Xác định tỷ lệ vi khuẩn đường ruột tiết carbapenemase được phân lập từ người khỏe mạnh trong cộng đồng

BỘ GIÁO DỤC & ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - - BÁO CÁO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Tên đề tài XÁC ĐỊNH TỶ LỆ VI KHUẨN ĐƢỜNG RUỘT TIẾT CARBAPENEMASE ĐƢỢC PHÂN LẬP TỪ NGƢỜI KHỎE MẠNH TRONG CỘNG ĐỒNG KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC CHUYÊN NGÀNH: VI SINH – SHPT GVHD: ThS Dƣơng Nhật Linh SVTH: Phạm Thị Thanh Thúy MSSV:1153010823 Niên khoá: 2011 - 2015 Tp Hồ Chí Minh, tháng 05 năm 2015 LỜI CẢM ƠN Thời gian làm đề tà t p n t n ệm v s n c o tô n ều kỷ niệm đẹp nhiều kinh nghiệm quý Để oàn t àn đề tà tô n ận đ s p đ t c c t y cô n c ị c c Đ u t ên m xn đ c n c c m pđ n ô Dƣơng Nhật ẫn c ỉ bảo s n l n đ n v ên m để oàn t àn t t đề tà Em xin cảm n quý t y cô Mn Hồ đn lờ cảm n c n t àn n ất đến Linh, Th y Ngu n V n Minh Cô, Th y tận t n c n ều ết l n ản o ôn n ệsn y truyền đ t n ọc – tr ờn Đ n ọc Mở TP ến t ức vô c n quý làm tảng v ng để em hoàn thành t t công việc Em xin g i lời cảm n c n t àn đến CN Nguy n Thị Bích Ngân Trung tâm Y tế d phòng huyện Hóc Môn t o đ ều kiện thuận l i mặt để em oàn t àn đề tài Em xin cảm n c ị Nguy n Thị Mỹ Linh, chị Võ Ngọc Yến Nhi b n, em học việc t p n t đ ều kiện thuận l u c n x n p v Kn c ệm ôn n để m oàn t àn t t t d y d nên n ến n i lời cảm n đến ệ v s n s t c n c quý t y cô t o c tập mẹ n s n t àn ời Cảm n n àn c o t n t t qu mọ tr nuô nấng n yêu vô n tron cu c s n n c ị c c n c c m đn sức n p c ặt hái nhiều t àn côn tron cu c s n n n t n 05 n m 2015 PHẠM THỊ THANH THÚY GVH : T S ƯƠNG NHẬT LINH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT v DANH MỤC HÌNH ẢNH vii DANH MỤC BẢNG viii DANH MỤC BIỂU ĐỒ xi DANH MỤC SƠ ĐỒ xii ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 KHÁNG SINH VÀ SỰ ĐỀ KHÁNG KHÁNG SINH 1.1.1 Lịch s phát triển kháng sinh 1.1.2 Khái niệm kháng sinh 1.1.3 c ế t c đ ng kháng sinh 1.1.4 S đề kháng kháng sinh vi khuẩn 1.1.5 c ế đề kháng kháng sinh vi khuẩn 10 1.2 KHÁNG SINH NHÓM CARBAPENEM 13 1.2.1 Gi i thiệu carbapenem 13 1.2.2 Lịch s phát carbapenem 14 1.3 CARBAPENEMASE TRÊN VI KHUẨN ENTEROBACTERIACEAE 15 1.4 CÁC VẤN ĐỀ LIÊN QUAN ĐẾN ENZYM CARBAPENEMASE 16 1.4.1 Hệ th ng phân lo i 16 1.4.2 Nhóm A serin – carbapenemase 18 1.4.3 Serin – carbapenemase nhóm D 19 1.4.4 Enzym nhóm B carbapenemase 21 1.5 CÁC KỸ THUẬT PHÁT HIỆN VI KHUẨN KHÁNG CARBAPENEMASE 23 1.5.1 Kỹ thuật th nghiệm tính nh y cảm kháng sinh 23 1.5.2 Kỹ thuật phát vi khuẩn sinh carbapenemase 24 SVTT: PHẠM THỊ THANH THUÝ i KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP GVH : T S ƯƠNG NHẬT LINH 1.6 GIỚI THIỆU VỀ ĐỐI TƯỢNG VI KHUẨN NGHIÊN CỨU 25 1.6.1 Vi khuẩn E coli 25 1.6.2 Vi khuẩn Klebsiella spp 28 1.6.3 Vi khuẩn Acinetobacter baumannii 32 1.6.4 Vi khuẩn Pseudomonas aeruginosa 34 1.6.5 Vi khuẩn Proteus spp 38 CHƢƠNG II 40 VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 40 2.1 VÂT LIÊU 41 2.1.1 Đị đ ểm thời gian nghiên cứu 41 2.1.2 Đ t ng nghiên cứu 41 2.1.3 T ết ị n c mô tr ờn 41 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 42 2.2.1 B trí thí nghiệm 42 2.2.2 Quy trình lấy mẫu phân lập 44 2.2.3 Quy tr n định danh 45 2.2.4 Kỹ thuật th ch t đĩ 2.2.5 P n s n đồ bằn p n p p uếch tán kháng sinh tẩm kháng sinh 50 n p áp x c định nồn đ ức chế t i thiểu kháng sinh (MIC) 52 2.2.6 Th nghiệm Hodge Test biến đổi phát carbapenemase 55 CHƢƠNG III 58 ẾT QUẢ VÀ BIỆN UẬN 58 3.1 ĐẶC TÍNH MẪU NGHIÊN CỨU VÀ ĐẶC ĐIỂM KHÁM CHỮA BỆNH 59 3.1.1 Đặc tính mẫu nghiên cứu 59 3.1.2 Đặc đ ểm khám ch a bệnh 60 3.2 KẾT QUẢ PHÂN LẬP VÀ ĐỊNH DANH 61 3.2.1 Kết phân lập 61 3.2.2 Kết định danh 63 SVTT: PHẠM THỊ THANH THUÝ ii KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP GVH : T S ƯƠNG NHẬT LINH 3.3 XÁC ĐỊNH TỶ LỆ VI KHUẨN ĐƯỜNG RUỘT TIẾT CARBAPENEMASE 65 3.3.1 X c định tỷ lệ E coli tiết carbapenemase 65 3.3.2 X c định tỷ lệ Acinetobacter spp tiết carbapenemase 68 3.3.3 X c định tỷ lệ Klebsiella spp tiết carbapenemase 71 3.3.4 X c định tỷ lệ Pseudomonas spp tiết carbapenemase 75 3.4 XÁC ĐỊNH TỶ LỆ ĐỀ KHÁNG KHÁNG SINH CỦA CÁC VI KHUẨN TIẾT CARBAPENEMASE 78 3.4.1 X c định tỷ lệ đề kháng kháng sinh E coli tiết carbapenemase 79 3.4.2 X c định tỷ lệ đề kháng kháng sinh Klebsiella spp tiết carbapenemase 80 3.4.3 X c định tỷ lệ đề kháng kháng sinh Acineobacter spp tiết carbapenemase 82 3.4.4 X c định tỷ lệ đề kháng kháng sinh P aeruginosa tiết carbapenemase 83 3.5 XÁC ĐỊNH NỒNG ĐỘ ỨC CHẾ TỐI THIỂU CỦA KHÁNG SINH (MIC) 85 3.5.1 Kết gía trị MIC lo n s n đ i vời E.coli tiết carbapenemase 85 3.5.2 Kết giá trị MIC lo n s n đ i v i Klebsiella spp tiết carbapenemase 87 3.5.3 Kết giá trị MIC lo n s n đ i v i Acinetobcter spp tiết carbapenemase 88 3.5.4 Kết giá trị MIC lo n s n đ i v i P aeruginosa tiết carbapenemase 90 3.6 KỸ THUẬT HODGE TEST BIẾN ĐỔI XÁC ĐỊNH ENZYM CARBAPENEM 93 3.6.1 Kết kỹ thuật Hodge Test biến đổi 93 CHƢƠNG IV 97 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 97 4.1 KẾT LUẬN 98 SVTT: PHẠM THỊ THANH THUÝ iii KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP GVH : T S ƯƠNG NHẬT LINH 4.2 ĐỀ NGHỊ 99 TÀI LIỆU THAM KHẢO 101 SVTT: PHẠM THỊ THANH THUÝ iv KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP GVH : T S ƯƠNG NHẬT LINH DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT Chữ viết tắt ESBL Tên Tiếng Anh Extended - spectrum beta lactamase Tên Tiếng Việt Men beta lactamase phổ r ng Mô tr ờng khảo sát Indol- di IM Indol – Motility KIA Kligler iron agar Th ch Kligler iron LDC Lysine decarboxylase Men lysine decarboxylase MC MacConkey agar Th ch MacConkey MIC Minimum inhibitory concentration Nồn đ ức chế t i thiểu MHA Mueller Hinton agar Th ch Mueller Hinton MRVP Methyl red – Voges Proskauer PBP Penicillin binding protein AMC Amoxicillin – clavulanic acid AmpC Ampicillin class C β – lactamase ATCC American Type Culture Collection CLSI CTX – M đ ng Mô tr ờng Methyl red – Voges Proskauer Protein gắn penicillin Clinical and Laboratory Standards Institute Cefotaxime resistance SVTT: PHẠM THỊ THANH THUÝ v KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP EDTA ESBL IMI GES KPC Ethylene diamine tetraacetic acid Extended spectrum – β – lactamase imipenem hydrolyzing β – lactamase Guiana extended spectrum Klebsiella pneumoniae carbapenemase IMP Mipenemase MBL Metallo β – lactamase NDM – NMC OXA GVH : T S ƯƠNG NHẬT LINH New Delhi Metallo β – lactamase not metalloenzyme carbapenemase Oxacillinase SVTT: PHẠM THỊ THANH THUÝ vi KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP GVH : T S ƯƠNG NHẬT LINH DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Cấu trúc phân t kháng sinh nhóm carbapenem 14 Hình Hình ảnh nhu m gram vi khuẩn Klebsiella spp 29 Hình 1.3 Hình thái khuẩn l c Klebsiella spp mô tr ờng MacConkey 30 Hình 1.4 Hình ảnh nhu m gram vi khuẩn P.aeruginosa 35 Hình 1.5 Hình thái khuẩn l c P aeruginosa mô tr ờng MacConkey .36 Hình 2.1 P n p pt c thí nghiệm n s n đồ tìm MIC bằn p n pháp pha loãng kháng sinh dãy ng nghiệm liên tiếp 54 Hình 3.1 Phân lập mẫu p n mô tr ờng ChromID ESBL (A) môi tr ờn romI c ản (không kháng sinh) (B) .63 Hình 3.2 Hình thái khuẩn l c tác nhân phân lập mẫu p n mô tr ờng ChromID ESBL 63 SVTT: PHẠM THỊ THANH THUÝ vii KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP GVH : T S ƯƠNG NHẬT LINH DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Bảng so sánh carbapenemase theo hệ th ng phân lo i Ambler Bush (và c ng s ) 17 Bảng 1.2 Họ enzym oxacillinase .20 Bảng 1.3 So sánh ranh gi i phát c c đ ểm gãy kháng sinh nhóm carbapenem v i chủng vi khuẩn đ ờng ru t 25 Bảng 3.1 Mô tả đặc tính mẫu nghiên cứu 59 Bảng 3.2 Mô tả đặc đ ểm khám ch a bệnh .60 Bảng 3.3 Kết phân lập t mẫu phân thu thập 61 Bảng 3.4 Tỷ lệ n ời mang E coli tiết carbapenemase t o đặc đ ểm dân s mẫu nghiên cứu 65 Bảng 3.5 Tỷ lệ n ời mang E coli tiết carbapenemase t o đặc đ ểm khám ch a bệnh 66 Bảng 3.6 Tỷ lệ n ời mang Acinetobacter spp tiết c r p n m s t o đặc đ ểm dân s mẫu nghiên cứu 68 Bảng 3.7 Tỷ lệ n ời mang Acinetobacter spp tiết c r p n m s t o đặc đ ểm khám ch a bệnh 69 Bảng 3.8 Tỷ lệ n ời mang Klebsiella spp tiết c r p n m s t o đặc đ ểm dân s mẫu nghiên cứu 72 Bảng 3.9 Tỷ lệ n ời mang Klebsiella spp tiết c r p n m s t o đặc đ ểm khám ch a bệnh 73 Bảng 3.10 Tỷ lệ n ời mang Pseudomonas aeruginosa tiết c r p n m s t o đặc đ ểm dân s mẫu nghiên cứu .75 Bảng 3.11 Tỷ lệ n ời mang Pseudomonas aeruginosa tiết carbapenemase theo đặc đ ểm khám ch a bệnh 76 SVTT: PHẠM THỊ THANH THUÝ viii GVH : T S ƯƠNG NHẬT LINH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP TÀI LIỆU TIẾNG ANH [1] Adjei M A (2010), "A retrospective evaluation of Ciprofloxacin use at Kwame Nkrumah University of Science and Technology (Knust) Hospital, Kum s pp 18 ‒ 19 [2] Am l r R P t l (1991) “A st n r num r n sc m for t cl ss A beta-l ct m s s” Biochem J, 276, pp 269 – 270 [3] Amj A M rz I.A A s S.A F rw U Z F (2011) “Mo l Hodge Test: A simple and effective test for detection of carbapenemase pro uct on” department of microbiology, Armed Forces of Pathology, Rawalpindi Pakistan (3), pp 189 – 193 [4] Anton Y P n v Hoop r (2010) “Hosp t l - Acquired Infections Due to Gram - Negative Bact r ” N Engl J Med, 362(19), pp 1804 - 1813 [5] Bradford, P.A., Urban C, Mariano N, Projan S.J., Rahal J.J., Bush K (1997), “Im p n m r s st nc n Klebsiella pneumoniae is associated with the combination of ACT-1, a plasmid-mediated AmpC b-lactamase, and the loss of n out r m m r n prot n” Antimicrob Agents Chemother, 41, pp 563 569 [6] Bratu S, Landman D, Haag R, Recco R, Eramo A, Alam M, Quale J (2005), “R p spr of c r p n m-resistant Klebsiella pneumoniae in New York City: a new threat to our ant ot c rm m nt r um” Arch.Intern.Med, 165(12), pp 1430-1435 Bratu S, Mooty M, Nichani S, et al (2005), “Em r nc of KP poss ss n Klebsiella pneumoniae in Brooklyn, New Yor : p m olo y n r comm n t ons for t ct on” Antimicrob Agents Chemother, 49, pp 3018 - 3020 [7] uc n n R E G ons N E (1994) r y’s m nu l of t rm n t v bacteriology, W E Johnson Library, pp 217- 322 SVTT: Phạm Thị Thanh Thuý 103 GVH : T S ƯƠNG NHẬT LINH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP [8] us K J co y G A n M ros A A (1995) “ A funct on l clacsification scheme for β – lactamases and its correlation with molecular structur ” Antimicrob Agents Chemother, 39, pp.1211 – 1233 o t l “R s f ctors n cl n c l outcom s of nosocom l mult – drug [9] resistant Pseudomonas aeruginosa nf ct ons” J Hosp Inf ct 2004 57: 112 Clinical and Laboratory Standards Institute (2013) “P rform nc [10] Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; Twenty – Third Inform t on l Suppl m nt” Clinical and Laboratory Standards Institute, M100 – S23 Vol 33 (No1), pp.44 – 52 [11] Chain E., Florey H W., Gardner A D., Heatley N G., Jennings M A., Orr-Ew n J S n rs A G (2005) “T mot r p ut c [12] A cl ss c: p n c ll n s nt” 1940 Clin.Orthop.Relat Res, 439, pp 23 – 26 Chen L., K D Chavda, J R Mediavilla, M R Jacobs, M H Levi, R onomo n N Kr sw rt (2012) “Partial excision of blaKPC from Tn401 in carbapenem - resistant Klebsiella pneumoniae” Ant m cro Agents Chemother 56 (3): 1635 – 1638 [13] Deshpande L.M., Jones R.N., Fritsche T.R., Sader H.S (2006), “Occurr nc n Ent ro ct r c [14] c r ct r z t on of c r p n m s -producing : r port” Microb Drug Resist, 12(4), pp 223 - 230 wor n M (2006) “The Prokaryotes A handbook on the Biology of Bacteria: Symbiotic associations, biotechnology, applied microbiology”, Springer, Vol 1, pp.159 - 196 [15] Garcia – Fernandez A., L Villa, C Carta, C Venditti, A Giordano, M V n t M ncun n A r ttol (2012) “Klebsiella pneumoniae ST258 producing KPC - identìied in italy carries novel plasmid and OmpK36/ OmpK35 porin variants” 2145.Antimicrob Agents chemother 56(4): 2143 – 2145 SVTT: Phạm Thị Thanh Thuý 104 GVH : T S ƯƠNG NHẬT LINH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP [16] GARP - V tn m (2010) “S tu t on An lys s on Ant r s st nc n V tn m” Glo l Ant ot c Us n ot c R s st nc P rtn rs p (GARP) - Vietnam, Hanoi, Vietnam [17] GARP – V tn m (2010) “S tu t on An lys s on Ant r s st nc ot c Us n n V tn m” Global Antibiotic Resistance Partnership (GARP) – Vietnam, Hanoi, Vietnam [18] Gootz T D., M K Lescoe, F Dib – Hajj, B A Dougherty, W He, P Della – Latta and R C Hu r (2009) “Genetic organization of transosase regions surrounding blaKPC carbapenemase genes on plasmids from Klebsiella pneumoniae isolate in a New York city hospital” Antimicrob Agents Chemother 53(5): 1998 – 2004 [19] Jorgensen m., Givney R., Pegler M., Vickey A., Funnel G (1996), “ Typing multidrug – resistant Staphylococcus aureus: conflicting epidemiological data produced by genotypic and phenotypic methods clarified by phylogenetic analysis” J l n M cro ol 34 pp 398 - 403 [20] Kader A A., Kumar A., and Kamath K A (2007), "Fecal carriage of extended-spectrum beta-lactamase producing Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae in patients and asymtomatic heathy individuals" Infect Control Hosp Epidemiol, 28(9), pp 1114 - 1116 [21] Krisztina M Papp – Wallace et al ( 2011), "Carbapenems: Past, Present, and Future" Antimicrobial Agent and Chemotherapy, 55(11), pp 4943 – 4960 [22] Kum r s my K K t l (2010) “Em r nc of n w nt ot c resistance mechanism in India, Pakistan, and the UK: a molecular, olo c l n [23] p m olo c l stu y” L nc t Inf ct s 10 pp 597 – 602 Kuo S C., Chiang M C., Lee W S., et al (2012), "Comparison of microbiological and clinical characteristics based on SSCmec typing in patients with community – onset meticillin resistant Staphylococus aureus (MRSA) bacteraemia", Int J Antimicrob Agents, 39 (1), pp 22 – 26 SVTT: Phạm Thị Thanh Thuý 105 GVH : T S ƯƠNG NHẬT LINH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP [24] Kuster J G., Van Vliet A H., Kuipers E J (2006), "Pathogenesis of Helicobacter Pylori infection", Clin Microbiol Rev, 19(3), pp 449 – 90 [25] Lowy F D (2003), "Antimicrobial resistance: the example of Staphylococcus aureua", J Clin Invest 111 (9), pp 1265 - 73 [26] Luvsansharav U O., et al (2011), "Prevalence of fecal carriage of extended-spectrum beta-lactamase-producing Enterobacteriaceae among healthy adult people in Japan.", J Infect Chemother, 17(5), pp 722 [27] MacKenzie F.M., Forbes K.J., Dorai-John T, Amyes S.G., Gould I.M (1997) “Em r nc of c r p n m-resistant Klebsiella pneumoniae” Lancet, 350, pp 783 [28] Marque S., Poirel L., Heritier C., Brisse S., Blasco M D., Filip R., om n G N s T plasmidmediated n Nor m nn P (2005) “R carbapenem-hydrolyzing on l occurr nc of oxacillinase OXA-58 in Acinetobacter spp.” Europe J Clin Microbiol, 43, pp 4885 – 4888 [29] M rs F J n S N m AmpC – beta lactamase” P [30] r (2011) “Review of carbapenemase and tr Inf ct s J 30(12): 1094 – 1095 Miralyn C Roberts et al (1999), Nomenclature for Macrolide and Macrolide Lincosamide - Streptogramin B Resistance Derterminant Antimicrobial Agents and Chemotherap, 43(12), pp 2823 – 2830 [31] Morr s F oyl Lu n I on on J H l N O’ onn ll L Power, T W Boo, H Dhanji, C Lavalle, N Woodford and M Cormican (2011) “Production of KPC – Carbapenemase by an Escherichia coliclinical íolate belonging to the international ST131 clone” Ant m cro Agént hemother 55(10): 4935 – 4936 [32] Nor m nn P t l (2011) “ o s ro -spectrum beta-lactam resistance due to NDM-1 herald the end of the antibiotic era for treatment of infections caused by Gram - n tv ct r ?” J Antimicrob Chemother, 66(4), pp 689 – 692 SVTT: Phạm Thị Thanh Thuý 106 GVH : T S ƯƠNG NHẬT LINH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Nor m nn P [33] ort t L n Po r l L (2012) “ in Enterobacteriaceae: r s t storm ” r p n m r s st nc Trends in Molecular Medicine,18(5), pp 263 - 272 [34] Peleg A Y., Franklin C., Walters L J., Bell J M., and Spelman D W (2006) “OXA - 58 and IMP-4 carbapenem-hydrolyzing beta-lactamases in an Acinetobacter junii loo cultur sol t from Austr l ” Antimicrob Agents Chemother, 50, pp 399 00 [35] Pereira L.P., Phillips M., Ramlal H., Teemul K., Prabhakar P (2004), “T r Tr n n r t on c p lospor n us :n for n nt n t rt ry osp t l n Port of Sp n ot c pol cy” BMC Infectious Diseases, 4(1), pp 59 Po sc un R Ullm nn U (1998) “Klebsiella spp as nosocomial [36] pathogens: epidemiology, taxonomy, typing methods, and pathogenicity f ctors” Clinical microbiology reviews, 11(4), pp 589 [37] Robledo I E., Aquino E E., Sante M I., Santana J L., Otero D M., Leon C F., Vazquez G J (2010) “ t ct on of KP n Acinetobacter spp n Pu rto R co” Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 54(3), pp.1354 – 1357 Rust m I Am nov (2010) “A [38] lessons learned and challenges for t r f story of t nt ot c r : futur ” Front Microbiol, 1(134), pp - [39] Sekar U and Shanthi M (2009), "The expanding family of beta- lactamases", J Acad Clin Microbiol 11(2), pp 72 - 86 [40] Tsakris A., Kristo I., Poulou A., Markou F., Ikonomidis A., Pournaras S (2008) “F rst occurrence of KPC – – possessing Klebsiella pneumoniae in a Greekhospital and recommendation for detection with boronic acid sct sts” Journal of Antimicrobial Chemotherapy, 62, pp.1257 – 1260 [41] Valverde A., Coque T M., M Paz Sanchez-Moreno, et al (2004), "Dramatic increase in prevalence of fecal carriage of extended spectrum SVTT: Phạm Thị Thanh Thuý 107 GVH : T S ƯƠNG NHẬT LINH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP beta-lactamase producing Enterobacteriaceae during nonoutbreak situations in Spain" J Clin Microbiol, 42(10), pp 4769 - 4775 [42] Walsh T R (2010) “Emerging carbapenemase: a global perspective” Int J Ant m cro A nts 36 Suppl 3: S8 – 14 [43] W ls T.R (2003) “Section III: Antibiotic Resistance, In: Antibiotics: Action, Origins, Resistance” Am Soc M ro ol pp 89 – 155 [44] WHO (2011), Guidelines for control and prevention of multi-drug resistantorganisms (MDRO) excluding MRSA in the healthcare setting [45] Y t H t l (2001) “Nov l c r p n m-hydrolyzing blactamase, KPC - 1, from a carbapenem - resistant strain of Klebsiella pneumoniae” Antimicrob Agents Chemother, 45, pp 1151 – 1161 [46] Yong D, Toleman MA, Giske CG, Cho HS, Sundman K, Lee K, Walsh TR (2009), "Characterization of a new metallo – beta - lactamase gene, bla (NDM - 1), and a novel erythromycin esterase gene carried on a unique genetic structure in Klebsiella pneumoniae sequence type 14 from India" Antimicrob Agents Chemother 53 (12), pp 5046 – 5054 TÀI LIỆU INTERNET [1] http://en.wikipedia.org/wiki/carbapenem SVTT: Phạm Thị Thanh Thuý 108 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP PHỤ LỤC PHỤ LỤC PHỤ ỤC 1: PHIẾU ĐỒNG Ý PHIẾU ĐỒNG Ý Tô tên:…………………………………………………….s n n m:……………… Tô đọc hiểu t ôn t n àn c o n ời tham gia nghiên cứu m c đ c nghiên cứu Tôi hiểu rằng:  Tôi tham gia nghiên cứu s t nguyện  Tôi t ch i trả lời câu h i mu n  Tôi hiểu tất câu trả lờ mà tô đ Tô đồng ý tham gia vào nghiên cứu r đ  Có c gi r ên t mật  Không Ngày: _/ _/ _ Ký tên SVTT: Ph m Thị Thanh Thuý 109 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP PHỤ LỤC PHỤ LỤC 2: PHIẾU ĐIỀU TRA Họ tên: Tuổi: Gi i tính: Nam  N  Địa chỉ: Có u ng kháng sinh vòng ba tháng trở l i: Có Không Nếu có xin ghi rõ kháng sinh lo i Nguồn g c kháng sinh mà anh chị s d ng: (1) c sĩ ê to (2) Do nhân viên nhà thu c t vấn (3) T ý mua thu c s d ng Anh/ chị s d n n sn n (1) Đ n đủ liều n t ế nào: c ỉ dẫn (2)T giảm liều thấy bện t uyên ảm (3) T ý b liều thấy hết bệnh Có nhập viện tháng g n đ y y không: CóKhông XIN CHÂN THÀNH CÁM ƠN! SVTT: Ph m Thị Thanh Thuý 110 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP PHỤ LỤC PHỤ ỤC 3: MÔI TRƢỜNG – THUỐC THỬ MÔI TRƯỜNG Môi trƣờng Mueller Hinton Agar (MHA) o c ết t ịt 300 Casein Tn 17,5g t 1,5g Agar N 17g c cất 1000mL pH = 7,3 ± 0,2 Môi trƣờng ChromID ESB  Mô tr ờn romI c ản ( ôn ổ sun n sn c p lospor n t ế ệ 3) P pton c o nấm m n 17 H n p c ất s n màu Agar N 15g c cất 1000mL pH = 7,0 ± 0,2  K n s n c p lospor n t ế ệ 3: c n 57 / L c o vào n c cất vô tr n Làm n u ấp t ệt tr n đến mô tr ờn romI oản n ệt đ 45oC – 50o t c oản 3mL ản đ ổ sun c n s n c uẩn ị vào lắc Môi trƣờng Clark – ubs (môi trƣờng canh MR - VP) Pepton 7g Glucose 5g K2HPO4 5g N 1000 mL c cất pH : 6.9 ± 0.2 Môi trƣờng Nutrient Broth (NB) SVTT: Ph m Thị Thanh Thuý 111 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP PHỤ LỤC Cao thịt 5g Pepton b t 10g NaCl 5g N 1000 mL c cất pH = 7,4-7,6 Môi trƣờng di động NB 13g Agar N 5g c cất 1000mL Môi trƣờng Simmons Citrate Agar Sodium citrat 2g K2HPO4 1g MgSO4 0,2g Brothymol blue 0,08g NaCl 5g NH4H2PO4 1g Agar 18g pH: 6,9 ±0,2 Môi trƣờng IA ( ligler Iron Agar) Peptic đ n vật 15 o c ết t ịt o c ết nấm m n Proteose peptone 5g Lactose 10g Dextrose 1g FeSO4 0,2g NaCl 5g Na2S2O3 0,3g Phenol Red 0,024g SVTT: Ph m Thị Thanh Thuý 112 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP PHỤ LỤC Agar 15g pH: 7,4 ±0,2 SVTT: Ph m Thị Thanh Thuý 113 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP PHỤ LỤC THUỐ THỬ α– naphtol 5% α– naphtol : 5g Định mức ethanol 96O 100 mL Bảo quản 40C KOH 40% KOH Định mức n 40g c 100 mL Bảo quản chai thủy tinh t – tu n ovac’s Isoamyl alcohol butyl alcohol: 150 mL p-Dimethylaminobenaldehyde (DMBA): 10 g H l đậm đặc: 50 mL Cách pha: Cho aldehyde vào lco ol đun n ẹ h n h p 50-600C Cho t t axít vào h n h p Bảo quản chai màu 4oC Methyl Red Metyl red 0,5g Cồn 60o100ml Bảo quản chai t i màu 4oC SVTT: Ph m Thị Thanh Thuý 114 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP PHỤ LỤC PHỤ ỤC 5: HÌNH ẢNH Hình ọ lấ mẫu chứa môi trƣờng Car – Blair Hình Thử nghiệm oxidase Hình Thử nghiệm di động SVTT: Ph m Thị Thanh Thuý Hình Thử nghiệm Citrate Hình Thử nghiệm VP 115 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP PHỤ LỤC 19a Hình ết kháng sinh đồ chủng Acinetobacter spp tiết enz m Carbapenemase 6a Hình ết kháng sinh đồ chủng E.coli tiết enz m Carbapenemase SVTT: Ph m Thị Thanh Thuý 116 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP PHỤ LỤC Ống MIC Hình Kết giá trị MIC củ m p n m đ i v i E coli tiết carrbapenemase, ng s bắt đ u t bên phải tính qua Hình Kết th nghiệm Hodge Test biến đổi v i chủng Acinetobacter spp 125a tiết carbapenemase SVTT: Ph m Thị Thanh Thuý 117 ... nghiên cứu: xác định tỷ lệ vi khuẩn đƣờng ruột tiết carbapenemase đƣợc phân lập từ ngƣời khỏe mạnh cộng đồng  Mục tiêu X c định tỷ lệ vi khuẩn đ ờng ru t tiết c r p n m s đ c phân lập t n ời... TỶ LỆ VI KHUẨN ĐƯỜNG RUỘT TIẾT CARBAPENEMASE 65 3.3.1 X c định tỷ lệ E coli tiết carbapenemase 65 3.3.2 X c định tỷ lệ Acinetobacter spp tiết carbapenemase 68 3.3.3 X c định tỷ lệ Klebsiella... spp tiết carbapenemase 71 3.3.4 X c định tỷ lệ Pseudomonas spp tiết carbapenemase 75 3.4 XÁC ĐỊNH TỶ LỆ ĐỀ KHÁNG KHÁNG SINH CỦA CÁC VI KHUẨN TIẾT CARBAPENEMASE 78 3.4.1 X c định