0,289 0,0027 0,275 0,0017 0,3cm 0,5cm Thời gian hấp thụ (giờ) 3.6.3 Màng gạo Bảng 3.4 Giá trị OD hấp thụ thuốc màng cellulose vi khuẩn môi trường nước vo gạo (n = 3) Độ dày Đặc điểm màng màng 0,5 1,5 Màng giữ nguyên 0,369 0,0022 0,358 0,0015 0,347 0,0012 0,332 0,0016 Màng sấy 50% 0,337 0,0028 0,322 0,0027 0,312 0,0026 0,301 0,0025 Màng sấy 100% 0,305 0,0018 0,292 0,0019 0,286 0,0023 0,273 0,0023 Màng giữ nguyên 0,396 0,0025 0,385 0,0016 0,367 0,0029 0,351 0,0026 Màng sấy 50% 0,374 0,0029 0,352 0,0029 0,341 0,0015 0,334 0,0017 Màng sấy 100% 0,357 0,0017 0,335 0,0024 0,324 0,0027 0,311 0,0021 0,3cm 0,5cm Thời gian hấp thụ (giờ) Từ kết tính bảng 3.2, 3.3, 3.4 ta thấy sau lắc màng giá trị OD đo gần không giảm chứng tỏ lượng thuốc hấp thụ vào màng đạt cực đại 29 Lấy giá trị OD thu từ bảng 3.1, 3.2, 3.3 thay vào phương trình đường chuẩn cimetidine ta tìm nồng độ cimetidine (%) dung dịch, lấy C% thay vào công thức (1) ta khối lượng cimetidine có dung dịch (mct), lấy khối lượng cimetidine có dung dịch thay vào công thức (2) ta khối lượng cimetidine hấp thụ vào màng cellulose vi khuẩn (mht), tiếp tục lấy khối lượng cimetidine hấp thụ vào màng thay vào công thức (3) ta tỉ lệ thuốc cimetidine hấp thụ vào màng cellulose vi khuẩn Khối lượng thuốc hấp thụ vào màng cellulose vi khuẩn với độ dày khác thời điểm thể bảng 3.5 Bảng 3.5 Lượng thuốc hấp thụ vào màng cellulose vi khuẩn thời điểm mht (mg) Các loại Màng giữ nguyên Màng sấy 50% Màng sấy 100% màng 0,3cm 0,5cm 0,3cm 0,5cm 0,3cm 0,5cm Màng 9,69 8,59 10,68 9,77 12,24 11,27 chuẩn 0,0057 0,0089 0,0029 0,0047 0,0048 0,0072 Màng 8,27 7,68 9,02 8,19 10,41 9,74 0,0027 0,0098 0,0037 0,0037 0,0071 0,0052 7,48 6,73 8,71 7,41 9,81 8,31 0,0022 0,0012 0,0075 0,0052 0,0042 0,0022 dừa Màng gạo Bảng 3.5 cho thấy loại màng lượng thuốc hấp thụ vào màng có độ dày 0,3cm nhiều so với màng cellulose vi khuẩn có độ dày 0,5 cm độ dày màng, lượng thuốc hấp thụ vào màng khác không giống nhau, tất sai khác có ý nghĩa thống kê với p < 0,05 Cụ thể: 30 − Trong loại màng: màng CNM, sau 2h lượng thuốc hấp thụ vào màng dày 0,3cm 9,69mg nhiều 1,1mg so với màng dày 0,5 cm; màng Dừa dày 0,3cm hấp thụ lượng thuốc nhiều 0.6mg so với màng Dừa dày 1cm; màng Gạo lượng thuốc hấp thụ vào màng dày 0,3cm 0,75mg nhiều 2mg so với màng dày 0.5cm − Trong độ dày màng 0,3cm: màng CNM hấp thụ 9,69 mg thụốc sau 2h nhiều 1,42mg so với lượng thuốc hấp thụ vào màng Dừa nhiều 2,21mg so với lượng thuốc hấp thụ vào màng Gạo Trong độ dày màng 0,5cm màng CNM hấp thụ thuốc nhiều so với màng Dừa màng Gạo 0,91mg 2,92mg − Trong loại màng độ dày 0,3cm: Đối với màng CNM: màng sấy khô 100% lượng thuốc hấp thụ nhiều so với màng sấy 50% giữ nguyên 1,58mg 2,57mg; Đối với màng Dừa: màng sấy khô 100% lượng thuốc hấp thụ nhiều so với màng sấy 50% giữ nguyên 1,39mg 2,14mg; Đối với màng Gạo: màng sấy khô 100% lượng thuốc hấp thụ nhiều so với màng sấy 50% giữ nguyên 1,1mg 2,33mg − Trong loại màng độ dày 0,5cm: Đối với màng CNM: màng sấy khô 100% lượng thuốc hấp thụ nhiều so với màng sấy 50% giữ nguyên 1,5mg 2,69mg Đối với màng Dừa: màng sấy khô 100% lượng thuốc hấp thụ nhiều so với màng sấy 50% giữ nguyên 1,54mg 2,06mg Đối với màng Gạo: màng sấy khô 100% lượng thuốc hấp thụ nhiều so với màng sấy 50% giữ nguyên 0,91mg 1,58mg Hiệu suất thuốc hấp thụ vào màng cellulose vi khuẩn khác với độ dày màng khác 2h thể bảng 3.6 31 Bảng 3.6 Hiệu suất thuốc hấp thụ vào loại màng cellulose vi khuẩn khác với độ dày màng khác 2h EE (%) Các loại Màng giữ nguyên Màng sấy 50% Màng sấy 100% màng 0,3cm 0,5cm 0,3cm 0,5cm 0,3cm 0,5cm Màng 48,47 42,94 53,41 48,87 61.32 56,19 chuẩn 0,0057 0,0089 0,0029 0,0047 0,0048 0,0072 Màng 41,36 38,41 45,12 40,07 52,04 48,68 0,0027 0,0098 0,0037 0,0037 0,0071 0,0052 37,41 33,66 43,54 37,02 49,07 41,56 0,0022 0,0012 0,0075 0,0052 0,0042 0,0022 dừa Màng gạo Qua bảng 3.6, ta có biểu đồ sau: 50 45 40 35 30 25 20 15 10 0,3 cm 0,5 cm Màng CNM Màng dừa Màng gạo Hình 3.13 Biểu đồ so sánh hiệu suất hấp thụ màng cellulose vi khuẩn lên men từ môi trường với thao tác không sấy 32 60 50 40 0,3 cm 0,5 cm 30 20 10 Màng CNM Màng dừa Màng gạo Hình 3.14 Biểu đồ so sánh hiệu suất hấp thụ màng cellulose vi khuẩn lên men từ môi trường với thao tác sấy 50% 70 60 50 40 0,3 cm 0,5 cm 30 20 10 Màng CNM Màng dừa Màng gạo Hình 3.15 Biểu đồ so sánh hiệu suất hấp thụ màng cellulose vi khuẩn lên men từ môi trường với thao tác sấy 100% 33 70 60 60 50 50 40 40 Không sấy Không sấy 30 Sấy 50% Sấy 50% 30 Sấy 100% 20 Sấy 100% 20 10 10 Màng CNM Màng CNM Màng dừa Màng gạo Màng dừa Màng gạo Hình 3.16 Biểu đồ so sánh hiệu suất Hình 3.17 Biểu đồ so sánh hiệu suất hấp thụ màng cellulose vi khuẩn lên hấp thụ màng cellulose vi khuẩn men từ môi trường với với độ dày 0,3 lên men từ môi trường với với độ cm dày 0,5 cm Qua bảng 3.6, hình 3.13, 3.14, 3.15, 3.16, 3.17 nhận thấy: Trong màng hiệu suất thuốc hấp thụ độ dày màng 0,3cm lớn màng 0,5 cm điều giải thích màng 0,3 cm mỏng hơn, sợi cellulose nên thuốc dễ dàng hấp thụ vào màng Trong độ dày màng ta thấy màng CNM có hiệu suất thuốc hấp thụ vào màng nhiều so với màng Dừa màng Gạo Trong loại màng hiệu suất hấp thụ màng sấy khô đến khối lượng không đổi nhiều so với màng sấy khô đến 50% màng giữ nguyên Tất sai khác có ý nghĩa thống kê với p < 0,05 Vì vậy, hiệu suất hấp thụ thuốc vào màng tỷ lệ thuận với khối lượng hấp thụ thuốc nên màng hấp thụ nhiều thuốc hiệu suất lớn ngược lại 34 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Sau hoàn thành xong khóa luận, thu kết sau: Nuôi cấy thu màng cellulose vi khuẩn từ A xylinum số môi trường Xử lý thu màng cellulose vi khuẩn tinh khiết với độ dày 0,3 cm 0,5 cm Màng cellulose vi khuẩn thu tinh khiết, độ thoáng cao, không mùi chua, không bị biến tính sấy khô nhiệt độ cao, chất lượng phù hợp với nhu cầu làm thí nghiệm Màng CNM có khả hấp thụ thuốc cao so với màng dừa àng gạo Màng cellulose vi khuẩn độ dày 0,3 cm có khả hấp thụ thuốc cao màng cellulose vi khuẩn có độ dày 0,5 cm Màng cellulose vi khuẩn sấy khô đến khối lượng không đổi có khả hấp thụ cao màng cellulose vi khuẩn sấy khô đến 50% màng cellulose vi khuẩn giữ nguyên khoảng thời gian với môi trường Khả hấp thụ thuốc màng cellulose vi khuẩn đạt cực đại Kiến nghị Tiếp tục khảo sát khả hấp thụ thuốc cimetidine màng cellulose vi khuẩn tạo chủng A xylinum từ loại môi trường tự nhiên khác như: dịch hoa quả, nước chè xanh, nước mía, nước dứa,… để mở rộng nguồn nguyên liệu Tiếp tục nghiên cứu khả hấp thụ thuốc cimetidine màng cellulose vi khuẩn chịu tác động điều kiện nhiệt độ khác để thu màng có khả hấp thụ thuốc tốt nhằm cung cấp liệu để phục vụ cho nghiên cứu in vivo 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt [1] Hà Nguyên Phương Anh, Trần Hậu Khang, Nguyễn Duy Hưng (2014), “Đánh giá hiệu Cimetidine phòng tái phát bệnh sùi mào gà Bệnh viện Da liễu Trung ương”, Tạp chí Da liễu học Việt Nam, sô 16 (7/2014), trang - 10 [2] Huỳnh Thị Ngọc Lan, Nguyễn Văn Thanh (2006), “Nghiên cứu đặc tính màng cellulose vi khuẩn từ Acetobacter xylinum sử dụng làm màng trị bỏng”, Tạp chí Dược học số 361/2006, trang 18-20 [3] Nguyễn Văn Mã, La Việt Hồng, Ong Xuân Phong (2013), Phương pháp nghiên cứu sinh lí học thực vật, Nxb Đại học Quốc gia Hà Nội [4] Đinh Thị Kim Nhung, Nguyễn Thị Thùy Vân, Trần Như Quỳnh (1996), “Nghiên cứu vi khuẩn Acetobacter xylinum tạo màng Bacterial Cellulose ứng dụng điều trị bỏng”, Tạp chí khoa học công nghệ, 50 (4), trang 453 - 462 [5] Nguyễn Thị Nguyệt (2008), Nghiên cứu vi khuẩn Acetobacter xylinum cho màng Bacterial Cellulose làm mặt nạ dưỡng da, Luận án thạc sỹ sinh học ĐHSP Hà Nội [6] Đinh Thị Kim Nhung (1998), “Tối ưu hóa thành phần môi trường dinh dưỡng cho Acetobacter xylinum phương pháp quy hoạch thực nghiệm” Tạp chí Khoa học Công nghệ, 36(1), 10 - 12 [7] Đinh Thị Kim Nhung, Nguyễn Thị Thùy Vân, Hoàng Thị Thảo (2011), “Nghiên cứu vi khuẩn Acetorbacter xylinum sinh tổng hợp màng Bacterial cellulose ứng dụng điều trị bỏng”, Tạp chí Y học thảm họa bỏng, ISSN 1859 - 3461(2), 122 - 127 [8] Lê Thị Khánh Vân cs (2012), “Sản xuất thạch dừa từ nước dừa” Tạp chí tháng 07/85 Viện nghiên cứu dầu lấy dầu 36 Tài liệu Tiếng Anh [9] American Chemical Society (2001), “Tagamet: Discovery of histamine H2 - receptor Antagonists”, National Historic Chemical Landmarks [10] Almeida, I.F., et al (2013), “Bacterial cellulose membranes as drug delivery systems: An in vivo skin conpatibility study”, Eur J Pharm Biopharm, in press [11] Andrew Somogyi, Roland Gugle, (1983), Clinical pharmacokinetics of Cimetidine, Clin Pharmakokinet, Now - Pec: (6): 463 - 95 [12] Arisawa T, Shibata T, et at (2006), “Effects of sucralfate, cimetidine and rabeprazole on mucosalhydroxyproline content in healing of ethanolhclinduced gastric lesions”, Pharmacol Physion, 33(7):628-32 [13] Dr G Bodermar, B Norlander, A Walan (Aug 1981), “Pharmacokinetics of Cimetidine after single doses and during continuous treatment”, Clinical pharmacokinetics, vol 6, issue 4, 306 - 315 [14] Franco I (2000), “Oral Cimetidine for the management of genital and perigenital warts in children, J Urol 2000 Sep, 164, 1074 - [15] Fukuda M, et al (2008), “Cimetidine inhibits salivary gland tumor cell adhesion to neural cells and induces apoptosis by blocking NCAM expression”, Cancer, 10(2407) 8-376 [16] Levine M, Law EY, Bandiera SM, Chang TK, Bellward GD (February 1998), “In vivo Cimetidine inhibits hepatic CYP2C6 and CYP2C11 but not CYP1A1 in adult male rats”, The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics 284 (2): 493 - [17] M Sonnenblick, A.J Rosin, N Weissberg (July 1982), “Neurological and psychiatric side effects of Cimetidine report of cases with review of the literature”, Postgraduate Medical Journal 58: 415 - 418 [18] Molinder HK (1994), “The development of Cimetidine: 1964 - 1976, A human story”, Jclin Gastroenterol, 19 (3): 248 - 54 37 [19] Pedersen P.U, Miller R (1980), “Pharmacokinetic and bioavailability of Cimetidine in humans”, J Pharm Sci., 69, 394 - 398 [20] Stephen J Winters, Judy Lee, Philip Troen (1979), “Competition of the histamine H2 antagonist Cimetidine for androgen binding sites in men”, American Journal of Andrology, vol 1: 111 - 114 [21] Sivelle PC, Underwood AH, Jelly JA (March 1982), “The effects of histamine H2 receptor antagonists on androgen action in vivo and dihydrotestosterone binding to the rat prostate androgen receptor in vitro”, Biochemical Pharmacology 31 (5): 677 - 84 [22] Saltissi, A Crowther et al (1981), “The effects of chronic oral Cimetidine therapy on the cardiovascular system in man”, Br J clin Pharmac, 11, 497 - 503 [23] Scheinfeld (2003), “Cimetidine: a review of the recent developments and reports in cutaneous medicine”, Dermatol Online J.9 (2): - 80 [24] Sabesin SM (1993), “Safety issues relating to long - term treatment with histamine H2 - receptor antagonists”, Aliment Pharmacol Ther Suppl 2: 35 - 40 [25] Thanh Xuan Nguyen, et al (2014), “Chitosan - coated nano - liposomes for the oral delivery of Berberin hydrochloride”, J Mater Chem B, 2, 7149 - 7159 [26] Ramakrishna et al (2015), “Formulation and evaluation of Cimetidine floating matric tablets”, International journal of pharmaceutical, chemical, and biological sciences [27] W.L Burland, W.A.M Duncan, T Hesselbo et al (1975), “Pharmacological evaluation of Cimetidine, a new histamine H2 - receptor antagonist, in healthy man”, Br J clin Pharmac.2: 481 - 486 38 ... hấp thụ qua màng xử lí số trường hợp Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu: So sánh khả hấp thụ thuốc cimetidin màng cellulose vi khuẩn lên men từ số môi trường Phạm vi nghiên cứu: Nghiên. .. vi khuẩn lên men từ số môi trường Mục đích nghiên cứu So sánh khả hấp thụ thuốc cimetidine từ số môi trường nhằm tìm môi trường hấp thụ nhiều thuốc nhất, phát huy hiệu tốt chữa trị bệnh vi m... đồ so sánh hiệu suất hấp thụ màng cellulose vi khuẩn lên men từ môi trường với thao tác sấy 100% 33 Hình 3.16 Biểu đồ so sánh hiệu suất hấp thụ màng cellulose vi khuẩn lên men từ môi trường