NGHIÊN cứu ĐỊNH LƯỢNG CEFOPERAZON TRONG THUỐC TIÊM và mẫu nước TIỂU tự tạo BẰNG PHƯƠNG PHÁP VON AMPE cực GIỌT THỦY NGÂN TREO

WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN TRƯỜNG GIANG NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG CEFOPERAZON TRONG THUỐC TIÊM VÀ MẪU NƯỚC TIỂU TỰ TẠO BẰNG PHƯƠNG PHÁP VON-AMPE CỰC GIỌT THỦY NGÂN TREO LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI 2013 i WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN TRƯỜNG GIANG NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG CEFOPERAZON TRONG THUỐC TIÊM VÀ MẪU NƯỚC TIỂU TỰ TẠO BẰNG PHƯƠNG PHÁP VON-AMPE CỰC GIỌT THỦY NGÂN TREO LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: KIỂM NGHIỆM THUỐC- ĐỘC CHẤT MÃ SỐ: 60720410 Người hướng dẫn khoa học: TS.Vũ Đặng Hoàng HÀ NỘI 2013 ii WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM LỜI CẢM ƠN Lời xin gửi tới thầy giáo – T.S Vũ Đặng Hoàng lời biết ơn chân thành sâu sắc Thầy người trực tiếp giao đề tài tận tình bảo, hướng dẫn, giúp đỡ trình nghiên cứu hoàn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cô Bộ môn Hóa Phân tích – Kiểm Nghiệm Trường Đại Học Dược Hà Nội, anh chị kỹ thuật viên giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi máy móc, trang thiết bị, sở vật chất hóa chất, dụng cụ suốt trình thực đề tài Và xin chân thành cảm ơn thầy cô Phòng sau đại học thầy cô trường Đại Học Dược Hà Nội hướng dẫn, cho kiến thức năm chương trình đào tạo thạc sỹ để hoàn thành tốt luận văn tốt nghiệp Cuối xin cảm ơn Bố mẹ người thân gia đình tôi, cảm ơn tất bạn bè, cảm ơn bạn cộng - sinh viên Phan Hồng Phúc Đào Thị Huyền động viên, cổ vũ để hoàn thành tốt luận văn Hà Nội – Tháng 08.2013 Nguyễn Trường Giang iii WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 PHƯƠNG PHÁP CỰC PHỔ 1.1.1 Phương pháp cực phổ xung thường (Normal Pulse Polarography – NPP) 1.1.2 Phương pháp cực phổ xung vi phân (Differential Pulse Polarography – DPP) Hình 1.4 : Dạng điện áp phân cực phương pháp DPP 1.1.3 Các loại điện cực sử dụng phương pháp von-ampe 1.1.3.1 Cực rắn hình đĩa ( Rotating disc electrode -RDE) 1.1.3.2 Điện cực màng thuỷ ngân (Thin mecury film electrode -TMFE) 1.1.3.3 Điện cực giọt thuỷ ngân 10 1.2 CEFOPERAZON 11 1.2.1 Công thức cấu tạo 11 1.2.2 Đặc điểm dược lý 12 1.2.2.1 Dạng dùng hàm lượng: 12 1.2.2.2 Phổ kháng khuẩn 12 1.2.2.3 Dược động học: 13 1.2.2.5 Ðộ ổn định bảo quản 14 1.3 Các phương pháp định lượng cefoperazon 14 CHƯƠNG 21 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 ĐỐI TƯỢNG - NGUYÊN LIỆU VÀ THIẾT BỊ 21 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 21 2.1.2 Nguyên liệu thiết bị 22 2.1.2.1 Nguyên liệu: 22 2.1.2.2 Dụng cụ: 23 iv WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM 2.1.2.3 Máy móc thiết bị: 23 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.2.1 Xây dựng phương pháp định lượng cefoperazon phương pháp Von – ampe tích góp xung vi phân 24 2.2.2 Ứng dụng phương pháp Von- ampe tích góp xung vi phân nêu để định lượng cefoperazon thuốc tiêm mẫu nước tiểu tự tạo 24 2.2.3 Xử lý kết thực nghiệm 24 CHƯƠNG 26 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 26 3.1 Kết thực nghiệm nhận xét 26 3.1.1 Chuẩn bị hóa chất 26 3.1.1.1 Pha đệm vạn (đệm Britton – Robinson) 26 3.1.1.2 Pha đệm acetat pH 26 3.1.1.3 Pha đệm phosphat pH 26 3.1.2 Chuẩn bị mẫu 27 3.1.3 Tìm hiểu chế phản ứng khử cực cefoperazon với điện cực giọt thủy ngân treo 27 3.1.4 Xây dựng phương pháp định lượng cefoperazon cực phổ xung vi phân 29 3.1.4.1 Tối ưu hóa điều kiện phân tích 29 3.1.4.2 Khảo sát khoảng tuyến tính 36 3.1.4.3 Kiểm tra độ lặp độ 39 3.2 Ứng dụng phương pháp cực phổ xung vi phân để định lượng cefoperazon chế phẩm 41 3.2.1 Chuẩn bị dung dịch thử 41 3.2.2 Kết định lượng 41 3.3 Ứng dụng phương pháp cực phổ xung vi phân để định lượng cefoperazon mẫu nước tiểu tự tạo 45 3.4 Bàn luận 47 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 51 v WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Số thứ Chữ tự viết tắt 01 HPLC 02 DPP 03 NPP Normal pulse polarography 04 UV Ultra violet 05 HMDE 06 TMFE 07 RDE 08 SMDE 09 SD 10 RSD Relative Standard Deviation Độ lệch chuẩn tương đối 11 B–R Britton – Robinson Đệm Britton – Robinson 12 CCF Central Composite Face Tên đầy đủ Ý nghĩa High performance liquid chromatography Differential pulse Sắc ký lỏng hiệu cao Cực phổ xung vi phân polarography Cực phổ xung thường Tử ngoại Hanging mercury drop Điện cực giọt thủy ngân electrode Thin mecury film electrode Điện cực rắn hình đĩa Rotating disc electrode Static mercury drop electrode Điện cực giọt thủy ngân rơi cưỡng Độ lệch chuẩn Standard Deviation vi Điện cực màng thủy ngân Mô hình thiết kế mặt phức hợp trung tâm WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM DANH MỤC CÁC BẢNG Số thứ Kí hiệu tự bảng 01 Bảng 1.1 Các phương pháp định lượng cefoperazon 14 02 Bảng 2.1 Đối tượng nghiên cứu 21 03 Bảng 3.1 Các thông số máy đo cực phổ von – ampe Tên bảng vòng 04 Bảng 3.2 Các thông số đo cực phổ xung vi phân 05 Bảng 3.3 Kết đo cực phổ xung vi phân cefoperazon 0,03 ppm theo mô hình thiết kế Trang 27 29 32 mặt phức hợp trung tâm 06 Bảng 3.4 Các thông số tối ưu phương pháp cực phổ xung vi phân 07 Bảng 3.5 Kết khảo sát tuyến tính cefoperazon 08 Bảng 3.6 Kết khảo sát tuyến tính cefoperazon có mặt sulbactam 0,03 ppm 09 Bảng 3.7 36 36 38 Kết kiểm tra độ lặp độ phương pháp với dung dịch cefoperazon 40 0,03 ppm 10 Bảng 3.8 Kết kiểm tra độ lặp độ phương pháp với dung dịch cefoperazon 40 0,03 ppm có mặt sulbactam 0,03 ppm vii WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM 11 Bảng 3.9 Các thông số trình sắc ký 12 Bảng 3.10 Kết định lượng cefoperazon chế phẩm cực phổ xung vi phân 43 44 HPLC 13 Bảng 3.11 Kết định lượng cefoperazon mẫu kiểm soát chất lượng (n=6) 14 Bảng 3.12 Kết tìm lại nồng độ nước tiểu ngày liên tiếp (n=3) viii 46 46 WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM DANH MỤC CÁC HÌNH Số thứ Kí hiệu tự hình 01 Hình 1.1 Tế bào đo cực phổ 02 Hình 1.2 Dạng điện áp phân cực NPP 03 Hình 1.3 Dạng đồ thị phương pháp NPP 04 Hình 1.4 Dạng điện áp phân cực phương pháp DPP 05 Hình 1.5 Dạng tín hiệu đầu phương pháp DPP 06 Hình 1.6 Công thức cấu tạo Cefoperazon Natri 11 Tên hình Trang Các cực phổ đồ von – ampe vòng dung dịch 07 Hình 3.1 cefoperazon 0,03 ppm đệm vạn 28 pH 3,05 (a); 4,04 (b); 5,01 (c); 6,02 (d) Đồ thị phụ thuộc vị trí xuất pic 08 Hình 3.2 cực phồ đồ von – ampe vòng cefoperazon 28 0,03 ppm vào pH đệm vạn Cực phổ đồ xung vi phân dung dịch 09 Hình 3.3 cefoperazon 0,03 ppm nềm đệm 30 phosphat pH Cực phổ đồ xung vi phân dung dịch 10 Hình 3.4 cefoperazon 0,03 ppm đệm acetat 30 pH 11 Hình 3.5 Cực phổ đồ xung vi phân dung dịch cefoperazon 0,03 ppm đệm B – R pH 31 Mặt đáp biểu diễn ảnh hưởng thời gian 12 Hình 3.6 tích góp bước cường độ dòng 35 đo (thời gian nhảy 0,055 s; biên độ ix WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM xung 0,075 V thời gian áp xung 0,03) Mặt đáp biểu diễn ảnh hưởng biên độ xung 13 Hình 3.7 thời gian áp xung cường độ dòng đo (thời gian tích góp 110 s; bước 0,015 35 V thời gian nhảy 0,055) 14 Hình 3.8 15 Hình 3.9 Cực phổ đồ xung vi phân cefoperazon 0,01 ÷ 0,06 ppm Đồ thị biểu diễn đường chuẩn cefoperazon 37 37 Cực phổ đồ xung vi phân cefoperazon 16 Hình 3.10 0,01 ÷ 0,06 ppm có mặt sulbactam 0,03 38 ppm Đồ thị biểu diễn đường chuẩn 17 Hình 3.11 18 Hình 3.12 19 Hình 3.13 20 Hình 3.14 Sắc ký đồ cefoperazon chuẩn 20 ppm 21 Hình 3.15 22 Hình 3.16 23 Hình 3.17 cefoperazon có mặt sulbactam 0,03 ppm Cực phổ đồ xung vi phân cefoperazon chế phẩm Cefobid Cực phổ đồ xung vi phân cefoperazon chế phẩm Cefactam Cực phổ đồ xung vi phân cefoperazon 0,01÷0,07 ppm nước tiểu Đô thị biểu diễn đường chuẩn cefoperazon nước tiểu Cơ chế phản ứng khử cực cefoperazon môi trường acid với cực giọt thủy ngân x 39 42 42 43 45 45 47 WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM Hình 3.12 Cực phổ đồ xung vi phân cefoperazon chế phẩm Cefobid Mẫu thử Jincetam, Bacamp, Cefactam, Sulperazon Lấy 0,3 ml dung dịch thử đem định mức thành 25 ml dung dịch đệm vạn B – R pH Kết định lượng trình bày bảng 3.9 hình 3.13 (ví dụ với chế phẩm Cefactam) Hình 3.13 Cực phổ đồ xung vi phân cefoperazon chế phẩm Cefactam 42 WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM Trong nghiên cứu này, phương pháp HPLC sử dụng làm phương pháp đối chiếu Điều kiện sắc ký: Cột: Apollo C18 150 mm x 4,6 mm, 5µm Detector UV: 210 nm Tốc độ dòng: 0,8 ml/phút Pha động: Hỗn hợp acetonitril – acid phosphoric pH 3, (60 : 40, tt/tt) Thể tích tiêm mẫu: 20 µl Hình 3.14 biểu diễn sắc kí đồ chuẩn cefoperazon 20 ppm Các thông số trình sắc ký trình bày bảng 3.9 Kết định lượng cefoperazon chế phẩm trình bày bảng 3.10 Hình 3.14 Sắc ký đồ chuẩn cefoperazon 20 ppm Bảng 3.9 Các thông số trình sắc ký Số thứ tự Thông số Cefoperazon Độ lặp RSD < 2% Độ 99 ÷ 101% Khoảng tuyến tính (10 ÷ 35 mg/l) R2 > 0,990 43 WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM Hệ số bất đối Số đĩa lý thuyết Thời gian lưu (phút) AF = 0,9 6000 4,4 Bảng 3.10 Kết định lượng cefoperazon số chế phẩm cực phổ xung vi phân HPLC Chế phẩm Hàm lượng % so với nhãn (trung bình ± SD, n = 6) Cực phổ xung vi phân HPLC Cefobid 99,5 ± 0,5 100,8 ± 1,3 Neoaxon 99,2 ± 0,4 100,7  0,7 Sulperazon 101,0 ± 0,2 100,4  0,9 Bacamp 100,2 ± 0,4 99,8  0,7 Jincetam 101,7 ± 0,3 100,9 ± 1,1 Cefactam 101,1 ± 0,2 100,1 ± 1,1 Kết định lượng cefoperazon chế phẩm đạt hàm lượng khoảng từ 99 ÷ 102% Kiểm định t ghép cặp với độ tin cậy 95% cho thấy khác biệt có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) so sánh kết định lượng cefoperazon chế phẩm khảo sát cực phổ xung vi phân HPLC 44 WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM 3.3 Ứng dụng phương pháp cực phổ xung vi phân để định lượng cefoperazon mẫu nước tiểu tự tạo Hình 3.15: Cực phổ đồ xung vi phân cefoperazon 0,01÷0,07 ppm nước tiểu Hình 3.16: Đồ thị biểu diễn đường chuẩn cefoperazon nước tiểu 45 WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM Bảng 3.11: Kết định lượng cefoperazon mẫu kiểm soát chất lượng (n=6) C (ppm) Vị trí peak V (ml) I(μA) C (ppm) tìm lại % tìm lại E(V) 0.01 0.1 -0.74 -65 0.0096 ± 0.0003 96.3 ± 1.0 0.03 0.3 -0.74 -107 0.0313 ± 0.0008 104.2 ± 1.1 0.04 0.4 -0.74 -129 0.0427 ± 0.0012 106.8 ± 0.5 0.06 0.6 -0.74 -159 0.0583 ± 0.0006 97.2 ± 0.9 Bảng 3.12 : Kết tìm lại nồng độ nước tiểu ngày liên tiếp (n=3) Nồng độ Nồng độ tìm lại Độ lặp Độ (ppm) (ppm) (RSD %) (%) DP-AdCSV Trong ngày Liên ngày 0.01 0.0097 ± 0.0001 1.0 97.2 0.03 0.0294 ± 0.0003 1.0 97.9 0.04 0.0405 ± 0.0002 0.5 101.2 0.06 0.0605 ± 0.0005 0.8 100 0.01 0.0092 ± 0.0003 3.3 92.3 0.03 0.0302 ± 0.0008 2.6 100.7 0.04 0.0408 ± 0.0001 2.7 102.1 0.06 0.0600 ± 0.0003 0.5 100.2 46 WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM 3.4 Bàn luận Cực phổ đồ von – ampe vòng dung dịch cefoperazon 0,03 ppm đệm vạn với pH ÷ cho thấy có xuất pic không thuận nghịch tương ứng với trình khử catod khoảng –0,3 ÷ –1,2 V (hình 3.1) Theo lý thuyết xuất pic cefoperazon khử liên kết đôi vị trí C3-C4 nhân cephem hoạt hóa nhóm [(1methyl-1Htetrazol-5-yl)sulphanyl]methyl vị trí C3 (hình 3.17) [34,35] + 2H+ + 4e Hình 3.17: Cơ chế phản ứng khử cực cefoperazon môi trường acid với cực giọt thủy ngân Quá trình tối ưu hóa điều kiện phân tích bắt đầu khảo sát lựa chọn dung dịch đệm Sự xuất pic cực phổ đồ xung vi phân cefoperazon 0,03 ppm đệm vạn năng, acetat, phosphat pH cho thấy đệm vạn phù hợp cho phép định lượng 47 WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM Qui hoạch hóa thực nghiệm theo thiết kế mặt phức hợp trung tâm sử dụng phần mềm Modde 9.1 cho thấy, cường độ dòng xung vi phân đạt cực tiểu thời gian tích góp 120 s, biên độ xung 100 mV với thời gian áp xung ms, bước mV thời gian nhảy ms Như điều kiện tối ưu phép định lượng cefoperazon cực phổ xung vi phân điện cực giọt thủy ngân xác định sau: Thời gian tích góp 120 s Bước 0,02 V Thời gian nhảy 0,05 s Biên độ xung 0,1 V Thời gian áp xung 0,02 s Thế tích góp –0,3 V Thế khởi điểm –0,3 V Thế kết thúc –1, V Thời gian cân 10 s Thời gian sục khí 100 s Tốc độ khuấy 2000 vòng/phút Kích cỡ giọt Sau lựa chọn điều kiện phân tích tối ưu cho phép định lượng cefoperazon, tiến hành trình thẩm định phương pháp dựa tiêu chí xác định khoảng tuyến tính (bảng 3.5, 3.6) (hình 3.8 ÷ 3.11), độ 48 WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM độ lặp (bảng 3.7, 3.8) Kết cho thấy thông số lựa chọn máy cực phổ Computrate 797 VA thỏa mãn yêu cầu độ xác cho phép định lượng cefoperazon chế phẩm Cực phổ đồ xung vi phân dung dịch cefoperazon 0,01 ÷ 0,06 ppm cho thấy tương quan chặt chẽ cường độ dòng đo nồng độ cefoperazon định lượng cefoperazon (R2 = 0,9998 , n = 6) cefoperazon có mặt sulbactam (R2 = 0,9999, n = 6) Cực phổ đồ nềm đệm vạn không thấy xuất pic khoảng xuất pic cefoperazon (–0,3 ÷ –1,2 V) chứng tỏ phương pháp có tính chọn lọc Ngoài có mặt sulbactam không làm ảnh hưởng đến độ xác khoảng tuyến tính phép định lượng cefoperazon (bảng 3.6 3.8, hình 3.10 3.11) Kết kiểm định t theo cặp với số liệu thu từ chế phẩm khác cho thấy khác biệt độ phép định lượng cực phổ xung vi phân HPLC (Dược Điển Mỹ 30) ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Hàm lượng thực tế cefoperazon chế phẩm khảo sát đạt khoảng 99 ÷ 102% so với hàm lượng ghi nhãn (đạt yêu cầu theo quy định Dược Điển Mỹ 30: Cefoperazon thuốc bột pha tiêm phải đạt 90 ÷ 120 % so với hàm lượng ghi nhãn) Để xây dựng phép định lượng cefoperazon nước tiểu, mối quan hệ tuyến tính nồng độ cefoperazon nước tiểu cường độ dòng xung vi phân đo điều kiện tối ưu khảo sát (Hình 3.15: Cực phổ đồ xung vi phân cefoperazon 0,01 ÷ 0,07 nước tiểu) Với giả thiết nồng độ cefoperazon nước tiểu đạt 32 µg/ml 12h [32], đường chuẩn xây dựng khoảng nồng độ tương ứng 0,01 ÷ 0,07 µg/ml, R2 > 0,990 Kết khảo sát cho thấy thành phần nước tiểu (mẫu trắng) không tham gia phản ứng điện cực vùng – 0,7 ÷ – 0,8 V 49 WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM chứng tỏ phương pháp có tính đặc hiệu cao Độ nhạy phép định lượng (giới hạn định lượng thấp nhất, LLOQ – Lowest Level of Quantification) 0,01 µg/ml Nồng độ thỏa mãn điều kiện độ lặp (RSD < 20 %) độ (80 ÷ 120 %) Các nồng độ lại đường chuẩn đáp ứng yêu cầu độ lặp (RSD < 15 %) độ (85÷115%) Độ lặp độ phép định lượng cefoperazon nước tiểu đánh giá qua phép thử ngày liên ngày với mẫu kiểm soát chất lượng (QC – Quality Control) (Bảng 3.12: Kết tìm lại nước tiểu ngày liên tiếp) Kết cho thấy phép định lượng có độ lặp ngày liên ngày với giá trị RSD < 15 % Độ phương pháp đánh giá qua khả thu hồi tương mức nồng độ (RSD < 15 %) Như qui trình định lượng cefoperazon nước tiểu cực phổ xung vi phân đạt yêu cầu phép định lượng thuốc dịch sinh học [33] 50 WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Như luận văn này, vấn đề sau giải quyết: Khảo sát yếu tố ảnh hưởng, kiểm tra yếu tố ảnh hưởng nhiều đưa vào tối ưu hóa sở phần mềm Modde 9.1 Qua lựa chọn điều kiện tối ưu để định lượng cefoperazon phương pháp cực phổ xung vi phân với cực giọt thủy ngân treo Xây dựng phép định lượng cefoperazon chế phẩm, với khoảng nồng độ tuyến tính 0,01 ÷ 0,06 ppm, thỏa mãn yêu cầu độ lặp (RSD < 1%), độ tương đương với phương pháp HPLC quy định Dược Điển Mỹ 30 Hàm lượng % chế phẩm so với nhãn đạt yêu cầu Xây dựng phép định lượng cefopeazon mẫu nước tiểu tự tạo với khoảng nồng độ tuyến tính 0,01÷0,07 ppm, thỏa mãn yêu cầu độ lặp (RSD