NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP, TỔNG HỢP, CHUYỂN HÓA VÀ ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA HỢP CHẤT MURRAYAFOLINE A TỪ LOÀI GLYCOSMIS STENOCARPA (DRAKE) CỦA VIỆT NAM

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Trần Quốc Tồn NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP, TỔNG HỢP, CHUYỂN HĨA VÀ ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA HỢP CHẤT MURRAYAFOLINE A TỪ LOÀI GLYCOSMIS STENOCARPA (DRAKE) CỦA VIỆT NAM LUẬN ÁN TIẾN SỸ HÓA HỌC Hà Nội – 2017 i BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Trần Quốc Tồn NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP, TỔNG HỢP, CHUYỂN HĨA VÀ ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA HỢP CHẤT MURRAYAFOLINE A TỪ LOÀI GLYCOSMIS STENOCARPA (DRAKE) CỦA VIỆT NAM Chuyên ngành: Hóa học hợp chất thiên nhiên Mã sỗ: 62 44 01 17 LUẬN ÁN TIẾN SỸ HÓA HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS Nguyễn Mạnh Cƣờng TS Trần Thị Thu Thủy Hà Nội – 2017 ii LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan: Đây cơng trình nghiên cứu tơi cộng Các số liệu kết đƣợc nêu luận án trung thực chƣa đƣợc công bố cơng trình khác Hà Nội, năm 2017 Tác giả luận án iii MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT a DANH MỤC SƠ ĐỒ b DANH MỤC HÌNH d DANH MỤC BẢNG BIỂU g DANH MỤC PHỤ LỤC h MỞ ĐẦU PHẦN 1: TỔNG QUAN CHƢƠNG 1: GIỚI THIỆU MURRAYAFOLINE A 1.1 Giới thiệu cơm rượu trái hẹp……… ……………………………… 1.2 Nguồn gốc thiên nhiên hoạt tính sinh học murrayafoline A……5 1.3 Các dẫn xuất tổng hợp murrayafoline A 10 CHƢƠNG 2: CÁC PHƢƠNG PHÁP TỔNG HỢP CARBAZOLE HIỆN ĐẠI VÀ ỨNG DỤNG TRONG TỔNG HỢP MURRAYAFOLINE A 13 2.1 Giới thiệu carbazole 13 2.2 Các phương pháp tổng hợp carbazole đại 14 2.2.1 Phương pháp sử dụng phức sắt 14 2.2.2 Phương pháp sử dụng xúc tác palladium 17 2.2.2.1 Phương pháp Oxy hóa đóng vòng từ amin Buchwald-Hartwig 17 2.2.2.2 Phương pháp đóng vòng N-bisaryl sử dụng xúc tác đồng (Cu[II]/Pd[II] 20 2.2.2.3 Phương pháp sử dụng phản ứng Suzuki-Miyaura Coupling 20 2.2.2.4 Phương pháp sử dụng phản ứng Heck-Coupling 24 2.2.2.5 Phương pháp oxy hóa đóng vòng sản phẩm thủy phân benzoxazol-2ones 27 2.2.2.6 Phương pháp kết nối kiểu Stille – Coupling 28 2.2.3 Một số phương pháp tổng hợp murrayafoline A khác 29 2.2.3.1 Phương pháp Martin 29 2.2.3.2 Phương pháp Mal 29 iv 2.2.3.3 Phương pháp Kikugawa 30 PHẦN 2: PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU VÀ KỸ THUẬT THỰC NGHIỆM 32 CHƢƠNG 3: PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 32 3.1 Phương pháp thu thập, giám định tên xử lý mẫu thực vật 32 3.2 Phương pháp phân lập hoạt chất 32 3.3 Phương pháp tổng hợp hữu 33 3.4 Phương pháp xác định cấu trúc hóa học 33 3.5 Phương pháp thử hoạt tính sinh học in vitro 34 3.5.1 Phương pháp thử hoạt tính kháng ung thư 34 3.5.2 Phương pháp thử hoạt tính kháng viêm tế bào tủy xương hình kích thích LPS 35 3.5.3 Phương pháp thử hoạt tính kháng viêm ức chế yếu tố NF-κB 36 3.6 Phương pháp thử hoạt tính kháng ung thư động vật thực nghiệm dòng tế bào LLC 37 3.6.1 Phương pháp thử độc tính cấp 37 3.6.2 Phương pháp xác định khả ức chế khối u hoạt chất Mu-A chuột gây u thực nghiệm dòng tế bào LLC 37 3.6.3 Phương pháp đánh giá tính độc hoạt chất Mu-A thông qua kiểm tra số tiêu sinh hóa máu 38 3.6.4 Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng hoạt chất Mu-A biến đổi giải phẫu bệnh lí gan, thận, lách, phổi chuột gây u thực nghiệm 39 3.6.5 Phương pháp nghiên cứu khả kích hoạt enzyme caspase3/7 hoạt chất Mu-A kit Promega 39 3.6.6 Phương pháp xử lí số liệu 39 CHƢƠNG 4: THỰC NGHIỆM 40 4.1 Phân lập murrayafoline A từ rễ cơm rượu trái hẹp 40 4.1.1 Nguyên liệu 40 4.1.2 Chiết tách thô 40 4.1.3 Phân lập theo phương pháp sắc ký 40 v 4.1.4 Phân lập theo phương pháp cất nước 40 4.1.5 Nghiên cứu xây dựng phương pháp định lượng murrayafoline A 41 4.2 Tổng hợp toàn phần murrayafoline A 42 4.2.1 Tổng hợp 2-metoxy-4-metyl-nitrobenzen 42 4.2.2 Tổng hợp 2-metoxy-4-metylanilin 42 4.2.3 Tổng hợp murrayafoline A 43 4.3 Tổng hợp dạng phức hợp murrayafoline A 44 4.3.1 Tổng hợp liposome 44 4.3.2 Tổng hợp mixen 44 4.4 Tổng hợp dẫn xuất murrayafoline A 45 4.4.1 Tổng hợp 1-methoxy-3-methyl-9-(3-bromo)-propyl-9H-carbazole) 1methoxy-3-methyl-9-(propen-2-yl)-9H-carbazole 45 4.4.2 Tổng hợp 1-methoxy-3-methyl-9-(3-azido)-propyl-9H-carbazole (105) 46 4.4.3 Bảo vệ nhóm chức amin amine 46 4.4.4 Bảo vệ nhóm chức alcohol 46 4.4.5 Tổng hợp dẫn xuất 1,2,3-triazole murrayafoline A 47 4.4.6 Tổng hợp 3-(1-methoxy-3-methyl-9H-carbazol-9-yl)propane-1,2-diol (107) 50 4.4.7 Tổng hợp 1-methoxy-3-formylcarbazole (2) 51 4.4.8 Tổng hợp chalcon murrayafoline A 51 PHẦN 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 54 CHƢƠNG : KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU TẠO NGUỒN NGUYÊN LIỆU MURRAYAFOLINE A 54 5.1 Nghiên cứu phân lập murrayafoline A từ rễ cơm rượu trái hẹp 54 5.1.1 Định hướng xây dựng phương pháp phân lập 54 5.1.2 Xây dựng phương pháp định lượng murrayafoline A HPLC 55 5.1.2.1 Xác định bước sóng phát 55 5.1.2.2 Xây dựng đường chuẩn cho murrayafoline A 55 5.1.2.3 Kết xác định độ lặp lại phương pháp 56 vi 5.1.2.4 Kết xác định độ xác phương pháp 57 5.1.2.5 Kết phân tích mẫu thực 57 5.1.3 Xây dựng quy trình phân lập murrayafoline A 58 5.1.3.1 Phương pháp sắc ký 58 5.1.3.2 Phương pháp kết hợp sử dụng cất lôi nước 59 5.1.3.3 Kết xác định cấu trúc hợp chất murrayafoline A phân lập từ rễ cơm rượu trái hẹp 61 5.2 Nghiên cứu tổng hợp murrayafoline A ………………………………….63 5.2.1 Tổng hợp 2-metoxy-4-metyl-nitrobenzen 64 5.2.2 Tổng hợp 2-metoxy-4-metylanilin 67 5.2.3 Tổng hợp 2-methoxy-4-metyl-N-phenylanilin 68 5.2.4 Tổng hợp murrayafoline A 69 CHƢƠNG 6: XÂY DỰNG DẠNG PHỨC HỢP CỦA MURRAYAFOLINE A 72 6.1 Mixen 72 6.1.1 Giới thiệu mixen 72 6.1.2 Kết điều chế mixen – murrayafoline A 73 6.2 Liposome 75 6.2.1 Giới thiệu liposome 75 6.2.1 Điều chế tiểu phân liposome chứa murrayafoline A 76 `CHƢƠNG 7: CHUYỂN HÓA TẠO DẪN XUẤT MURRAYAFOLINE A 79 7.1 Chuyển hóa tạo dẫn xuất chứa nhóm triazole 79 7.1.1 Phản ứng murrayafoline A với 1,3 – dibrompropan 82 7.1.2 Phản ứng azide hóa 86 7.1.3 Phản ứng “Click” đóng vòng 1,2,3 – triazole 89 7.1.4 Phản ứng dihidroxyl hóa nối đơi 103 7.2 Chuyển hóa tạo dẫn xuất chalcon 105 7.2.1 Phản ứng oxi hóa tạo nhóm chức andehit 107 7.2.2 Phản ứng Claisen-Schmidt tạo xeton α,β-không no 109 vii CHƢƠNG 8: ĐÁNH GIÁ MỘT SỐ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA MURRAYAFOLINE A VÀ CÁC DẪN XUẤT 117 8.1 Hoạt tính sinh học in vitro murrayafoline A 117 8.1.1 Hoạt tính gây độc tế bào 117 8.1.2 Hoạt tính ức chế phát triển tế bào ung thư thạch mềm 3D 118 8.1.3 Hoạt tính tim mạch 119 8.2 Hoạt tính sinh học in vivo murrayafoline A 120 8.2.1 Kết xác định khả gây độc cấp tính Mu-A 121 8.2.2 Kết xác định khả ức chế khối u Mu-A chuột gây u thực nghiệm dòng tế bào LLC 122 8.2.2.1 Khả bảo vệ chung kéo dài tuổi thọ cho động vật nghiên cứu Mu-A 122 8.2.2.2 Khả ức chế khối u phát triển 124 8.2.2.3 Khả kháng khối u di 125 8.2.2.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng Mu-A đến tiêu huyết học chức gan, thận chuột bị gây u thơng qua số tiêu sinh hố máu 126 8.2.2.5 Khả kích hoạt hệ enzyme caspase 3/7 Mu-A 129 8.2.3 Kết luận kết thử nghiệm khả kháng u ung thư in vivo 131 8.3 Hoạt tính sinh học dạng bào chế murrayafoline A 132 8.3.1 Hoạt tính gây độc tế bào mixen-murrayafoline A 132 8.3.2 Đánh giá hoạt tính sinh học murrayafoline A dạng liposome 132 8.3.2.1 Hoạt tính in vitro 132 8.3.2.2 Hoạt tính in vivo 133 8.4 Hoạt tính sinh học hợp chất dãy chuyển hóa tạo dẫn xuất triazole murrayafoline A 135 8.4.1 Hoạt tính gây độc tế bào 135 8.4.2 Hoạt tính kháng viêm 137 8.5 Hoạt tính gây độc tế bào hợp chất dãy chuyển hóa chalcon murrayafoline A 139 viii KẾT LUẬN 141 ĐIỂM MỚI CỦA LUẬN ÁN 143 CÁC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN 144 Tài liệu tham khảo 145 ix DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Mu-A Murrayafoline A Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân proton H-NMR 13 C-NMR Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân đồng vị cacbon 13 DEPT Phổ khuyếch đại HMQC Phổ tƣơng tác gần 13C-1H HMBC Phổ tƣơng tác xa 13C-1H COSY Phổ tƣơng quan 1H-1H CDCl3 Cloroform deuteri hóa DMSO-d6 Dimethyl sulfoxid đƣợc deuteri hóa MeOD Methanol deuteri hóa HR-MS Phổ khối lƣợng phân giải cao HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao UV Phổ tử ngoại EtOAc Ethyl axetat MeOH Methanol EtOH Etanol TBDPS tert -butyldiphenylsilyl clorua (Boc)2O Di-tert-butyl dicacbonat NMO N-methylmorpholine N-oxit PEG Polyetylenglycol THF Tetrahidrofuran DSPC 1,2-Distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine MIC Nồng độ ức chế 100% số cá thể thử nghiệm IC50 Nồng độ ức chế 50% số cá thể thử nghiệm a MẪU SỐ 18 Gan mẫu số 18: Trên mảnh cắt mô gan, thấy cấu trúc gan giới hạn bình thƣờng, tế bào gan thối hóa nhẹ Kết luận: Mơ gan có hình thái giới hạn bình thƣờng Gan mẫu số 18 Các tế bào gan quanh tĩnh Gan mẫu số 18 Các tế bào gan quanh tĩnh mạch trung tâm tiểu thùy thối hóa nhẹ mạch trung tâm tiểu thùy thối hóa nhẹ Nhuộm HE x 100 Nhuộm HE x 100 Thận mẫu số 18: Trên mảnh cắt mô thận thấy sung huyết nhẹ Kết luận: Hình ảnh mơ thận giới hạn bình thƣờng Thận mẫu số 18 Nhu mô thận sung huyết Thận mẫu số 18 Cầu thận sung huyết nhẹ nhẹ Nhuộm HE x 100 Nhuộm HE x 400 250 MẪU SỐ 21 Gan mẫu số 21: Trên mảnh cắt thấy tế bào gan thối hóa nhẹ Kết luận: Mơ gan có hình thái giới hạn bình thƣờng Mẫu gan số 21 Các tế bào gan thối hóa Mẫu gan số 21 Các tế bào gan thối hóa mức độ nhẹ Nhuộm HE x100 mức độ nhẹ Nhuộm HE x400 Thận mẫu số 21: Trên mảnh cắt cho thấy vùng mơ kẽ ống thận có ổ nhỏ xâm nhập tế bào viêm nhân tăng sinh mô liên kết xơ Các cầu thận sung huyết Kết luận: Hình ảnh viêm thận kẽ cục Thận mẫu số 21 Trong vùng mơ kẽ có Thận mẫu số 21 Các cầu thận sung huyết xâm nhập viêm tăng sinh mô liên kết Nhuộm HE x 400 xơ thành ổ nhỏ Nhuộm HE x 100 251 III MẪU SỐ 22 Gan mẫu số 22: Trên mảnh cắt mô gan cho thấy cấu trúc gan không bị đảo lộn, nhận rõ tiểu thùy Các tĩnh mạch trung tâm rãn rộng Trong nhiều vùng nhu mơ gan có xâm nhập viêm mạn tính (chủ yếu lympho bào), tập trung thành ổ nhỏ Các tế bào gan vùng quanh tĩnh mạch trung tâm tiểu thùy thối hóa nhẹ Kết luận: Hình ảnh viêm gan mạn tính dạng ổ Gan mã số 22 Các lympho xâm nhập vào nhu mô gan, tạo thành ổ viêm (mũi tên) Cấu trúc gan không đảo lộn Nhuộm HE x 100 Gan mã số 22 Một vùng khác, lympho xâm nhập vào nhu mô gan, tạo thành ổ viêm (mũi tên) Nhuộm HE x 100 Gan mã số 22 Các lympho xâm nhập vào nhu mô gan, tạo thành ổ viêm (mũi tên), kèm tăng sinh xơ nhẹ Nhuộm HE x 400 Gan mã số 22 Các tế bào gan lắng đọng glycogen Nhuộm PAS x 100 252 Thận mẫu số 22: Trên mảnh cắt nhu mô thận nhuộm HE (HematoxylineEosin) cho thấy khoảng kẽ có nhiều ổ tăng sinh xơ xâm nhập tế bào viêm nhân (chủ yếu lympho bào) Các cầu thận sung huyết nhẹ Kết luận: Hình ảnh viêm thận kẽ cục Thận mẫu số 22 Khoảng kẽ sung huyết nhẹ, Thận mẫu số 22 Vùng khoảng kẽ xâm xâm nhập nhiều tế bào viêm nhân (chủ nhập nhiều tế bào viêm nhân, cầu thận yếu lympho- mũi tên) Nhuộm HE x 100 không thấy tổn thƣơng Nhuộm HE x 400 Thận mẫu số 22.Vùng khác khoảng kẽ sung huyết nhẹ, xâm nhập nhiều tế bào viêm nhân (chủ yếu lympho- mũi tên) Nhuộm HE x 100 253 IV MẪU SỐ 24 Gan mẫu số 24: Trên mảnh cắt mô gan cho thấy cấu trúc gan không bị đảo lộn, nhận rõ tiểu thùy Các tĩnh mạch trung tâm rãn rộng, sung huyết Trong nhiều vùng nhu mơ gan có xâm nhập viêm mạn tính thành ổ (chủ yếu lympho bào) Các tế bào gan vùng quanh tĩnh mạch trung tâm tiểu thùy thối hóa nhẹ Kết luận: Hình ảnh viêm gan mạn tính dạng ổ Gan mã số 24 Các lympho xâm nhập vào nhu mô gan, tạo thành ổ viêm (mũi tên) Cấu trúc gan không đảo lộn Nhuộm HE x 100 Gan mã số 24 Vùng khác thấy lympho xâm nhập vào nhu mô gan, tạo thành ổ viêm (mũi tên) Cấu trúc gan không đảo lộn Nhuộm HE x 100 Gan mã số 24 Một vùng khác thấy lympho xâm nhập vào nhu mô gan, tạo thành ổ viêm (mũi tên) Nhuộm HE x 100 Gan mã số 24 Các lympho xâm nhập vào nhu mô gan, tạo thành ổ viêm (mũi tên) Cấu trúc gan không đảo lộn Nhuộm HE x 400 254 Thận mẫu số 24: Trên mảnh cắt nhu mô thận nhuộm HE (HematoxylineEosin) cho thấy khoảng kẽ có nhiều ổ tăng sinh xơ xâm nhập tế bào viêm nhân (chủ yếu lympho bào) Các cầu thận sung huyết nhẹ Kết luận: Hình ảnh viêm thận kẽ cục Thận mẫu số 24 Khoảng kẽ sung huyết nhẹ, Thận mẫu số 24 Khoảng kẽ cầu xâm nhập nhiều tế bào viêm nhân (chủ thận sung huyết nhẹ (mũi tên) Nhuộm HE yếu lympho- mũi tên) Nhuộm HE x 100 x 100 Thận mẫu số 24 Khoảng kẽ cầu thận sung huyết nhẹ (mũi tên) Nhuộm HE x 400 255 V MẪU SỐ 25 Gan mẫu số 24: Trên mảnh cắt mô gan cho thấy cấu trúc gan không bị đảo lộn, nhận rõ tiểu thùy Các tĩnh mạch trung tâm rãn rộng, sung huyết Trong nhiều vùng nhu mơ gan có xâm nhập viêm mạn tính thành ổ (chủ yếu lympho bào) Các tế bào gan vùng quanh tĩnh mạch trung tâm tiểu thùy thối hóa nhẹ Kết luận: Hình ảnh viêm gan mạn tính dạng ổ Gan mã số 25 Các lympho xâm nhập vào nhu mô gan, tạo thành ổ viêm (mũi tên) Cấu trúc gan không đảo lộn Nhuộm HE x 100 Gan mã số 25 Vùng khác thấy lympho xâm nhập vào nhu mô gan, tạo thành ổ viêm (mũi tên) Cấu trúc gan không đảo lộn Nhuộm HE x 100 Gan mã số 25 Vùng khác thấy lympho Gan mã số 25 Các tế bào gan thối hóa xâm nhập vào nhu mơ gan, tạo thành ổ nhẹ Nhuộm HE x 400 viêm (mũi tên) Cấu trúc gan không đảo lộn Nhuộm HE x 100 256 Thận mẫu số 25: Trên mảnh cắt mô thận thấy sung huyết nhẹ Kết luận: Hình ảnh mơ thận giới hạn bình thƣờng Thận mẫu số 25 Nhu mô thận sung huyết Thận mẫu số 25 Cầu thận sung huyết nhẹ nhẹ HE x 100 HE x 100 257 VI MẪU SỐ 27 Gan mẫu số 27: Trên mảnh cắt nhu mô gan thấy cấu trúc gan giới hạn bình thƣờng Các tế bào gan thối hóa nhẹ Kết luận: Gan khơng có tổn thƣơng Gan mẫu số 27 Cấu trúc gan giới hạn Gan mẫu số 27 Tế bào gan thối hóa nhẹ Nhuộm HE x 400 bình thƣờng Nhuộm HE x 100 Thận mẫu số 27: Trên mảnh cắt mô thận thấy sung huyết nhẹ Kết luận: Hình ảnh mơ thận khơng có tổn thƣơng Thận mẫu số 27 Các cầu thận sung huyết Thận mẫu số 27 Các ống thận sung huyết nhẹ HE x 100 nhẹ HE x 100 258 MẪU SỐ 31 Gan mẫu số 31: Trên mảnh cắt thấy tế bào gan thối hóa nhẹ Kết luận: Mơ gan có hình thái giới hạn bình thƣờng Gan mẫu số 31 Cấu trúc gan giới hạn bình thƣờng Nhuộm HE x 100 Gan mẫu số 31 Cấu trúc gan giới hạn bình thƣờng Nhuộm HE x 400 259 Thận mẫu số 31: Trên mảnh cắt cho thấy vùng mô kẽ ống thận có ổ nhỏ xâm nhập tế bào viêm nhân tăng sinh mô liên kết xơ Các cầu thận sung huyết Kết luận: Hình ảnh viêm thận kẽ cục Thận mẫu số 31 Khoảng kẽ sung huyết nhẹ, Thận mẫu số 31 Khoảng kẽ xâm nhập nhiều xâm nhập nhiều tế bào viêm nhân (chủ tế bào viêm nhân (chủ yếu lymphoyếu lympho- mũi tên) Nhuộm HE x 100 mũi tên) Nhuộm HE x 400 Thận mẫu số 31 Vùng nhu mô thận khác có khoảng kẽ sung huyết nhẹ, xâm nhập nhiều tế bào viêm nhân (chủ yếu lympho- mũi tên) Nhuộm HE x 100 260 MẪU SỐ 35 Gan mẫu số 35: Trên mảnh cắt mô gan cho thấy cấu trúc gan không bị đảo lộn, nhận rõ tiểu thùy Các tĩnh mạch trung tâm rãn rộng, sung huyết Trong nhiều vùng nhu mô gan có xâm nhập viêm mạn tính thành ổ (chủ yếu lympho bào) Các tế bào gan vùng quanh tĩnh mạch trung tâm tiểu thùy thối hóa nhẹ Kết luận: Hình ảnh viêm gan mạn tính dạng ổ Gan mã số 35 Các lympho xâm nhập nhu mô gan, tạo thành ổ viêm (mũi tên) Cấu trúc gan không đảo lộn Nhuộm HE x 100 Gan mã số 35 Các lympho xâm nhập khoảng cửa gan, tạo thành ổ viêm (mũi tên) Cấu trúc gan không đảo lộn Nhuộm HE x 100 Gan mã số 35 Các lympho xâm nhập Gan mã số 35 Các lympho xâm nhập trong nhu mô gan khoảng cửa, tạo thành nhu mô gan, tạo thành ổ viêm (mũi tên) ổ viêm (mũi tên) Cấu trúc gan không Nhuộm HE x 400 đảo lộn Nhuộm HE x 100 Gan mã số 35 Các tế bào gan lắng đọng glycogen Nhuộm PAS x 100 261 Thận mẫu số 35: Trên mảnh cắt cho thấy vùng mơ kẽ ống thận có ổ nhỏ xâm nhập tế bào viêm nhân tăng sinh mô liên kết xơ Các cầu thận sung huyết Kết luận: Hình ảnh viêm thận kẽ cục Thận mẫu số 35 Khoảng kẽ sung huyết Thận mẫu số 35 Vùng khác khoảng kẽ nhẹ, xâm nhập nhiều tế bào viêm nhân xâm nhập nhiều tế bào viêm nhân (chủ (chủ yếu lympho- mũi tên) Nhuộm HE x yếu lympho- mũi tên) Nhuộm HE x 100 100 Thận mẫu số 35 Các cầu thận sung huyết nhẹ Nhuộm HE x 400 262 MẪU SỐ 36 Gan mẫu số 36: Nhu mô gan sung huyết nhẹ, không thấy tổn thƣơng Kết luận: Gan không tổn thƣơng Gan mã số 36 Cấu trúc gan không bị đảo lộn, tế bào gan không thấy tổn thƣơng, mô đệm không thấy xâm nhập viêm Nhuộm HE x 100 Gan mã số 36 Các tế bào gan lắng đọng glycogen nhẹ PAS x 100 263 Thận mẫu số 36: Trên mảnh cắt mô thận thấy sung huyết nhẹ, mô đệm không thấy tế bào viêm Kết luận: Hình ảnh mơ thận khơng có tổn thương Thận mẫu số 36 Nhu mô thận không thấy tổn thƣơng Nhuộm HE x 100 264 ... 2-metoxy-4-metyl-nitrobenzen 64 5.2.2 Tổng hợp 2-metoxy-4-metylanilin 67 5.2.3 Tổng hợp 2-methoxy-4-metyl-N-phenylanilin 68 5.2.4 Tổng hợp murrayafoline A 69 CHƢƠNG... MỤC SƠ ĐỒ Sơ đồ 1.1: Sơ đồ lai hóa murrayafoline A tạo dẫn xuất với 5-fluorouracil, acridone, murrayafoline A, ciprofloxacin, piperazine 11 Sơ đồ 1.2: Sơ đồ lai hóa Mu-A tạo dẫn xuất với... tác paladi kết hợp với đồng .18 Sơ đồ 2.6: Tổng hợp số carbazole xúc tác Pd 19 Sơ đồ 2.7: Tổng hợp murrayfoline A theo phƣơng pháp oxi hóa amin BuchwaldHartwig với xúc tác paladi