Nghiên cứu thành phần hóa học trong lá cây sống đời ở Quảng Ngãi

Header Page of 126 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO Công trình ñược hoàn thành ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Người hướng dẫn khoa học: GS.TS Đào Hùng CưỜng NGUYỄN THỊ PHƯƠNG THẢO Phản biện 1: PGS.TS Trương Thị Minh Hạnh NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC TRONG LÁ CÂY SỐNG ĐỜI Ở QUẢNG NGÃI Chuyên ngành: Hóa hữu Mã số: 60 44 27 Phản biện 2: PGS.TS Trần Văn Thắng Luận văn ñược bảo vệ trước Hội ñồng chấm Luận văn tốt nghiệp thạc sĩ khoa học họp Đại học Đà nẵng vào ngày 30 tháng năm 2012 TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC * Có thể tìm hiểu luận văn tại: - Trung tâm Thông tin - Học liệu, Đại học Đà Nẵng Đà Nẵng - Năm 2012 Footer Page of 126 - Thư viện trường Đại học sư phạm, Đại học Đà Nẵng Header Page of 126 MỞ ĐẦU ñánh không chết Người Trinidad gọi sống ñời "Never Dead" Ở Ấn Độ sống ñời mọc nhiều vùng Bengal Tiếng Lý chọn ñề tài Phạn (Sankrit) gọi Parnabija có nghĩa có nhiều rễ Chữ Hóa học hợp chất thiên nhiên nói chung hợp chất Parnabija ñồng nghĩa với dhanvantari có nghĩa "thiêng liêng, có hoạt tính sinh học nói riêng lĩnh vực nghiên thần diệu" Như sống ñời "thiên thảo" lý cứu ñã ñang ñược nhiều nhà khoa học quan tâm Từ xa xưa ñó.[25] người ñã khám phá sức mạnh thiên nhiên biết sử dụng nhiều Nhân loại không hẹn lại gặp việc ñặt tên loại thực vật nhằm mục ñích chữa bệnh, ñồng thời tránh ñược số cho sống ñời qua hiệu trị liệu sức sống ngoan cường tác nhân có hại cho sức khỏe người ñược ñặt lên hàng ñầu Do vậy, việc nghiên cứu chất mang hoạt tính sinh học cao có Chính lý trên, chọn ñề tài: “ Nghiên cứu thành loài cây, cỏ có tác dụng thiết thực ñời sống hàng ngày phần hóa học sống ñời Quảng Ngãi” vấn ñề quan tâm toàn xã hội Mục ñích nghiên cứu Việt Nam nước có nguồn thực vật phong phú với Đối tượng phạm vi nghiên cứu khoảng 12000 loài, ñó ñã ñiều tra ñược 3850 loài ñược sử dụng 3.1 Đối tượng nghiên cứu làm thuốc thuộc 309 họ Đa phần mọc tự nhiên chưa ñược 3.2 Phạm vi nghiên cứu nghiên cứu cách ñầy ñủ, có hệ thống mặt khoa học Phương pháp nghiên cứu hoạt tính sinh học [5] 4.1 Nghiên cứu lí thuyết Có loài phổ biến Việt Nam, rơi xuống ñất 4.2 Nghiên cứu thực nghiệm bén rễ hình thành con, có sức sống mãnh liệt Người Việt Nam Ý nghĩa khoa học thực tiễn ñề tài gọi sống ñời hay trường sinh không chết Lá sống ñời rụng xuống ñất rễ nhiều sống ñời Cấu trúc luận văn Luận văn gồm 81 trang ñó có 14 bảng, 52 hình Phần Đó nguồn gốc tên Sống ñời mở ñầu (3 trang), kết luận kiến nghị (2 trang), tài liệu tham khảo Nó ñược gọi là: Lá bỏng dùng ñể chữa lửa (3 trang với 28 tài liệu) Nội dung luận văn gồm chương: hay nước sôi hay Lá cầm máu hay thuốc hàn cầm máu Chương 1: Tổng quan (23 trang) nhanh Lá Quan Âm có khả chữa trị ñược nhiều thứ bệnh Chương 2: Những nghiên cứu thực nghiệm (13 trang) Đức Bồ Tát Quán Thế Âm cứu ñộ Người Tây Ban Nha gọi Angelica (Thiên Thần Diệp) Người Trung Hoa gọi là: lạc diệp sinh rụng rễ sinh nhiều hay ñả có nghĩa Footer Page of 126 Chương 3: Kết thảo luận (37 trang) Header Page of 126 Chương TỔNG QUAN 1.2.2.1 Nguyên tắc chiết xuất (ly trích) [2] 1.2.2.2 Chiết chất rắn [1], [3] 1.1 Phương pháp nghiên cứu hợp chất thiên nhiên 1.2.2.3 Yêu cầu dung môi hữu sử dụng 1.1.1 Giới thiệu họ bỏng [26] 1.2.3 Phương pháp sắc kí khí ghép khối phổ (GC-MS) [6], [7] 1.1.1.1 Sơ lược họ 1.2.3.1 Định nghĩa 1.1.1.2 Một số loại thuộc họ bỏng 1.2.3.2 Ứng dụng 1.1.2 Giới thiệu số loại thuộc chi kalanchoe 1.2.3.3 Chu trình hoạt ñộng 1.1.3 Sơ lược sống ñời 1.2.4 Thử hoạt tính sinh học Cây sống ñời (danh pháp khoa học: Kalanchoe pinnata hay Bryophyllum calycinum, Bryophyllum pinnatum).Cây sống ñời thuộc: Giới (regnum): Plantae Bộ (ordo): Saxifragales( tai hùm) Họ (familia): Crassulaceae(thuốc bỏng) Chi (genus): Kalanchoe Đoạn (section): Bryophyllum Loài (species): K pinnata 1.1.3.1 Nguồn gốc, thân tên gọi [25] 1.1.3.2 Đặc ñiểm sống ñời [27] 1.1.4 Công dụng sống ñời 1.1.4.1 Giới thiệu số thuốc dùng sống ñời nước ta[20] 1.1.4.2 Công dụng sống ñời nước giới [1] 1.2 Phương pháp nghiên cứu lí thuyết thực nghiệm 1.2.1 Xác ñịnh số tiêu lý hóa 1.2.1.1 Độ ẩm, hàm lượng tro 1.2.1.2 Xác ñịnh hàm lượng kim loại 1.2.2 Chiết xuất Footer Page of 126 1.2.4.1 Thử hoạt tính kháng sinh vật kiểm ñịnh 1.2.4.2 Thử hoạt tính kháng oxi hóa Header Page of 126 Chương NHỮNG NGHIÊN CỨU THỰC NGHIỆM 2.1 Thu nguyên liệu 2.4.3 Khảo sát chiết soxhlet dung môi clorofom 2.4.3.1 Yếu tố thời gian Cây lấy xã Đức Nhuận, huyện Mộ Đức, tỉnh Quảng Ngãi (hình 2.1, 2.2) 2.4.3.2 Yếu tố rắn/lỏng 2.4.4 Khảo sát chiết soxhlet dung môi metanol 2.4.4.1 Yếu tố thời gian 2.4.4.2 Yếu tố rắn/lỏng 2.5 Xác ñịnh thành phần hóa học 2.5.1 Chưng ninh mẫu tươi 2.5.2 Chiết soxhlet mẫu khô 2.5.2.1 Chiết soxhlet dung môi hexan 2.5.2.2 Chiết soxhlet dung môi clorofom 2.5.2.3 Chiết soxhlet dung môi metanol Hình 2.1: Hoa sống ñời Hình 2.2: Cây sống ñời 2.6 Thử hoạt tính sinh học 2.2 Xử lí nguyên liệu 2.6.1 Thử hoạt tính kháng sinh 2.3 Xác ñịnh số tiêu lý hóa 2.6.2 Thử hoạt tính kháng oxi hóa 2.3.1 Xác ñịnh ñộ ẩm 2.3.1.1 Xác ñịnh ñộ ẩm tươi 2.3.1.2 Xác ñịnh ñộ ẩm khô 2.3.2 Xác ñịnh hàm lượng tro sống ñời 2.3.3 Xác ñịnh hàm lượng kim loại 2.4 Khảo sát yếu tố ảnh hưởng ñến trình chiết 2.4.1 Khảo sát chiết chưng ninh dung dịch KOH 2.4.1.1 Yếu tố thời gian 2.4.1.2 Yếu tố rắn/lỏng 2.4.2 Khảo sát chiết soxhlet dung môi hexan 2.4.2.1 Yếu tố thời gian 2.4.2.2 Yếu tố rắn/lỏng Footer Page of 126 Header Page of 126 10 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Sau khảo sát yếu tố thời gian tỉ lệ rắn/lỏng, ta chọn chiết soxhlet 20g bột sống ñời khô 200 ml hexan chiết 3.1 Kết xác ñịnh số tiêu lý hóa 3.1.1 Xác ñịnh ñộ ẩm 3.2.3 Khảo sát chiết soxhlet dung môi clorofom 3.1.1.1 Xác ñịnh ñộ ẩm tươi 3.2.3.1 Yếu tố thời gian Nhận xét: Độ ẩm trung bình tươi là: 92,777 % 3.1.1.2 Xác ñịnh ñộ ẩm khô Nhận xét: Độ ẩm trung bình khô là:14,338 % 3.1.2 Xác hàm lượng tro sống ñời Nhận xét: Hàm lượng tro trung bình sống ñời là: 3.2.3.2 Yếu tố rắn/lỏng Sau khảo sát yếu tố thời gian tỉ lệ rắn/lỏng, ta chọn chiết soxhlet 20g bột sống ñời khô 250 ml clorofom chiết 3.2.4 Khảo sát chiết soxhlet dung môi metanol 1,073 % 3.2.4.1 Yếu tố thời gian 3.1.3 Xác ñịnh hàm lượng kim loại 3.2.4.2 Yếu tố rắn/lỏng Căn vào ñịnh số 867/1998/ QĐ-BYT ngày 04 tháng Sau khảo sát yếu tố thời gian tỉ lệ rắn/lỏng, ta chọn năm 1998 Bộ y tế việc ban hành ”Danh mục tiêu chuẩn vệ chiết soxhlet 20g bột sống ñời khô 150 ml metanol chiết sinh ñối với lương thực thực phẩm”, ñối chiếu với mục hàm lượng kim loại cho phép rau bảng kết ta nhận thấy 3.3 Kết xác ñịnh thành phần hóa học thành phần kim loại sống ñời có hàm lượng nhỏ, 3.3.1 Chưng ninh mẫu tươi dung dịch KOH không gây ñộc hại ñến trình nghiên cứu sử dụng Kết ñịnh danh thành phần hóa học cấu tử 3.2 Kết khảo sát yếu tố ảnh hưởng ñến trình chiết dịch chiết sống ñời chưng ninh với dung dịch KOH 3.2.1 Khảo sát chiết chưng ninh dung dịch KOH phương pháp sắc kí khí ghép khối phổ (GC-MS) thể hình 3.1, 3.2.1.1 Yếu tố thời gian 3.2.1.2 Yếu tố rắn/lỏng Sau khảo sát yếu tố thời gian tỉ lệ rắn/lỏng, ta chọn chiết chưng ninh 200g sống ñời tươi 90 ml dung dịch KOH 3.2.2 Khảo sát chiết soxhlet dung môi hexan 3.2.2.1 Yếu tố thời gian 3.2.2.2 Yếu tố rắn/lỏng Footer Page of 126 3.2, 3.3, bảng 3.13 Header Page of 126 11 12 Hình 3.1: Phố cấu tử dịch chiết chưng ninh sống ñời dung dịch KOH Hình 3.2 : Các cấu tử dịch chiết chưng ninh sống ñời dung dịch KOH Nhận xét: Khi chưng ninh dung dịch KOH, ñịnh danh ñược 23 cấu tử Một số cấu tử có hàm lượng cao như: lauric acid, Footer Page of 126 Header Page of 126 13 14 ethyl ester chiếm 15,34%, bis(2-ethylhexyl) phthalate chiếm 11,16%, palmitic acid, ethyl ester chiếm 10,20% Trong ñó cấu tử có hàm lượng cao lauric acid, ethyl ester chiếm 15,34% 3.3.2 Chiết soxhlet dung môi hexan Kết ñịnh danh thành phần hóa học cấu tử dịch chiết sống ñời với dung môi hexan phương pháp sắc kí khí ghép khối phổ (GC-MS) thể hình 3.4, 3.5, 3.6, bảng 3.14 Error! Hình 3.4 : Phố cấu tử dịch chiết sống ñời dung môi hexan Hình 3.5 : Các cấu tử dịch chiết sống ñời dung môi hexan Nhận xét: Khi chiết dung môi hexan, ñược 32 cấu tử, ñịnh danh ñược 31 cấu tử Một số cấu tử có hàm lượng cao như: urs12-ene chiếm 13,25%, heineicosane,11-decyl- chiếm 11,17%, nonacosane chiếm 9,58% Trong ñó cấu tử có hàm lượng cao Footer Page of 126 Header Page of 126 15 16 urs-12-ene chiếm 13,25% Trong dịch chiết có hợp chất squalene chiếm 4,19% , hợp chất tự nhiên thuộc nhóm terpenoid có cấu tạo nhiều ñơn vị isoprene, chất tan dầu có tác dụng ngăn ngừa kìm hãm phát triển tế bào ung thư Vitamin E chiếm 3,56%, hợp chất chống oxi hóa, kìm hãm trình lão hóa, làm ñẹp da, góp phần quan trọng trình chuyển hóa thể 3.3.3 Chiết soxhlet dung môi clorofom Kết ñịnh danh thành phần hóa học cấu tử dịch chiết sống ñời với dung môi clorofom phương pháp sắc kí khí ghép khối phổ (GC-MS) thể hình 3.7, 3.8, 3.9, bảng 3.15 Hình 3.8 : Các cấu tử dịch chiết sống ñời dung Hình 3.7: Phố cấu tử dịch chiết sống ñời dung môi clorofom Footer Page of 126 môi clorofom Header Page of 126 17 18 Nhận xét: Khi chiết dung môi clorofom, ñược 37 cấu tử, ñịnh danh ñược 34 cấu tử Một số cấu tử có hàm lượng cao như: 11-n-decylheneicosane chiếm 22,21%, Hexadecanoic acid chiếm 13,60%, nonacosane chiếm 8,68% Trong ñó cấu tử có hàm lượng cao 11-n-decylheneicosane chiếm 22,21% Trong dịch chiết có hợp chất squalene chiếm 4,52%, vitamin E chiếm 2,88% 3.3.4 Chiết soxhlet dung môi metanol Kết ñịnh danh thành phần hóa học cấu tử dịch chiết sống ñời với dung môi metanol phương pháp sắc kí khí ghép khối phổ (GC-MS) thể hình: 3.10, 3.11, 3.12, bảng 3.16 Hình 3.10 : Các cấu tử dịch chiết sống ñời dung môi metanol Footer Page of 126 Hình 3.11 : Các cấu tử dịch chiết sống ñời dung môi metanol Header Page 10 of 126 19 20 Nhận xét: Khi chiết dung môi metanol, ñược 40 cấu hợp chất không phân cực, metanol chủ yếu hợp chất tử, ñịnh danh ñược 38 cấu tử Một số cấu tử có hàm lượng cao như: phân cực, clorofom cấu tử có hàm lượng lớn có hai hexadecanoic acid chiếm 37,13%, 9,12- octadecadienoic acid (Z,Z)- dạng chiếm 13,97%, octadecanoic acid chiếm 5,96% Trong ñó cấu tử có hàm lượng cao hexadecanoic acid chiếm 37,13% Trong dịch chiết với dung môi hexan, clorofom, metanol ñều có hợp chất squalene có tác dụng ngăn ngừa kìm hãm phát triển Trong dịch chiết có hợp chất erythritol chiếm 3,74% chất tế bào ung thư Vitamin E hợp chất chống oxi hóa, kìm làm lượng, không làm tăng insulin, không làm hãm trình lão hóa, làm ñẹp da, cần thiết cho bền vững ổn tăng ñường huyết, thực phẩm, dược phẩm dành cho người ñịnh màng tế bào, kích thích hệ thống miễn dịch hoạt ñộng bình tiểu ñường, béo phì Có hợp chất gamma tocopherol chiếm 0,91% thường, góp phần quan trọng trình chuyển hóa chất chống viêm chống xơ vữa ñộng mạch, ngăn ngừa trình lão thể Trong dịch chiết với dung môi metanol có hợp chất hóa, ngăn ngừa ñột quỵ, ức chế tăng trưởng tế bào ung thư erythritol chất làm thực phẩm, dược phẩm dành cho như: ung thư ruột kết, ung thư tuyến tiền liệt, vú, phổi… người tiểu ñường, béo phì, hợp chất gamma tocopherol chất có hợp chất squalene chiếm 5,18%, vitamin E chiếm 1,98% chống viêm chống xơ vữa ñộng mạch, ức chế tăng trưởng tế 3.3.5 Nhận xét chung bào ung thư Số lượng cấu tử dịch chiết sống ñời tươi chưng ninh dung dịch KOH chiết lại etylaxetat Đối với dịch chiết soxhlet sống ñời khô, dung môi clorofom ñịnh danh ñược nhiều cấu tử dung môi hexan, số ñó có cấu tử giống với cấu tử ñã ñịnh danh ñược hexan Số lượng cấu tử dung môi metanol lớn ñịnh danh ñược 40 cấu tử cao hexan clorofom Trong số ñó có cấu tử giống với cấu tử ñã ñịnh danh ñược hexan clorofom Ta thấy tăng ñộ phân cực dung môi lên số lượng cấu tử dịch chiết sống ñời thu ñược nhiều Các cấu tử có hàm lượng lớn chiết ñược dung môi hexan chủ yếu Footer Page 10 of 126 3.4 Kết thử hoạt tính sinh học 3.4.1 Thử hoạt tính kháng sinh Kết quả: Nồng ñộ ức chế 50% phát triển số vi sinh vật nấm kiểm ñịnh –IC50 ( µ g/mL) hình 3.13 Header Page 11 of 126 21 22 Hình 3.13 : Kết thử hoạt tính kháng sinh Nhận xét: Thử hoạt tính kháng sinh vật kiểm ñịnh gồm vi khuẩn: bacillus subtilis, staphylococcus aureus, escherichia coli, pseudomonas aeruginosa, salmonella enterica, lactobacillus fermentum nấm: candida albicans cho kết mẫu dịch chiết dung môi nước dung môi clorofom hoạt tính kháng chủng vi sinh vật với nồng ñộ < 128µg/ml Hình 3.14 : Kết thử hoạt tính chống oxi hóa 3.4.2 Thử hoạt tính kháng oxi hóa Kết quả: Thử hoạt tính chống oxi hoá DPPH thể hình 3.14 Nhận xét: Thử hoạt tính kháng oxi hóa DPPH cho kết mẫu dịch chiết dung môi hexan, metanol etylaxetat hoạt tính kháng oxi hóa nồng ñộ < 128µg/ml Footer Page 11 of 126 Header Page 12 of 126 23 24 - Khi chiết dung môi hexan, ñược 32 cấu tử, ñịnh danh KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Trong trình nghiên cứu ñề tài ñã ñạt số kết ñược 31 cấu tử Cấu tử có hàm lượng cao urs-12-ene chiếm 13,25% sau: - Khi chiết dung môi clorofom, ñược 37 cấu tử, ñịnh A KẾT LUẬN Một số tiêu lý hóa : ñộ ẩm trung bình sống ñời tươi danh ñược 34 cấu tử Cấu tử có hàm lượng cao 11-n- là: 92,777 %, ñộ ẩm trung bình sống ñời khô là: 14,338 decylheneicosane chiếm 22,21% %, hàm lượng tro trung bình sống ñời là: 1,073 %, hàm - Khi chiết dung môi metanol, ñịnh danh ñược 40 cấu lượng kim loại Pb, Cu, Zn, Fe, Cd phù hợp với tiêu hàm tử, ñịnh danh ñược 38 cấu tử Cấu tử có hàm lượng cao lượng kim loại ñáp ứng “Tiêu chuẩn vệ sinh ñối với lương thực thực hexadecanoic acid chiếm 37,13% phẩm”, an toàn cho người sử dụng Thử hoạt tính sinh học cho kết quả: Khảo sát yếu tố ảnh hưởng ñến trình chiết cho kết quả: - Chiết chưng ninh 200g tươi 90 ml dung dịch KOH - Chiết soxhlet 20g bột sống ñời khô 200 ml hexan chiết - Chiết soxhlet 20g bột sống ñời khô 250 ml clorofom chiết - Chiết soxhlet 20g bột sống ñời khô 150 ml metanol - Thử hoạt tính kháng sinh vật kiểm ñịnh gồm vi khuẩn: bacillus subtilis, pseudomonas staphylococcus aeruginosa, aureus, salmonella escherichia enterica, coli, lactobacillus fermentum nấm: candida albicans cho kết mẫu dịch chiết dung môi nước dung môi clorofom hoạt tính kháng chủng vi sinh vật với nồng ñộ < 128µg/ml - Thử hoạt tính kháng oxi hóa DPPH cho kết mẫu dịch chiết dung môi hexan, metanol dịch chiết lại với chiết etylaxetat hoạt tính kháng oxi hóa DPPH nồng ñộ < Định danh hợp chất dịch chiết sống ñời cho kết 128µg/ml quả: B KIẾN NGHỊ - Khi chiết dung dịch KOH, ñịnh danh ñược 23 cấu tử - Nghiên cứu, xác ñịnh thành phần hóa học thân, rễ sống Cấu tử có hàm lượng cao lauric acid, ethyl ester chiếm ñời ñược trồng khu vực thổ nhưỡng khác ñể khảo sát mở 15,34% rộng phát triển sau - Phân lập chất tinh khiết Footer Page 12 of 126  ... trên, chọn ñề tài: “ Nghiên cứu thành loài cây, cỏ có tác dụng thiết thực ñời sống hàng ngày phần hóa học sống ñời Quảng Ngãi vấn ñề quan tâm toàn xã hội Mục ñích nghiên cứu Việt Nam nước có... mặt khoa học Phương pháp nghiên cứu hoạt tính sinh học [5] 4.1 Nghiên cứu lí thuyết Có loài phổ biến Việt Nam, rơi xuống ñất 4.2 Nghiên cứu thực nghiệm bén rễ hình thành con, có sức sống mãnh... phạm vi nghiên cứu khoảng 12000 loài, ñó ñã ñiều tra ñược 3850 loài ñược sử dụng 3.1 Đối tượng nghiên cứu làm thuốc thuộc 309 họ Đa phần mọc tự nhiên chưa ñược 3.2 Phạm vi nghiên cứu nghiên cứu cách