Nghiên Cứu Phân Lập Và Tuyển Chọn Giống Vi Sinh Vật Nội Sinh Từ Vùng Sinh Thải Đất Chua Mặn Phục Vụ Cho Sản Xuất Nông Nghiệp Và Bảo Vệ Môi Trường

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA MÔI TRƯỜNG -oOo KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN GIỐNG VI SINH VẬT NỘI SINH TỪ VÙNG SINH THÁI ĐẤT CHUA MẶN PHỤC VỤ CHO SẢN XUẤT NÔNG NGHIỆP VÀ BẢO VỆ MÔI TRƯỜNG Người thực Lớp Khóa Chuyên ngành Người hướng dẫn : : : : : ĐINH THỊ THU NGA MTC 57 KHOA HỌC MÔI TRƯỜNG TS NGUYỄN THỊ MINH HÀ NỘI, 2016 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA MÔI TRƯỜNG -oOo KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN GIỐNG VI SINH VẬT NỘI SINH TỪ VÙNG SINH THÁI ĐẤT CHUA MẶN PHỤC VỤ CHO SẢN XUẤT NÔNG NGHIỆP VÀ BẢO VỆ MÔI TRƯỜNG Người thực Lớp Khóa Chuyên ngành Người hướng dẫn Địa điểm thực tập : : : : : : ĐINH THỊ THU NGA MTC 57 KHOA HỌC MÔI TRƯỜNG TS NGUYỄN THỊ MINH Học viện Nông nghiệp Việt Nam HÀ NỘI, 2016 LỜI CAM ĐOAN Em xin cam đoan kết viết hoàn toàn chân thực chưa công bố nghiên cứu trước i LỜI CÁM ƠN Trong trình học tập Học viện Nông nghiệp Việt Nam, giúp đỡ thầy cô, đoàn thể, đặc biệt môn VSV – Khoa Môi trường tạo điều kiện, đến nay, em hoàn thành khóa học thực xong khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới cô Nguyễn Thị Minh tận tình hướng dẫn em hoàn thành tốt nghiên cứu Cảm ơn thầy cô, anh chị Phòng thí nghiệm Bộ môn vi sinh – Khoa môi trường phòng thí nghiệm Jica – Khoa Quản lý đất đai tạo điều kiện giúp đỡ em hoàn thành nghiên cứu Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới bạn bè, thầy cô gia đình giúp đỡ, động viên em suốt thời gian học tập nghiên cứu tạitrường Em xin chân thành cảm ơn! Sinh viên thực Đinh Thị Thu Nga ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i Em xin cam đoan kết viết hoàn toàn chân thực chưa công bố nghiên cứu trước .i LỜI CÁM ƠN ii Em xin chân thành cảm ơn! ii Sinh viên thực ii 2.4.Phương pháp nghiêncứu 28 2.4.7 Xác định tính đối kháng chủng giống VSVtheo phương pháp cấy vạch 32 Các chủng giống đánh giá tính đối kháng theo cặp theo phương pháp đường vuông góc Cross-Streak Các chủng VSV cấy thành cặp theo đường giao Nếu xuất vòng đối kháng (các chủng mọc cách nhau) chủng đối kháng phối trộn chúng vào chất mang 32 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 35 iii DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Giá trị sản xuất nông lâm thủy sản quý năm 2016 Bảng 1.2 Liều lượng bón phân đạm tích lũy NO3- nước ngầm, nước mặt Bảng 1.3 Tình hình sử dụng thuốc bảo vệ thực vật Việt Nam ước tính số lượng vỏ bao bì thải Bảng 1.4 Dư lượng HCBVTV số loại rau .10 Bảng 3.1 So sánh tầng chứa vật liệu sinh phèn theo tiêu chuẩn FAO đất phèn huyện Kiến Thụy 36 Bảng 3.2 So sánh số tính chất đất phèn .36 huyện Kiến Thụy Hải Phòng với đất phèn Nam Bộ 36 Bảng 3.3 Kết phân tích đất khu vực lấy mẫu Hải Phòng 37 Bảng 3.4 Kết phân lập chủng giống VSV 38 Bảng 3.5.Kết đánh giá khả phân giải xenlulozo, lân khả sinh chất kích thích sinh trưởng chủng giống 47 Bảng 3.6 Khả tích thích ứng pH chủng VSV nội sinh 52 Bảng 3.7 Khả thích ứng nhiệt độ chủng VSV nội sinh .55 Bảng 3.8 Khả phân giải tinh bột chủng VSV nội sinh 56 Bảng 3.9 Đặc điểm sinh học chủng VSV tuyển chọn .60 Bảng 3.10 Chất lượng chế phẩm dinh dưỡng vi sinh 63 Bảng 3.11 Ảnh hưởng CPDDVS đến dự sinh trưởng 64 Phát triển mồng tơi 64 Bảng 3.12 Tính chất đất trước sau thí nghiệm (sau 30 ngày) 65 iv DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Tăng trưởng đất nông nghiệp hữu theo châu lục .4 2005-2013 .4 Hình 1.2 Phát triển số lượng nước sản xuất nông nghiệp hữu Hình 3.1 Một số chủng vi sinh vật nội sinh phân lập .42 Hình 3.2 Vòng phân giải xenlulo số chủng VSV 51 Hình 3.3 Vòng phân giải lân số chủng VSV 51 Hình 3.4 Khả thích ứng pH chủng 3RC3 54 Hình 3.5 Vòng phân giải tinh bột chủng 3RXC3 chủng 8LC .57 Hình 3.6 Tính đối kháng chủng tuyển chọn 58 Hình 3.7.Các ống giống chứa chủng VSV chọn .59 Hình 3.8 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng 3RXC3 61 Hình 3.9 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng 3TC2 .61 Hình 3.10 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng 3TKT2 61 Hình 3.11 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng 3RC2 61 Hình 3.12 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng 3TXC3 62 Hình 3.13 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng 3LC2 .62 Hình 3.14 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng YLD2 62 Hình 3.15 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng 3LDQ2 62 Hình 3.16 Thí nghiệm chậu vại mồng tơi 65 v DANH MỤC VIẾT TẮT CPDDVS Chế phẩm dinh dưỡng vi sinh FiBL Viện nghiên cứu truyền thông nông nghiệp hữu IAA Indole – – axetic acid IFOAM Hiệp hội nông nghiệp hữu quốc tế HCBVTV Hóa chất bảo vệ thực vât NNHC Nông nghiệp hữu vi MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Nông nghiệp ngành mũi nhọn kinh tế Việt Nam.Thế nên, tập trung phát triển nông nghiệp ưu tiên hàng đầu nay.Tuy nhiên, lãnh thổ Việt Nam, có không vùng đất không màu mỡ, tiêu biểu nhóm đất phèn.Việc phá rừng, đốt rừng, làm nương rẫy với biến đổi khí hậu toàn cầu làm ảnh hưởng đến hệ sinh thái trồng gây hậu lớn cho người sau này.Chính mà việc cải tạo sử dụng lại vùng đất phèn xem biện pháp tốt nhất, thích ứng với biến đổi khí hậu Ngành nông nghiệp nước ta phụ thuộc nhiều vào phân bón hóa học thuốc bảo vệ thực vật Điều gây tình trạng thoái hóa đất, cân sinh thái, gây ô nhiễm môi trường tồn dư chất độc hại nông sản phẩm cao Vì vậy, việc phát triển ngành nông nghiệp hữu bền vững với việc tăng cường sử dụng chế phẩm sinh học phân bón hữu canh tác trồng nhằm đảm bảo an toàn sinh học bảo vệ môi trường mà đảm bảo suất chất lượng nông sản yêu cầu tái cấu nông nghiệp Việt Nam Vi sinh vật(VSV) nội sinh VSV sống mô thực vật tìm thấy vùng rễ, rễ, thân, thực vật Theo Zinniel cộng (2002), vi khuẩn nội sinh tìm thấy nhiều loại trồng Hoa Kỳ, chúng không gây hại hay cạnh tranh dinh dưỡng với chủ; trái lại chúng xúc tiến sinh trưởng, phát triển trồng Vi khuẩn nội sinh thúc đẩy trình chuyển hóa phát triển lông rễ cách mạnh mẽ giảm kéo dài rễ (Harari cộng sự, 1988) Vi khuẩn nội sinh thường giúp tăng cường sinh trưởng cách tổng hợp kích thích tố auxin (IAA) (Barbieri cộng sự, 1986) VSV nội sinh xem đối tượng quan trọng phân lập sàng lọc để sản xuất chế phẩm sinh học ứng dụng sản xuất nông nghiệp bảo vệ môi trường Lợi dụng đặc tính VSV sống nội sinh tế bào mô thực vật rút ngắn thời gian thích nghi chế phẩm sinh học VSV nội sinh tạo nhiều chất kháng sinh nấm bệnh, kích thích sinh trưởng cho đồng thời không ảnh hưởng đến môi trường sức khỏe cộng đồng Xuất phát từ thực tế trên, nhằm mục đích phục vụ cho sản xuất nông nghiệp bảo vệ môi trường, tiến hành đề tài: “Nghiên cứu phân lập tuyển chọn giống VSV nội sinh từ vùng sinh thái đất chua mặn phục vụ cho sản xuất nông nghiệp bảo vệ môi trường.” Mục tiêu nghiên cứu Tuyển chọn giống VSV nội sinh có nguồn gốc địa từ đất phèn, có tác dụng phân giải chuyển hóa chất hữu cơ, tạo dinh dưỡng dễ tiêu, chống chịu cao với điều kiện bất lợi, hạn chế bệnh hại, tăng cường sinh trưởng phát triển trồng,…phục vụ cho sản xuất nông nghiệp bảo vệ môi trường 3.4 Đánh giá hiệu chế phẩm dinh dưỡng vi sinh sản xuất từ VSV nội sinh 3.4.1 Chất lượng chế phẩm dinh dưỡng vi sinh Chế phẩm dinh dưỡng vi sinh (CPDDVS) sản xuất dựa theo nguyên tắc hợp chủng chất mang không trùng chủng VSV tuyển chọn Kết chất lượng CPDDVS thể bảng 3.10 Bảng 3.10 Chất lượng chế phẩm dinh dưỡng vi sinh Chỉ tiêu CPDDVS TT 41- pH 7,80 - OM% 8,20 - N% 1,39 - P2O5% 0,029 - K2O% 3,91 - VSV hữu ích 2,66×109 ≥1,0×106 BNNPTNT, 2014 Ghi chú: (-) số liệu Kết bảng 3.10 cho thấy, tiêu đánh giá chất lượng CPDDVS đạt TT 41-BNNPTNT, 2014nên hoàn toàn đưa vào thử nghiệm ứng dụng Mặt khác, hàm lượng dinh dưỡng CPDDVS từ phế thải chăn nuôi đạt cao nên dùng để bón cho trồng 3.4.2 Đánh giá hiệu chế phẩm dinh dưỡng vi sinh 3.4.2.1 Hiệu chế phẩm sinh học đến sinh trưởng phát triển Sau 30 ngày làm thí nghiệm chậu vại tiến hành đo đếm trực tiếp tiêu sinh trưởng phát triển để đánh giá hiệu CPDDVS Kết đo đếm trình bày bảng 3.11 63 Bảng 3.11 Ảnh hưởng CPDDVS đến dự sinh trưởng Phát triển mồng tơi Chỉ tiêu Chiều cao Số Diện tích (cm2) Năng suất (cm) (g/chậu) Công thức Đối chứng 6,70 5,02 14,06 35,77 Xử lý chế phẩm 13,31 7,61 38,81 67,46 LSD% 0,73 0,24 3,50 3,62 CV% 4,20 2,10 4,80 2,50 Kết bảng 3.11 rõ phát triển rau tương đối khác công thức thí nghiệm Sự sinh trưởng rau công thức xử lý CPDDVS đạt cao công thức đối chứng (không xử lý CPDDVS) với tất tiêu theo dõi mức sai số có ý nghĩa - Chiều cao công thức xử lý CPDDVS cao công thức đối chứng gấp 1,99 lần - Số công thức xử lý CPDDVS cao công thức đối chứng 2,76 lần - Diện tích công thức xử lý CPDDVS cao công thức đối chứng 1,77 lần - Các tiêu như: trọng lượng cây, suất công thức xử lý CPDDVS cao công thức đối chứng Năng suất công thức xử lý CPDDVS cao gấp 1,89 lần công thức đối chứng Như vậy, sử dụng CPDDVS có tác dụng làm tăng cường sinh trưởng phát triển cây.Sự khác biệt cho ta thấy CPDDVS có tác dụng kích thích sinh trưởng phát triển trồng, cho suất cao nên có tiềm ứng dụng thực tế sản xuất 64 Hình 3.16 Thí nghiệm chậu vại mồng tơi 3.4.2.2 Hiệu cải tạo đất chế phẩm dinh dưỡng vi sinh Đánh giá hiệu cải tạo đất CPDDVS để xem chiều hướng thay đổi tính chất vật lý, hóa học sinh học đất.Kết phân tích đất trước sau thí nghiệm trình bày bảng 3.12 Bảng 3.12 Tính chất đất trước sau thí nghiệm (sau 30 ngày) Tính chất Chỉ tiêu Tính chất vật lý Tính chất hóa học pHKCl Độ ẩm OM (%) OC (%) N (%) Pts (%) Kts (%) Pdt (mg/100g đất) Kdt (mg/100g đất) VSV tổng số (CFU/g hay ml) Tính chất sinh học Trước thí nghiệm 6,80 28,31 2,30 1,05 0,24 0,18 1,41 2,08 6,98 2,9×106 Sau thí nghiệm CT1 CT2 6,74 6,61 29,10 29,32 2,69 2,98 1,19 1,61 0,31 0,35 0,16 0,21 1,38 1,42 1,65 2,68 6,17 7,52 7,8×107 9,6×108 Kết cho thấy CPDDVS có tác dụng cải tạo đất tốt Các tiêu dinh dưỡng dễ tiêu có chiều hướng tăng tác dụng cộng đồng VSV bổ sung CPDDVS: 65 - Lân dễ tiêu công thức xử lý CPDDVS (2,68 mg/100g đất) cao công thức (1,65mg/100g đất) 1,62 lần - Kali dễ tiêu công thức xử lý CPDDVS (7,52 mg/100g đất) cao công thức đối chứng (6,17 mg/100g đất) 1,22 lần - Số lượng VSV tổng số công thức xử lý CPDDVS 9,6×10 (CFU/g) cao nhiều so với công thức đối chứng 66 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Từ kết nghiên cứu đạt trên, sơ rút số kết luận sau: Kết khảo sát cho thấy đất phèn Hải Phòng chiếm diện tích nhiều tập trung vùng gần cửa sông chịu ảnh hưởng thủy triều, phản ứng đất chua, độ pH = 4÷4,5 hàm lượng muối sulfat nhiều thể rõ huyện Kiến Thụy – Hải Phòng Mẫu đất lấy khu vực lấy mẫu phục vụ cho phân lập giống VSV nội sinh xác định thuộc loại đất phèn, nhóm đất có lượng mùn lân tổng số trung bình, hàm lượng lân dễ tiêu nghèo mặn Kết phân lập 120 chủng VSV nội sinh từ lá, thân rễ loại trồng phổ biến đất phèn (khoai lang, xuyến chi, chuối lùn, …) Hầu hết chủng thuộc nhóm VSV mọc nhanh (khuẩn lạc hình thành trước 48h, hình thái khuẩn lạc chủ yếu nhày có dạng vết Đa số chủng phân lập thể hoạt tính enzyme cao, khả phân giải lân, khả tổng hợp IAA cao, chịu nhiệt tốt có khoảng thích ứng pH rộng Tám chủng giống VSV nội sinh tuyển chọn Pseudomonas 3RXC3, Azospirillum3RC2, Pseudomonas 3TKT2, Azospirillum 3TC2, Klebsiella, Burkholderia 3TXC3, Burkholderia 3LDQ2, Azospirillum YLD2có hoạt tính enzyme ngoại bào mạnh, khả phân giải lân mạnh, khả sinh chất kích thích sinh trưởng trồng cao, thích ứng pH rộng vừa chịu nhiệt độ cao dùng làm giống để sản xuất chế phẩm dinh dưỡng vi sinh Sử dụng CPDDVS từ VSV nội sinh có tác dụng kích thích sinh trưởng phát triển trồng Tất tiêu theo dõi (cao cây, số cây, diện tích lá) công thức sử dụng CPDDVS cao so với công 67 thức đối chứng mức sai số có ý nghĩa CPDDVS làm tăng cường sinh trưởng phát triển trồng (năng suất tăng gấp 1,89 lần) mà có xu hướng cải tạo đất, đặc biệt hàm lượng lân dễ tiêu tăng 1,62 lần hàm lượng kali dễ tiêu tăng 1,22 lần so với đối chứng Kiến nghị Thử nghiệm chế phẩm dinh dưỡng vi sinh tiến hành chậu vại, đề nghị đưa chế phẩm vào thử nghiệm quy mô lớn qua nhiều vụ để đánh giá xác hiệu kiểm tra sinh trưởng phát triển cải tạo đất chế phẩm dinh dưỡng vi sinh Đánh giá thời gian sống sót chủng VSV nội sinh CPDDVS Tiếp tục phân lập tuyển chọn chủng VSV nội sinh vùng sinh thái đất phèn khác 68 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Công nghệ xanh, 16/9/2014, “Tìm hiểu chế phẩm sinh học gì?” http://sinhhocvietnam.vn/tim-hieu-che-pham-sinh-hoc-la-gi/Thứ 2, 2/5/2016 Vũ Năng Dũng cộng (2009) Cẩm nang sử dụng đất nông nghiệp, Tập “Tài nguyên đất Việt Nam, trạng tiềm sử dụng” Nhà xuất khoa học kỹ thuật Cao Ngọc Điệp Nguyễn Ái Chi (2009) Phân lập đặc tính vi khuẩn nội sinh Khóm trồng đất phèn huyện Bến Lức, tỉnh Long An, Việt Nam Tuyển tập công trình nghiên cứu hội nghị Công nghệ sinh học năm 2009 tổ chức thành phố Hồ Chí Minh, 23-24, tháng 10 năm 2009 Nguyễn Thi Thu Hà, Hà Thanh Toàn Cao Ngoc Điệp (2009) Phân lập đặc tính dòng vi khuẩn nội sinh số cỏ chăn nuôi Tạp chí Công nghệ sinh học 7(2), 241-250 Trần Thị Lệ Hà, Cao Việt Hà, Nguyễn Hữu Thành (2009) Giáo trình thực tập thổ nhưỡng nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội Trần Minh Hiền, Trần Thị Kim Cúc, Mai Thanh Trúc, Ngô Thị Bích Ngọc, Đỗ Trung Bình ,ctv (2013) Ứng dụng công nghệ vi sinh sản xuât chế phẩm vi sinh phân hữu vi sinh http://iasvn.org/homepage/Ung-dung-cong-nghe-vi-sinh-san-xuat-chepham-vi-sinh-va-phan-huu-co-vi-sinh-4106.html Thứ 2, 2/5/2016 Lương Thị Hồng Hiệp Cao Ngọc Điệp (2011) Phân lập nhận diện vi khuẩn nội sinh cúc xuyến chi (Wedelia Trilobata (L.) Hitche) kỹ thuật PCR Tạp chí khoa học 2011:18a 168-176 Nguyễn Hữu Hiệp Nguyễn Thị Hải Lý (2012) Phân lập dòng vi khuẩn có khả phân hủy tinh bột Tạp chí Khoa học 2012:21a 37-44 69 Cao Việt Hưng (2001).Nghiên cứu số đặc điểm hình thái tính chất đất phèn huyện Kiến Thụy, thành phố Hải Phòng theo phân loại FAO- UNESCO http://luanan.nlv.gov.vn/luanan? a=d&d=TTbFfqzEzCkO2001.1.1&e= -vi-20 img-txIN -#Thứ 2, 9/5/2016 10 Phạm Hương, 2016, “Nitrat - hiểm họa từ việc lạm dụng phân bón” http://vnexpress.net/tin-tuc/khoa-hoc/trong-nuoc/nitrat-hiem-hoa-tu-vieclam-dung-phan-bon-3341897.html.Thứ 2, 9/5/2016 11 Tống Khiêm (2009), Báo khuyến nông, "Nguyên tắc canh tác nông nghiệp hữu làcơsởđểchứngminhthựcphẩmlàantoàncólợichosứckhỏe” 12 Minh Long, STINFO Số 11/2012, Nông nghiệp bền vững với chế phẩm sinh học http://www.cesti.gov.vn/khong-gian-cong-nghe/nong-nghiep-ben-vungvoi-che-pham-sinh-hoc.htmlThứ 2, 2/5/2016 13 Nguyễn Thị Minh (2005) Phân lập tuyển chọn nấm rễ Arbuscular Mycorrhizae để xử lý cho trồng Tạp chí Khoa học đất Việt Nam, số 23, 46-51 14 Nguyễn Thị Huỳnh Như, Nguyễn Hữu Hiệp, Nguyễn Minh Đời, Trần Nguyễn Nhật Khoa, Thái Trần Phương Minh (2013) Phân lập dòng vi khuẩn nội sinh có khả tổng hợp IAA cố định đạm chuối tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ, phần B: Nông nghiệp, Thủy sản Công nghệ Sinh học: 27(2013):24-31 15 Nông nghiệp năm 2015: Sức bật khó khăn 'kép', N.Hoàng (Tiền Phong), 2016, Bộ Nông nghiệp phát triển nông thôn-Văn phòng Bộ 70 http://www.nhandan.com.vn/kinhte/item/29420302-nong-nghiep-huu-conen-tang-cho-nong-nghiep-ben-vung.htmlThứ 2, 9/5/2016 16 Trần Thanh Phong, 2012, “Đánh giá khả cố định đạm vi khuẩn nội sinh đến suất chất lượng trái khóm trồng huyện Tân Phước, tỉnh Tiền Giang” http://gs.ctu.edu.vn/tomtat_LATS/VSVH_TTPhong.pdfThứ 4, 4/5/2016 17 Hải Thư, 25/04/2016, Nông nghiệp hữu cơ, tảng cho nông nghiệp bền vững 18 Hà Thanh Toàn, Mai Thu Thảo, Nguyễn Thu Phướng, TRần Lê Kim Ngân, Bùi Thế Vinh Cao Ngọc Điệp (2008) Phân lập vi khuẩn phân giải cellulose, tinh bột protein nước rỉ rác thành phố Cần Thơ Tạp chí Khoa học 2008:10 195-202 19 Nguyễn Duy Vĩnh (2013), Nông nghiệp Việt Nam thực trạng giải pháp, Bộ Nông nghiệp phát triển nông thôn-Vụ Kế hoạch http://vukehoach.mard.gov.vn/Default.aspx?id=1426Thứ 4, 4/5/2016 20 Ủy ban nhân dân thành phố Hải Phòng Mục tiêu, nhiệm vụ, giải pháp bảo vệ nguồn nước ngọt tại các sông: Rế, Giá, Đa Độ, Chanh Dương; kênh Hòn Ngọc; hệ thống trung thuỷ nông Tiên Lãng địa bàn thành phố Hải Phòng giai đoạn 2013-2020 21 VnExpress (14/01/2016) Hiểm họa từ việc lạm dụng phân bón http://khoahoc.tv/nitrat-hiem-hoa-tu-viec-lam-dung-phan-bon-69178Thứ 4, 4/5/2016 Tài liệu tiếng anh 22 Bergey (2009) Bergay manual’s of systermatic Bacteriology Second edition William B Whitman Springer, USA, p 19-21 71 23 Campbell I (1971) Comparison of Serological and Physiological Classification of the Genus Saccharomyces Journal of General Microbiology 3, p 189-198 24 De Schutter, Olivier “Report submitted by the Special Rapporteur on the right to food” http://3x39fmt0aja34zifjfnu4695x.wpengine.netdna-cdn.com/wpcontent/uploads/2011/03/20110308_UN_agroecology_report.pdfThứ 4, 4/5/2016 25 FAO, Organic agriculture can contribute to fighting hunger - But chemical fertilizers needed to feed the world http://www.fao.org/news/story/en/item/202820/icode/Thứ 5, 5/5/2016 26 FilB and IFOAM (2012): The wold Organic Agriculture: Statistics and emerging trends2012 27 FilB and IFOAM (2016): The wold Organic Agriculture: Statistics and emerging trends2016 http://www.worldwatch.org/node/4060Thứ 5, 5/5/2016 28 Paull, John (2011) "The Uptake of Organic Agriculture: A Decade of Worldwide Development", Journal of Social and Development Sciences, (3), pp 111-120 29 Peter Kampfer, Reiner M Kroppensted and Wolfgang Dott E (1991) A numerical classification of the genera Streptomyces and Streptoverticillium using miniaturized physiological tests Journal of General Microbiology, 137, p 1831-1891 30 The New Partnership for Africa's Development (NEPAD) Meeting Africa's Food Challenge https://web.archive.org/web/20100304023531/http://www.africafertilizers ummit.org/Thứ 5, 5/5/2016 72 PHỤ LỤC Phụ lục Thành phần môi trường Tryptone glucose yeast agar Tryptose Cao nấm men Glucose 5,0 g 2,5 g 1,0 g Phụ lục TT Tên trường LB MPA Gause NA Hansen LGI môi Khối lượng Khối lượng Thành phần (g/l (g/l Cao nấm men Peptone NaCl Cao thịt Peptone NaCl Tinh bột KNO3 K2HPO4 MgSO4 Peptone Cao thịt bò Cao nấm men NaCl Glucose KH2PO4 MgSO4.7H2O Peptone Sucrose K2HPO4 cất) 10 10 5 20 0,5 0,5 5 50 3 10 10 0,2 KH2PO4 MgSO4.7H2O 0,6 0,2 73 nước Thành phần Thạch pH=7 Nước cất Thạch nước cất) 20 1l 20 NaCl FeSO4 Thạch Nước cất Thạch pH=7 Nước cất 0,5 0,01 20 1l 20 Thạch pH=6 Nước cất 20 1l 1l Na2MoO4.2H2O 0,002 Bromthymol 5ml blue 0.5% pH = Nước cất 1l Sabouraud YMA MRS CaCl2.2H2O Glucose Peptone Thạch Manitol K2HPO4 NaCl MgSO4.7H2O Cao nấm men Cao thịt Peptone Cao nấm men Tween 80 0,02 40 10 20 10 0,5 0,1 0,2 1,0 10 10 1ml C64H124O26 K2HPO4 CH3COONa (NH4)3C6H5O7 Phụ lục Môi trường Pikovaskya Glucose Ca3(PO4)2 (NH4)2SO4 NaCl MgSO4 KCl Cao nấm men MnSO4 FeSO4 Nước cất pH= 1g 0,5g 0,05g 0,02g 0,01g 0,02g 0,05g 0,0002g 0,0002g 100 ml Phụ lục Thành phần thuốc thử Salkowski FeCl3 0,5M 15ml 74 pH=5,6 Nước cất 1l Thạch Congo đỏ 1% pH = 6,8 Nước cất 20 2.5ml MgSO4.7H2O MnSO4.H2O Glucoza CaCO3 0,58 0,28 20 pH=6 Thạch Nước cất 20 1l 1l H2SO4 98% Nước cất 300ml 500ml 75 Phụ lục * RESIDUAL 703382 175846 * TOTAL (CORRECTED) 115.143 12.7937 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SOLA FILE NGA 20/ 5/16 7:30 :PAGE VARIATE V005 SOLA LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 16.6978 16.6978 929.06 0.000 NL 2.71474 678684 37.76 0.004 * RESIDUAL 718915E-01 179729E-01 * TOTAL (CORRECTED) 19.4844 2.16494 BALANCED ANOVA FOR VARIATE NS FILE NGA 20/ 5/16 7:30 :PAGE VARIATE V006 NS LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 2511.27 2511.27 ****** 0.000 NL 1.52830 382076 0.22 0.911 * RESIDUAL 6.82834 1.70708 * TOTAL (CORRECTED) 2519.63 279.959 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE NGA 20/ 5/16 7:30 :PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 5 SL 14.0662 38.8100 CAO 6.70040 13.3080 SOLA 5.02420 7.60860 NS 35.7680 67.4620 SE(N= 5) 0.565097 0.187534 0.599548E-01 0.584309 5%LSD 4DF 2.21506 0.735094 0.235010 2.29036 - 76 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS 2 2 SL 27.0820 26.3400 26.0755 26.1130 26.5800 CAO 9.45000 10.2610 8.89000 10.5805 10.8395 SOLA 6.72450 6.64700 5.62450 6.84150 5.74450 NS 51.1050 51.6450 51.5600 52.3050 51.4600 SE(N= 2) 0.893496 0.296518 0.947968E-01 0.923873 5%LSD 4DF 3.50231 1.16229 0.371583 3.62138 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE NGA 20/ 5/16 7:30 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE OBS SL CAO SOLA NS GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT (N= 10) SD/MEAN | NO BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | | | 10 26.438 13.074 1.2636 4.8 0.0002 10 10.004 3.5768 0.41934 4.2 0.0002 10 6.3164 1.4714 0.13406 2.1 0.0002 10 51.615 16.732 1.3066 2.5 0.0001 77 |NL | | 0.9168 0.0403 0.0035 0.9108 | | |