Nghiên Cứu Phân Lập Và Tuyển Chọn Giống Vi Sinh Vật Nội Sinh Từ Vùng Sinh Thái Đất Bạc Màu Phục Vụ Cho Sản Xuất Nông Nghiệp Và Bảo Vệ Môi Trường

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA MÔI TRƯỜNG & - KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN GIỐNG VI SINH VẬT NỘI SINH TỪ VÙNG SINH THÁI ĐẤT BẠC MÀU PHỤC VỤ CHO SẢN XUẤT NÔNG NGHIỆP VÀ BẢO VỆ MÔI TRƯỜNG Người thực : ĐỖ THỊ PHƯƠNG HẰNG Lớp : K57 - MTC Khóa : 57 Chuyên ngành : KHOA HỌC MÔI TRƯỜNG Giáo viên hướng dẫn : TS NGUYỄN THỊ MINH Hà Nội – 2016 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA MÔI TRƯỜNG & - KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN GIỐNG VI SINH VẬT NỘI SINH TỪ VÙNG SINH THÁI ĐẤT BẠC MÀU PHỤC VỤ CHO SẢN XUẤT NÔNG NGHIỆP VÀ BẢO VỆ MÔI TRƯỜNG Người thực : ĐỖ THỊ PHƯƠNG HẰNG Lớp : K57 - MTC Khóa : 57 Chuyên ngành : KHOA HỌC MÔI TRƯỜNG Giáo viên hướng dẫn : TS NGUYỄN THỊ MINH Địa điểm thực tập : Học viện Nông nghiệp Việt Nam Hà Nội – 2016 LỜI CAM ĐOAN Em xin cam đoan kết viết hoàn toàn chân thực chưa công bố nghiên cứu trước Hà Nội, ngày tháng năm 2016 Sinh viên thực Đỗ Thị Phương Hằng i LỜI CẢM ƠN Trong trình học tập Học viện Nông nghiệp Việt Nam, giúp đỡ thầy cô, đoàn thể, đặc biệt môn Vi sinh vật – Khoa Môi trường tạo điều kiện, đến nay, em hoàn thành khóa học thực xong khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới cô Nguyễn Thị Minh tận tình hướng dẫn em hoàn thành tốt nghiên cứu Cảm ơn thầy cô, anh chị Phòng thí nghiệm Bộ môn vi sinh – Khoa môi trường phòng thí nghiệm Jica – Khoa Quản lý đất đai tạo điều kiện giúp đỡ em hoàn thành nghiên cứu Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới bạn bè, thầy cô gia đình giúp đỡ, động viên em suốt thời gian học tập nghiên cứu trường Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2016 Sinh viên thực Đỗ Thị Phương Hằng MỤC LỤC Vũ Văn Định (2008) Nghiên cứu ứng dụng vi khuẩn nội sinh để phòng trừ bệnh đốm lá, khô cành keo lai (Acacia auriculiformis x Acacia mangium) nấm Colletotrichum gloeosp orioides (Penz.) Sacc gây hại ii lâm trường Tam Thắng, huyện Thanh Sơn, tỉnh Phú Thọ Luận văn thạc sĩ khoa học lâm nghiệp Trường đại học Nông lâm 63 13 Nguyễn Hoàng Nghĩa, Phạm Quang Thu (2006) Vai trò vi khuẩn nội sinh chế kháng bệnh loét thân, cành nấm Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Sacc gây bệnh hại với keo lai 64 14 Lương Đức Phẩm (2011) Giáo trình Sản xuất sử dụng chế phẩm sinh học nông nghiệp Nhà xuất Giáo dục Việt Nam 64 16 Lê Xuân Phương (2008) Vi sinh vật môi trường Đại học Đà Nẵng 64 17 Nguyễn Quang Thu (2002) Một số biện pháp phòng trừ, quản lý bệnh hại Keo tai thượng lân trường Đạ Terh – Lâm Đồng Tạp chí Nông nghiệp & Phát triển nông thôn số 6/2002 Trang 532 – 533 64 18 Dương Hoa Xô (2009) Ứng dụng chế phẩm sinh học cho trồng – hướng đắn phát triển nông nghiệp sinh thái bền vững (Phần 1) 64 39 Hoàng Hà Nam, 2010 Cố định nitơ: mối quan hệ thực vật vi khuẩn http://khoasinhhoc.vinhuni.edu.vn/nghien-cuu-khoa-hoc/seo/co-dinhnito-moi-quan-he-giua-thuc-vat-va-vi-khuan-48896 Thứ 4, ngày 18/5/2016 .67 iii DANH MỤC VIẾT TẮT CT1 CT2 IAA : Công thức : Công thức : Indole-3-acetic acid IFA : Quỹ Nông nghiệp phát triển quốc tế IFOAM : Hiệp hội Nông nghiệp hữu quốc tế (Internation Federration of Orfanic Agriculture Movements) FIBL : Viện nghiên cứu truyền thông nông nghiệp hữu (Communication, Research Intitute of Organic Agriculture) TCVN : Tiêu chuẩn Việt Nam VSV : Vi sinh vật VSV NS : Vi sinh vật nội sinh iv DANH MỤC BẢNG Vũ Văn Định (2008) Nghiên cứu ứng dụng vi khuẩn nội sinh để phòng trừ bệnh đốm lá, khô cành keo lai (Acacia auriculiformis x Acacia mangium) nấm Colletotrichum gloeosp orioides (Penz.) Sacc gây hại lâm trường Tam Thắng, huyện Thanh Sơn, tỉnh Phú Thọ Luận văn thạc sĩ khoa học lâm nghiệp Trường đại học Nông lâm 63 13 Nguyễn Hoàng Nghĩa, Phạm Quang Thu (2006) Vai trò vi khuẩn nội sinh chế kháng bệnh loét thân, cành nấm Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Sacc gây bệnh hại với keo lai 64 14 Lương Đức Phẩm (2011) Giáo trình Sản xuất sử dụng chế phẩm sinh học nông nghiệp Nhà xuất Giáo dục Việt Nam 64 16 Lê Xuân Phương (2008) Vi sinh vật môi trường Đại học Đà Nẵng 64 17 Nguyễn Quang Thu (2002) Một số biện pháp phòng trừ, quản lý bệnh hại Keo tai thượng lân trường Đạ Terh – Lâm Đồng Tạp chí Nông nghiệp & Phát triển nông thôn số 6/2002 Trang 532 – 533 64 18 Dương Hoa Xô (2009) Ứng dụng chế phẩm sinh học cho trồng – hướng đắn phát triển nông nghiệp sinh thái bền vững (Phần 1) 64 39 Hoàng Hà Nam, 2010 Cố định nitơ: mối quan hệ thực vật vi khuẩn http://khoasinhhoc.vinhuni.edu.vn/nghien-cuu-khoa-hoc/seo/co-dinhnito-moi-quan-he-giua-thuc-vat-va-vi-khuan-48896 Thứ 4, ngày 18/5/2016 .67 v DANH MỤC HÌNH Vũ Văn Định (2008) Nghiên cứu ứng dụng vi khuẩn nội sinh để phòng trừ bệnh đốm lá, khô cành keo lai (Acacia auriculiformis x Acacia mangium) nấm Colletotrichum gloeosp orioides (Penz.) Sacc gây hại lâm trường Tam Thắng, huyện Thanh Sơn, tỉnh Phú Thọ Luận văn thạc sĩ khoa học lâm nghiệp Trường đại học Nông lâm 63 13 Nguyễn Hoàng Nghĩa, Phạm Quang Thu (2006) Vai trò vi khuẩn nội sinh chế kháng bệnh loét thân, cành nấm Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Sacc gây bệnh hại với keo lai 64 14 Lương Đức Phẩm (2011) Giáo trình Sản xuất sử dụng chế phẩm sinh học nông nghiệp Nhà xuất Giáo dục Việt Nam 64 16 Lê Xuân Phương (2008) Vi sinh vật môi trường Đại học Đà Nẵng 64 17 Nguyễn Quang Thu (2002) Một số biện pháp phòng trừ, quản lý bệnh hại Keo tai thượng lân trường Đạ Terh – Lâm Đồng Tạp chí Nông nghiệp & Phát triển nông thôn số 6/2002 Trang 532 – 533 64 18 Dương Hoa Xô (2009) Ứng dụng chế phẩm sinh học cho trồng – hướng đắn phát triển nông nghiệp sinh thái bền vững (Phần 1) 64 39 Hoàng Hà Nam, 2010 Cố định nitơ: mối quan hệ thực vật vi khuẩn http://khoasinhhoc.vinhuni.edu.vn/nghien-cuu-khoa-hoc/seo/co-dinhnito-moi-quan-he-giua-thuc-vat-va-vi-khuan-48896 Thứ 4, ngày 18/5/2016 .67 vi MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Hiện nay, sản xuất nông nghiệp nước ta sử dụng ngày nhiều phân bón hóa học thuốc bảo vệ thực vật Điều ảnh hưởng đến chất lượng đất canh tác, đa dạng sinh học gây ô nhiễm môi trường.Vì vậy, để phục vụ sản xuất nông nghiệp thích ứng với biến đổi khí hậu xảy ra, việc sản xuất sử dụng chế phẩm sinh học phục vụ cho phát triển hữu bền vững cần thiết Đất bạc màu đất có màu xám nhạt, nhiều cát, thành phần giới nhẹ, hạt thô Tầng đất dày mỏng không đều, nhiều nơi mỏng, sâu đạt 1-2m Đất nói chung có nước ngầm sâu, chua, nghèo mùn, nghèo sét, nghèo Ca đất rời rạc dễ bị nén chặt Có loại đất bạc màu: đất xám bạc màu phù xa cổ, đất xám bạc màu đá macma axit, đất xám bạc màu glay Đất bị bạc màu hóa làm ảnh hưởng đến sinh trưởng phát triển trồng, làm giảm suất chất lượng nông sản phẩm (Phùng Gia Hưng, 2012) Hầu hết chế phẩm sinh học phân hữu vi sinh lưu hành thị trường có chất lượng không đảm bảo Mặt khác, hầu hết chế phẩm vi sinh sử dụng Việt Nam thường có tác dụng đơn lẻ việc phòng trừ sâu bệnh, cải tạo đất hay xử lý phế thải,….và tác dụng làm tăng suất trồng trực tiếp có tác dụng tổng hợp sản phẩm nước Sở dĩ thiếu chủng vi sinh vật (VSV) thực hữu ích, chủng vi sinh vật nội sinh (VSV NS) có hoạt tính sinh học cao phát huy tốt hiệu nhiều loại trồng điều kiện sinh thái khác Vi sinh vật nội sinh VSV sống mô thực vật tìm thấy vùng rễ, rễ, thân, lá, thực vật VSV NS thường xâm nhập vào thực vật qua vùng rễ, thúc đẩy trình chuyển hóa phát triển lông rễ cách mạnh mẽ giảm kéo dài rễ (Harari et al., 1988), kích thích phát triển cây, cải thiện phát triển bệnh tăng cường chống chịu với yếu tố bên (Hallmann et al., 1997) VSV NS nghiên cứu ứng dụng nhiều giới Ở Việt Nam có số nghiên cứu VSV NS như: Nguyễn Thị Thu Hà cộng (2009) phân lập dòng VSV NS số loại cỏ chăn nuôi có đặc tính cố định đạm, phân giải lân tổng hợp IAA cao,… Tuy nhiên, hầu hết dòng vi khuẩn nội sinh phân lập chưa đánh giá đầy đủ chưa ứng dụng thực tiễn Vì vậy, việc phân lập tuyển chọn loài VSV NS phục vụ cho sản xuất nông nghiệp bảo vệ môi trường, đặc biệt thích ứng với đất bị bạc màu vô cần thiết Xuất phát từ thực tiễn trên, thực đề tài: “Nghiên cứu phân lập tuyển chọn giống vi sinh vật nội sinh từ vùng sinh thái đất bạc màu phục vụ cho sản xuất nông nghiệp bảo vệ môi trường.” Mục tiêu nghiên cứu Tuyển chọn giống VSV NS có nguồn gốc địa từ đất bạc màu, có tác dụng phân giải chuyển hóa chất hữu cơ, tạo dinh dưỡng dễ tiêu, chống chịu cao với điều kiện bất lợi, tăng cường sinh trưởng phát triển trồng,…phục vụ cho sản xuất nông nghiệp bảo vệ môi trường trồng sinh trưởng phát triển tốt hơn, cho tiềm năng suất cao mà đảm bảo cho phát triển nông nghiệp hữu giảm thiểu ô nhiễm phân bón thuốc bảo vệ thực vật hóa học Hình 3.19 Thí nghiệm chậu vại rau dền 3.4.2.2 Hiệu cải tạo đất chế phẩm vi sinh Tính chất đất trước sau thí nghiệm để xác định ảnh hưởng chế phẩm dinh dưỡng vi sinh đến môi trưởng đất Kết phân tích đất trước sau thí nghiệm trình bày bảng 3.11 Bảng 3.12 Tính chất đất trước sau thí nghiệm (sau 30 ngày) Tính chất Vật lý Hóa học Sinh học Đặc tính pH Độ ẩm OM% N% P2O5 (mg/100g đất) K2O (mg/100g đất) OC% Trước thí nghiệm 7,34 25,63 2,07 0,17 3,04 6,18 3,26 2,8x106 VSV tổng số Sau thí nghiệm CT1 CT2 7,46 26,08 2,36 0,17 3,07 6,37 3,62 7,18 28,83 2,47 0,18 3,50 10,63 4,06 4,7x106 8,4x106 (CFU/ml) Số liệu bảng 3.11 cho thấy chế phẩm dinh dưỡng vi sinh xu hưỡng góp phần cải tạo tính chất đất Các đặc tính dinh dưỡng đất có xu hướng tăng dần, đặc biệt hàm lượng dinh dưỡng dễ tiêu Trong đó, kali dễ tiêu tăng nhiều (gấp 1,72 lần so với đất trước thí nghiệm gấp 1,71 lần 59 đất công thức đối chứng), hoạt động tích cực loài VSV NS có chế phẩm dinh dưỡng vi sinh giúp kích thích sinh trưởng phát triển hệ VSV đất Hàm lượng VSV tổng số đất tăng cao so với trước thí nghiệm (gấp lần so với đất trước thí nghiệm, gấp 1,9 lần so với đất công thức đối chứng) 60 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Từ kết nghiên cứu đạt trên, sơ rút số kết luận sau: Đất xám bạc màu huyện Đông Anh chiếm 0,17% so với tổng diện tích đất tự nhiên, tỉnh Bắc Giang đất tự nhiên chiếm 25,06% so với tổng diện tích tự nhiên Từ số liệu phân tích cho thấy hàm lượng chất dinh dưỡng dễ tiêu đất lấy huyện Đông Anh, thành phố Hà Nội huyện Việt Yên, tỉnh Bắc Giang thấp (P2O5: 13,05-28,1 mg/100g đất; K2O: 2,403,48 mg/100g đất), đất chua (pH: 4,83-5,57), độ ẩm thấp từ 9,2-9,6 Vì vậy, trồng thường sinh trưởng phát triển lượng VSV tổng số đất Bắc Giang cao (3,7x106 CFU/ml) Từ mẫu lấy huyện Đông Anh, thành phố Hà Nội tỉnh Bắc Giang phân lập 116 chủng VSV NS Cây phân lập nhiều VSV tầm bóp cải xanh (đều 20 chủng VSV NS) Còn ngô phân lập (chỉ chủng VSV NS) Tuyển chọn tám chủng VSV NS có hoạt tính sinh học tốt từ 116 chủng VSV NS phân lập gồm: Azospirillum 5RK, Herbaspirillum 5TK, Burkholderia, Azospirillum 3TN, Klebsiella, Azotobacter, Gluconacetobacter diazotrophicus Herbaspirillum 6LCX2 Trong có hai chủng có bốn đặc tính sinh học Azospirillum 5RK Herbaspirillum 6LCX2 Sáu chủng lại không đạt bốn đặc tính đặc tính lại chúng cao Cả tám chủng VSV NS có khả thích nghi khoảng pH nhiệt độ rộng (pH: 5-9, nhiệt độ: 20-40oC) Sử dụng chế phẩm dinh dưỡng vi sinh giúp kích thích sinh trưởng phát triển trồng Bên cạnh có xu hướng góp phần cải tạo đất, hiệu chứng minh qua thí nghiệm chậu vại Các đặc tính dinh dưỡng dễ tiêu hàm lượng VSV tổng số đất sử dụng chế phẩm tăng so với đất không dùng 61 Kiến nghị Thử nghiệm chế phẩm dinh dưỡng vi sinh tiến hành chậu vại Vì đề nghị đưa chế phẩm vào thử nghiệm quy mô lớn nhiều vụ để đánh giá xác hiệu quả chế phẩm trồng đất Đánh giá thời gian sống sót chủng VSV NS chế phẩm Tiếp tục phân lập tuyển chọn chủng VSV NS có đặc tính tốt từ vùng sinh thái khác 62 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt Vũ Năng Dũng cộng (2009) Cẩm nang sử dụng đất nông nghiệp Tập tài nguyên đất Việt Nam thực trạng tiềm sử dụng Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật Trang 81 – 95 Cao Ngọc Điệp, Nguyễn Thị Thu Hà Hà Thanh Toàn (2009) Phân lập đặc tính dòng vi khuẩn nội sinh số cỏ chăn nuôi Cao Ngọc Điệp Trần Thanh Phong (2011) Phân lập đặc tính vi khuẩn nội sinh khóm (Ananas comosus [L.]) trồng đất phèn huyện Tân Phước, tỉnh Tiền Giang Vũ Văn Định (2008) Nghiên cứu ứng dụng vi khuẩn nội sinh để phòng trừ bệnh đốm lá, khô cành keo lai (Acacia auriculiformis x Acacia mangium) nấm Colletotrichum gloeosp orioides (Penz.) Sacc gây hại lâm trường Tam Thắng, huyện Thanh Sơn, tỉnh Phú Thọ Luận văn thạc sĩ khoa học lâm nghiệp Trường đại học Nông lâm Phạm Thanh Hà, Nguyễn Thị Quỳnh Mai, Hồ Thị Kim Anh, Nguyễn Thị Phương Chi (2003) Ảnh hưởng nhiệt độ vi sinh vật hòa tan phosphate Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống Báo cáo hội nghị công nghệ sinh học toàn quốc Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật Hà Nội Trang 381 – 383 Nguyễn Thị Thu Hà (2014) Nghiên cứu sử dụng vi khuẩn nội sinh có khả phân hủy N-Acly-L-Homoserine lactones (AHLs) phòng trừ bệnh thối nhũn khoai tây vi khuẩn Erwinia carotovora susps Carotovora Lương Thị Hồng Hiệp (2010) Phân lập nhận diện vi khuẩn nội sinh sài đất Wedelia chinensis (OSB) Merr kỹ thuật PCR Luận văn tốt nghiệp đại học Trường đại học Cần Thơ Nguyễn Hữu Hiệp (2009) Bài giảng vi sinh vật nông nghiệp Viện nghiên cứu phát triển công nghệ sinh học Cần Thơ 63 Nguyễn Thị Hòa (2014) Hiện trạng hệ thống trồng trọt khả sản xuất nông sản theo hướng hữu huyện Việt Yên, tỉnh Bắc Giang Luận văn thạc sĩ Học viện Nông nghiệp Việt Nam 10 Phùng Gia Hưng (2012) Xác định cấu sử dụng đất nông nghiệp hợp lý vùng đất bạc màu Bắc Giang Luận văn tiến sĩ nông nghiệp Học viện Nông nghiệp Việt Nam 11 Võ Thị Lài (2006) Nghiên cứu nuôi cấy khả phân giải lân khó tân vi khuẩn Bacillus megaterium Luận văn tốt nghiệp Trường đại học Tây Nguyên 12 Minh.D, Anh.V.T (2003) Vi sinh vật đất Giáo trình giảng dạy trực tuyến Trường đại học Cần Thơ 13 Nguyễn Hoàng Nghĩa, Phạm Quang Thu (2006) Vai trò vi khuẩn nội sinh chế kháng bệnh loét thân, cành nấm Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Sacc gây bệnh hại với keo lai 14 Lương Đức Phẩm (2011) Giáo trình Sản xuất sử dụng chế phẩm sinh học nông nghiệp Nhà xuất Giáo dục Việt Nam 15 Nguyễn Kim Phụng (2002) Bài giảng nông hóa Trường đại học Tây Nguyên 16 Lê Xuân Phương (2008) Vi sinh vật môi trường Đại học Đà Nẵng 17 Nguyễn Quang Thu (2002) Một số biện pháp phòng trừ, quản lý bệnh hại Keo tai thượng lân trường Đạ Terh – Lâm Đồng Tạp chí Nông nghiệp & Phát triển nông thôn số 6/2002 Trang 532 – 533 18 Dương Hoa Xô (2009) Ứng dụng chế phẩm sinh học cho trồng – hướng đắn phát triển nông nghiệp sinh thái bền vững (Phần 1) 19 Viện Quy hoach Thiết kế nông nghiệp (2005) Thuyết minh đồ đất tỉnh Bắc Giang 64 Tài liệu nước ngoài: 20 Barbieri, P., Zanelli, T., Galli, E., and Zanetti, G (1986) Wheat inoculation with Azospirillum brasilense Sp6 and some mutants altered in nitrogen fixation and indole-3-acetic acid production FEMS Microbiol Lett 36 87-90 21 Benhamou, N., Kloepper, JW., Quadt-Hallman, A., Tuzon, S., (1996) Induction of defense-related ultrastructural modification in pea root tissues inoculated with endophytic bacteria Plant Physion 112, 919-929 22 Bergey, 2009, Bergay manual’s of systermatic Bacteriology Second edition William B Whitman Springer, USA, p 19-21 23 Biswas JC Ladha JK Dazzo FB (2000a) Rhizobia inoculation improves nutrient uptake and growth of lowland rice Soil Sci Soc Am J 64:1644-1650 24 Biswas JC Ladha JK Dazzo FB Yanni YG Rolfe BG (2000b) Rhizobial inoculaition influences seedling vigour and yield of rice Agron J 92:880-886 25 Campbell I (1971) Comparison of Serological and Physiological Classification of the Genus Saccharomyces Journal of General Microbiology 3, p 189-198 26 FilB and IFOAM (2012): The wold Organic Agriculture: Statistics and emerging trends 2012 27 Hallmann, J.M., A.H Nasar, G.E.St.J Hardy and K Sivasithamparam Plant growth promotion and biological control of Pythium aphanidermatum A pathogen of cucumber, by endophytic actinomycetes Microbiol 181:337-334 28 Harari, A., Kigel, J., and Okon, Y (1988) Involvement of IAA in the interaction between Azospirillum Brasilense and Panicum miliaceum roots Plant Soil, 110: 275-282 29 Peter Kampfer, Reiner M Kroppensted and Wolfgang Dott E (1991) A numerical classification of the genera Streptomyces and Streptoverticillium using miniaturized physiological tests Journal of General Microbiology, 137, p 1831-1891 65 30 Rosenblueth M and Martinez-Romero E (2006) Bacterial endophytes and their interactions with hots Molecular plant – Microbe interactions 19: 827-837 31 Rosenblueth M., and Martinez Romero E (2004) Rhizobium etli maize populations and their competitiveness for root colonization Arch Microbiol 181: 337-334 32 Saikia R, SajuVarghese, Bhim Pratap Singh, Dilip K.Aora (2009) Influence of mineral amendment on diease suppressive activity of Pseudomonas fluorescens to Fusarium wilt of chickpea Microbiological Research 164: 365-373 33 Xu, H., M Griffith C L Patten and B R Glick, (1998) Isolation and characterization of an antifreeze protein with ice nucleation activity from the plant growth promoting rhizobacterium Pseudomonas putida GR12-2 Can J Microbiol 44 64-73 34 Zinniel DK P Lambrecht NB Haris, Z Feng, D Kuczmarski, P higley, CA Ishimaru, A Arunakumari, RG Barletta and AK Vidaver 2002 Isolation and characterization of endophytic colonizing bacteria from agronomic crops and prairie plants Appl Environ Microbiol 68: 2198-2208 Tài liệu tham khảo internet 35 Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn (2015) Giá trị sản xuất nông, lâm nghiệp thủy sản năm 2015 http://www.mard.gov.vn/Lists/appsp01_statistic/Attachments/99/phuluc_T12 _2015-f.pdf Thứ hai, 16/5/2016 36 Cổng thông tin điện tử tỉnh Bắc Giang (2015) Tài nguyên đất http://www.bacgiang.gov.vn/tong-quan-bac-giang/16867/Ta%CC%80inguyen-da%CC%81t.html Thứ ba, 17/5/2016 37 Lưu Nguyễn Thành Công (2013) http://doc.edu.vn/tai-lieu/khoa-luanthuc-trang-cua-viec-su-dung-hoa-chat-bao-ve-thuc-vat-va-van-de-o-nhiemcac-che-pham-hoa-hoc-su-dung-trong-nong-11626/ Chủ nhật, 15/5/2016 66 38 Minh Long (2012) Nông nghiệp bền vững chế phẩm sinh học http://www.cesti.gov.vn/khong-gian-cong-nghe/nong-nghiep-ben-vung-voiche-pham-sinh-hoc.html Thứ hai, 16/5/2016 39 Hoàng Hà Nam, 2010 Cố định nitơ: mối quan hệ thực vật vi khuẩn http://khoasinhhoc.vinhuni.edu.vn/nghien-cuu-khoa- hoc/seo/co-dinh-nito-moi-quan-he-giua-thuc-vat-va-vi-khuan-48896 Thứ 4, ngày 18/5/2016 40 Minh Tâm (2011) Nghiên cứu sử dụng chế phẩm sinh học từ vi khuẩn đối kháng để kiểm soát nấm hại trồng http://www.vast.ac.vn/ung-dungva-trien-khai/ung-dung/940-nghien-cuu-va-su-dung-che-pham-sinh-hoc-tu-vikhuan-doi-khang-de-kiem-soat-nam-hai-cay-trong Thứ tư, ngày 18/5/2016 41 Sở nông nghiệp phát triển nông thôn thành phố HCM (2010) http://www.sonongnghiep.hochiminhcity.gov.vn/tonghop/lists/posts/post.aspx ?Source=/tonghop&Category=Tr%E1%BB%93ng+tr%E1%BB %8Dt&ItemID=149&Mode=1 Chủ nhật, 15/5/2016 67 PHỤ LỤC PHỤ LỤC Thành phần môi trường phân lập STT Tên môi trường Thành phần Khối lượng (g/l nước cất) YMA Manitol K2HPO4 NaCl MgSO4.7H2O Cao nấm men Thạch Congo đỏ 1% pH = 6,8 10 0.5 0.1 0.2 1.0 20 2.5ml Sabouraud Glucose Peptone Thạch pH=5.6 40 10 20 LB Cao nấm men Peptone NaCl Thạch pH=7 10 10 20 MPA Cao thịt Peptone NaCl Thạch 5 20 Gause Tinh bột KNO3 K2HPO4 68 20 0.5 STT Tên môi trường MgSO4 NaCl FeSO4 Thạch 0.5 0.5 0.01 20 Thành phần Khối lượng (g/l nước cất) NA Peptone Cao thịt bò Cao nấm men NaCl Thạch pH=7 5 20 Hansen Glucose KH2PO4 MgSO4.7H2O Peptone Thạch pH=6 50 3 10 20 69 PHỤ LỤC Thành phần môi trường Tryptone glucose yeast agar Thành phần môi trường Tryptose Cao nấm men Glucose Thạch Khối lượng (g/l nước cất) 5,0 2,5 1,0 15 PHỤ LỤC Môi trường Pikovaskya STT 10 Thành phần môi trường Glucozơ Ca3(PO4) (NH4)2SO4 NaCl MgSO4 KCl Cao nấm men MnSO4 FeSO4 pH = Khối lượng (g/100ml nước cất) 0,5 0,05 0,02 0,01 0,02 0,05 0,0002 0,0002 PHỤ LỤC Thuốc thử Salkowski Thành phần Thể tích (ml) FeCl3 0.5M 15 H2SO4 98% 300 Nước cất 500 Thuốc thử sau pha xong cần bảo quan bình tối PHỤ LỤC BALANCED ANOVA FOR VARIATE SOLA FILE HANG 20/ 5/16 4: :PAGE 70 VARIATE V003 SOLA LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN F RATIO PROB ER LN ====================================================================== ======= CT 25.0589 25.0589 134.42 0.001 NHACLAI 713740 178435 * RESIDUAL 745663 186416 0.96 0.516 * TOTAL (CORRECTED) 26.5183 2.94648 BALANCED ANOVA FOR VARIATE THAN FILE HANG 20/ 5/16 4: :PAGE VARIATE V004 THAN LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN F RATIO PROB ER LN ====================================================================== ======= CT 26.2440 26.2440 78.14 0.002 NHACLAI 612740 153185 * RESIDUAL 1.34350 335875 0.46 0.768 * TOTAL (CORRECTED) 28.2002 3.13336 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SLA FILE HANG 20/ 5/16 4: :PAGE VARIATE V005 SLA LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN F RATIO PROB ER LN ====================================================================== ======= CT NHACLAI 24702.9 24702.9 17.4195 ****** 0.000 4.35488 71 1.25 0.417 * RESIDUAL 13.9467 3.48667 * TOTAL (CORRECTED) 24734.3 2748.25 BALANCED ANOVA FOR VARIATE NS FILE HANG 20/ 5/16 4: :PAGE VARIATE V006 NS LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ====================================================================== ======= CT 525.625 525.625 761.31 0.000 NHACLAI 1.73666 434165 * RESIDUAL 2.76168 690421 0.63 0.669 * TOTAL (CORRECTED) 530.123 58.9026 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE HANG 20/ 5/16 4: :PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT NOS SOLA THAN SLA NS 5.56800 6.24600 94.2040 10.2680 8.73400 9.48600 193.608 24.7680 SE(N= 5) 5%LSD 4DF 0.193088 0.756865 0.259181 1.01594 0.835065 3.27328 0.371597 1.45658 - 72 MEANS FOR EFFECT NHACLAI NHACLAI NOS SOLA THAN SLA NS 7.01500 7.71000 145.100 18.1100 2 6.75000 7.64000 143.410 17.9050 7.10500 8.18000 143.045 17.2500 7.49500 8.15500 145.760 17.0150 7.39000 7.64500 142.215 17.3100 SE(N= 2) 0.305300 5%LSD 4DF 0.409802 1.19671 1.32035 1.60634 0.587546 5.17550 2.30305 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE HANG 20/ 5/16 4: :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT (N= 10) SD/MEAN | NO BASED ON BASED ON OBS TOTAL SS RESID SS | | % | | | | | | SOLA 10 7.1510 1.7165 0.43176 6.0 0.0009 0.5165 THAN 10 7.8660 1.7701 0.57955 7.4 0.0017 0.7676 SLA NS 10 143.91 10 17.518 52.424 1.8673 1.3 0.0001 0.4169 7.6748 0.83092 4.7 0.0002 0.6686 73 |NHACLAI |