Ảnh hưởng của kích thước và phương thức cấy mẫu đến khả năng tái sinh chồi in vitro một số giống hoa cúc

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH - KTNN ====== NGUYỄN DOÃN THỊ HUYỀN ẢNH HƯỞNG CỦA KÍCH THƯỚC, PHƯƠNG THỨC CẤY MẪU ĐẾN KHẢ NĂNG TÁI SINH CHỒI IN VITRO MỘT SỐ GIỐNG HOA CÚC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Sinh lý học Thực vật Người hướng dẫn khoa học PGS.TS NGUYỄN VĂN ĐÍNH HÀ NỘI, 2016 LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ lòng cảm ơn chân thành tri ân sâu sắc đến thầy giáo PGS.TS Nguyễn Văn Đính – người tận tình hướng dẫn, bảo tạo điều kiện tốt để hoàn thành khóa luận Tôi xin chân trọng cảm ơn thầy cô giáo trường Đại học Sư phạm Hà Nội 2, Ban chủ nhiệm khoa Sinh – KTNN ĐHSP Hà Nội tạo điều kiện để hoàn thành khóa luận tốt nghiệp Trong thời gian thực đề tài, nhận giúp đỡ tận tình thầy La Việt Hồng cô Mai Thị Hồng tập thể, cán Phòng thí nghiệm Sinh lý thực vật giúp đỡ, đóng góp ý kiến để hoàn thành khóa luận, nhân xin gửi lời cảm ơn Cuối cùng, xin cảm ơn tới người thân, bạn bè bên động viên, giúp đỡ khích lệ hoàn thành khóa luận Tôi xin chân thành cảm ơn Hà Nội, ngày 12, tháng 4, năm 2016 Sinh viên Nguyễn Doãn Thị Huyền LỜI CAM ĐOAN Khóa luận tốt nghiệp: “Ảnh hưởng kích thước phương thức cấy mẫu đến khả tái sinh chồi in vitro số giống hoa cúc” công trình nghiên cứu cá nhân thực hướng dẫn PGS.TS Nguyễn Văn Đính Các kết nghiên cứu khóa luận trung thực thông tin trích dẫn khóa luận ghi rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày 12, tháng 4, năm 2016 Sinh viên Nguyễn Doãn Thị Huyền DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT NAA: Napthlacetic acid BAP: 6-Benzyl amino purin KI: Kinetin IBA: Indol butyric acid GA3: Gibberellic acid MS: Murashige Skoog Nxb: Nhà xuất Cs: Cộng MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục đích nội dung nghiên cứu Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn NỘI DUNG Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu hoa cúc 1.1.1 Nguồn gốc hoa cúc 1.1.2 Vị trí phân loại 1.1.3 Một số đặc điểm thực vật học 1.2 Tình hình sản xuất hoa cúc giới Việt Nam 1.2.1 Tình hình sản xuất hoa cúc giới 1.2.2 Tình hình sản xuất hoa cúc Việt Nam 1.3 Tình hình nghiên cứu nuôi cấy in vitro hoa cúc giới Việt Nam 1.3.1 Tình hình nghiên cứu nuôi cấy in vitro hoa cúc giới 1.3.2 Tình hình nghiên cứu in vitro hoa cúc Việt Nam 1.4 Tình hình nghiên cứu ảnh hưởng kích thước mẫu phương thức cấy mẫu đến sinh trưởng in vitro 10 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 2.1 Vật liệu nghiên cứu 13 2.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu 13 2.3 Dụng cụ thiết bị thí ngiệm 13 2.3.1 Thiết bị 13 2.3.2 Dụng cụ 13 2.4 Môi trường nuôi cấy 13 2.5 Điều kiện nuôi cấy 14 2.6 Phương pháp nghiên cứu 14 2.6.1 Chuẩn bị vật liệu thực vật 14 2.6.2 Phương pháp bố trí thí nghiệm 14 2.6.3 Phương pháp xử lý số liệu 16 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 17 3.1 Tạo vật liệu khởi đầu 17 3.2 Đánh giá khả tái sinh chồi in vitro giống hoa cúc nuôi cấy in vitro 19 3.2.1 Số chồi/mẫu 19 3.2.2 Chiều cao chồi 21 3.2.3 Số lá/chồi 23 3.3 Ảnh hưởng kích thước mẫu đến trình nhân nhanh chồi cúc 23 3.4 Ảnh hưởng phương thức cấy đến phát triển chồi phát sinh 25 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 27 TÀI LIỆU THAM KHẢO 28 DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 3.1 Hiệu khử trùng bề mặt dung dịch Javen đỉnh sinh trưởng hoa cúc 17 Bảng 3.2 Ảnh hưởng BAP đến số chồi/mẫu số giống cúc 20 Bảng 3.3 Ảnh hưởng BAP đến chiều cao chồi số giống cúc 21 Bảng 3.4 Ảnh hưởng BAP đến số lá/chồi số giống cúc 23 Bảng 3.5 Ảnh hưởng kích thước mẫu cấy đến số chồi/mẫu hoa cúc 24 Bảng 3.6 Ảnh hưởng phương thức cấy đến phát triển chồi cúc 25 DANH MỤC HÌNH Hình 3.1 Các mẫu cúc sau tuần vào mẫu 18 Hình 3.2 Sự sinh trưởng giống cúc vàng hè sau tuần 20 Hình 3.3 Sự sinh trưởng giống cúc chi đỏ sau tuần 21 Hình 3.4 Sự sinh trưởng giống cúc đỏ cờ sau tuần 22 Hình 3.5 Sự sinh trưởng giống cúc kim cương sau tuần 22 Hình 3.6 Sự sinh trưởng giống cúc thạch bích sau tuần 23 Hình 3.7 Sự sinh trưởng chồi cúc chi đỏ nhóm kích thước mẫu sau tuần nuôi cấy 25 Hình 3.8 Ảnh hưởng phương thức cấy đến phát triển chồi cúc vàng hè 27 MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Ngày nay, xã hội phát triển, không chất lượng đời sống vật chất người cải thiện mà đời sống tinh thần không ngừng tăng lên, hoa vẻ đẹp thiếu sống đại, hoa tô điểm cho sống, thoả mãn nhu cầu thưởng thức đẹp người Và loài hoa, không kể đến hoa cúc - loài hoa trồng chậu cắt cành nhiều người ưa chuộng phổ biến giới Cúc đẹp không màu sắc phong phú hình dáng đa dạng mà mùi hương kín đáo đặc tính bền Với ưu đó, hoa cúc nhà trồng hoa trọng đầu tư phát triển [9] Trong xu hội nhập, với sách mở cửa nhà nước, nhiều nhà đầu tư nước không ngừng đưa vào Việt Nam giống cúc đẹp có giá trị kinh tế cao Chính vậy, sản phẩm hoa cúc đa dạng chủng loại, phong phú màu sắc Việc xuất liên tục giống hoa cúc ngoại nhập, bên cạnh giống hoa nội địa, giúp mở rộng sản xuất để đáp ứng nhu cầu thị hiếu người tiêu dùng Theo đó, nhu cầu giống tăng theo, phương pháp nhân giống không ngừng cải tiến Trong năm gần đây, phương pháp đại ứng dụng rộng rãi phương pháp nhân giống in vitro ưu điểm như: tạo lượng lớn giống từ mô, quan với kích thước nhỏ 0,1 – 10 mm; giống tạo bệnh, có khả nhân nhanh giống bệnh; điều chỉnh khả tái sinh theo ý muốn; hệ số nhân giống cao, có khả sản xuất số lượng lớn thời gian ngắn; tiến hành quanh năm giống in vitro bảo quản thời gian dài điều kiện in vitro [2] Quá trình tái sinh nhân nhanh chồi in Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Tạo vật liệu khởi đầu Đây giai đoạn quan trọng, chí định toàn quy trình nhân giống in vitro [2] Đối với loại cây, loại mô khác phải xác định phương thức khử trùng khác cho thích hợp Có loại cần bóc lớp bên để lấy đỉnh sinh trưởng rửa lại cồn 700 (chuối, mía ), có loại phải sử dụng hoá chất khác HgCl2, Ca(OCl)2, NaOCl, H2O2… với nồng độ thời gian thích hợp Đối với giống cúc này, sử dụng NaOCl - 15% để khử trùng bề mặt - 15 phút Sau tuần theo dõi tiêu: tỉ lệ mẫu nhiễm, tỉ lệ mẫu sống, tỉ lệ mẫu chết giống thể qua bảng 3.1 Bảng 3.1: Hiệu khử trùng bề mặt dung dịch Javen đỉnh sinh trưởng hoa cúc Công Chỉ tiêu Kim Thạch Vàng thức giống cương bích hè 100 100 100 100 - - - - - - - - - - Mẫu nhiễm (%) 95,83 100 100 100 100 Mẫu sống (%) 4,17 - - - - Mẫu chết (%) - - - - - Mẫu nhiễm (%) 7,10 81,90 97,14 96,67 94,12 Mẫu sống (%) 92,90 18,10 2,86 3,33 5,88 Mẫu chết (%) - - - - - Mẫu nhiễm (%) - 41,67 76,00 50,00 9,09 Mẫu sống (%) - 41,67 12,00 33,33 54,55 Mẫu chết (%) 100 16,66 12,00 16,67 36,36 Đỏ cờ Chi đỏ 100 Mẫu sống (%) Mẫu chết (%) Mẫu nhiễm (%) T0 T1 T2 T3 17 T4 T5 Mẫu nhiễm (%) - 6,67 30,00 15,00 - Mẫu sống (%) - 13,33 36,67 15,00 7,41 Mẫu chết (%) 100 80,00 33,33 70,00 92,59 Mẫu nhiễm (%) - - 10,00 - - Mẫu sống (%) - - 15,00 - - Mẫu chết (%) 100 100 75,00 100 100 Dấu “-”thể tỉ lệ mẫu sống 0,00% công thức Hình 3.1 Các mẫu cúc sau tuần vào mẫu gồm: - cúc đỏ cờ, cúc chi đỏ, - cúc kim cương, - cúc thạch bích, – cúc vàng hè Việc khử trùng bề mặt ban đầu không hiệu quả, nấm, nấm men vi khuẩn vào mẫu nuối cấy in vitro với nguyên liệu [17], [19], vậy, mẫu khử trùng công thức ĐC hiệu khử trùng, mẫu nhiễm sau ngày nuôi cấy Từ công thức T1 đến T4 cho thấy Javen có tác dụng khử trùng mẫu in vitro Tuy nhiên, có khác hiệu khử trùng Đối với giống cúc đỏ cờ, hiệu khử trùng đạt cao công thức T2 (92,9 18 %), giống cúc chi đỏ, thạch bích, vàng hè, hiệu khử trùng đạt cao công thức T3 (lần lượt 41,67 %; 33,33 %; 54,55 %), giống cúc kim cương, hiệu khử trùng đạt cao công thức T4 (36,67 %) Tại công thức T5, nồng độ Javen cao, tác dụng diệt khuẩn, bào tử nấm gây chết cho tế bào thực vật 3.2 Đánh giá khả tái sinh chồi in vitro giống hoa cúc nuôi cấy in vitro Giai đoạn tái sinh giai đoạn quan trọng kĩ thuật nuôi cấy in vitro Sự thành công trình nghiên cứu tái sinh thực vật in vitro có nhờ tìm điều kiện nuôi cấy thích hợp cho phát triển tế bào mô thực vật Các yếu tố đóng vai trò quan trọng môi trường, nhiệt độ, pH, độ ẩm thành phần khí nghiên cứu chi tiết [31] Trong giai đoạn này, môi trường nhân giống thường môi trường MS có bổ sung chất điều hoà sinh trưởng (auxin, cytokinin…) với tỷ lệ phù hợp tùy loài nhằm tạo điều kiện cho trình nhân chồi, đó, BAP thuộc nhóm cytokinin, nhóm có ảnh hưởng rõ rệt đặc trưng lên phân hoá quan thực vật, đặc biệt phân hoá chồi [10], vậy, nuôi cấy in vitro, sử dụng phổ biến để tạo đa chồi nhiều loài Dựa nghiên cứu trước La Việt Hồng cs (2014), tiến hành nghiên cứu ảnh hưởng BAP nồng độ 0,7 mg/l bổ sung vào MS đến tạo chồi cúc, kết sau: 3.2.1 Số chồi/mẫu Bảng 3.2: Ảnh hưởng BAP đến số chồi/mẫu số giống cúc 19 Giống Số chồi/mẫu tuần tuần tuần tuần Đỏ cờ 2,13c 2,88d 3,88c 4,38c Chi đỏ 3,69ab 4,63b 5,63a 7,20a Kim cương 2,81bc 3,63c 4,00c 4,60c Thạch bích 3,63ab 4,38b 4,56b 6,00b Vàng hè 4,50a 5,25a 6,00a 7,25a Những chữ khác (a, b…) cột thể sai khác với mức ý nghĩa α = 0,05 Từ kết ta thấy, môi trường MS + 30 g/l saccarozơ + g agar + 0,7 mg/l BAP môi trường thích hợp cho tái sinh chồi hoa cúc nói chung Tuy nhiên, với giống cúc khác phát sinh chồi lại không giống Cụ thể, sau tuần, giống cúc vàng hè giống cúc chi đỏ cho số chồi/mẫu lớn (lần lượt 7,25 7,2 chồi/mẫu) thấp giống đỏ cờ (đạt 4,38 chồi/mẫu) Hình 3.2 Sự sinh trưởng giống cúc vàng hè sau tuần 20 Hình 3.3 Sự sinh trưởng giống cúc chi đỏ sau tuần 3.2.2 Chiều cao chồi Bảng 3.3: Ảnh hưởng BAP đến chiều cao chồi số giống cúc Giống Chiều cao chồi (cm) tuần tuần tuần tuần Đỏ cờ 1,33a 2,04a 3,25a 4,78a Chi đỏ 0,83bc 1,13c 1,96bc 2,44c Kim cương 1,04abc 1,46bc 2,21bc 2,65c Thạch bích 0,75bc 1,42bc 2,38bc 2,83c Vàng hè 1,09ab 1,67ab 2,42b 3,78b Những chữ khác (a, b…) cột thể sai khác với mức ý nghĩa α = 0,05 Từ kết ta thấy, môi trường MS + BAP 0,7 mg/l ảnh hưởng đến sinh trưởng chiều cao giống cúc Cụ thể, sau tuần, giống cúc đỏ cờ vàng hè có tăng trưởng mạnh chiều cao: giống đỏ cờ tăng 3,45 cm (với tuần đạt 4,78 cm); giống vàng hè tăng 2,69 cm (tuần đạt 3,78 cm) Ở giống kim cương, thạch bích, chi đỏ tuần đầu tăng trưởng mạnh (từ tuần đến tuần 5: giống kim cương tăng 0,75 cm giống thạch bích: tăng 0,96 cm, giống chi đỏ tăng 0,83 cm) đến tuần thứ 21 tăng chậm (giống kim cương tăng 0,44 cm; giống thạch bích tăng 0,45 cm, giống chi đỏ tăng 0,48 cm) Kết sau tuần, giống giống chi đỏ kim cương có chiều cao trung bình thấp (lần lượt 2,44 cm 2,65 cm) Hình 3.4 Sự sinh trưởng giống cúc đỏ cờ sau tuần Hình 3.5 Sự sinh trưởng giống cúc kim cương sau tuần 22 3.2.3 Số lá/chồi Bảng 3.4: Ảnh hưởng BAP đến số lá/chồi số giống cúc Giống Số lá/chồi tuần tuần tuần tuần Đỏ cờ 3,5bc 4,62c 5,83bc 6,89c Chi đỏ 3,58b 5,08bc 6,17bc 7,22c Kim cương 5,08a 6,15ab 6,50b 8,28b Thạch bích 2,75bc 4,15c 6,33bc 7,11c Vàng hè 5,00a 7,38a 8,83a 10,22a Những chữ khác (a, b…) cột thể sai khác với mức ý nghĩa α = 0,05 Từ kết ta thấy, môi trường MS có bổ sung BAP 0,7 mg/l có ảnh hưởng tốt đến phát sinh lá/chồi giống nghiên cứu Cụ thể, sau tuần, giống vàng hè có số lá/chồi cao (đạt 10,22 lá/chồi), giống đỏ cờ có số lá/chồi thấp (đạt 6,89 lá/chồi) Hình 3.6 Sự sinh trưởng giống cúc thạch bích sau tuần 3.3 Ảnh hưởng kích thước mẫu đến trình nhân nhanh chồi cúc Trong thí nghiệm này, sử dụng đốt thân có kích thước: cm, cm, cm, cấy vào môi trường MS bổ sung BAP 0,7 mg/l Sau tuần theo dõi, số chồi/mẫu nhóm giống trình bày 23 bảng 3.5 Bảng 3.5: Ảnh hưởng kích thước mẫu cấy đến số chồi/mẫu hoa cúc Giống Kích thước mẫu (cm) 1cm 2cm 3cm Đỏ cờ 4,38c 8,75d 14,60c Chi đỏ 7,20a 12,75b 15,38b Kim cương 4,60c 10,25c 14,88bc Thạch bích 6,00b 10,88c 15,13bc Vàng hè 7,25a 14,63a 16,25a Những chữ khác (a, b…) cột thể sai khác có ý nghĩa với α = 0,05 Kết cho thấy, giống cúc, số chồi/mẫu tỉ lệ thuận với kích thước mẫu cấy, theo đó, nhóm chiều cao cm, số chồi/mẫu đạt lớn (trong đó, cao giống cúc vàng hè, đạt 16,25 chồi/mẫu) nhóm chiều cao cm cho số chồi/mẫu thấp (trong đó, thấp giống đỏ cờ, với 4,38 chồi/mẫu) Điều giải thích kích thước mẫu cấy lớn số mắt ngủ nhiều, tác dụng BAP cytokinin kích thích chồi bên phát triển làm mắt ngủ phát sinh thành chồi mới, vậy, kích thước mẫu cấy cm có số chồi/ mẫu lớn 24 Hình 3.7 Sự sinh trưởng chồi cúc chi đỏ nhóm kích thước mẫu sau tuần nuôi cấy 3.4 Ảnh hưởng phương thức cấy đến phát triển chồi phát sinh Sử dụng đốt thân có kích thước cm làm vật liệu cho nghiên cứu Đốt thân cấy theo phương thức: thẳng đứng, nằm ngang môi trường MS có bổ sung BAP 0,7 mg/l Mục đích thí nghiệm nghiên cứu tìm phương thức cấy phù hợp với giống chất lượng chồi tốt Sau tuần theo dõi, đánh giá phát triển chồi phát sinh thông qua chiều cao chồi Kết trình bày bảng 3.6 Bảng 3.6: Ảnh hưởng phương thức cấy đến phát triển chồi cúc Phương thức cấy Đỏ cờ Chi đỏ Kim cương Thạch bích Vàng hè Thẳng đứng 3,60a±2,00 1,94a±1,25 2,68a±0,46 2,82a±0,37 2,86a±1,83 Nằm ngang 4,96a±0,53 2,60a±0,51 2,64a±0,50 2,81a±0,54 3,92a±0,43 Những chữ khác (a, b…) cột thể sai khác có ý nghĩa thống kê với α = 0,05 25 Kết cho thấy, giống cúc sai khác chiều cao trung bình phương thức cấy Tuy nhiên, giống cúc: đỏ cờ, chi đỏ, vàng hè cấy theo phương thức nằm ngang chồi phát sinh không đồng đều, giống kim cương thạch bích tương đối đồng Sở dĩ có kết giống đỏ cờ, chi đỏ, vàng hè cấy thẳng đứng môi trường MS bổ sung BAP 0,7 mg/l, sau tuần nuôi cấy có hình thành mô sẹo phát sinh chồi từ mô sẹo, từ tuần thứ trở thấy phát sinh chồi từ mắt ngủ phương thức cấy nằm ngang, không thấy hình thành mô sẹo; sau tuần, phát sinh chồi từ mắt ngủ, vậy, giống này, phương thức cấy nằm ngang tạo chồi có mức đồng cao so với phương thức cấy thẳng đứng Trong đó, giống thạch bích kim cương khác biệt phương thức cấy Hình 3.8 Ảnh hưởng phương thức cấy đến phát triển chồi cúc vàng hè 1- Mẫu cúc vàng hè sau tuần cấy theo phương thức thẳng đứng (đã có phát sinh chồi từ mô sẹo, chưa thấy phát sinh chồi từ mắt ngủ) 2- Mẫu cúc vàng hè sau tuần nuôi cấy theo phương thức nằm ngang (không hình thành mô sẹo, thấy có phát sinh chồi từ mắt ngủ) 26 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Từ kết thu từ đề tài này, đưa số kết luận sau: Tạo vật liệu khởi đầu, hiệu chất khử trùng lên giống khác Cụ thể, hiệu khử trùng đạt cao giống đỏ cờ sử dụng Javen 5% (v/v)/10 phút (đạt 92,9%); giống chi đỏ, thạch bích, Javen 10% (v/v)/10 phút (lần lượt đạt 41,67%, 33,33% 54,55%) giống cúc kim cương javen10% (v/v)/15 phút (đạt 36,67%) Môi trường MS + 30 g/l saccarozơ + g agar + 0,7 mg/l BAP thích hợp để tái sinh chồi giống cúc vàng hè (đạt 7,25 chồi/mẫu, đạt 10,22 số lá/chồi) giống đỏ cờ (cho chiều cao chồi cao – 4,78 cm) Kích thước mẫu cấy ảnh hưởng đến trình nhân nhanh chồi cúc, cụ thể ảnh hưởng đến tiêu số chồi/mẫu hoa cúc Qua nghiên cứu nhận thấy, nhóm kích thước nghiên cứu kích thước mẫu cấy cm cho số chồi/mẫu lớn giống cúc, đó, cao giống vàng hè (đạt 16,25 chồi/mẫu) Thông qua việc theo dõi tiêu chiều cao chồi đánh giá mức độ đồng chồi giống nghiên cứu, nhận thấy, nhóm phương thức nghiên cứu, phương thức cấy nằm ngang tối ưu cho giống đỏ cờ, chi đỏ, vàng hè (mức độ đồng cao so với phương thức cấy thẳng đứng) Trong đó, giống cúc thạch bích, kim cương không bị ảnh hưởng phương thức cấy mẫu Kiến nghị Từ kết nghiên cứu tạo vật liệu in vitro để hoàn thiện quy trình nhân giống cúc giống khác Ứng dụng mô hình nhân giống in vitro hoa cúc vào thực tế sản xuất để cung cấp số lượng giống lớn, giá thành rẻ 27 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt [1].Võ Văn Chi, Dương Đức Tiến, 1978 Phân loại thực vật (Thực vật bậc cao), Nxb Đại học Trung học chuyên nghiệp [2] Nguyễn Văn Đính, La Việt Hồng, 2015 Sinh trưởng phát triển thực vật, Nxb Đại học Quốc gia Hà Nội [3] La Việt Hồng, Phạm Thị Tươi, Dương Thị Minh, Trần Thị Thắm, Nguyễn Văn Bằng, Mai Thị Hồng, Phạm Thị Thu Hằng,2014 Xây dựng quy trình nhân giống hoa cúc CN01 (Chrysanthemum maximum Seium – 3) kĩ thuật nuôi cấy in vitro, Tạp chí khoa học (29): 28 – 37, Đại học Sư phạm Hà Nội [4] Nguyễn Thị Nhật Linh, Nguyễn Bá Nam, Nguyễn Thị Kim Yến, Lê Kim Cương, Nguyễn Phúc Huy, Dương Tấn Nhựt, 2012 Ảnh hưởng than hoạt tính lên khả định hướng rễ Hồng môn Cúc nuôi cấy in vitro, Tạp chí Sinh học, 34(3): 377-388 [5] Nguyễn Xuân Linh chủ biên, 1998 Hoa kỹ thuật trồng hoa, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội [6] Nguyễn Văn Mã, La Việt Hồng, Ong Xuân Phong, 2013 Phương pháp nghiên cứu sinh lý học thực vật, Nxb Đại học Quốc gia Hà Nội [7] Nguyễn Bá Nam, Nguyễn Đình Lâm, Dương Tấn Nhựt, 2012 Ảnh hưởng loại mẫu cấy hệ thống chiếu sáng đơn sắc lên khả tái sinh chồi hoa cúc (Chrysanthemum morifolium Ramat cv “Jimba”) nuôi cấy in vitro, Tạp chí Khoa học Công nghệ 50 [8] Hoàng Thị Sản, Phan Nguyên Hồng, 1986 Thực vật học phân loại, Nxb Giáo dục [9] Đào Thanh Vân, Đặng Thị Tố Nga, 2007 Giáo trình hoa, NXB Nông nghiệp 28 [10] Vũ Văn Vụ, 2009 Sinh lý thực vật, Nxb Giáo dục Tài liệu tiếng Anh [11] Anderson, NO, 1998 Evaluating Selp - incompatibility in Chrysanthemum - The influence of ovule number: 173- 181 [12] Ana M Vieitez, M Concepclón Sasnchez, Juan B Amo-Marco, Antonio Ballester, 1994 Foreed flusing of branch segments as a method of obtaining reactive explants of mature Quercus robus trees for micropropagation, Plant Cell, Tissue and Organ Culture Vollume 37 Issue pp 287-295 [13] Chen J, 1985 Studies on the origin of Chinese florist Chrysanthemum, Acta- Horticulture: 349-361 [14] Cockshull, K.E, 1985 Chrysanthemum morifolium, Volume II CRC Press, Boca Ration: 238 – 257 [15] Cockshull, KE And Hughes, A.P.,1972 Flower formation in Chrysanthemum morifolium, The influence of level J Horticulture Science: 113 – 127 [16] Cornish E and T Stevenson, 1990 Designer flower: a Blossoming industry, To days life, Sci.2: 46 – 47 [17] Cornu, D & Michel, M.F, 1987 Bacteria contaminant in shoot cultures of prunus avium L choice and phytotoxicity of antibiotics, Acta Horticulturae 212: 83 – 86 [18] Elizabete catapan, Michel eleith otuki, Anamaria viana, 2001 In vitro culture of Phyllanthus stipulatus (Euphorbiaceace), Rev Bot Vol 24 no.1 São Paulo [19] Enjalric, F., Carron, M.P & Lardet, 1998 Contamination of primarycultures in tropical areas: The case of Hevea brasiliensis, Acta Horticulturae 225: 57 – 65 29 [20] Horst, R.K, 1990 Handbook of plant cell culture, Vol.5, New York: 215217 [21] Isiwara K, 1984 Garland Chrysanthemum simple variety seed production, Japan: 175-184 [22] Jesmin Sultana Nahid, Saha Shyamali and Hattori Kazumi, 2007 High frequency shoot regeneration from petal explants of Chrysanthemum morifolium Ramat in vitro, Pakistan Journal of Biological Siences 10 (19): 3356 – 3361 [23] Kenneth C, Torres, 1990 Tissue culture techniques for horticulture: 2634 [24] Lunegent and Wardley, 1990 Efficent, direct plant regenation from stem Segment of Chrysanthemum, Plan cell report 8: 733-736 [25] Mouaad Amine Mazri, 2013 Effect of basal medium, explants size and density on the in vitro proliferation and growth of Date Palrm (Phoenix dactylifera L.) cultivar “16 bis”, Notulae Scientia Biologicae [26] Okada, 1994 Studies on flower, had differentiation and flowering in Chrysanthemum, Memoirs of the faculty of Tokyo Univ of Education: 163 – 202 [27] R.EI Boullani, A Elmoslih, A.El Finti, A El Mousadik, M A Serghini, 2013 Effect of decapitation and size of explants on in vitro multiplication rate of globe artichoke, International Society for Horticultural Science (ISHS) [28] Roberd, A V and Smith, E.P, 1990 The preparation in vitro of Chrysanthemum for transplantion to soil, Plant cell tissue and organ culture: 129-140 [29] Sussex, I.M, 1989 Developmental programming of the shoot meristemcell, 56: 225-229 30 [30] Teixeira da Silva J A., 2004 Ornamental chrysanthemums: improvement bybiotechnology, Review of Plant Biotechnology and Applied Genetics, PlantCell Tiss Org Cult 79: 1-18 [31] Thorpe T.A., 1994 Morphogenesis and regeneration In: Vasil I.K., ThorpeT.A (Eds) Plant cell and tissue culture Dordrecht: Kluwer AcademicPublishers: 17-36 [32] Van Ruiten, J B M., De Jong, J.,1984 Speed of flower introduction in Chrysanthemum morifolium depends on cultivar and temperature, Science Horticulture: 287 – 294 [33] Vanderkamp, B.V, 2000 Chrysanthemum catalogue, Hoogeweg 12 – 2231, MS Rijnsburg – The Netherlands: 2-31 [34] Zagorski T.S, P.D.Ascher and R.E Widmer, 1983 Multigenic Selfcompatibility and hexaploid Chrysanthemum, Euphytica: 1-7 31 ... 3.2 Ảnh hưởng BAP đến số chồi /mẫu số giống cúc 20 Bảng 3.3 Ảnh hưởng BAP đến chiều cao chồi số giống cúc 21 Bảng 3.4 Ảnh hưởng BAP đến số lá /chồi số giống cúc 23 Bảng 3.5 Ảnh hưởng kích thước. .. tái sinh chồi giống hoa cúc nuôi cấy in vitro - Ảnh hưởng kích thước mẫu cấy đến trình tái sinh nhân nhanh chồi cúc - Ảnh hưởng phương thức cấy đến phát triển chồi phát sinh Ý nghĩa khoa học ý nghĩa... tài: Ảnh hưởng kích thước phương thức cấy mẫu đến khả tái sinh chồi in vitro số giống hoa cúc Mục đích nội dung nghiên cứu 2.1 Mục đích Tạo vật liệu khởi đầu, nghiên cứu ảnh hưởng kích thước mẫu,