Hoàn thiện quy trình nhân giống cây hoa đồng tiền bằng kĩ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH – KTNN - TRẦN PHƯƠNG THẢO HOÀN THIỆN QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG CÂY HOA ĐỒNG TIỀN BẰNG KĨ THUẬT NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Sinh lý học thực vật Hà Nội, 2016 TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH – KTNN - TRẦN PHƯƠNG THẢO HOÀN THIỆN QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG CÂY HOA ĐỒNG TIỀN BẰNG KĨ THUẬT NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Sinh lý học thực vật Người hướng dẫn khoa học PGS.TS NGUYỄN VĂN ĐÍNH Hà Nội, 2016 LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Văn Đính – Khoa Sinh KTNN Trường Đại học Sư phạm Hà Nội tận tình hướng dẫn, giúp đỡ suốt trình thực đề tài Tôi xin cảm ơn tới Ban Giám hiệu trường ĐHSP Hà Nội 2, Ban Chủ nhiệm khoa Sinh – KTNN trường ĐHSP Hà Nội tạo điều kiện để hoàn thành khóa luận Trong thời gian thực đề tài nhận giúp đỡ tận tình thầy TS La Việt Hồng – Khoa Sinh KTNN, cô Mai Thị Hồng – Phòng thí nghiệm Sinh lý thực vật, giúp đỡ, đóng góp ý kiến để hoàn thành đề tài khóa luận, nhân xin gửi lời cảm ơn Tôi xin chân thành cảm ơn tập thể cán Phòng thí nghiệm Sinh lí thực vật, Phòng thí nghiệm Thực vật- trường ĐHSP Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi thiết bị, phương tiện để hoàn thành khóa luận Cảm ơn gia đình bạn bè động viên, góp ý cho trình học tập hoàn thành đề tài Hà Nội, 28 tháng 04 năm 2016 Sinh viên TRẦN PHƯƠNG THẢO LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nghiên cứu khóa luận trung thực chưa công bố Hà Nội, 28 tháng 04 năm 2016 Sinh viên TRẦN PHƯƠNG THẢO MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục đích nhiệm vụ nghiên cứu Ý Nghĩa khoa học thực tiễn NỘI DUNG Chương1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu hoa đồng tiền (Gerbera jamesoni Hook.f.1889) 1.1.1 Phân loại 1.1.2 Đặc điểm thực vật học 1.1.3 Nguồn gốc, phân bố 1.1.4 Giá trị sử dụng 1.1.5 Kĩ thuật trồng thu hoạch 1.1.6 Tình hình sản xuất hoa đồng tiền 1.2 Kết nhân giống hoa đồng tiền kĩ thuật nuôi cấy mô 1.2.1 Trên giới 1.2.2 Ở Việt Nam 11 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 2.1 Vật liệu nghiên cứu 13 2.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu 13 2.3 Dụng cụ thiết bị thí nghiệm 13 2.3.1 dụng cụ 13 2.3.2 Thiết bị 13 2.4 Môi trường nuôi cấy 13 2.5 Điều kiện nuôi cấy 13 2.6 Phương pháp nghiên cứu 14 2.6.1 Phương pháp bố trí thí nghiệm 14 2.6.2 Phương pháp nghiên cứu 14 2.6.3 Phương pháp xử lý số liệu 16 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 17 3.1 Giai đoạn nhân nhanh chồi in vitro hoa đồng tiền 17 3.1.1 Ảnh hưởng Kinetin tới trình nhân nhanh chồi in vitro hoa đồng tiền 17 3.1.2 Ảnh hưởng BAP tới trình nhân nhanh chồi in vitro hoa đồng tiền 20 3.2 Giai đoạn rễ - tạo hoa đồng tiền in vitro hoàn chỉnh 23 3.3 Rèn luyện hoa đồng tiền in vitro thích nghi với điều kiện tự nhiên 24 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 26 PHỤ LỤC 27 TÀI LIỆU THAM KHẢO 29 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT NAA: Napthlacetic acid BAP: - Benzyl amino purin IBA: Indol butyric acid MS: Murashige Skoog NXB: Nhà xuất 2,4 – D: 2,4 - Dichlorophenoxy acetic aicd Kinetin: 6-furfurylaminopurine DTZ: Thidiazuron CT: Công thức DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ Kinetin đến trình nhân nhanh chồi in vitro hoa đồng tiền 14 Bảng 2.2 Nghiên cứu ảnh hưởng BAP đến trình nhân nhanh chồi in vitro hoa đồng tiền 15 Bảng 2.3 Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ α - NAA đến trình rễ hoa đồng tiền in vitro 15 Bảng 2.4 Nghiên cứu ảnh hưởng giá thể tới tỷ lệ sống hoa đồng tiền in vitro 16 Bảng 3.1 Ảnh hưởng Kinetin đến trình nhân nhanh chồi in vitro hoa đồng tiền sau 30 ngày nuôi cấy 17 Bảng 3.2 Ảnh hưởng BAP đến phát sinh chồi in vitro hoa đồng tiền sau 30 ngày nuôi cấy 20 Bảng 3.3 Ảnh hưởng α -NAA đến trình rễ tạo hoa đồng tiền in vitro hoàn chỉnh sau 30 ngày nuôi cấy 23 Bảng 3.4 Ảnh hưởng giá thể tới tỷ lệ sống hoa đồng tiền in vitro sau 30 ngày 25 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 3.1 Cụm chồi in vitro hoa đồng tiền môi trường Kinetin sau 30 ngày nuôi cấy 19 Hình 3.2 Cụm chồi in vitro hoa đồng tiền môi trường BAP sau 30 ngày nuôi cấy 22 Hình 3.3 Rễ hoa đồng tiền in vitro sau 30 ngày nuôi cấy 24 Hình 3.4 Cây hoa đồng tiền in vitro cho tự nhiên 25 MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Hoa đồng tiền có tên khoa học Gerbera Jamesoni Hook.f.1889 (còn gọi hoa mặt trời hay hoa Phu Lăng) có nguồn gốc từ Nam Phi Đến nay, hoa đồng tiền trồng nhiều nước giới điển hình là: Hà Lan, Mỹ, Đức, Nhật, Trung Quốc…[1] Với vẻ đẹp nó, hoa đồng tiền xếp vào mười loại hoa đẹp giới (sau hoa Hồng, hoa Cúc, hoa Lan, hoa Cẩm Chướng, hoa Lay Ơn) [19] Chúng thường dùng làm bó hoa, lẵng hoa, cắm nghệ thuật trồng vào chậu cảnh để trang trí Trong sản xuất, hoa đồng tiền loài hoa có giá trị kinh tế cao Hoa đồng tiền nhân giống phương pháp hữu tính phương pháp nhân giống vô tính Nhưng hầu hết giống trồng thương mại sản xuất nhân giống vô tính để trì tính đồng không lẫn tạp mặt di truyền [20] Trong phương pháp nhân giống vô tính, nhân nhanh thông qua phân tách cụm chồi phương pháp phổ biến sử dụng nhiều thập kỉ qua Ngoài ra, người ta sử dụng phương pháp cắt chồi hoa đồng tiền [21] Nhưng tất phương pháp tốn nhiều thời gian áp dụng vào sản xuất đại trà, dễ nhiễm bệnh, độ đồng thấp mau thoái hoá giống Vì vậy, phải tìm phương pháp áp dụng quy mô lớn, nhanh hơn, dễ thực đạt hiệu kinh tế cao Trong đó, kĩ thuật nuôi cấy mô sử dụng thay cho phương pháp nhân giống truyền thống Phương pháp cho phép tăng số lượng giống lên gấp hàng triệu lần năm [14] [6] Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Giai đoạn nhân nhanh chồi in vitro hoa đồng tiền Việc nhân chồi in vitro có vai trò quan trọng việc tạo lượng lớn in vitro làm nguyên liệu cho trình nhân giống Đây trình quan trọng nói nhiệm vụ nhân giống vô tính Ở giai đoạn sử dụng môi trường có bổ sung chất điều hòa sinh trưởng Kintein BAP nồng độ khác nhằm tìm nồng độ thích hợp cho trình nhân nhanh, tạo số chồi nhiều, có chất lượng tốt thời gian nuôi cấy ngắn 3.1.1 Ảnh hưởng Kinetin tới trình nhân nhanh chồi in vitro hoa đồng tiền Thí nghiệm tiến hành môi trường MS (Murashige & Skoog, 1962) có bổ sung Kinetin với nồng độ từ 0,1 – 1,5 mg/l Kết thu bảng 3.1: Bảng 3.1 Ảnh hưởng Kinetin đến trình nhân nhanh chồi in vitro hoa đồng tiền sau 30 ngày nuôi cấy Công thức Số chồi/mẫu Số lá/mẫu Chiều cao chồi (cm) CT1 1,14 ± 0,38e 2,43 ± 0,53f 3,99 ± 0,33bc CT2 1,29 ± 0,49de 2,86 ± 0,69f 3,54 ± 0,36d CT3 1,71 ± 0,48cd 3,86 ± 0,69e 3,04 ± 0,34e CT4 2,14 ± 0,38c 5,57 ± 0,79d 2,90 ± 0,49e CT5 3,29 ± 0,49b 7,86 ± 0,69c 3,80 ± 0,38cd CT6 3,43 ± 0,53ab 8,71 ± 0,76b 4,17 ± 0,30bc CT7 3,86 ± 0,38a 9,71 ± 0,76a 4,86 ± 0,41a LSD 0,49 0,76 0,41 Những chữ khác (a, b…) cột thể sai khác với mức ý nghĩa α = 0,05 17 Kết cho thấy: Mẫu cấy giống đưa vào môi trường không bổ sung chất điều tiết sinh trưởng Kinetin không tạo chồi mà tiếp tục phát triển (hình 3.1.A) Khi bổ sung Kinetin vào môi trường nuôi cấy ta thấy số thay đổi rõ rệt Số chồi/mẫu dao động khoảng từ 1,29 – 3,86 chồi/mẫu số lá/mẫu dao động khoảng từ 2,86 – 9,71 lá/mẫu Công thức có số chồi/mẫu số lá/mẫu cao công thức (có bổ sung 1,5 mg/l Kinetin) Cụ thể 3,86 chồi/mẫu 9,71 lá/mẫu (hình 3.1.G) Đồng thời, công thức chất lượng chồi tốt (chồi mập, khỏe có màu xanh non) Công thức (bổ sung 0,1 mg/l Kinetin) có số chồi/mẫu số lá/mẫu thấp Trong số chồi/mẫu 1,29 chồi/mẫu số lá/mẫu 2,86 lá/mẫu (hình 3.1.B) Với tiêu chiều cao chồi, công thức đối chứng có chiều cao trung bình 3,99 cm (hình 3.1.A) Khi tăng dần nồng độ Kinetin từ 0,1 – 0,5 mg/l chiều cao giảm dần từ 3,54 – 2,90 cm (hình 3.1.B,C,D) Tiếp tục tăng nồng độ Kinetin từ 0,5 – 1,5 mg/l chiều cao tăng dần từ 2,90 – 4,86 cm (hình 3.1.E,F,G) Nhìn chung, công thức thí nghiệm có bổ sung Kinetin cho tỉ lệ phát sinh chồi tương đối thấp 18 a b c d e f g Hình 3.1 Cụm chồi in vitro hoa đồng tiền môi trường Kinetin sau 30 ngày nuôi cấy a: Mẫu cấy môi trường CT1; b: Mẫu cấy môi trường CT2; c: Mẫu cấy môi trường CT3; d: Mẫu cấy môi trường CT4; e: Mẫu cấy môi trường CT5; f: Mẫu cấy môi trường CT6; g: Mẫu cấy môi trường CT7 19 3.1.2 Ảnh hưởng BAP tới trình nhân nhanh chồi in vitro hoa đồng tiền Thí nghiệm tiến hành môi trường MS (Murashige & Skoog, 1962) có bổ sung BAP với nồng độ từ 0,1 – 1,5 mg/l Kết thu bảng 3.2 Bảng 3.2 Ảnh hưởng BAP đến phát sinh chồi in vitro hoa đồng tiền sau 30 ngày nuôi cấy Công thức Số chồi/mẫu Số lá/mẫu Chiều cao chồi (cm) CT1 1,14 ± 0,38g 2,43 ± 0,53g 3,99 ± 0,33a CT2 1,71 ± 0,49f 4,71 ± 0,76f 3,37 ± 0,32bc CT3 3,57 ± 0,53e 8,71 ± 0,76e 2,63 ± 0,36f CT4 4,71 ± 0,49d 13,14 ± 0,90d 2,66 ± 0,35ef CT5 9,43 ± 0,53c 35,29 ± 0,49c 3,03 ± 0,38cdef CT6 14,43 ± 0,53a 69,86 ± 0,69a 3,50 ± 0,57b CT7 11,86 ± 0,38b 54,14 ± 0,69b 2,96 ± 0,22def LSD 0,52 0,75 0,40 Những chữ khác (a, b…) cột thể sai khác với mức ý nghĩa α = 0,05 Kết cho thấy: Môi trường không bổ sung chất điều tiết sinh trưởng BAP không phát sinh thêm chồi mà tiếp tục phát triển (hình 3.2.A) Khi bổ sung BAP với nồng độ từ 0,1 – 1,0 mg/l số chồi/mẫu số lá/mẫu tăng dần (từ 1,71 – 14,43 chồi/mẫu từ 4,71 – 69,86 lá/mẫu), đạt cao nồng độ BAP 1,0 mg/l 14,43 chồi/mẫu 69,86 lá/mẫu (hình 3.2.F) Nhưng bổ sung 1,5 mg/l BAP số chồi/mẫu số lá/mẫu giảm 20 11,86 chồi/mẫu 54,14 lá/mẫu (hình 3.2.G) Điều chứng tỏ nồng độ chất kích thích cao ức chế sinh trưởng chồi Chiều cao chồi đạt cao 3,99 cm không bổ sung chất điều tiết sinh trưởng (hình 3.2.A) Chiều cao chồi giảm dần từ 3,37 – 2,63 cm nồng độ BAP từ 0,1 – 0,3 mg/l (hình 3.2.B,C) Sau chiều cao chồi lại tăng dần từ 2,66 – 3,50 cm nồng độ BAP từ 0,5 – 1,0 mg/l (hình 3.2.D,E,F) Khi nồng độ BAP 1,5 mg/l chiều cao chồi giảm 2,96 cm (hình 3.2.G) Như vậy, công thức thí nghiệm bổ sung BAP có tỉ lệ phát sinh chồi tương đối cao Trong đó, môi trường bổ sung BAP 1,0 mg/l có tỉ lệ phát sinh chồi cao Kết khác với Seifeldin Ali Mohamed cs (2014) tìm công thức nhân nhanh tối ưu môi trường bổ sung BAP mg/l [23] Kết luận chung: Hai chất điều hòa sinh trưởng sử dụng hai thí nghiệm Kinetin BAP kích thích phát sinh chồi hoa đồng tiền Tuy nhiên môi trường bổ sung BAP cho kết cao Kinetin, nồng độ BAP 1,0 mg/l mang lại hiệu cao 21 a b c d e f g Hình 3.2 Cụm chồi in vitro hoa đồng tiền môi trường BAP sau 30 ngày nuôi cấy a: Mẫu cấy môi trường CT1; b: Mẫu cấy môi trường CT2; c: Mẫu cấy môi trường CT3; d: Mẫu cấy môi trường CT4; e: Mẫu cấy môi trường CT5; f: Mẫu cấy môi trường CT6; g: Mẫu cấy môi trường CT7 22 3.2 Giai đoạn rễ - tạo hoa đồng tiền in vitro hoàn chỉnh Thí nghiệm tiến hành môi trường MS (Murashige & Skoog, 1962) có bổ sung NAA với nồng độ từ 0,1 – 0,3 mg/l Kết thu bảng sau: Bảng 3.3 Ảnh hưởng α -NAA đến trình rễ tạo hoa đồng tiền in vitro hoàn chỉnh sau 30 ngày nuôi cấy Công thức Số rễ/cây Độ dài rễ (cm) CT1 1,20 ± 0,45c 4,60 ± 0,79a Nhỏ, mảnh CT2 2,60 ± 0,55b 1,08 ± 0,19c Mập, tròn CT3 3,40 ± 0,55a 2,58 ± 0,37b Mập, tròn CT4 2,20 ± 0,45b 1,42 ± 0,28c Mập, tròn LSD 0,67 0,63 Hình thái rễ Những chữ khác (a, b…) cột thể sai khác với mức ý nghĩa α = 0,05 Kết cho thấy: Chồi hoa đồng tiền rễ công thức đối chứng (hình 3.3.B) Ở môi trường bổ sung NAA nồng độ từ 0,1 - 0,3 mg/l số rễ/cây độ dài rễ có khác biệt Ở nồng độ NAA từ 0,1 – 0,2 mg/l, số rễ/cây tăng từ 1,20 – 3,40 rễ/cây Ở nồng độ NAA từ 0,2 – 0,3 mg/l, số rễ/cây giảm từ 3,40 – 2,20 rễ/cây Số rễ/cây đạt cao nồng độ NAA 0,2 mg/l 3,40 rễ/cây (hình 3.3.A) Và số rễ/cây đạt thấp công thức đối chứng 1,20 rễ/cây (hình 3.3.B) Kết khác với Shagufta Naz cs (2012) tìm nồng độ thích hợp tạo rễ hoa đồng tiền môi trường bổ sung NAA 10 mg/l [24] Ở công thức đối chứng độ dài rễ cao nhất, cụ thể 4,60 cm (hình 3.3.B) Khi tăng nồng độ NAA đến 0,1 mg/l độ dài rễ giảm xuống thấp 1,08 cm Tăng tiếp nồng độ NAA lên 0,2 mg/l độ dài rễ tăng lên đạt 23 2,58 cm (hình 3.3.A) Khi nồng độ NAA lên đến 0,3 mg/l, độ dài rễ giảm xuống 1,42 cm Về mặt hình thái, rễ hoa đồng tiền công thức đối chứng khác biệt hoàn toàn so với công thức bổ sung NAA Ở công thức đối chứng, rễ mảnh nhỏ, công thức bổ sung NAA trễ to, mập tròn a b Hình 3.3 Rễ hoa đồng tiền in vitro sau 30 ngày nuôi cấy a: Rễ hoa đồng tiền in vitro môi trường bổ sung NAA nồng độ 0,2 mg/l; b: Rễ hoa đồng tiền in vitro môi trường không bổ sung NAA 3.3 Rèn luyện hoa đồng tiền in vitro thích nghi với điều kiện tự nhiên Đưa giá thể giai đoạn cuối trình nhân giống giai đoạn đưa từ môi trường nhân tạo sang môi trường tự nhiên việc lựa chọn giá thể thích hợp cho sinh trưởng phát triển quan trọng Mỗi loài trồng giai đoạn vườn ươm có yêu cầu khác điều kiện ngoại cảnh Nhìn chung, giá thể tốt giá thể có khả giữ ẩm tốt, thoát nước tốt có khả cung cấp dinh dưỡng cho giai đoạn 24 đầu tiếp cận với môi trường sống tự nhiên Hoa đồng tiền sau nuôi cấy mô có yêu cầu chặt điều kiện môi trường, độ ẩm phải lớn không bị úng, nhiệt độ môi trường không cao, giá thể có khả cung cấp dinh dưỡng cho giai đoạn vườn ươm Để xác định giá thể phù hợp, tiến hành thử nghiệm loại giá thể kết thu bảng sau: Bảng 3.4 Ảnh hưởng giá thể tới tỷ lệ sống hoa đồng tiền in vitro sau 30 ngày Công thức Tỷ lệ sống (%) Đặc điểm CT1 63% Nhỏ, yếu, xanh CT2 70% Nhỏ, khỏe, xanh CT3 80% Mập, khỏe, xanh Kết cho thấy: Giá thể có thành phần: đất, xơ dừa mùn cho tỷ lệ sống đồng tiền sau nuôi cấy mô cao (hình 3.4.A) Cây khỏe mạnh, nhiều lá, có màu xanh mọc thêm rễ Ở giá thể có thành phần đất thịt tỷ lệ sống hoa đồng tiền thấp nhất; nhỏ, yếu mọc rễ (hình 3.4.B) a b c Hình 3.4 Cây hoa đồng tiền in vitro cho tự nhiên a: Cây hoa đồng tiền trồng CT3; b: Cây hoa đồng tiền trồng CT1; c: Cây hoa đồng tiền trồng CT2 25 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Qua thí nghiệm thực hiện, rút kết luận sau hoàn chỉnh quy trình nuôi cấy mô hoa đồng tiền: - Môi trường thích hợp cho phát sinh chồi in vitro hoa đồng tiền môi trường MS + 30g/l đường saccarose + g/l agar + mg/l BAP đạt 14,43 chồi - Môi trường thích hợp để tạo hoa đồng tiền in vitro hoàn chỉnh môi trường MS + 30 g/l đường saccarose + g/l agar + 0,2 mg/l NAA sinh trưởng phát triển tốt với 3,4 rễ - Giá thể thích hợp cho hoa đồng tiền in vitro môi trường tự nhiên có thành phần đất kết hợp với xơ dừa mùn với tỉ lệ sống 80% Kiến nghị Tiếp tục hoàn thiện giai đoạn khác quy trình nuôi cấy mô tế bào hoa đồng tiền Tiếp tục nghiên cứu thêm để tìm chất điều hòa sinh trưởng thích hợp cho giai đoạn tái sinh mô nuôi cấy hình thành rễ hoa đồng tiền 26 PHỤ LỤC PHỤ LỤC Một số hình ảnh nuôi cấy mô hoa đồng tiền Cấy chuyển cụm chồi in vitro hoa đồng tiền Hoa đồng tiền in vitro giai đoạn vườn ươm 27 PHỤ LỤC Môi trường MS cải tiến (Murashige Skoog, 1962) gồm: Thành phần Khoáng đa lượng Khoáng vi lượng Sắt EDTA Vitamin Nồng độ (mg/l) NH4NO3 1650 KNO3 1900 CaCl2.2H2O 440 MgSO4.7H2O 370 KH2PO4 170 MnSO4.4H2O 23,3 ZnSO4.7H2O 8,6 H3PO3 6,2 KI 0,83 Na2MoO4.2H2O 0,25 CuSO4.5H2O 0,025 CoCl2.6H2O 0,025 Na2.EDTA 37,3 FeSO4.7H2O 27,8 Myo-Inositol 100 Thiamin (B1) 0,5 Nicotinic acid 0,5 Pyridoxine (B6) 0,5 Glycine 28 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tham khảo tiếng Việt [1] Đặng Văn Đông Đinh Thế Lộc, (2003), Hoa đồng tiền, NXB Lao Động – Xã Hội [2] Dương Công Kiên (2003), Nuôi cấy mô thực vật II, NXB Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh [3] Hoàng Thị Nga, Nguyễn Thị Phương Hoa, Nguyễn Thị Giang, Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Lý Anh, (2003), Xây dựng quy trình nhân giống hoa đồng tiền kỹ thuật cấy mô Tạp trí nông nghiệp phát triển nông thôn, Số 8/2003 [4] Đào Thanh Vân ThS Đặng Thị Tố Nga, (2007), Cây hoa NXB Nông Nghiệp [5] Ngô Đăng Vịnh, Hà Thị Thúy, Dương Minh Nga, (2008), Nghiên cứu hoàn thiện quy trình nhânh nhanh giống hoa đồng tiền nhập nội công nghệ in vitro- Tạp trí nông nghiệp phát triển nông thôn, Số 8/2003, 1012 - 1014 Tài liệu tham khảo tiếng Anh [6] Aswath C, Choudhary M.L, (2002), Rapid plant regen- eration from Gerbera jamesonii Bolus callus cultures, Acta Botanica Croatica, 61: 125–134 [7] Bhatia R, Singh K.P, Singh M.C, (2012), In vitro mass multiplication of gerbera (Gerbera jamesonii) using capitulum explant [8] Bhargava B, Dilta B.S, Dhiman S.R, Modgil M, (2013), Studies on micropropagation of gerbera (Gerbera jamesonii Bolus) [9] Broek Van Den L, Haydu J.J, Hodges A.W, Neves E.M, (2004), Production, marketing and distribution of cut flowers in the United 29 States and Brazil, Annual Report of Florida Agricultural Experiment Station, University of Florida: 1–19 [10] Das P, Singh P.K.S, (1989), Gerbera In: Bose T.K, Yadav L.P (eds), Commercial Flowers Calcutta, Naya Prokash: 601–622 [11] Kanwar J K, Kumar S, (2008), In vitro propagation of Gerbera – A Review, 35: 35 – 44 [12] Shabbir K, Ahmad T , Hafiz I.A, Hussain A, Abbasi N.A and Ahmad J, (2012), In vitro regeneration of Gerbera jamesonii cv Sunglow, pp 9975 - 9984 [13] Loeser H, (1986) New gerbera cultivars at Heidelberg Deutscher Gartenbau, 40: 1461–1464 [14] Murashige T, Sepra M, Jones J.B, (1972), Clonal multiplication of gerbera through tissue culture HortScience,9: 175–180 [15] Akter N, Hoque M.I and Sarker R.H., (2012), In vitro Propagation in Three Varieties of Gerbera (Gerbera jamesonii Bolus.) from Flower Bud and Flower Stalk Explants, 22(2): 143-152 [16] Nickell L.G (1973), “Test-tube Approaches to by pass sexx”, Hawaiian Planters Record.58, pp 239-314 [17] Hasbullah N.A, Lassim M.M, Azis N.A, Daud N.F, Rasad F.M, and Amin M.A.M, (2015), Somatic Embryo Formation in Gerbera jamesonii Bolus ex Hook f in vitro, 25 – 28 [18] Paduchuri P.Y, Deogirkar G.V, Kamdi S.R, Kale M.C, Madhavi Rajurkar D, (2010), In vitro callus induction and root regeneration studies in Gerbera jamesonii,87 – 90 [19] Parthasarathy V.A, Nagaraju V, (1999), In vitro propagation in Gerbera jamesonii Bolus, Indian Journal of Horticulture, 56: 82–85 30 [20] Peper H, Brandis A.V, Dopke H, (1971), Clonal propagation of gerberas can be profitable Result from Ahlem on the culture and clonal propagation of gerberas Taspo, 105: [21] Schiva T, (1975), Vegetative propagation in gerbera improvement Annali dell’Instituto Sperimentale per la Floricultura, 6: 133–135 [22] Mohamed S.A, Ozzambak M.E, (2014), Shoot regeneration capacity of in vitro cultures of some Gerbera (Gerbera jamesonii Bolus) explants [23] Naz S , Naz F,Tariq A, Aslam F, Ail A and Athar M, (2012), Effect of different explant on in vitro propagation of gerbera (Gerbera jamesonii) [24] Mishra S.J, Chandra R , Prasad L and Patel R.K, (2014), Influence of some phytohormones based culture medium on in vitro multiplication of gerbera (Gerbera jamesonii), 3(1):65 - 68 [25] Kumar S, Kanwar J.K, (2006), Regeneration ability of petiole, leaf and petal explants in gerbera cut flower cultures in vitro, 57- 64 [26] Kumar S, Kanwar J.K, (2007), Plant regeneration from cell suspensions in Gerbera jamesonii Bolus, 15: 157 – 166 [27] Ha Tieu De, Trieu Thong Nhat, Lo Kim Vu, (2000), gerbera flower NXB KHKT Giang To, Trung Quoc [28] Tài liệu tham khảo website: http://favri.org.vn/vi/san-pham-khcn/ san-pham-khcn/hoa-va-cay-canh/quy-trinh-ky-thuat/259-quy-trinh-kythuat-trong-hoa-dong-tien-chau.htm 31 ... Nghiên cứu hoàn thiện quy trình nhân giống hoa đồng tiền kĩ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.2 Nhiệm vụ nghiên cứu Nhân nhanh chồi in vitro hoa đồng tiền Ra rễ - tạo hoa đồng tiền in vitro hoàn. .. nuôi cấy mô hoa đồng tiền công nghệ nuôi cấy in vitro 3.2 Ý nghĩa thực tiễn Hoàn thiện quy trình nhân giống hoa đồng tiền kĩ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật, nhằm cung cấp nguồn giống bệnh, chất...TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH – KTNN - TRẦN PHƯƠNG THẢO HOÀN THIỆN QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG CÂY HOA ĐỒNG TIỀN BẰNG KĨ THUẬT NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI