HOÀN THIỆN QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG CÂY DÂU TÂY (FRAGARIA SPP.) SẠCH VIRUS SCV (STRAWBERRY CRINKLE VIRUS) BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP

HOÀN THIỆN QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG CÂY DÂU TÂY (FRAGARIA SPP.) SẠCH VIRUS SCV (STRAWBERRY CRINKLE VIRUS) BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP HOÀN THIỆN QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG CÂY DÂU TÂY (FRAGARIA SPP.) SẠCH VIRUS SCV (STRAWBERRY CRINKLE VIRUS) BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 82010 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP. HỒ CHÍ MINH HÀ THỊ TUYẾT PHƯỢNG HOÀN THIỆN QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG CÂY DÂU TÂY (FRAGARIA SPP.) SẠCH VIRUS SCV (STRAWBERRY CRINKLE VIRUS) BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ Chuyên ngành: Kỹ thuật Trồng trọt Mã số: 60.62.01 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP Hướng dẫn Khoa học: 1. PGS. TS. DƯƠNG TẤN NHỰT 2. TS. BÙI MINH TRÍ Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 82010 ii LÝ LỊCH CÁ NHÂN Tôi tên là Hà Thị Tuyết Phượng, sinh năm 1981 tại huyện Cái Bè, tỉnh Tiền Giang. Con Ông Hà Văn Xua và Bà Nguyễn Thị Hữu. Tốt nghiệp trung học phổ thông tại Trường Trung học phổ thông An Hữu, tỉnh Tiền Giang năm 2000. Tốt nghiệp Đại học ngành Nông học, hệ Chính quy tại trường Đại học Nông Lâm, thành phố Hồ Chí Minh năm 2005. Từ năm 2006 đến nay, công tác tại Khoa Nông nghiệp Trường Đại học Tiền Giang. Tháng 9 năm 2006 theo học Cao học ngành Kỹ thuật Trồng trọt tại Trường Đại học Nông Lâm, thành phố Hồ Chí Minh. Địa chỉ liên lạc: Nhà số 342, tổ 13, ấp 4, xã Tân Thanh, huyện Cái Bè, tỉnh Tiền Giang. Điện thoại: 0982.137.800 Email: tuyetphuonghathigmail.com iii LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan đây là công trình nghiên cứu của tôi. Các số liệu, kết quả nêu trong luận văn là trung thực và chưa từng được ai công bố trong bất kỳ công trình nào khác. Hà Thị Tuyết Phượng iv LỜI CẢM ƠN Em xin chân thành cám ơn Ban giám hiệu, Ban chủ nhiệm Khoa Nông học, Phòng Sau đại học Trường Đại học Nông Lâm, thành phố Hồ Chí Minh đã tạo điều kiện trong thời gian học tập. Ban giám hiệu, Ban chủ nhiệm Khoa Nông nghiệp Trường Đại học Tiền Giang đã tạo điều kiện về thời gian, kinh phí trong quá trình học tập. Ban lãnh đạo Viện Sinh học Tây Nguyên, Viện Nghiên cứu Công nghệ Sinh học và Môi trường đã tạo điều kiện trong quá trình làm đề tài. Quý Thầy Cô trong và ngoài trường đã tận tình giảng dạy trong suốt quá trình học tập tại trường. Em xin gửi lời cám ơn sâu sắc đến PGS.TS. Dương Tấn Nhựt, TS. Bùi Minh Trí, những người Thầy luôn tận tụy và giàu lòng hy sinh cho sự nghiệp trồng người. Một tấm gương lao động cần mẫn và hết lòng đam mê khoa học. Cám ơn Quý Thầy đã tận tình hướng dẫn, tạo mọi điều kiện thuận lợi và hỗ trợ kinh phí cho em trong quá trình làm đề tài. Cám ơn Quý Thầy đã cho em có cơ hội tiếp xúc với môi trường nghiên cứu khoa học mà em từng mơ ước được một lần đến. Cám ơn Quý Thầy đã là điểm tựa và chấp cánh cho em để ngày càng được hoàn thiện hơn. Em xin chân thành cám ơn PGS.TS. Lê Quang Hưng, TS. Võ Thái Dân đã tận tình chỉ dẫn giúp em hoàn thành luận văn tốt nghiệp. Con xin cám ơn Ba Mẹ, các Chị đã hết lòng thương yêu, đùm bọc, dìu dắt con trong cuộc đời. Cám ơn các Anh Chị Phòng Sinh học Phân tử và Chọn tạo Giống cây trồng, Bộ môn Công nghệ Sinh học Thực vật đã giúp đỡ trong quá trình làm đề tài. Em xin cám ơn thầy Phạm S, thầy Tuấn, chú Tới, chú Xuân Tùng, cô Toản, cô Hương, cô Lan, chị Hằng; anh Nam, Công, Hùng, Dũng, Tâm, Sơn; bạn Trang, Tâm, Công; em Thùy, Sương, Bá Nam, Tuấn, Thái, Dung, Chương, Nam, Diệu Hiền, Thanh, Hiền, Nhiên, Giáp, Hằng, Trực, Nhật, Tùng, Thưởng, Loan, Thương, Thu, Hương, Chiến, Nguyễn, Anh, Kha, My, Hà, Thái Hiền, Nhân, Quỳnh, Huy, Phúc Huy, Thuận, Vương đã giúp đỡ trong quá trình làm đề tài. Con xin cám ơn gia đình bác Hai, gia đình chú Yên đã thương yêu, đùm bọc trong thời gian làm đề tài. v TÓM TẮT Đề tài “Hoàn thiện quy trình nhân giống cây dâu tây (Fragaria spp.) sạch virus SCV (Strawberry Crinkle Virus) bằng phương pháp nuôi cấy mô” được thực hiện tại Phòng Sinh học Phân tử và Chọn tạo Giống cây trồng của Viện Sinh học Tây Nguyên, Bộ môn Công nghệ Sinh học Thực vật của Viện Nghiên cứu Công nghệ Sinh học và Môi trường từ 102008 102009. Các thí nghiệm được bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên, 3 lần lặp lại. Kết quả nghiên cứu của đề tài cho thấy giống dâu tây Mỹ Hương có khả năng phát sinh chồi từ mô lá cao hơn so với giống Mỹ Đá và dâu Pháp. Môi trường thích hợp cho quá trình phát sinh chồi từ mô lá cây dâu tây in vitro là môi trường MS được bổ sung 1 mgl TDZ, 0,1 mgl NAA, 30 gl sucrose và 8 gl agar. Mô lá cây dâu tây in vitro thuộc giống Mỹ Hương được nuôi cấy trên môi trường MS có bổ sung 1 mgl TDZ, 0,1 mgl NAA, 30 gl sucrose và 8 gl agar có khả năng phát sinh chồi cao nhất. Áp dụng kỹ thuật “Cắt lá và tạo vết thương ở đỉnh ngọn chồi” cho khả năng nhân chồi của cây dâu tây cao hơn so với kỹ thuật “Để nguyên chồi” và kỹ thuật “Cắt lá của chồi”. Giống dâu Mỹ Hương có khả năng nhân chồi cao hơn so với giống Mỹ Đá và dâu Pháp. Chồi dâu tây thuộc giống Mỹ Hương được xử lý bằng kỹ thuật “Cắt lá và tạo vết thương ở đỉnh ngọn chồi” có khả năng nhân chồi cao nhất. Môi trường ½ MS được bổ sung 30 gl sucrose, 0,2 mgl IBA, 0,75 gl than hoạt tính và 8 gl agar thích hợp nhất cho sự sinh trưởng của cây dâu tây trong giai đoạn in vitro và ở giai đoạn vườn ươm so với các nồng độ sucrose còn lại (0; 10; 20; 40 gl). Cây dâu tây thuộc giống Mỹ Hương kết hợp với nuôi cấy trên môi trường ½ MS được bổ sung 30 gl sucrose, 0,2 mgl IBA, 0,75 gl than hoạt tính và 8 gl agar có khả năng sinh trưởng tốt nhất trong giai đoạn in vitro và ở giai đoạn vườn ươm. Kiểm tra virus SCV trên cây dâu tây sau khi được trồng ra vườn ươm 45 ngày của ba giống dâu tây Mỹ Đá, Mỹ Hương và dâu Pháp bằng kỹ thuật RTPCR. Kết quả cho thấy tất cả các mẫu được kiểm tra đều không bị nhiễm virus SCV. vi SUMMARY The thesis “Improving SCVfree strawberry (Fragaria spp.) propagation protocol through tissue culture method”, was carried out at Department of Plant Molecular Biology and Plant Breeding, Tay Nguyen Institute of Biology; Department of Plant Bioteachnology, Research Institute for Biotechnology and Environment from 102008 to 102009. Experiments were arranged in Completely Randomized Design with three replications. The shoot regeneration from leaf tissues of in vitro strawberry plantlets of three strawberry cultivars, namely My Da, My Huong and Phap, depended on different genotypes and supplemented TDZ concentrations. My Huong showed the highest regeneration rate among the three strawberry cultivars. The highest shoot regeneration rate from leaf tissues of in vitro strawberry plantlets was noticed after leaf tissues had been cultivated on MS medium containing 1 mgl1 TDZ, 0.1 mgl1 NAA, 30 gl1 sucrose and 8 gl1 agar. “Leaves cutting and shoot tip wounding” treatment performed significantly higher shoot regeneration rate compared with “No cutting” and “Leaves cutting” treatments. By supplementing sucrose to growing medium, the growth of in vitro strawberry plantlets were improved and the concentration of 30 gl1 sucrose showed the optimal growth for in vitro strawberry plantlets of three strawberry cultivars. ½ MS medium supplemented with 30 gl1 sucrose, 0.2 mgl1 IBA, 0.75 gl1 activated charcoal and 8 gl1 agar was the most suitable for the development of in vitro strawberry plantlets. After 45 days in nethouse condition, strawberry plantlets of three strawberry cultivars, namely My Da, My Huong and Phap, were screened from SCV (Strawberry Crinkle Virus) by using RTPCR technique and no virus was detected. The results of this study confirm the potential of using tissue culture technique in virusfree strawberry propagation. vii MỤC LỤC CHƯƠNG TRANG Trang tựa Trang chuẩn y .............................................................................................................. i LÝ LỊCH CÁ NHÂN ................................................................................................. ii LỜI CAM ĐOAN ..................................................................................................... iii LỜI CẢM ƠN ........................................................................................................... iv TÓM TẮT ................................................................................................................... v SUMMARY .............................................................................................................. vi MỤC LỤC ................................................................................................................ vii DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT .................................................................... xiii DANH SÁCH CÁC HÌNH ....................................................................................... xv DANH SÁCH CÁC BẢNG ................................................................................... xvii DANH SÁCH CÁC BIỂU ĐỒ ................................................................................. xx 1.ĐẶT VẤN ĐỀ ......................................................................................................... 1 1.1 Giới thiệu ............................................................................................................... 1 1.2 Mục đích mục tiêu và yêu cầu của đề tài ............................................................ 2 1.2.1 Mục đích của đề tài ............................................................................................ 2 1.2.2 Mục tiêu của đề tài ............................................................................................. 3 1.2.3 Yêu cầu của đề tài .............................................................................................. 3 1.3 Giới hạn của đề tài ................................................................................................ 3 1.3.1 Thời gian nghiên cứu ......................................................................................... 3 1.3.2 Địa điểm nghiên cứu .......................................................................................... 3 2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU ..................................................................................... 4 2.1 Sơ lược về cây dâu tây .......................................................................................... 4 2.1.1 Phân loại khoa học của cây dâu tây ................................................................... 4 2.1.2 Nguồn gốc phân bố của cây dâu tây ................................................................ 5 2.1.2.1 Nguồn gốc ....................................................................................................... 5 viii 2.1.2.2 Phân bố ............................................................................................................ 5 2.1.3 Đặc tính thực vật học của cây dâu tây ................................................................ 5 2.1.4 Các phương pháp nhân giống cây dâu tây ......................................................... 6 2.1.5 Thành phần các chất có trong quả dâu tây ......................................................... 6 2.1.6 Công dụng của cây dâu tây ................................................................................ 7 2.1.7 Điều kiện canh tác của cây dâu tây .................................................................... 7 2.1.7.1 Đất trồng .......................................................................................................... 7 2.1.7.2 Khí hậu ............................................................................................................ 7 2.1.8 Tình hình canh tác cây dâu tây........................................................................... 7 2.1.8.1 Trên thế giới .................................................................................................... 7 2.1.8.2 Ở Việt Nam ..................................................................................................... 8 2.2 Sơ lược về nuôi cấy mô thực vật ......................................................................... 13 2.2.1 Lịch sử nuôi cấy mô thực vật ........................................................................... 13 2.2.2 Các phương pháp nuôi cấy mô thực vật ........................................................... 13 2.2.2.1 Nuôi cấy đỉnh sinh trưởng ............................................................................. 13 2.2.2.2 Nuôi cấy mô sẹo ............................................................................................ 14 2.2.2.3 Nuôi cấy tế bào đơn ...................................................................................... 14 2.2.2.4 Nuôi cấy protoplast ....................................................................................... 14 2.2.2.5 Nuôi cấy hạt phấn .......................................................................................... 14 2.2.3 Lợi ích của nhân giống cây trồng bằng nuôi cấy mô ....................................... 15 2.2.4 Các bước trong nhân giống cây trồng bằng nuôi cấy mô ................................ 15 2.2.4.1 Chọn vật liệu và cấy ...................................................................................... 15 2.2.4.2 Nhân chồi ...................................................................................................... 15 2.2.4.3 Tạo rễ từ chồi ................................................................................................ 16 2.2.4.4 Trồng cây cấy mô ra đất ................................................................................ 16 2.2.5 Các yếu tố ảnh hưởng trong nhân giống bằng nuôi cấy mô............................. 17 2.2.5.1 Sự lựa chọn mẫu cấy ..................................................................................... 17 2.2.5.2 Môi trường nuôi cấy ...................................................................................... 17 2.2.5.3 Điều kiện nuôi cấy ........................................................................................ 17 ix 2.2.6 Giới thiệu về chất điều hòa sinh trưởng thực vật ............................................. 18 2.2.6.1 Auxin ............................................................................................................. 18 2.2.6.2 Cytokinin ....................................................................................................... 19 2.3 Một số nghiên cứu nhân giống cây dâu tây bằng phương pháp nuôi cấy mô ..... 20 2.3.1 Trên thế giới ..................................................................................................... 20 2.3.2 Ở Việt Nam ...................................................................................................... 21 2.4 Các kỹ thuật chẩn đoán bệnh virus hại thực vật ................................................. 23 2.4.1 Kỹ thuật chẩn đoán dựa vào triệu chứng ......................................................... 23 2.4.2 Kỹ thuật chẩn đoán bằng cây chỉ thị ................................................................ 24 2.4.3 Kỹ thuật chẩn đoán bằng kính hiển vi .............................................................. 24 2.4.3.1 Chẩn đoán bằng kính hiển vi quang học ....................................................... 24 2.4.3.2 Chẩn đoán bằng kính hiển vi điện tử ............................................................ 24 2.4.4 Kỹ thuật chẩn đoán bằng phản ứng huyết thanh .............................................. 24 2.4.5 Kỹ thuật chẩn đoán dựa vào nucleic acid......................................................... 25 2.4.5.1 Kỹ thuật lai phân tử (Molecular hybridization) ............................................ 25 2.4.5.2 Kỹ thuật PCR và RTPCR ............................................................................ 25 2.5 Giới thiệu về kỹ thuật PCR và RTPCR ............................................................. 25 2.5.1 Kỹ thuật PCR ................................................................................................... 25 2.5.2 Kỹ thuật RTPCR ............................................................................................. 26 2.6 Sơ lược về virus SCV gây hại trên cây dâu tây .................................................. 27 2.6.1 Phân loại ........................................................................................................... 27 2.6.2 Nguồn gốc phân bố ........................................................................................ 27 2.6.3 Hình dạng kích thước..................................................................................... 27 2.6.4 Genome ............................................................................................................ 27 2.6.5 Protein .............................................................................................................. 27 2.6.6 Phạm vi ký chủ ................................................................................................. 27 2.6.7 Phương thức lan truyền .................................................................................... 27 2.6.8 Triệu chứng và tác hại của virus SCV trên cây dâu tây ................................... 28 2.6.8.1 Triệu chứng ................................................................................................... 28 x 2.6.8.2 Tác hại của virus SCV................................................................................... 28 2.6.9 Biện pháp quản lý virus SCV ........................................................................... 28 2.6.10 Một số nghiên cứu về virus SCV ................................................................... 28 2.6.10.1 Trên thế giới ................................................................................................ 28 2.6.10.2 Ở Việt Nam ................................................................................................. 29 2.7 Một số thành tựu trong việc tạo cây sạch bệnh virus bằng phương pháp nuôi cấy mô .............................................................................................................................. 33 2.7.1 Trên thế giới ..................................................................................................... 33 2.7.2 Ở Việt Nam ...................................................................................................... 33 3. NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU.......................................... 34 3.1 Thời gian nghiên cứu .......................................................................................... 34 3.2 Nội dung và địa điểm nghiên cứu ....................................................................... 34 3.3 Vật liệu nghiên cứu ............................................................................................. 34 3.3.1 Giống cây dâu tây ............................................................................................. 34 3.3.2 Hóa chất ........................................................................................................... 34 3.3.2.1 Hóa chất dùng trong nuôi cấy mô cây dâu tây .............................................. 34 3.3.2.2 Hóa chất dùng trong kiểm tra virus ............................................................... 36 3.3.3 Thiết bị và dụng cụ ........................................................................................... 37 3.3.3.1 Thiết bị .......................................................................................................... 37 3.3.3.2 Dụng cụ ......................................................................................................... 38 3.4 Phương pháp nghiên cứu ..................................................................................... 38 3.4.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng của yếu tố giống và nồng độ TDZ kết hợp với NAA lên khả năng phát sinh chồi từ mô lá cây dâu tây in vitro ......................... 38 3.4.1.1 Điều kiện thí nghiệm ..................................................................................... 38 3.4.1.2 Bố trí thí nghiệm ........................................................................................... 39 3.4.1.3 Phương pháp tiến hành .................................................................................. 39 3. 4.1.4 Chỉ tiêu theo dõi ........................................................................................... 40 3.4.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng của yếu tố giống và kỹ thuật xử lý mẫu cấy lên khả năng nhân chồi của cây dâu tây trong điều kiện in vitro .............................. 41 xi 3.4.2.1 Điều kiện thí nghiệm ..................................................................................... 42 3.4.2.2 Bố trí thí nghiệm ........................................................................................... 42 3.4.2.3 Phương pháp tiến hành .................................................................................. 42 3.4.2.4 Chỉ tiêu theo dõi ............................................................................................ 43 3.4.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng của yếu tố giống và nồng độ sucrose lên sự sinh trưởng của cây dâu tây trong điều kiện in vitro ................................................. 43 3.4.3.1 Điều kiện thí nghiệm ..................................................................................... 43 3.4.3.2 Bố trí thí nghiệm ........................................................................................... 44 3.4.3.3 Phương pháp tiến hành .................................................................................. 44 3.4.3.4 Chỉ tiêu theo dõi ............................................................................................ 44 3.4.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng của yếu tố giống và nồng độ sucrose trong giai đoạn nuôi cấy in vitro sự lên sinh trưởng của cây dâu tây sau khi đượctrồng ra vườn ươm .................................................................................................................. 45 3.4.4.1 Điều kiện thí nghiệm ..................................................................................... 45 3.4.4.2 Bố trí thí nghiệm ........................................................................................... 45 3.4.4.3 Phương pháp tiến hành .................................................................................. 46 3. 4.4.4 Chỉ tiêu theo dõi ........................................................................................... 46 3.4.5 Thí nghiệm 5: Kiểm tra virus SCV trên cây dâu tây sau khi được trồng ra vườn ươm .................................................................................................................. 47 3.4.5.1 Điều kiện thí nghiệm ..................................................................................... 47 3.4.5.2 Bố trí thí nghiệm ........................................................................................... 48 3.4.5.3 Phương pháp tiến hành .................................................................................. 48 3.4.5.4 Chỉ tiêu theo dõi ............................................................................................ 54 3.5 Xử lý số liệu ........................................................................................................ 54 4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN ............................................................................ 58 4.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng của yếu tố giống và nồng độ TDZ kết hợp với NAA lên khả năng phát sinh chồi từ mô lá cây dâu tây in vitro ......................... 58 4.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng của yếu tố giống và kỹ thuật xử lý mẫu cấy lên khả năng nhân chồi của cây dâu tây trong điều kiện in vitro .............................. 67 xii 4.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng của yếu tố giống và nồng độ sucrose lên sự sinh trưởng của cây dâu tây trong điều kiện in vitro ................................................. 76 4.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng của yếu tố giống và nồng độ sucrose trong giai đoạn nuôi cấy in vitro lên sự sinh trưởng của cây dâu tây sau khi được trồng ra vườn ươm .................................................................................................................. 83 4.5 Thí nghiệm 5: Kiểm tra virus SCV trên cây dâu tây sau khi được trồng ra vườn ươm ........................................................................................................................... 91 5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ ................................................................................. 97 5.1 Kết luận ............................................................................................................... 97 5.2 Đề nghị ................................................................................................................ 97 TÀI LIỆU THAM KHẢO ...................................................................................... 99 Phụ lục .................................................................................................................... 109

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH HÀ THỊ TUYẾT PHƯỢNG HỒN THIỆN QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG CÂY DÂU TÂY (FRAGARIA SPP.) SẠCH VIRUS SCV (STRAWBERRY CRINKLE VIRUS) BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 8/2010 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC NƠNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH HÀ THỊ TUYẾT PHƯỢNG HỒN THIỆN QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG CÂY DÂU TÂY (FRAGARIA SPP.) SẠCH VIRUS SCV (STRAWBERRY CRINKLE VIRUS) BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ Chuyên ngành: Kỹ thuật Trồng trọt Mã số: 60.62.01 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP Hướng dẫn Khoa học: PGS TS DƯƠNG TẤN NHỰT TS BÙI MINH TRÍ Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 8/2010 LÝ LỊCH CÁ NHÂN Tôi tên Hà Thị Tuyết Phượng, sinh năm 1981 huyện Cái Bè, tỉnh Tiền Giang Con Ông Hà Văn Xua Bà Nguyễn Thị Hữu Tốt nghiệp trung học phổ thông Trường Trung học phổ thông An Hữu, tỉnh Tiền Giang năm 2000 Tốt nghiệp Đại học ngành Nơng học, hệ Chính quy trường Đại học Nơng Lâm, thành phố Hồ Chí Minh năm 2005 Từ năm 2006 đến nay, công tác Khoa Nông nghiệp Trường Đại học Tiền Giang Tháng năm 2006 theo học Cao học ngành Kỹ thuật Trồng trọt Trường Đại học Nơng Lâm, thành phố Hồ Chí Minh Địa liên lạc: Nhà số 342, tổ 13, ấp 4, xã Tân Thanh, huyện Cái Bè, tỉnh Tiền Giang Điện thoại: 0982.137.800 E-mail: tuyetphuonghathi@gmail.com ii LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Hà Thị Tuyết Phượng iii LỜI CẢM ƠN Em xin chân thành cám ơn Ban giám hiệu, Ban chủ nhiệm Khoa Nơng học, Phòng Sau đại học Trường Đại học Nông Lâm, thành phố Hồ Chí Minh tạo điều kiện thời gian học tập Ban giám hiệu, Ban chủ nhiệm Khoa Nông nghiệp Trường Đại học Tiền Giang tạo điều kiện thời gian, kinh phí q trình học tập Ban lãnh đạo Viện Sinh học Tây Nguyên, Viện Nghiên cứu Công nghệ Sinh học Môi trường tạo điều kiện q trình làm đề tài Q Thầy Cơ ngồi trường tận tình giảng dạy suốt trình học tập trường Em xin gửi lời cám ơn sâu sắc đến PGS.TS Dương Tấn Nhựt, TS Bùi Minh Trí, người Thầy ln tận tụy giàu lòng hy sinh cho nghiệp trồng người Một gương lao động cần mẫn hết lòng đam mê khoa học Cám ơn Quý Thầy tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện thuận lợi hỗ trợ kinh phí cho em q trình làm đề tài Cám ơn Quý Thầy cho em có hội tiếp xúc với môi trường nghiên cứu khoa học mà em mơ ước lần đến Cám ơn Quý Thầy điểm tựa chấp cánh cho em để ngày hoàn thiện Em xin chân thành cám ơn PGS.TS Lê Quang Hưng, TS Võ Thái Dân tận tình dẫn giúp em hoàn thành luận văn tốt nghiệp Con xin cám ơn Ba Mẹ, Chị hết lòng thương yêu, đùm bọc, dìu dắt đời Cám ơn Anh Chị Phòng Sinh học Phân tử Chọn tạo Giống trồng, Bộ môn Công nghệ Sinh học Thực vật giúp đỡ trình làm đề tài Em xin cám ơn thầy Phạm S, thầy Tuấn, Tới, Xuân Tùng, cô Toản, cô Hương, cô Lan, chị Hằng; anh Nam, Công, Hùng, Dũng, Tâm, Sơn; bạn Trang, Tâm, Công; em Thùy, Sương, Bá Nam, Tuấn, Thái, Dung, Chương, Nam, Diệu Hiền, Thanh, Hiền, Nhiên, Giáp, Hằng, Trực, Nhật, Tùng, Thưởng, Loan, Thương, Thu, Hương, Chiến, Nguyễn, Anh, Kha, My, Hà, Thái Hiền, Nhân, Quỳnh, Huy, Phúc Huy, Thuận, Vương giúp đỡ trình làm đề tài Con xin cám ơn gia đình bác Hai, gia đình Yên thương yêu, đùm bọc thời gian làm đề tài iv TÓM TẮT Đề tài “Hồn thiện quy trình nhân giống dâu tây (Fragaria spp.) virus SCV (Strawberry Crinkle Virus) phương pháp ni cấy mơ” thực Phòng Sinh học Phân tử Chọn tạo Giống trồng Viện Sinh học Tây Nguyên, Bộ môn Công nghệ Sinh học Thực vật Viện Nghiên cứu Công nghệ Sinh học Mơi trường từ 10/2008 - 10/2009 Các thí nghiệm bố trí theo kiểu hồn tồn ngẫu nhiên, lần lặp lại Kết nghiên cứu đề tài cho thấy giống dâu tây Mỹ Hương có khả phát sinh chồi từ mô cao so với giống Mỹ Đá dâu Pháp Mơi trường thích hợp cho q trình phát sinh chồi từ mơ dâu tây in vitro môi trường MS bổ sung mg/l TDZ, 0,1 mg/l NAA, 30 g/l sucrose g/l agar Mô dâu tây in vitro thuộc giống Mỹ Hương nuôi cấy mơi trường MS có bổ sung mg/l TDZ, 0,1 mg/l NAA, 30 g/l sucrose g/l agar có khả phát sinh chồi cao Áp dụng kỹ thuật “Cắt tạo vết thương đỉnh chồi” cho khả nhân chồi dâu tây cao so với kỹ thuật “Để nguyên chồi” kỹ thuật “Cắt chồi” Giống dâu Mỹ Hương có khả nhân chồi cao so với giống Mỹ Đá dâu Pháp Chồi dâu tây thuộc giống Mỹ Hương xử lý kỹ thuật “Cắt tạo vết thương đỉnh chồi” có khả nhân chồi cao Mơi trường ½ MS bổ sung 30 g/l sucrose, 0,2 mg/l IBA, 0,75 g/l than hoạt tính g/l agar thích hợp cho sinh trưởng dâu tây giai đoạn in vitro giai đoạn vườn ươm so với nồng độ sucrose lại (0; 10; 20; 40 g/l) Cây dâu tây thuộc giống Mỹ Hương kết hợp với ni cấy mơi trường ½ MS bổ sung 30 g/l sucrose, 0,2 mg/l IBA, 0,75 g/l than hoạt tính g/l agar có khả sinh trưởng tốt giai đoạn in vitro giai đoạn vườn ươm Kiểm tra virus SCV dâu tây sau trồng vườn ươm 45 ngày ba giống dâu tây Mỹ Đá, Mỹ Hương dâu Pháp kỹ thuật RT-PCR Kết cho thấy tất mẫu kiểm tra không bị nhiễm virus SCV v SUMMARY The thesis “Improving SCV-free strawberry (Fragaria spp.) propagation protocol through tissue culture method”, was carried out at Department of Plant Molecular Biology and Plant Breeding, Tay Nguyen Institute of Biology; Department of Plant Bioteachnology, Research Institute for Biotechnology and Environment from 10/2008 to 10/2009 Experiments were arranged in Completely Randomized Design with three replications The shoot regeneration from leaf tissues of in vitro strawberry plantlets of three strawberry cultivars, namely My Da, My Huong and Phap, depended on different genotypes and supplemented TDZ concentrations My Huong showed the highest regeneration rate among the three strawberry cultivars The highest shoot regeneration rate from leaf tissues of in vitro strawberry plantlets was noticed after leaf tissues had been cultivated on MS medium containing mgl-1 TDZ, 0.1 mgl-1 NAA, 30 gl-1 sucrose and gl-1 agar “Leaves cutting and shoot tip wounding” treatment performed significantly higher shoot regeneration rate compared with “No cutting” and “Leaves cutting” treatments By supplementing sucrose to growing medium, the growth of in vitro strawberry plantlets were improved and the concentration of 30 gl-1 sucrose showed the optimal growth for in vitro strawberry plantlets of three strawberry cultivars ½ MS medium supplemented with 30 gl-1 sucrose, 0.2 mgl-1 IBA, 0.75 gl-1 activated charcoal and gl-1 agar was the most suitable for the development of in vitro strawberry plantlets After 45 days in nethouse condition, strawberry plantlets of three strawberry cultivars, namely My Da, My Huong and Phap, were screened from SCV (Strawberry Crinkle Virus) by using RT-PCR technique and no virus was detected The results of this study confirm the potential of using tissue culture technique in virus-free strawberry propagation vi MỤC LỤC CHƯƠNG TRANG Trang tựa Trang chuẩn y i LÝ LỊCH CÁ NHÂN ii LỜI CAM ĐOAN iii LỜI CẢM ƠN iv TÓM TẮT v SUMMARY vi MỤC LỤC vii DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT xiii DANH SÁCH CÁC HÌNH .xv DANH SÁCH CÁC BẢNG xvii DANH SÁCH CÁC BIỂU ĐỒ xx 1.ĐẶT VẤN ĐỀ 1.1 Giới thiệu .1 1.2 Mục đích - mục tiêu yêu cầu đề tài 1.2.1 Mục đích đề tài 1.2.2 Mục tiêu đề tài .3 1.2.3 Yêu cầu đề tài 1.3 Giới hạn đề tài 1.3.1 Thời gian nghiên cứu 1.3.2 Địa điểm nghiên cứu TỔNG QUAN TÀI LIỆU .4 2.1 Sơ lược dâu tây 2.1.1 Phân loại khoa học dâu tây 2.1.2 Nguồn gốc - phân bố dâu tây 2.1.2.1 Nguồn gốc .5 vii 2.1.2.2 Phân bố 2.1.3 Đặc tính thực vật học dâu tây 2.1.4 Các phương pháp nhân giống dâu tây 2.1.5 Thành phần chất có dâu tây 2.1.6 Công dụng dâu tây 2.1.7 Điều kiện canh tác dâu tây 2.1.7.1 Đất trồng 2.1.7.2 Khí hậu 2.1.8 Tình hình canh tác dâu tây 2.1.8.1 Trên giới 2.1.8.2 Ở Việt Nam .8 2.2 Sơ lược nuôi cấy mô thực vật 13 2.2.1 Lịch sử nuôi cấy mô thực vật 13 2.2.2 Các phương pháp nuôi cấy mô thực vật 13 2.2.2.1 Nuôi cấy đỉnh sinh trưởng .13 2.2.2.2 Nuôi cấy mô sẹo 14 2.2.2.3 Nuôi cấy tế bào đơn 14 2.2.2.4 Nuôi cấy protoplast .14 2.2.2.5 Nuôi cấy hạt phấn 14 2.2.3 Lợi ích nhân giống trồng nuôi cấy mô .15 2.2.4 Các bước nhân giống trồng nuôi cấy mô 15 2.2.4.1 Chọn vật liệu cấy 15 2.2.4.2 Nhân chồi 15 2.2.4.3 Tạo rễ từ chồi 16 2.2.4.4 Trồng cấy mô đất 16 2.2.5 Các yếu tố ảnh hưởng nhân giống nuôi cấy mô 17 2.2.5.1 Sự lựa chọn mẫu cấy .17 2.2.5.2 Môi trường nuôi cấy 17 2.2.5.3 Điều kiện nuôi cấy 17 viii 2.2.6 Giới thiệu chất điều hòa sinh trưởng thực vật .18 2.2.6.1 Auxin .18 2.2.6.2 Cytokinin .19 2.3 Một số nghiên cứu nhân giống dâu tây phương pháp nuôi cấy mô .20 2.3.1 Trên giới .20 2.3.2 Ở Việt Nam 21 2.4 Các kỹ thuật chẩn đoán bệnh virus hại thực vật 23 2.4.1 Kỹ thuật chẩn đoán dựa vào triệu chứng 23 2.4.2 Kỹ thuật chẩn đoán thị 24 2.4.3 Kỹ thuật chẩn đốn kính hiển vi 24 2.4.3.1 Chẩn đốn kính hiển vi quang học .24 2.4.3.2 Chẩn đốn kính hiển vi điện tử 24 2.4.4 Kỹ thuật chẩn đoán phản ứng huyết 24 2.4.5 Kỹ thuật chẩn đoán dựa vào nucleic acid .25 2.4.5.1 Kỹ thuật lai phân tử (Molecular hybridization) 25 2.4.5.2 Kỹ thuật PCR RT-PCR 25 2.5 Giới thiệu kỹ thuật PCR RT-PCR .25 2.5.1 Kỹ thuật PCR 25 2.5.2 Kỹ thuật RT-PCR .26 2.6 Sơ lược virus SCV gây hại dâu tây 27 2.6.1 Phân loại 27 2.6.2 Nguồn gốc - phân bố 27 2.6.3 Hình dạng - kích thước 27 2.6.4 Genome 27 2.6.5 Protein 27 2.6.6 Phạm vi ký chủ 27 2.6.7 Phương thức lan truyền 27 2.6.8 Triệu chứng tác hại virus SCV dâu tây 28 2.6.8.1 Triệu chứng 28 ix 2.8 Kết xử lý thống kê tỷ lệ chất khô A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Factor A 1.927 0.964 69.8098 0.0000 Factor B 2.551 1.275 92.3914 0.0000 AB 0.598 0.149 10.8228 0.0001 -7 Error 18 0.248 0.014 Total 26 5.324 Coefficient of Variation: 1.27% Giống (A) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.160 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 9.520 A Mean = 9.520 A Mean = 9.370 A Mean = 9.370 A Mean = 8.890 B Mean = 8.890 B Kỹ thuật xử lý mẫu cấy (B) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.160 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Mean = 9.680 A Mean Mean = 9.160 B Mean Mean = 8.940 C Mean Order = 9.680 = 9.160 = 8.940 A B C Tương tác giống với kỹ thuật xử lý mẫu cấy (AB) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.106 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 9.657 B Mean = Mean = 9.520 BC Mean = Mean = 9.380 CD Mean = Mean = 9.840 A Mean = Mean = 9.260 D Mean = Mean = 9.007 E Mean = Mean = 9.537 BC Mean = Mean = 8.697 F Mean = Mean = 8.450 G Mean = 9.840 9.657 9.537 9.520 9.380 9.260 9.007 8.697 8.450 A B BC BC CD D E F G Thí nghiệm 3: 3.1 Kết xử lý thống kê chiều cao chồi A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Factor A 159.379 79.690 52.4989 0.0000 Factor B 1854.617 463.654 305.4524 0.0000 AB 19.647 2.456 1.6180 0.1614 -7 Error 30 45.538 1.518 Total 44 2079.181 Coefficient of Variation: 2.69% 122 Giống (A) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 1.237 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 45.71 B Mean = Mean = 48.07 A Mean = Mean = 43.46 C Mean = 48.07 45.71 43.46 A B C Nồng độ sucrose (B) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 1.597 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 35.28 D Mean = Mean = 41.87 C Mean = Mean = 47.74 B Mean = Mean = 51.17 A Mean = Mean = 52.68 A Mean = 52.68 A 51.17 A 47.74 B 41.87 C 35.28 D 3.2 Kết xử lý thống kê số A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Factor A 3.361 1.681 526.2677 0.0000 Factor B 36.286 9.071 2840.7370 0.0000 AB 1.715 0.214 67.1282 0.0000 -7 Error 30 0.096 0.003 Total 44 41.458 Coefficient of Variation: 0.82% Giống (A) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.055 at alpha Original Order Mean = 7.050 A Mean = 7.060 A Mean = 6.470 B = 0.010 Ranked Mean Mean Mean Order = = = 7.060 7.050 6.470 A A B Nồng độ sucrose (B) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.071 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 5.280 E Mean = Mean = 6.610 D Mean = Mean = 7.070 C Mean = Mean = 7.420 B Mean = Mean = 7.920 A Mean = 7.920 7.420 7.070 6.610 5.280 A B C D E Tương tác giống với nồng độ sucrose (AB) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.055 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 5.313 K Mean 10 Mean = 6.573 I Mean Mean = 7.197 F Mean Mean = 7.920 C Mean Mean = 8.253 B Mean Mean = 5.360 K Mean Mean = 6.917 G Mean 15 123 = = = = = = = 8.350 8.253 7.920 7.390 7.277 7.197 7.163 A B C D E F F Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 10 11 12 13 14 15 = = = = = = = = 7.277 7.390 8.350 5.180 6.327 6.747 6.950 7.163 E D A L J H G F Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 14 13 12 11 = = = = = = = = 6.950 6.917 6.747 6.573 6.327 5.360 5.313 5.180 G G H I J K K L 3.3 Kết xử lý thống kê kích thước A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Factor A 5.734 2.867 123.6585 0.0000 Factor B 12.725 3.181 137.2018 0.0000 AB 0.734 0.092 3.9573 0.0027 -7 Error 30 0.696 0.023 Total 44 19.889 Coefficient of Variation: 2.29% Giống (A) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.152 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 6.880 A Mean = Mean = 6.920 A Mean = Mean = 6.140 B Mean = 6.920 6.880 6.140 A A B Nồng độ sucrose (B) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.196 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 5.780 D Mean = Mean = 6.300 C Mean = Mean = 6.860 B Mean = Mean = 7.030 B Mean = Mean = 7.240 A Mean = 7.240 7.030 6.860 6.300 5.780 A B B C D Tương tác giống với nồng độ sucrose (AB) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.152 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 6.187 H Mean 10 = 7.497 Mean = 6.667 G Mean = 7.380 Mean = 6.953 EF Mean = 7.270 Mean = 7.213 CD Mean = 7.213 Mean = 7.380 AB Mean = 7.063 Mean = 6.087 H Mean = 6.953 Mean = 6.657 G Mean 15 = 6.847 Mean = 7.063 DE Mean = 6.667 Mean = 7.270 BC Mean = 6.657 Mean 10 = 7.497 A Mean 14 = 6.620 Mean 11 = 5.077 J Mean 13 = 6.573 Mean 12 = 5.587 I Mean = 6.187 Mean 13 = 6.573 G Mean = 6.087 Mean 14 = 6.620 G Mean 12 = 5.587 Mean 15 = 6.847 F Mean 11 = 5.077 124 A AB BC CD DE EF F G G G G H H I J 3.4 Kết xử lý thống kê số rễ A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob -2 Factor A 103.228 51.614 138.6465 0.0000 Factor B 981.225 245.306 658.9489 0.0000 AB 80.848 10.106 27.1471 0.0000 -7 Error 30 11.168 0.372 Total 44 1176.469 Coefficient of Variation: 5.62% Giống (A) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.612 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 10.06 B Mean = Mean = 12.99 A Mean = Mean = 9.550 B Mean = 12.99 10.06 9.550 A B B Nồng độ sucrose (B) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.790 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 4.010 D Mean = Mean = 7.840 C Mean = Mean = 12.56 B Mean = Mean = 17.83 A Mean = Mean = 12.08 B Mean = 17.83 12.56 12.08 7.840 4.010 A B B C D Tương tác giống với nồng độ sucrose (AB) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.612 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 3.730 L Mean Mean = 8.010 I Mean Mean = 11.21 G Mean Mean = 16.64 B Mean 14 Mean = 10.71 GH Mean 10 Mean = 4.470 K Mean 15 Mean = 8.440 I Mean Mean = 16.00 C Mean Mean = 22.68 A Mean 13 Mean 10 = 13.31 E Mean Mean 11 = 3.840 L Mean Mean 12 = 7.060 J Mean 12 Mean 13 = 10.47 H Mean Mean 14 = 14.16 D Mean 11 Mean 15 = 12.21 F Mean 125 = = = = = = = = = = = = = = = 22.68 16.64 16.00 14.16 13.31 12.21 11.21 10.71 10.47 8.440 8.010 7.060 4.470 3.840 3.730 A B C D E F G GH H I I J K L L 3.5 Kết xử lý thống kê chiều dài rễ A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Factor A 279.390 139.695 251.7008 0.0000 Factor B 810.647 202.662 365.1534 0.0000 AB 69.354 8.669 15.6201 0.0000 -7 Error 30 16.650 0.555 Total 44 1176.041 Coefficient of Variation: 4.79% Giống (A) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.748 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 18.98 A Mean = 18.98 Mean = 13.13 C Mean = 14.56 Mean = 14.56 B Mean = 13.13 A B C Nồng độ sucrose (B) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.965 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 8.570 D Mean = Mean = 14.21 C Mean = Mean = 15.16 C Mean = Mean = 19.12 B Mean = Mean = 20.72 A Mean = 20.72 19.12 15.16 14.21 8.570 A B C C D Tương tác giống với nồng độ sucrose (AB) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.748 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 9.920 J Mean = Mean = 16.61 E Mean = Mean = 18.02 D Mean 15 = Mean = 24.26 B Mean = Mean = 26.10 A Mean 14 = Mean = 7.240 L Mean 10 = Mean = 13.49 H Mean = Mean = 12.43 I Mean = Mean = 15.81 F Mean 13 = Mean 10 = 16.67 E Mean = Mean 11 = 8.570 K Mean 12 = Mean 12 = 12.54 I Mean = Mean 13 = 15.03 G Mean = Mean 14 = 17.27 E Mean 11 = Mean 15 = 19.39 C Mean = 126 26.10 24.26 19.39 18.02 17.27 16.67 16.61 15.81 15.03 13.49 12.54 12.43 9.920 8.570 7.240 A B C D E E E F G H I I J K L 3.6 Kết xử lý thống kê trọng lượng tươi A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Factor A 2705.738 1352.869 19.1024 0.0000 Factor B 501806.595 125451.649 1771.3718 0.0000 AB 605.404 75.676 1.0685 0.4105 -7 Error 30 2124.652 70.822 Total 44 507242.390 -Coefficient of Variation: 3.61% Giống (A) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 8.451 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 232.9 B Mean = Mean = 242.6 A Mean = Mean = 223.6 C Mean = 242.6 232.9 223.6 A B C Nồng độ sucrose (B) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 10.910 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 81.90 E Mean = Mean = 142.2 D Mean = Mean = 256.0 C Mean = Mean = 334.8 B Mean = Mean = 350.4 A Mean = 350.4 334.8 256.0 142.2 81.90 A B C D E 3.7 Kết xử lý thống kê trọng lượng khô A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Factor A 46.172 23.086 27.6912 0.0000 Factor B 6543.178 1635.794 1962.0950 0.0000 AB 9.162 1.145 1.3736 0.2478 -7 Error 30 25.011 0.834 Total 44 6623.522 Coefficient of Variation: 3.76% Giống (A) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.917 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 23.86 B Mean = Mean = 25.70 A Mean = Mean = 23.34 B Mean = 25.70 23.86 23.34 A B B Nồng độ sucrose (B) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 1.184 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 6.870 D Mean = Mean = 14.07 C Mean = Mean = 27.03 B Mean = 127 37.29 36.23 27.03 A A B Mean Mean = = 36.23 37.29 A A Mean Mean = = 14.07 6.870 C D 3.8 Kết xử lý thống kê tỷ lệ chất khô A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Factor A 0.926 0.463 73.7626 0.0000 Factor B 35.941 8.985 1430.7541 0.0000 AB 0.144 0.018 2.8646 0.0171 -7 Error 30 0.188 0.006 Total 44 37.199 Coefficient of Variation: 0.79% Giống (A) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.077 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 9.890 C Mean = Mean = 10.24 A Mean = Mean = 10.06 B Mean = 10.24 10.06 9.890 A B C Nồng độ sucrose (B) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.100 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 8.380 D Mean = Mean = 9.920 C Mean = Mean = 10.55 B Mean = Mean = 10.82 A Mean = Mean = 10.64 B Mean = 10.82 10.64 10.55 9.920 8.380 A B B C D Tương tác giống với nồng độ sucrose (AB) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.1292 at alpha = 0.050 Original Order Ranked Order Mean = 8.270 I Mean = Mean = 9.650 G Mean 14 = Mean = 10.41 D Mean 10 = Mean = 10.67 C Mean = Mean = 10.44 D Mean = Mean = 8.490 H Mean 15 = Mean = 10.22 E Mean 13 = Mean = 10.75 BC Mean = Mean = 10.93 A Mean = Mean 10 = 10.82 AB Mean = Mean 11 = 8.390 HI Mean 12 = Mean 12 = 9.880 F Mean = Mean 13 = 10.49 D Mean = Mean 14 = 10.87 AB Mean 11 = Mean 15 = 10.66 C Mean = 128 10.93 10.87 10.82 10.75 10.67 10.66 10.49 10.44 10.41 10.22 9.880 9.650 8.490 8.390 8.270 A AB AB BC C C D D D E F G H HI I Thí nghiệm 4: 4.1 Kết xử lý thống kê tỷ lệ sống A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Factor A 1205.856 602.928 83.5489 0.0000 Factor B 23864.417 5966.104 826.7343 0.0000 AB 1203.690 150.461 20.8497 0.0000 -7 Error 30 216.494 7.216 Total 44 26490.457 Coefficient of Variation: 3.52% Giống (A) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 2.697 at Original Order Mean = 69.07 B Mean = 81.12 A Mean = 78.52 A alpha = 0.010 Ranked Order Mean = 81.12 Mean = 78.52 Mean = 69.07 A A B Nồng độ sucrose (B) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 3.482 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 33.13 D Mean = Mean = 71.71 C Mean = Mean = 90.35 B Mean = Mean = 95.40 A Mean = Mean = 90.60 B Mean = 95.40 90.60 90.35 71.71 33.13 A B B C D Tương tác giống với nồng độ sucrose (AB) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 2.697 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 12.77 K Mean Mean = 69.35 H Mean 14 Mean = 82.14 F Mean Mean = 92.73 CD Mean 13 Mean = 88.36 E Mean Mean = 48.21 I Mean 15 Mean = 73.96 G Mean 10 Mean = 95.28 ABC Mean Mean = 97.33 A Mean Mean 10 = 90.82 DE Mean Mean 11 = 38.39 J Mean 12 Mean 12 = 71.81 GH Mean Mean 13 = 93.62 BCD Mean Mean 14 = 96.14 AB Mean 11 Mean 15 = 92.62 CD Mean 129 = = = = = = = = = = = = = = = 97.33 96.14 95.28 93.62 92.73 92.62 90.82 88.36 82.14 73.96 71.81 69.35 48.21 38.39 12.77 A AB ABC BCD CD CD DE E F G GH H I J K 4.2 Kết xử lý thống kê chiều cao A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Factor A 255.027 127.514 39.9533 0.0000 Factor B 3973.375 993.344 311.2397 0.0000 AB 47.969 5.996 1.8787 0.1010 -7 Error 30 95.747 3.192 Total 44 4372.118 Coefficient of Variation: 2.47% Giống (A) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 1.794 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 72.25 B Mean = Mean = 75.47 A Mean = Mean = 69.65 C Mean = 75.47 72.25 69.65 A B C Nồng độ sucrose (B) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 2.316 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 55.87 D Mean = Mean = 68.42 C Mean = Mean = 77.08 B Mean = Mean = 81.05 A Mean = Mean = 79.85 A Mean = 81.05 79.85 77.08 68.42 55.87 A A B C D 4.3 Kết xử lý thống kê số A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Factor A 0.411 0.205 8.0960 0.0015 Factor B 6.806 1.701 67.0320 0.0000 AB 0.113 0.014 0.5558 -7 Error 30 0.761 0.025 Total 44 8.091 Coefficient of Variation: 5.57% Giống (A) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.158 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 2.730 B Mean = Mean = 2.960 A Mean = Mean = 2.890 A Mean = 2.960 2.890 2.730 A A B Nồng độ sucrose (B) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.205 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 2.150 C Mean = 3.200 Mean = 2.750 B Mean = 3.130 Mean = 3.070 A Mean = 3.070 130 A A A Mean Mean = = 3.200 3.130 A A Mean Mean = = 2.750 2.150 B C 4.4 Kết xử lý thống kê kích thước A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Factor A 51.893 25.946 192.5624 0.0000 Factor B 886.649 221.662 1645.0836 0.0000 AB 36.776 4.597 34.1173 0.0000 -7 Error 30 4.042 0.135 Total 44 979.360 Coefficient of Variation: 2.17% K Giống (A) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.369 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 15.53 C Mean = Mean = 18.15 A Mean = Mean = 16.96 B Mean = 18.15 16.96 15.53 A B C Nồng độ sucrose (B) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.476 at alpha Original Order Mean = 9.360 E Mean = 15.21 D Mean = 17.33 C Mean = 21.82 A Mean = 20.69 B = 0.010 Ranked Order Mean = Mean = Mean = Mean = Mean = 21.82 20.69 17.33 15.21 9.360 A B C D E Tương tác giống với nồng độ sucrose (AB) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.369 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 8.350 I Mean 14 = Mean = 14.87 G Mean = Mean = 16.48 F Mean 15 = Mean = 19.54 D Mean 10 = Mean = 18.39 E Mean = Mean = 11.40 H Mean = Mean = 16.19 F Mean = Mean = 19.21 D Mean = Mean = 22.42 B Mean 13 = Mean 10 = 21.55 C Mean = Mean 11 = 8.320 I Mean = Mean 12 = 14.55 G Mean 12 = Mean 13 = 16.30 F Mean = Mean 14 = 23.49 A Mean = Mean 15 = 22.15 B Mean 11 = 131 23.49 22.42 22.15 21.55 19.54 19.21 18.39 16.48 16.30 16.19 14.87 14.55 11.40 8.350 8.320 A B B C D D E F F F G G H I I 4.5 Kết xử lý thống kê số rễ A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Factor A 9412.047 4706.023 335.9735 0.0000 Factor B 35274.283 8818.571 629.5775 0.0000 AB 5733.866 716.733 51.1692 0.0000 -7 Error 30 420.214 14.007 Total 44 50840.410 Coefficient of Variation: 6.15% Giống (A) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 3.758 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 49.38 B Mean = Mean = 81.23 A Mean = Mean = 51.87 B Mean = 81.23 51.87 49.38 A B B Nồng độ sucrose (B) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 4.852 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 12.13 D Mean = Mean = 48.23 C Mean = Mean = 71.71 B Mean = Mean = 85.40 A Mean = Mean = 86.65 A Mean = 86.65 85.40 71.71 48.23 12.13 A A B C D Tương tác giống với nồng độ sucrose (AB) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 3.758 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 11.42 K Mean 10 Mean = 35.78 J Mean Mean = 69.50 E Mean Mean = 76.23 D Mean Mean = 53.99 H Mean 15 Mean = 12.96 K Mean Mean = 63.73 F Mean 14 Mean = 85.94 C Mean Mean = 113.6 B Mean 13 Mean 10 = 129.9 A Mean Mean 11 = 12.01 K Mean 12 Mean 12 = 45.19 I Mean Mean 13 = 59.69 G Mean Mean 14 = 66.35 EF Mean 11 Mean 15 = 76.08 D Mean 132 = = = = = = = = = = = = = = = 129.9 113.6 85.94 76.23 76.08 69.50 66.35 63.73 59.69 53.99 45.19 35.78 12.96 12.01 11.42 A B C D D E EF F G H I J K K K 4.6 Kết xử lý thống kê chiều dài rễ A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Factor A 300.329 150.164 175.2265 0.0000 Factor B 805.414 201.353 234.9588 0.0000 AB 255.614 31.952 37.2843 0.0000 -7 Error 30 25.709 0.857 Total 44 1387.065 Coefficient of Variation: 2.00% Giống (A) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.929 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 49.95 A Mean = 49.95 Mean = 44.28 B Mean = 44.67 Mean = 44.67 B Mean = 44.28 A B B Nồng độ sucrose (B) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 1.200 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 42.06 D Mean = Mean = 45.33 C Mean = Mean = 49.93 B Mean = Mean = 52.39 A Mean = Mean = 41.79 D Mean = 52.39 49.93 45.33 42.06 41.79 A B C D D Tương tác giống với nồng độ sucrose (AB) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.929 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 46.14 FG Mean = Mean = 46.70 EF Mean = Mean = 53.56 C Mean = Mean = 57.20 A Mean = Mean = 46.12 FG Mean 13 = Mean = 37.56 J Mean = Mean = 43.16 H Mean = Mean = 48.92 D Mean 12 = Mean = 54.67 B Mean = Mean 10 = 37.08 J Mean 14 = Mean 11 = 42.47 HI Mean = Mean 12 = 46.13 FG Mean 11 = Mean 13 = 47.30 E Mean 15 = Mean 14 = 45.29 G Mean = Mean 15 = 42.17 I Mean 10 = 133 57.20 54.67 53.56 48.92 47.30 46.70 46.14 46.13 46.12 45.29 43.16 42.47 42.17 37.56 37.08 A B C D E EF FG FG FG G H HI I J J 4.7 Kết xử lý thống kê trọng lượng tươi A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Factor A 14761.595 7380.797 13.1024 0.0001 Factor B 5649985.895 1412496.474 2507.4744 0.0000 AB 8769.545 1096.193 1.9460 0.0894 -7 Error 30 16899.433 563.314 Total 44 5690416.468 -Coefficient of Variation: 2.26% Giống (A) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 23.83 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 1048 B Mean = Mean = 1074 A Mean = Mean = 1030 B Mean = 1074 1048 1030 A B B Nồng độ sucrose (B) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 30.77 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 366.4 D Mean = Mean = 1045 C Mean = Mean = 1285 A Mean = Mean = 1303 A Mean = Mean = 1253 B Mean = 1303 1285 1253 1045 366.4 A A B C D 4.8 Kết xử lý thống kê trọng lượng khô A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Factor A 4469.831 2234.916 26.0763 0.0000 Factor B 273039.528 68259.882 796.4351 0.0000 AB 695.473 86.934 1.0143 0.4465 -7 Error 30 2571.203 85.707 Total 44 280776.035 Coefficient of Variation: 5.08% Giống (A) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 9.296 at Original Order Mean = 173.7 B Mean = 196.3 A Mean = 177.1 B alpha = 0.010 Ranked Order Mean = Mean = Mean = 134 196.3 177.1 173.7 A B B Nồng độ sucrose (B) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 12.000 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 38.62 D Mean = Mean = 162.2 C Mean = Mean = 227.5 B Mean = Mean = 251.0 A Mean = Mean = 232.6 B Mean = 251.0 232.6 227.5 162.2 38.62 A B B C D 4.9 Kết xử lý thống kê tỷ lệ chất khô A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Factor A 21.987 10.993 50.2342 0.0000 Factor B 449.842 112.461 513.8833 0.0000 AB 3.484 0.435 1.9900 0.0825 -7 Error 30 6.565 0.219 Total 44 481.878 -Coefficient of Variation: 2.87% Giống (A) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.469 at alpha Original Order Mean = 15.53 C Mean = 17.22 A Mean = 16.19 B = 0.010 Ranked Mean Mean Mean Order = = = 17.22 16.19 15.53 A B C Nồng độ sucrose (B) Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.606 at alpha Original Order Mean = 10.51 E Mean = 15.52 D Mean = 17.71 C Mean = 19.26 A Mean = 18.57 B = 0.010 Ranked Order Mean = Mean = Mean = Mean = Mean = 135 19.26 18.57 17.71 15.52 10.51 A B C D E Sơ đồ bố trí nghiệm thức thí nghiệm NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT 6.3 1.1 13.1 5.2 12.2 8.2 11.1 13.3 2.3 8.1 15.3 3.3 7.1 14.3 5.1 NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT 2.1 15.1 9.2 11.3 6.2 7.3 3.2 3.1 9.3 4.3 13.2 9.1 1.2 10.1 8.3 NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT 14.1 12.3 7.2 4.2 15.2 1.3 10.2 5.3 14.2 11.2 10.3 12.1 6.1 2.2 4.1 NT: Nghiệm thức, số đứng trước dấu chấm (.) tên nghiệm thức, số đứng sau dấu chấm số thứ tự lần lặp lại Sơ đồ bố trí nghiệm thức thí nghiệm NT NT NT NT NT NT NT NT NT 2.1 1.1 6.3 5.2 1.3 2.3 3.2 9.1 8.3 NT NT NT NT NT NT NT NT NT 4.2 9.3 3.3 8.1 7.3 8.2 5.1 4.3 7.2 NT NT NT NT NT NT NT NT NT 6.2 5.3 7.1 2.2 6.1 9.2 4.1 1.2 3.1 NT: Nghiệm thức, số đứng trước dấu chấm (.) tên nghiệm thức, số đứng sau dấu chấm số thứ tự lần lặp lại Sơ đồ bố trí nghiệm thức thí nghiệm NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT 1.1 5.2 10.3 9.3 14.2 4.1 11.2 2.1 6.3 12.2 3.1 7.3 8.1 9.1 14.3 NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT 15.2 3.2 7.2 12.3 6.1 5.3 9.2 7.1 5.1 4.3 14.1 2.2 6.2 3.3 11.3 NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT 4.2 8.2 15.1 13.2 11.1 10.1 15.3 8.3 1.3 13.1 2.3 10.2 1.2 12.1 13.3 NT: Nghiệm thức, số đứng trước dấu chấm (.) tên nghiệm thức, số đứng sau dấu chấm số thứ tự lần lặp lại Sơ đồ bố trí nghiệm thức thí nghiệm NT: Nghiệm thức, số đứng trước dấu chấm (.) tên nghiệm thức, số đứng sau dấu chấm số thứ tự lần lặp lại 136 ... TẠO ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH HÀ THỊ TUYẾT PHƯỢNG HỒN THIỆN QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG CÂY DÂU TÂY (FRAGARIA SPP.) SẠCH VIRUS SCV (STRAWBERRY CRINKLE VIRUS) BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ Chuyên... nhiễm virus dâu tây sau trồng vườn ươm Xuất phát từ tình hình trên, đề tài “Hồn thiện quy trình nhân giống dâu tây (Fragaria spp.) virus SCV (Strawberry Crinkle Virus) phương pháp nuôi cấy mô ... quy trình nhân giống dâu tây (Fragaria spp.) virus SCV (Strawberry Crinkle Virus) phương pháp nuôi cấy mô thực Phòng Sinh học Phân tử Chọn tạo Giống trồng Viện Sinh học Tây Nguyên, Bộ môn Công