Nghiên cứu định lượng cefoperazon trong thuốc tiêm và mẫu nước tiểu tự tạo bằng phương pháp von ampe cực giọt thủy ngân

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 2 1.1 PHƯƠNG PHÁP CỰC PHỔ 2 1.1.1. Phương pháp cực phổ xung thường (Normal Pulse Polarography – NPP) 4 1.1.2. Phương pháp cực phổ xung vi phân (Differential Pulse Polarography – DPP) 7 Hình 1.4 : Dạng điện áp phân cực trong phương pháp DPP 7 1.1.3. Các loại điện cực được sử dụng trong phương pháp vonampe 8 1.1.3.1. Cực rắn hình đĩa ( Rotating disc electrode RDE) 8 1.1.3.2. Điện cực màng thuỷ ngân (Thin mecury film electrode TMFE) 9 1.1.3.3. Điện cực giọt thuỷ ngân 10 1.2. CEFOPERAZON 11 1.2.1. Công thức cấu tạo 11 1.2.2. Đặc điểm dược lý 12 1.2.2.1. Dạng dùng và hàm lượng: 12 1.2.2.2. Phổ kháng khuẩn 12 1.2.2.3. Dược động học: 13 1.2.2.5. Ðộ ổn định và bảo quản 13 1.3. Các phương pháp định lượng cefoperazon 14 CHƯƠNG 2 21 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1. ĐỐI TƯỢNG NGUYÊN LIỆU VÀ THIẾT BỊ 21 2.1.1. Đối tượng nghiên cứu 21 2.1.2. Nguyên liệu và thiết bị 22 2.1.2.1. Nguyên liệu: 22 2.1.2.2. Dụng cụ: 23 2.1.2.3. Máy móc thiết bị: 23 2.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.2.1. Xây dựng phương pháp định lượng cefoperazon bằng phương pháp Von – ampe tích góp xung vi phân 24 2.2.2. Ứng dụng phương pháp Von ampe tích góp xung vi phân đã nêu để định lượng cefoperazon trong thuốc tiêm và mẫu nước tiểu tự tạo 24 2.2.3. Xử lý kết quả thực nghiệm 24 CHƯƠNG 3 26 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 26 3.1. Kết quả thực nghiệm và nhận xét 26 3.1.1. Chuẩn bị hóa chất 26 3.1.1.1. Pha đệm vạn năng (đệm Britton – Robinson) 26 3.1.1.2. Pha đệm acetat pH 4 26 3.1.1.3. Pha đệm phosphat pH 4 26 3.1.2. Chuẩn bị mẫu 27 3.1.3. Tìm hiểu cơ chế phản ứng khử cực của cefoperazon với điện cực giọt thủy ngân treo 27 3.1.4. Xây dựng phương pháp định lượng cefoperazon bằng cực phổ xung vi phân 29 3.1.4.1. Tối ưu hóa điều kiện phân tích 29 3.1.4.2. Khảo sát khoảng tuyến tính 36 3.1.4.3. Kiểm tra độ lặp và độ đúng 39 3.2. Ứng dụng phương pháp cực phổ xung vi phân để định lượng cefoperazon trong các chế phẩm 41 3.2.1. Chuẩn bị dung dịch thử 41 3.2.2. Kết quả định lượng 41 3.3. Ứng dụng phương pháp cực phổ xung vi phân để định lượng cefoperazon trong mẫu nước tiểu tự tạo 45 3.4. Bàn luận 47 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 51

LỜI CẢM ƠN

Lời đầu tiên tôi xin được gửi tới thầy giáo – T.S Vũ Đặng Hoàng lời biết

ơn chân thành và sâu sắc nhất Thầy là người đã trực tiếp giao đề tài và tậntình chỉ bảo, hướng dẫn, giúp đỡ tôi trong quá trình nghiên cứu và hoànthành luận văn

Tôi xin chân thành cảm ơn các thầy cô Bộ môn Hóa Phân tích –Kiểm Nghiệm Trường Đại Học Dược Hà Nội, các anh chị kỹ thuật viên đãgiúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi về máy móc, trang thiết bị, cơ sở vật chấtcũng như hóa chất, dụng cụ trong suốt quá trình tôi thực hiện đề tài

Và tôi cũng xin chân thành cảm ơn các thầy cô Phòng sau đại học vàcác thầy cô trường Đại Học Dược Hà Nội đã hướng dẫn, cho tôi kiến thứccủa 2 năm chương trình đào tạo thạc sỹ để tôi có thể hoàn thành tốt luậnvăn tốt nghiệp

Cuối cùng tôi xin được cảm ơn Bố mẹ và những người thân trong giađình tôi, cảm ơn tất cả bạn bè, cảm ơn 2 bạn cộng sự - sinh viên Phan HồngPhúc và Đào Thị Huyền đã luôn động viên, cổ vũ để tôi hoàn thành tốt luậnvăn của mình

Hà Nội – Tháng 08.2013

MỤC LỤC

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 2

1.1 PHƯƠNG PHÁP CỰC PHỔ 2

1.1.1 Phương pháp cực phổ xung thường (Normal Pulse Polarography – NPP) 4

1.1.2 Phương pháp cực phổ xung vi phân (Differential Pulse Polarography – DPP) 7

Hình 1.4 : Dạng điện áp phân cực trong phương pháp DPP 7

1.1.3 Các loại điện cực được sử dụng trong phương pháp von-ampe 8

1.1.3.1 Cực rắn hình đĩa ( Rotating disc electrode -RDE) 8

1.1.3.2 Điện cực màng thuỷ ngân (Thin mecury film electrode -TMFE) .9

1.1.3.3 Điện cực giọt thuỷ ngân 10

1.2 CEFOPERAZON 11

1.2.1 Công thức cấu tạo 11

1.2.2 Đặc điểm dược lý 12

1.2.2.1 Dạng dùng và hàm lượng: 12

1.2.2.2 Phổ kháng khuẩn 12

1.2.2.3 Dược động học: 13

1.2.2.5 Ðộ ổn định và bảo quản 13

1.3 Các phương pháp định lượng cefoperazon 14

CHƯƠNG 2 21

ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21

2.1 ĐỐI TƯỢNG - NGUYÊN LIỆU VÀ THIẾT BỊ 21

2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 21

2.1.2 Nguyên liệu và thiết bị 22

2.1.2.1 Nguyên liệu: 22

2.1.2.2 Dụng cụ: 23

2.1.2.3 Máy móc thiết bị: 23

2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24

2.2.1 Xây dựng phương pháp định lượng cefoperazon bằng phương pháp Von – ampe tích góp xung vi phân 24

2.2.2 Ứng dụng phương pháp Von- ampe tích góp xung vi phân đã nêu để định lượng cefoperazon trong thuốc tiêm và mẫu nước tiểu tự tạo 24

2.2.3 Xử lý kết quả thực nghiệm 24

CHƯƠNG 3 26

KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 26

3.1 Kết quả thực nghiệm và nhận xét 26

3.1.1 Chuẩn bị hóa chất 26

3.1.1.1 Pha đệm vạn năng (đệm Britton – Robinson) 26

3.1.1.2 Pha đệm acetat pH 4 26

3.1.1.3 Pha đệm phosphat pH 4 26

3.1.2 Chuẩn bị mẫu 27

3.1.3 Tìm hiểu cơ chế phản ứng khử cực của cefoperazon với điện cực giọt thủy ngân treo 27

3.1.4 Xây dựng phương pháp định lượng cefoperazon bằng cực phổ xung vi phân 29

3.1.4.1 Tối ưu hóa điều kiện phân tích 29

3.1.4.2 Khảo sát khoảng tuyến tính 36

3.1.4.3 Kiểm tra độ lặp và độ đúng 39

3.2 Ứng dụng phương pháp cực phổ xung vi phân để định lượng cefoperazon trong các chế phẩm 41

3.2.1 Chuẩn bị dung dịch thử 41

3.2.2 Kết quả định lượng 41

3.3 Ứng dụng phương pháp cực phổ xung vi phân để định lượng cefoperazon trong mẫu nước tiểu tự tạo 45

3.4 Bàn luận 47

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 51

DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Số

thứ tự

Chữ

01 HPLC High performance liquid

chromatography

Sắc ký lỏng hiệu năng cao

02 DPP Differential pulse

polarography

Cực phổ xung vi phân

03 NPP Normal pulse polarography Cực phổ xung thường

05 HMDE Hanging mercury drop

electrode

Điện cực giọt thủy ngân

06 TMFE Thin mecury film electrode Điện cực màng thủy

ngân

07 RDE Rotating disc electrode Điện cực rắn hình đĩa

08 SMDE Static mercury drop electrode Điện cực giọt thủy ngân

rơi cưỡng bức

10 RSD Relative Standard Deviation Độ lệch chuẩn tương đối

12 CCF Central Composite Face Mô hình thiết kế mặt

01 Bảng 1.1 Các phương pháp định lượng cefoperazon 14

03 Bảng 3.1 Các thông số máy đo cực phổ von – ampe

04 Bảng 3.2 Các thông số đo cực phổ xung vi phân 29

05 Bảng 3.3 Kết quả đo cực phổ xung vi phân

cefoperazon 0,03 ppm theo mô hình thiết

09 Bảng 3.7 Kết quả kiểm tra độ lặp và độ đúng của

phương pháp với các dung dịch cefoperazon 0,03 ppm

40

10 Bảng 3.8 Kết quả kiểm tra độ lặp và độ đúng của

phương pháp với các dung dịch cefoperazon 0,03 ppm khi có mặt sulbactam 0,03 ppm

44

13 Bảng Kết quả định lượng cefoperazon trong 4 46

3.11 mẫu kiểm soát chất lượng (n=6)

3.12

Kết quả tìm lại nồng độ nước tiểu trong 3

04 Hình 1.4 Dạng điện áp phân cực trong phương pháp DPP 7

05 Hình 1.5 Dạng tín hiệu đầu ra của phương pháp DPP 7

06 Hình 1.6 Công thức cấu tạo của Cefoperazon Natri 11

07 Hình 3.1

Các cực phổ đồ von – ampe vòng của dung dịch cefoperazon 0,03 ppm trong nền đệm vạn năng pH 3,05 (a); 4,04 (b); 5,01 (c); 6,02 (d)

28

Đồ thị sự phụ thuộc vị trí xuất hiện pic trên cực phồ đồ von – ampe vòng cefoperazon 0,03 ppm vào pH của đệm vạn năng

28

Cực phổ đồ xung vi phân của dung dịch cefoperazon 0,03 ppm trong nềm đệm phosphat pH 4

38

17 Hình 3.11 Đồ thị biểu diễn đường chuẩn của 39

cefoperazon khi có mặt sulbactam 0,03 ppm

18 Hình 3.12 Cực phổ đồ xung vi phân của cefoperazon

19 Hình 3.13 Cực phổ đồ xung vi phân của cefoperazon

20 Hình 3.14 Sắc ký đồ của cefoperazon chuẩn 20 ppm 43

21 Hình 3.15 Cực phổ đồ xung vi phân của cefoperazon

0,01÷0,07 ppm trong nước tiểu 45

22 Hình 3.16 Đô thị biểu diễn đường chuẩn của cefoperazon

23 Hình 3.17 Cơ chế phản ứng khử cực của cefoperazon

trong môi trường acid với cực giọt thủy ngân 47

ĐẶT VẤN ĐỀ

Việc sử dụng kháng sinh tiêm đang trở nên phổ biến ở Việt Nam do môitrường ngày càng ô nhiễm kèm theo sự kháng thuốc ngày một nhiều củacác chủng vi khuẩn Các kháng sinh được kê đơn hiện nay thường có phổrộng, hoạt tính kháng khuẩn cao cho các trường hợp nhiễm khuẩn nặng cóthể nguy hiểm đến tính mạng người bệnh

Các cephalosporin là kháng sinh thuộc nhóm Beta-lactam, nhóm thuốcđược đánh giá là an toàn nhất hiện nay khi sử dụng Các cephalosporinđược chia làm 4 thế hệ Các thế hệ đầu có phổ kháng khuẩn chủ yếu trên vikhuẩn Gram dương, các thế hệ sau phổ kháng khuẩn ngày càng mở rộngbao gồm cả các vi khuẩn Gram âm

Cefoperazon là một cephalosporin thế hệ 3 được bào chế dưới dạng thuốctiêm thường được sử dụng hiện nay Để định lượng cefoperazon bột phatiêm, các dược điển Anh, Mỹ đều quy định dùng phương pháp sắc ký lỏnghiệu năng cao (HPLC) Tuy nhiên hiện nay, dược điển Việt Nam IV chưa

có quy định nào về việc định lượng các chế phẩm có chứa cefoperazon.Với mục đích xây dựng một phương pháp định lượng cefoperazon có khảnăng thay thế HPLC trong công tác kiểm nghiệm thuốc, chúng tôi thựchiện đề tài:

“Nghiên cứu định lượng cefoperazon trong thuốc tiêm và mẫu nước tiểu tự tạo bằng phương pháp von-ampe cực giọt thủy ngân treo” với hai mục tiêu sau:

- Xây dựng phép định lượng cefoperazon bằng phương pháp von-ampexung vi phân trên cực giọt thủy ngân

- Ứng dụng phương pháp này để định lượng cefoperazon trong thuốc tiêm

và mẫu nước tiểu tự tạo

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 PHƯƠNG PHÁP CỰC PHỔ [1]

Phương pháp cực phổ là nhóm các phương pháp phân tích dựa vào việcnghiên cứu đường cong Von-ampe hay còn gọi là đường cong phân cực Đây

là đường cong biểu diễn sự phụ thuộc cường độ dòng điện vào điện thế khitiến hành điện phân dung dịch phân tích với điện cực giọt thuỷ ngân

Phương pháp này được Heyrovsky phát minh vào năm 1920 và cho đến naycùng với sự phát triển của khoa học kỹ thuật, phương pháp này ngày càngđược cải tiến

Hình 1.1 Tế bào đo trong cực phổ

Cơ sở của phương pháp này là dựa trên phản ứng điện hoá của các chất phântích trong dung dịch điện li trên điện cực giọt thuỷ ngân theo phản ứng:

Ox + ne  KhTrong đó :

Id : Cường độ dòng cực đại giới hạn ( μA )

n : Số electron tham gia vào phản ứng điện cực

1.1.1 Phương pháp cực phổ xung thường (Normal Pulse Polarography – NPP)

Hình 1.2: Dạng điện áp phân cực trong NPP

Hình 1.3.Dạng đồ thị của phương pháp NPP

Dòng Faraday tính theo công thức:

D : Diện tích bề mặt điện cực tại thời điểm đo

Trong mỗi chu kỳ giọt điện cực được phân cực bổ sung bằng một xung vuônggóc có khoảng thời gian tồn tại rất ngắn 40 – 100ms tuỳ theo tiêu chuẩn từngnước và từng máy Sau thời gian đó xung bị ngắt và thế điện cực trở về điện

áp khởi điểm Biên độ xung tăng dần theo thời gian với một tốc độ đều giốngnhư tốc độ quét thế tuyến tính trong cực phổ cổ điển

Cường độ dòng được ghi theo 1 trong 2 cách :

- Ghi cường độ dòng tại một thời điểm sau khi đặt xung thường là 17ms trướckhi ngắt xung

- Cường độ dòng cực phổ được ghi 2 lần : lần 1 trước khi ngắt xung và lần 2 saukhi ngắt xung Thường là 17ms trước và sau khi đặt và ngắt xung Cách này chohiệu quả tốt hơn và thu được đường E – I là dạng píc như trong cực phổ sóngvuông

Phương pháp này có thể đạt độ nhạy 10-7M cho cả hai quá trình thuận nghịch

và không thuận nghịch, đặc biệt thích hợp cho phép phân tích chất hữu cơ.Trong một số trường hợp ngay cả phương pháp cổ điển không cho sóng cựcphổ rõ ràng thì nó vẫn cho sóng cực phổ rõ ràng

1.1.2 Phương pháp cực phổ xung vi phân (Differential Pulse Polarography – DPP)

Hình 1.4 : Dạng điện áp phân cực trong phương pháp DPP

ΔFei : Biên độ xung

ΔEstep : Bước thế một xung điện

tstep : Thời gian nạp xung điện

Hình 1.5 : Dạng tín hiệu đầu ra của phương pháp DPP

Trong phương pháp cực phổ xung vi phân điện cực giọt thuỷ ngân được phâncực bằng một điện áp một chiều biến thiên tuyến tính với tốc độ chậm ( 1 – 2mV/s ) nhưng vào cuối mỗi chu kỳ giọt (giọt rơi cưỡng bức nhờ bộ gõ), trênkhung điện áp biến đổi một chiều người ta đặt thêm một xung vuông góc vớibiên độ thay đổi trong khoảng 10 – 100 mV và độ dài xung cỡ 400 – 100 ms.Cường độ dòng là hiệu của giá trị dòng ghi ở 17ms trước khi nạp xung và17ms sau khi ngắt xung.

Ưu điểm nổi bật của kỹ thuật này là đường cực phổ là dạng píc có cực đại nênsau mỗi lần ghi đường nền lại trở về vị trí ban đầu nên độ chọn lọc củaphương pháp này tăng lên nhiều lần

1.1.3 Các loại điện cực được sử dụng trong phương pháp von-ampe

1.1.3.1 Cực rắn hình đĩa ( Rotating disc electrode -RDE)

Đó là một mặt phẳng hình tròn đường kính 3 ÷ 5 mm làm bằng các vật liệutrơ như platin, vàng và các loại cacbon có độ tinh khiết cao, trơ và có bề mặt

dễ đánh bóng để diện tích bề mặt không đổi Platin quý hiếm nhưng khó giacông bề mặt để cho diện tích bề mặt có diện tích không đổi, vì quá thế hiđrotrên platin nhỏ nên khoảng thế sử dụng hẹp đặc biệt là với quá trình catot

Vật liệu tốt nhất để sản xuất điện cực rắn hình đĩa là cacbon thuỷ tinh có độbền hoá học cao, không thay đổi kể cả khi ngâm nhiều giờ trong nước cườngthuỷ, dễ đánh bóng bề mặt

Thực nghiệm đã chứng minh rằng lấy các loại giấy nhám mịn đánh bóng bềmặt điện cực đĩa quay bằng than thuỷ tinh thì bề mặt thực của nó bằng bề mặthình học của nó:

S = Π R2

Ngoài cacbon thuỷ tinh có thể dùng cacbon ngâm tẩm hoặc cacbon nhão đểchế tạo điện cực đĩa.

Khoảng thế hoạt động của điện cực này rất rộng :

- Trong môi trường axít : +1 ÷ -1 V

- Trong môi trường kiềm hoặc trung tính : +1 ÷ -1,8 V

1.1.3.2 Điện cực màng thuỷ ngân (Thin mecury film electrode -TMFE)

Loại cực này rất thuận lợi cho việc xác định lượng vết các kim loại dễ tạo hỗnhỗng với thuỷ ngân Chỉ cần thêm vào dung dịch phân tích một lượng Hg2+với nồng độ 10-5 ÷ 10-4 M, khi điện phân làm giàu kim loại phân tích thì ion

Hg2+ cũng bị khử đồng thời hoặc khử trước tạo thành một màng mỏng và đềuthuỷ ngân trên bề mặt cực rắn Kim loại cần xác định được hoà tan đều trongmàng đó, dùng điện cực TMFE hạn chế được sự hình thành hợp chất trunggian kim loại hoặc dung dịch rắn khi xác định lượng vết của một số ion kimloại có mặt trong dung dịch

Thông thường người ta dùng điện cực màng thuỷ ngân trên nền than thủy tinh Có 3 loại than thường dùng :

+ Grafit ngâm tẩm : loại này ít sử dụng vì có lỗ xốp hấp thụ khí

+ Grafit cacbon ( than thuỷ tinh ) : được dùng nhiều nhất

+ Grafit nhão : Đôi khi cũng được dùng tuy nhiên hình dạng của nó có thể bịbiến đổi trong một số truờng hợp

- Màng mỏng thuỷ ngân được tạo ra bằng hai cách :

+ Tạo màng mỏng trước

+ Tạo màng đồng thời

Mỗi cách có một ưu việt riêng được áp dụng cho từng đối tượng khác nhautuỳ vị trí của ion kim loại tạo màng Nồng độ thuỷ ngân thường được dùnggấp 100 ÷ 1000 lần so với nồng độ của ion phân tích

1.1.3.3 Điện cực giọt thuỷ ngân

Điện cực giọt thuỷ ngân bao gồm 3 loại : điện cực giọt thuỷ ngân (HMDE),điện cực giọt thuỷ ngân rơi cưỡng bức ( SMDE ) và điện cực giọt rơi (DME)

Điện cực giọt thuỷ ngân là một giọt thuỷ ngân có kích thước nhỏ và bất độngđường kính khoảng 1mm được treo trên một mao quản bằng thuỷ tinh hơi lõm

ở giữa có một mẩu nhỏ ngắn platin để dẫn điện Để đảm bảo tính chính xác và

độ lặp lại của phép xác định yêu cầu của giọt thuỷ ngân tĩnh là có kích thướckhông đổi và độ lặp lại cao Vì sau mỗi lần đo phải tạo một giọt khác giốngnhư giọt ban đầu

Ưu điểm của điện cực giọt thuỷ ngân :

+ Khoảng thế cho phép của thuỷ ngân rất rộng, nên xác định được một số lớnkim loại Trong môi trường axít khoảng thế axít tốt là -0,15 ÷ -1,2V và trongmôi trường bazơ khoảng thế tốt là -0,15 ÷ 2V

+ Dùng điện cực thuỷ ngân thuận lợi cho việc chọn nền phân tích, chọn thếđiện phân, có độ lặp lại cao Có thể xác định được nồng độ thấp tuỳ phươngpháp

Nếu trong quá trình ghi cực phổ đồ của chất phân tích giọt thuỷ ngân bị rơicưỡng bức theo một chu kì nhất định thì được gọi là điện cực giọt thuỷ ngânrơi cưỡng bức ( SMDE ).

Ưu điểm của điện cực SMDE cũng như DME là điện cực giọt rơi nên điệncực luôn được làm mới, nhưng SMDE lại có ưu điểm như HMDE kích cỡ nhỏ

Tuy thế đối với phương pháp sử dụng TMFE các hợp chất trung gian kim loại

dễ hình thành khi phân tích theo phương pháp Von – ampe hoà tan, gây ra sựbiến dạng tín hiệu dẫn đến sai số

1.2 CEFOPERAZON [2]

1.2.1 Công thức cấu tạo

Hình 1.6: Công thức cấu tạo của Cefoperazon Natri

- Tên khoa học: Sodium

(6R,7R)-7-[[(2R)-2-[[(4-ethyl-2,3-dioxopiperazin-1-yl)carbonyl]amino]-2-(4-hydroxyphenyl)acetyl]amino]-3-[[(1-methyl-1H 5-yl)sulphanyl]methyl]-8-oxo-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylate

tetrazol Công thức hoá học: C25H27N9O8S2Na

- Khối lượng phân tử: 668

- Độ tan: tan tốt trong nước, methanol, ít tan trong ethanol 96%

Phổ kháng khuẩn của cefoperazon bao gồm các vi khuẩn Gram âm(Haemophilus influenzae, Pseudomonas aeruginosa, Moraxella catarrhalis, vàNeisseria spp) và các vi khuẩn Gram dương (Staphylococcus aureus, Staph.epidermidis, Streptococcus nhóm A, và B, Streptococcus viridans vàStreptococcus pneumoniae) Tuy nhiên tác dụng của cefoperazon trên các cầukhuẩn Gram dương kém hơn các cephalosporin thế hệ thứ nhất và thế hệ thứ hai

Ngoài ra, cefoperazon có tác dụng trên một số vi khuẩn kị khí nhưPeptococcus, Peptostreptococcus, các chủng Clostridium, Bacteroides fragilis,

và các chủng Bacteroides Hoạt tính của cefoperazon, đặc biệt là đối với cácchủng Enterobacteriaceae và Bacteroides, tăng lên với sự hiện diện của chất

ức chế beta - lactamase như sulbactam

1.2.2.3 Dược động học:

Cefoperazon không hấp thu qua đường tiêu hóa nên phải dùng đường tiêm.Thuốc tiêm cefoperazon là dạng muối natri Tiêm bắp các liều 1 g hoặc 2 gcefoperazon, nồng độ đỉnh huyết tương tương ứng là 65 và 97 g/mL sau 1đến 2 giờ Tiêm tĩnh mạch, 15 đến 20 phút sau, nồng độ đỉnh huyết tương gấp

2 - 3 lần nồng độ đỉnh huyết tương của tiêm bắp Thời gian bán thải củacefoperazon là 2 giờ, thời gian này kéo dài hơn ở trẻ sơ sinh và ở người bệnh

bị bệnh gan hoặc đường mật Cefoperazon gắn kết với protein huyết tương từ

Cefoperazon thải trừ chủ yếu ở mật (70% đến 75%) và nhanh chóng đạt đượcnồng độ cao trong mật Cefoperazon thải trừ trong nước tiểu chủ yếu qua lọccầu thận Khoảng 30% liều sử dụng thải trừ trong nước tiểu ở dạng không đổitrong vòng 12 đến 24 giờ; ở người bị bệnh gan hoặc mật, tỷ lệ thải trừ trongnước tiểu tăng

1.2.2.5 Ðộ ổn định và bảo quản

Chế phẩm bột pha tiêm cefoperazon được bảo quản ở nhiệt độ ≤ 250C, tránhánh sáng trước khi pha

1.3 Các phương pháp định lượng cefoperazon

Bảng 1.1. Các phương pháp định lượng cefoperazon

Phương

Tài liệu tham khảo

- Chuẩn nội: Ornidazol

- Pha động: đệm phosphat pH 3,5: acetonitril (35 :

- Chuẩn nội: Captopril

- Pha động: Nước pH 3,2 : acetonitril (40 : 60)

- Cột: Phenomenex Gemini C18 5 µm, 250 x 4,6

[21]

- Tốc độ dòng: 0,5 ml/phút

- Detector: 210 nm

Định lượng đồng thời sulbactam, sultamicilin

tosylat, cefaclor, ampicillin và cefoperazon trong

chế phẩm

- Chuẩn nội: Salicylamid

tetramethylammonium 0,005 M điều chỉnh tới pH

Định lượng cefoperazon trong chế phẩm

- Pha động: Amoni acetat pH 5,5 : MeOH (30 :

Định lượng đồng thời các penicillin và

cefoperazon trong chế phẩm và dịch sinh học

- Pha động: MeOH : NaCl 0,2M (35 : 65 → 65 :

35)

- Cột: Alltech C18 10 µm, 250 x 4,6 mm

- Tốc độ dòng 1,5 – 2,2 ml/phút

- Detector: Điện hóa sau phản ứng phân hủy do

nguồn bức xạ Photronix Model 816 UV

[14]

Định lượng đồng thời ampicillin, cefoperazon và

sulbactam trong chế phẩm

[7]

- Pha động: MeOH : đệm tetraethylammonium

Định lượng đồng thời cefalexin, cefoperazon,

ceftriaxon, ceftazidim, cefepim; cefoperazon và

Định lượng cefoperazon trong chế phẩm

- Pha tĩnh: Silica gel G 60F254

- Pha động: Ethyl acetat : methanol : nước :

aceton (3:1:1:2)

- Phát hiện: Quan sát dưới đèn UV 220 nm 50 Hz

sau khi phun thuốc thử Dragendorff

[11]

Sắc ký

điện động

mixen

Định lượng đồng thời cephazolin, cefuroxim,

ceftriaxon, cefoperazon và ceftazidim trong hỗn

pentanesulfonic acid

- Detector: 214 nm

Quang

phổ UV

Định lượng cefoperazon trong chế phẩm

- Dung môi: MeOH

- Đo quang tại λ = 230 nm

- Đo diện tích dưới đường cong phổ hấp thụ trong

Định lượng cefoperazon trong chế phẩm

- Tạo phản ứng với folin – ciocalteau trong môi

trường kiềm (Na2CO3) và đo quang tại λmax của

hợp chất màu xanh 652 nm

[24]

Định lượng cefoperazon trong chế phẩm

- Tạo phản ứng với folin – ciocalteau phenol trong

môi trường Na2CO3 và đo quang tại λmax của hợp

chất màu xanh 668 nm

[30]

Định lượng cefoperazon trong chế phẩm

- Đo quang tại:

- Nitrat hóa và tạo phức với tác nhân ái nhân (I):

390 nm

- Nitrat hóa và tạo chalate kim loại (II): 520 nm

- Tạo liên kết với diazo (III): 435 nm

[22]

- Phản ứng với muối đồng và chiết phức chelat

tạo thành vào cloroform (IV): 415 nm

Định lượng cefoperazon trong chế phẩm

- Đo quang trong 1,2 – dicloroethan tại 364 nm

sản phẩm của phản ứng với iod

- Đo quang trong methanol tại 460 nm sản phẩm

của phản ứng với 2,3–dicloro–5,6–dicyano–p–

Định lượng cefoperazon trong chế phẩm

- Đo quang tại λ = 510 nm sau 30 phút phản ứng

với quercetin đã được oxy hóa bởi N–

Định lượng cefoperazon trong chế phẩm

- Đo quang phức bậc ba tạo thành nhờ phản ứng

với Tb3+ trong đệm Tris với pH 8

- λ kích thích = 240; λ phát xạ = 485 nm

[27]

Định lượng cefoperazon trong chế phẩm

- Đo quang dẫn xuất coumarin phát quang màu

vàng được tạo thành nhờ phản ứng với ethyl

acetat trong môi trường acid sulfuric

- λ kích thích = 412; λ phát xạ = 465 nm

[4]

So màu

và phổ

hấp thụ

nguyên tử

Định lượng cefoperazon trong chế phẩm

- So màu tại bước sóng 525 nm hoặc đo quang tại

bước sóng 358,6 nm cặp ion tạo thành giữa chất

phân tích và muối Amoni reineckat trong môi

Von – ampe sóng vuông

- Điện cực công tác: giọt thủy ngân

Định lượng cefoperazon trong chế phẩm, tế bào vi

khuẩn, sữa và nước tiểu

- Điện cực công tác: Giọt thủy ngân

Von – ampe sóng vuông

- Thế bắt đầu: 0,0 V

- Thời gian tích góp: 100s

- Bước thế: 5 mV

[13]

- Biên độ xung: 25 mV

- Tần số xung: 500 Hz

- Chất điện ly nền: Đệm Brittion – Robinson, pH 4,4

Định lượng cefoperazon trong nước tiểu

- Điện cực công tác: Giọt thủy ngân

Von – ampe đo dòng trực tiếp và xung vi phân

2.1 ĐỐI TƯỢNG - NGUYÊN LIỆU VÀ THIẾT BỊ

2.1.1 Đối tượng nghiên cứu

Bảng 2.1 Đối tượng nghiên cứu

Jncetam 1 g

Cefoperazon 500 mg

Nhà sản xuất: Hankook Korus Pharm, Hàn Quốc

Số lô: A01709

Sulbactam 500 mg Số đăng kí: VN - 8024 - 09

Ngày sản xuất: 21/ 06/ 2012Hạn sử dụng: 20/ 06/ 2015

2.1.2 Nguyên liệu và thiết bị

- Nước cất 2 lần đã lọc loại bỏ ion

- NaOH; Acid H3BO3; CH3COONa.3H2O; NaH2PO4; Na2HPO4 (đạt tiêu chuẩnphân tích)

- Dung dịch CH3COOH đặc (≥ 98% khối lượng/khối lượng), dung dịch H3PO4đặc (≥ 84% khối lượng/khối lượng), dung dịch HCl đặc (tỉ trọng ở 20oC =1,18g/ml), nồng độ khoảng 11,5 M) (đạt tiêu chuẩn phân tích)

2.1.2.2 Dụng cụ:

- Bình định mức: 25 ml, 50 ml, 100 ml, 250 ml và 500 ml

Điện cực công tác: Cực giọt Hg (HDME);

Điện cực so sánh: Ag|AgCl|KCl;

Điện cực bổ trợ: Pt

Loại Oxy hòa tan bằng N2 99,99%

- Máy đo pH: Eutech Instruments pH 510 (Eutech)

- Máy cất nước 2 lần (Hamilton)

- Máy lọc nước: Maxima Ultra pure water (ELGA)

- Máy siêu âm: Ultrasonic LC 60 H (ELMA, Đức)

- Cân phân tích: Sartorius (Sartorius)

2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.2.1 Xây dựng phương pháp định lượng cefoperazon bằng phương pháp Von – ampe tích góp xung vi phân

- Tối ưu hóa điều kiện phân tích

- Chọn khoảng nồng độ có sự phụ thuộc tuyến tính giữa các nồng độ vàcác giá trị cường độ dòng điện tương ứng

- Kiểm tra tính thích hợp của hệ thống

- Kiểm tra độ lặp lại của phương pháp

- Kiểm tra độ đúng của phương pháp

- Kiểm tra giới hạn định lượng dưới trong mẫu nước tiểu tự tạo

2.2.2 Ứng dụng phương pháp Von- ampe tích góp xung vi phân đã nêu để định lượng cefoperazon trong thuốc tiêm và mẫu nước tiểu tự tạo

- Định lượng cefoperazon trong các chế phẩm bằng các phương pháp:Von-ampe tích góp xung vi phân và HPLC (theo qui định của dược điển Mỹ,Anh)

- Định lượng cefoperazon trong một số mẫu nước tiểu tự tạo bằng phươngpháp Von-ampe tích góp xung vi phân