Khảo sát ảnh hưởng của nhiệt độ và đều kiện hô hấp đến khả năng sinh enzym ngoại bào của lactobacillus sporogenes

BỘ Y TẾ
 TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI BO CHANDAN MÃ SINH VIÊN: 1201066 KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA NHIỆT ĐỘ VÀ ĐIỀU KIỆN HÔ HẤP ĐẾN KHẢ NĂNG SINH ENZYM NGOẠI BÀO CỦA Lactobacillus sporogenes KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2017 BỘ Y TẾ
 TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI BO CHANDAN MÃ SINH VIÊN: 1201066 KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA NHIỆT ĐỘ VÀ ĐIỀU KIỆN HÔ HẤP ĐẾN KHẢ NĂNG SINH ENZYM NGOẠI BÀO CỦA Lactobacillus sporogenes KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS: Đàm Thanh Xuân Nơi thực hiện: Bộ môn Công nghiệp Dược HÀ NỘI- 2017 LỜI CẢM ƠN Trước hết, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới TS Đàm Thanh Xuân, người trực tiếp hướng dẫn tạo điều kiện thuận lợi để em hoàn thành khóa luận Em xin chân thành cảm ơn Ths Nguyễn Khắc Tiệp đóng góp nhiều ý kiến quý báu tận tình giúp đỡ em thực đề tài Em xin cảm ơn quan tâm, giúp đỡ thầy cô giáo, anh chị kỹ thuật viên Bộ môn Công nghiệp Dược em suốt trình nghiên cứu làm thực nghiệm môn Em xin cảm ơn Ban giám hiệu, Phòng đào tạo, thầy cô giáo trường Đại học Dược Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt trình học tập trường Cuối cùng, em xin bày tỏ lòng biết ơn gia đình, thầy cô, bạn bè, người động viên, giúp đỡ em học tập sống Em xin trân trọng cảm ơn! Hà Nội, ngày 12 tháng năm 2017 Sinh viên BO CHANDAN MỤC LỤC TRANG LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH VẼ, BIỂU ĐỒ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG I TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan probiotic 1.1.1 Định nghĩa probiotic 1.1.2 Các chức sinh học probiotic 1.2 Tổng quan Lactobacillus sporogenes 1.2.1 Lịch sử phát 1.2.2 Đặc điểm phân loại
 1.2.3 Đặc điểm phân bố 1.2.4 Đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa 1.2.5 Những đặc điểm, chức sinh học tương đồng L sporogenes vi khuẩn Lactobacillus khác 1.2.6 Các đặc tính giúp L sporogenes vượt trội vi khuẩn Lactobacillus khác ứng dụng làm probiotic 10 1.3 Ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy đến phát triển vi sinh vật 12 1.3.1 Ảnh hưởng thành phần dinh dưỡng môi trường nuôi cấy đến sinh trưởng vi sinh vật 12 1.3.2 Ảnh hưởng yếu tố bên đến sinh trưởng vi sinh vật 12 1.4 Một số chế phẩm chứa vi khuẩn lactobacillus sporogenes thị trường 13 CHƯƠNG II NGUYÊN LIỆU, HOÁ CHẤT, THIẾT BỊ VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 Nguyên liệu, hoá chất, thiết bị 15 2.1.1 Vi sinh vật sử dụng 15 2.1.2 Hoá chất sử dụng 15 2.1.3 Môi trường sử dụng 15 2.1.4 Dụng cụ 17 2.2 Nội dung nghiên cứu 17 2.2.1 Khảo sát ảnh hưởng điều kiện hô hấp đến khả sinh enzym ngoại bào Lactobacillus sporogenes nhiệt độ 37 0C.
 17 2.2.2 Khảo sát ảnh hưởng điều kiện hô hấp đến khả sinh enzym ngoại bào Lactobacillus sporogenes nhiệt độ 50 0C.
 17 2.3 Phương pháp nghiên cứu 17 2.3.1 Phương pháp nhân giống Lactobacillus sporogenes 17 2.3.2 Phương pháp lên men 17 2.3.3 Phương pháp thử hoạt tính enzym dịch nuôi cấy 18 CHƯƠNG III THỰC NGHIỆM – KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU-BÀN LUẬN 20 3.1 Khảo sát ảnh hưởng điều kiện hô hấp đến khả sinh enzym ngoại bào Lactobacillus sporogenes nhiệt độ 37 0C.
 20 3.1.2 Thử hoạt tính protease môi trường nuôi cấy Canh thang bổ sung hạt đậu 2,5% bổ sung bột đậu 2,5% 21 3.1.3 Thử hoạt tính protease môi trường nuôi cấy Canh thang bổ sung casein sau 48 23 3.1.4 Lựa chọn môi trường nuôi cấy để thử hoạt tính amylase 25 3.1.5 Thử hoạt tính amylase môi trường nuôi cấy Canh thang bổ sung hạt đậu 2,5% bổ sung bột đậu 2,5% 26 3.1.6 Thử hoạt tính amylase nuôi cấy L sporogenes môi trường Canh thang bổ sung casein sau 48 27 3.1.7 Lựa chọn môi trường nuôi cấy để thử hoạt tính cellulase môi trường hiếu khí kỵ khí 29 3.1.8 Thử hoạt tính cellulase môi trường nuôi cấy Canh thang bổ sung hạt đậu 2,5% bổ sung bột đậu 2,5% 30 3.1.9 Thử hoạt tính cellulase nuôi cấy L sporogenes môi trường nuôi cấy Canh thang bổ sung casein 31 3.2 Khảo sát ảnh hưởng điều kiện hô hấp đến khả sinh enzym ngoại bào Lactobacillus sporogenes nhiệt độ 50 0C.
 33 3.2.1 Thử hoạt tính protease môi trường nuôi cấy Canh thang bổ sung hạt đậu 2,5%, bột đậu 2,5%, casein 2,5% casein 5% 33 3.2.2 Thử hoạt tính amylase môi trường nuôi cấy Canh thang bổ sung hạt đậu 2,5% bổ sung bột đậu 2,5% trường hợp hiếu khí kỵ khí 34 3.2.3 Thử hoạt tính cellulse môi trường nuôi cấy Canh thang bổ sung hạt đậu 2,5% bổ sung bột đậu 2,5% trường hợp hiếu khí kỵ khí 36 3.3 So sánh khả sinh enzym 50 0C 37 0C enzym dịch nuôi cấy Canh thang 38 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 40 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Tên đầy đủ Tên viết tắt ATCC CMC FAO L sporogenes MRS WHO Trung tâm giữ giống quốc gia Mỹ (American Type Culture Collection) Carboxyl methyl cellulose Food and Agriculture Organization (Tổ chức Nông lương giới) Lactobacillus sporogenes (de Man, Rogosa and Sharpe) Môi trường nuôi cấy vi khuẩn lactic World Health Organization (Tổ chức Y tế giới) DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Bảng 1.1 Bảng 1.2 Bảng 1.3 Bảng 1.4 Bảng 1.5 Tên bảng So sánh đặc tính Lactobacillus sporogenes với chi Bacillus Lactobacillus 
 Những tương đồng đặc điểm sinh trường sinh hóa L sporogenes Lactobacillus Những khác biệt đặc điểm sinh trưởng sinh hóa L sporogenes so với Bacillus Tác dụng vài sản phẩm trao đổi chất Lactobacillus Bảng liệt kê ưu điểm L sporogenes so với L.acidophillus Bảng 1.6 Các sảm phẩm chứa L sporogenes Bảng 3.1 Hoạt tính protease dịch lên men sau 24 giờ, 48 72 nuôi cấy L sporogenes 37 0C Hoạt tính brotease L sporogenes dịch nuôi cấy (bổ sung đậu) 37 0C Bảng 3.2 Trang 10 11 14 20 22 Bảng 3.3 Thử hoạt tính protease sau khí bổ sung casein 37 0C 23 Bảng 3.4 Hoạt tính amylase dịch lên men thu sau 24 giờ, 48 72 nuôi cấy L sporogenes 37 0C 25 Bảng 3.5 Thử hoạt tính amylase sau bổ sung đậu 37 0C 26 Bảng 3.6 Hoạt tính amylase sau bổ sung casein vào môi trường Canh thang với nồng độ khác 37 0C Hoạt tính cellulase L.sporogenes nuôi cấy môi trường nuôi cấy khác 37 0C Bảng 3.7 28 29 Bảng 3.8 Hoạt tính cellulase sau bổ sung đậu 37 0C Bảng 3.9 Bảng 3.10 Hoạt tính cellulase sau bổ sung casein với nồng độ khác 37 0C Hoạt tính protease 50 0C sau bổ sung đậu casein Bảng 3.11 Hoạt tính amylase bổ sung đậu casein 50 0C 35 Bảng 3.11 Hoạt tính cellulase bổ sung đậu casein 50 0C 37 Bảng 3.13 So sánh khả sinh enzym 37 0C 50 0C 38 30 32 33 DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH VẼ, BIỂU ĐỒ Bảng Tên hình Tràng Hình 1.1 Nhuộm Gram tế bào vi khuẩn Lactobacillus sporogenes Hình 1.2 Giản đồ cấu tạo bào tử Hình 1.3 Ảnh hưởng nhiệt độ đến tốc độ sinh trưởng vi sinh vật 13 Hình 3.1 Hình 3.2 Hình 3.3 Hình 3.4 Hình 3.5 Hình 3.6 Đồ thị so sánh hoạt tính protease môi trường nuôi cấy Canh thang 37 0C bổ sung bột đậu 2,5% hạt đậu 2,5% điều kiện kỵ khí hiếu khí Đồ thị so sánh hoạt tính protease môi trường nuôi cấy Canh thang bổ sung casein với nồng độ khac điều kiện kỵ khí hiếu khí 37 0C Đồ thị so sánh hoạt tính amylase môi trường nuôi cấy Canh thang 37 0C bổ sung bột đậu 2,5% hạt đậu 2,5% điều kiện kỵ khí hiếu khí Đồ thị so sánh hoạt tính amylase môi trường nuôi cấy Canh thang 37 0C bổ sung casein với nồng độ khac điều kiện kỵ khí hiếu khí Đồ thị so sánh hoạt tính cellulase môi trường nuôi cấy Canh thang 37 0C bổ sung bột đậu 2,5% hạt đậu 2,5% điều kiện kỵ khí hiếu khí Đồ thị so sánh hoạt tính cellulase môi trường nuôi cấy Canh thang 37 0C bổ sung casein với nồng độ khac điều kiện kỵ khí hiếu khí 23 24 27 29 31 32 Hình 3.7 Đồ thị so sánh hoạt tính protease dịch nuôi cấy 50 0C 34 Hình 3.8 Đồ thị so sánh hoạt tính amylase dịch nuôi cấy 50 0C 36 Hình 3.9 Đồ thị so sánh hoạt tính cellulase dịch nuôi cấy 50 0C 37 sinh enzym ngoại bào L Hình 3.10 Đồ thị so sánh 0khả sporogenes 37 50 C 38 ĐẶT VẤN ĐỀ Probiotic biết đến lợi khuẩn có nhiều giá trị thiết thực sức khỏe người như: chống nhiễm trùng đường tiêu hóa, cải thiện khả dung nạp lactose, tăng cường miễn dịch, giảm cholesterol Probiotic sử dụng từ lâu trước đây, vài thập kỷ trở lại đây, số lượng nghiên cứu probiotic số chế phẩm probiotic có mặt thị trường xuất ngày nhiều Trong số probiotic sử dụng, không kể đến Lactobacillus sporogenes, chủng vi khuẩn có nhiều đặc tính trội: có khả sinh bào tử giúp chống chịu tốt với điều kiện bất lợi môi trường, làm tăng tỉ lệ sống sót tăng hiệu điều trị; có khả lên men đồng hình tạo acid L (+) lactic mà thể chuyển hóa hoàn toàn Tại Việt Nam, vi khuẩn Lactobacillus sporogenes bắt đầu nghiên cứu năm gần đây, nhiên, số lượng nghiên cứu chưa nhiều tập trung chủ yếu vào nhóm ngành thực phẩm thú y Với mong muốn góp phần nhỏ vào nghiên cứu L sporogenes Việt Nam, đề tài “Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ điều kiện hô hấp đến khả sinh enzym ngoại bào Lactobacillus sporogenes” thực với mục tiêu: Khảo sát ảnh hưởng điều kiện hô hấp đến khả sinh enzym ngoại bào Lactobacillus sporogenes nhiệt độ 37 0C.
 Khảo sát ảnh hưởng điều kiện hô hấp đến khả sinh enzym ngoại bào Lactobacillus sporogenes nhiệt độ 50 0C.
 enzym cellulase 3.2 Khảo sát ảnh hưởng điều kiện hô hấp đến khả sinh enzym ngoại bào Lactobacillus sporogenes nhiệt độ 50 0C.
 3.2.1 Thử hoạt tính protease môi trường nuôi cấy Canh thang bổ sung hạt đậu 2,5%, bột đậu 2,5%, casein 2,5% casein 5% Cách tiến hành: • Chuẩn bị bình nón 250 ml để pha môi trường Canh thang theo công thức 2.1.2 Bổ sung bột đậu 2,5%, hạt đậu 2,5%, casein 2,5% 5% vào bình theo thứ tự Nuôi cấy điều kiện hiếu khí kỵ khí theo mục 2.3.2.1 2.3.2.2 • Lấy mẫu sau 24 giờ, 48 dể thử hoạt tính protease theo mục 2.3.3.1 Kết quả: Bảng 3.10 Hoạt tính protease 50 0C sau bổ sung đậu casein Đường kính vòng phân giải (cm) Thời gian Môi Trường Canh thang 24 48 Hiếu khí Kỵ khí Hiếu khí Kỵ khí 1,4 0,9 0,9 1,3 1,26 0,8 0,8 1,64 1,33 0,98 1,2 1,39 0,99 1,15 1,82 1,19 Canh thang+hạt 1,0 đậu 2,5% Canh thang+bột 1,29 đậu 2,5% Canh thang + 1,3 Casein 2,5% Canh thang + 1,24 Casein 5% Nhật xét: Theo bảng 3.10 nhận thấy Ở điều kiện hiếu khí sau 24 môi trường Canh thang có hoạt tính protease vòng phân giải cao vòng phân giải đạt 1.4 cm sau vòng phân giải giảm Khi bổ sung đậu bổ sung bột đậu 48 có đường kính vòng phân giải lớn đạt 1,33 cm Còn thêm casein nồng độ casein làm tăng sinh enzym nhiều 5% có đường kính vòng phân giải 1,82 cm 33 Điều kiện kỵ khí môi trường Canh thang không thêm vào sau 24 bắt đầu có enzym protease có vòng phân giải 0,9 cm, sau 72 vòng phân giải tốt nhât đạt 1,13 cm Bổ sung đậu làm tăng hoạt tính protase mạnh thêm bột đậu có đường kính vòng phân giải đạt 1,64 cm Khi bổ sung casein 2,5% làm tăng hoạt tính protase lớn đạt 1,39 cm Đường kính vòng phân giải thử hoạt tính casein (cm) 1.5 0.5 Canh thang Canh thang+hạt đậu Canh thang+bột đậu Canh thang + Casein Canh thang + Casein 2.5% 2.5% 2.5% 5% 24 giờ Hiếu khí 24 giờ Kỵ khí 72 giờ Hiếu khí 72 giờ Kỵ khí Hình 3.7: Đồ thị so sánh hoạt tính protase dịch nuôi cấy 50 0C Nhận thấy theo đồ thị môi trường Canh thang có hoạt tính tốt 24 điều kiện hiếu khí Thêm bột đậu 2,5% cho hoạt tính protease tốt điều kiện kỵ khí 24 Và nồng độ casein thêm để làm tăng protase dịch nuôi cấy tốt 5% điều kiện kỵ khí 72 Vì casein bột đậu hoạt chất có chất protein bổ sung vào dịch nuôi cấy làm tăng sinh enzym protease vi khuẩn 3.2.2 Thử hoạt tính amylase môi trường nuôi cấy Canh thang bổ sung hạt đậu 2,5% bổ sung bột đậu 2,5% trường hợp hiếu khí kỵ khí Cách tiến hành: • Chuẩn bị bình nón 250 ml để pha môi trường Canh thang theo công thức 2.1.2 Bổ sung bột đậu 2,5%, hạt đậu 2,5%, casein 2,5% 5% vào bình theo thứ tự Nuôi cấy điều kiện hiếu khí kỵ khí theo mục 2.3.2.1 2.3.2.2 • Lấy mẫu sau 24 giờ, 48 dể thử hoạt tính amylase theo mục 2.3.3.2 Kết quả: 34 Bảng 3.11 Hoạt tính amylase bổ sung đậu casein 50 0C Đường kính vòng phân giải (cm) Thời gian Môi Trường Canh thang 24 48 Hiếu khí Kỵ khí Hiếu khí Kỵ khí 1,6 1,0 1,26 - 1,34 1,45 1,23 1,45 1,76 1,35 1,23 1,43 1,29 1,5 1,72 1,37 Canh thang+hạt 1,55 đậu 2,5% Canh thang+bột 1,87 đậu 2,5% Canh thang + 1,65 Casein 2,5% Canh thang + 1,9 Casein 5% Kết luận: Theo bảng 3.11 nhận thấy Đối với điều kiện hiếu khí nhận thấy môi trường nuôi cấy Canh thang sinh enzym nhiều 24 đạt 1,6 cm Khi bổ sung đậu vào bột đậu làm tăng hoạt tính enzym 24 có vòng phân giải đạt 1,87 cm Còn nồng độ casein làm tăng khả sinh enzym amylase nhiều 5% có vòng phân giải đạt 1,9 cm Điều kiện kỵ khí môi trường Canh thang sinh enzym amylase nhiều 24 có vòng phân giải đạt 1,0 cm Bột đậu làm tăng khả sinh enzym ngoại bào L sporogenes có vòng phân giải đạt 1,34 cm 24 Với casein 5% làm tăng hoạt tính amylase 24 có vòng phân giải đạt 1,5 cm 35 Hoạt tính amylase thể đường kính phân giải (cm) 1.8 1.6 1.4 1.2 0.8 0.6 0.4 0.2 Canh thang Canh thang+hạt đậu Canh thang+bột đậu Canh thang + Casein Canh thang + Casein 2.5% 2.5% 2.5% 5% 24 giờ Hiếu khí 24 giờ Kỵ khí 72 giờ Hiếu khí 72 giờ Kỵ khí Hình 3.8: Đồ thị so sánh hoạt tính amylase dịch nuôi cấy 50 0C Nhận xét theo đồ thị ta thấy điều kiện hiếu khí làm phát triển enzym amyase tốt điều kiện kỵ khí enzym amylase Lactobacillus sporogenes được phát triển điều kiện hiếu khí kỵ khí Khi thêm bột đậu 2,5% thêm casein 5% làm tăng enzym amylase tốt 3.2.3 Thử hoạt tính cellulse môi trường nuôi cấy Canh thang bổ sung đậu casein trường hợp hiếu khí kỵ khí Cách tiến hành: • Chuẩn bị bình nón 250 ml để pha môi trường Canh thang theo công thức 2.1.2 Bổ sung bột đậu 2,5%, hạt đậu 2,5%, casein 2,5% 5% vào bình theo thứ tự Nuôi cấy điều kiện hiếu khí kỵ khí theo mục 2.3.2.1 2.3.2.2 • Lấy mẫu sau 24 giờ, 48 dể thử hoạt tính cellulase theo mục 2.3.3.3 Kết quả: 36 Bảng 3.12 Hoạt tính cellulase sau thêm đậu casein 50 0C Đường kính vòng phân giải (cm) Thời gian Môi Trường Canh thang 24 48 Hiếu khí Kỵ khí Hiếu khí Kỵ khí 2,1 2,09 2,2 1,92 2,19 2,34 2,24 2,30 2,55 2,27 2,22 2,24 2,24 2,5 2,65 2,74 Canh thang+hạt 2,21 đậu 2,5% Canh thang+bột 2,45 đậu 2,5% Canh thang + 2,25 Casein 2,5% Canh thang + 2,75 Casein 5% Nhật xét: Theo bảng 4.12 nhận thấy Trong điều kiện hiếu khí kỵ khí bổ sung đậu casein làm tăng khả sinh enzym cellulase dịch nuôi cấy Hoạt tính cellulase cao môi trường Canh thang điều kiện hiếu khí có đường kính vòng phân giải đạt 2,2 cm 48 Khi bổ sung bột đậu 2,5% làm tăng 48 điều kiện hiếu khí có vòng phân giải cao đạt 2,55 cm Nồng độ casein bổ sung vào môi trường Canh thang làm tăng sinh enzym nhiều 5% 24 có vòng phân giải đạt 2,75 cm Đường kính vòng phân giải cellulase (cm) Canh thang Canh thang+hạt đậu Canh thang+bột đậu Canh thang + Casein Canh thang + Casein 2.5% 2.5% 2.5% 5% 24 giờ Hiếu khí 24 giờ Kỵ khí 72 giờ Hiếu khí 72 giờ Kỵ khí Hình 3.9: Đồ thị so sánh hoạt tính cellulase dịch nuôi cấy 50 0C Nhận xét: Theo đồ thị nhận thấy điều kiện hiếu khí làm phát triển enzym cellulase tốt điều kiện kỵ khí enzym amylase Lactobacillus sporogenes 37 được phát triển điều kiện hiếu khí kỵ khí, điều kiện hiếu khí enzym cellulase phát triển tốt Khi thêm bột đậu 2,5% thêm casein 5% làm tăng enzym amylase tốt Do thành phần cellulose bột đậu casein kích thích vi sinh vật sinh enzym 3.3 So sánh khả sinh enzym 50 0C 37 0C enzym dịch nuôi cấy Canh thang Bảng 3.13 So sánh khả sinh enzym 37 0C 50 0C Thời gian Kích thước đường phân giải (cm) 48 Hiếu khí Enzym Kỵ khí 37 0C 50 0C 37 0C 50 0C Protease 1,33 0,9 1,20 1,3 Amylase 1,74 1,26 1,64 - Cellulase 2,44 2,2 2,34 1,92 Theo bảng 3.12 nhận thấy enzym protease sinh nhiều 37 0C điều kiện hiếu khí có đường kính vòng phân giải đạt 1,33 cm Còn enzym amylase sinh nhiều 37 0C điều kiện hiếu khí vòng phân giải đạt 1,74 cm Cuối cellulase enzym sinh nhiều loại enzym L sporogenes có vòng phân giải to đạt 2,44 cm 37 0C Điều kiện hiếu khí Điều kiện kỵ khí 2.5 2.5 2 1.5 1.5 1 0.5 0.5 Protease Amylase Hiếu khí 37 0C Cellulase Protease Amylase Kỵ khí 37 0C Hiếu khí 50 0C Cellulase Kỵ khí 50 0C Hình 3.10 Đồ thị so sánh khả sinh enzym ngoại bào L sporogenes 37 0C 50 0C 38 Bàn luận: Theo đồ thị nhận thấy hai điều kiện hiếu khí kỵ khí nhiệt độ 37 0C khả sinh enzym ngoại bào L sporogenes cao so với nhiệt độ 50 0C Trong loại enzym cellulase sinh nhiều dịch nuôi cấy Vì để sản xuất enzym ngoại bào nuôi cấy 37 0C thích hợp 39 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT KẾT LUẬN Qua trình nghiên cứu, đề tài thu kết sau: a) Đã khảo sát ảnh hưởng điều kiện hô hấp đến khả sinh enzym ngoại bào Lactobacillus sporogenes nhiệt độ 37 0C kết cho thấy
 • Trong môi trường Canh thang, MRS, Glucose-cao nấm men 37 0C, nhận thấy sau 48 môi trường Canh thang L sporogenes cho hoạt tính enzym cao nhất, loại enzym sinh nhiều cellulase • Trong môi trường Canh thang bổ sung bột đậu, hạt đậu casein protease amylase không tăng, enzym cellulase tăng lên b) Đã khảo sát ảnh hưởng điều kiện hô hấp đến khả sinh enzym ngoại bào Lactobacillus sporogenes nhiệt độ 50 0C kết cho thấy
 • Trong môi trường Canh thang, MRS, Glucose-cao nấm men 50 0C Nhận thấy sau 48 môi trường Canh thang L sporogenes cho hoạt tính enzym cao nhất, loại enzym sinh nhiều cellulase • Trong môi trường Canh thang bổ sung bột đậu, hạt đậu casein protease amylase không tăng, enzym cellulase tăng lên So sánh hai điều nhiệt độ 37 0C L sporogenes sinh enzym tốt 50 0C Để sản xuất enzym ngoại bào nuôi cấy 37 0C thích hợp So sánh khả sinh enzym: điều kiện hiếu khí sinh nhiều enzym L sporogenes nhiều điều kiện kỵ khí Đề xuất 
 Do thời gian nghiên cứu có hạn nên khóa luận chưa giải hết vấn đề liên quan Vì vậy, đề xuất số hướng nghiên cứu tiếp sau: • Khảo sát ảnh hưởng thông số tốc độ lắc đến khả sinh enzym L sporogenes • Nghiên cứu chiết enzym ngoại bào từ môi trường nuôi cấy 40 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Bộ môn vi sinh - sinh học (2007), Vi sinh vật học, Trường Đại học Dược Hà Nội, Hà Nội Nguyễn Lân Dũng cộng (2011), Vi sinh vật học, Nhà xuất khoa học kỹ thuật, Hà Nội 
 Vũ Thị Minh Đức (2001), Thực tập vi sinh vật học, Nhà xuất đại học Quốc Gia Hà Nội, Hà Nội 
 Nguyễn Thị Nhung (2015), Khảo sát khả sinh enzym protease tế bào Bacillus subtilis natto cố định gel alginate Khóa luận tốt nghiệp, Trường Đại học Dược Hà Nội Lê Xuân Phương (2008), Thí nghiệm vi sinh vật học, Trường Đại học Đà Nẵng Hin Vireak (2012), Khảo sát ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy lên khả tạo enzym protease vi khuẩn B subtilis natto Khóa luận tốt nghiệp, Trường Đại học Dược Hà Nội Dương Thị Huyền Trang (2016), Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ điều kiện hô hấ đến khả sinh khối L sporogenes Khóa luận tốt nghiệp, Trường Đại học Dược Hà Nội Nguyễn Thanh Quỳnh Trang (2015), Bước đầu khảo sát điều kiện nuôi cấy lactobacillus sporogenes Khóa luận tốt nghiệp, Trường Đại học Dược Hà Nội Trần Hạnh Triết (2005), Nghiên cứu đặc điểm sinh trưởng phát triển vi khuẩn Lactobacillus sporogenes Khóa luận tốt nghiệp, Trường Đại học Nông lâm Thành phố Hồ Chí Minh Tiếng Anh 10 Amer, M.A and Lammending, A.M., (1983), Health Maintenance benefits of cultured dairy products Cultured Dairy Products J 18: 6-19 11 Ali O Büyükkileci, Sebnem Harsa (2004), “Batch production of L (+) lactic 
acid from whey by Lactobacillus casei”, Journal of Chemical Technology 
and Biotechnology, Vol 79, Issue 9, 1036 – 1040 12 B W Hammer (1915), “Bacteriological studies on the coagulation of evaporated milk”, Agricultural experiment station Iowa state college of agriculture and mechanic arts, Research Bulletin No 19, 119 – 132 13 Bernet et al., (1994), Lactobacillus acidophillus LA binds to cultured human intestinal cells and inhibits cell attachment and cell invasion by enterovirulent bacteria, 35: 483 – 489 14 FAO/WHO (2002), "Guidelines for the evaluation of probiotic in food Joint FAO/WHO working group report on drafting guidelines for the evaluation of probiotic in food”, London, Ontario, Canada 15 FAO/WHO (2001), Report of a Joint FAO/WHO Expert Consultation on Evaluation of Health and Nutritional Properites of Probiotic in Food Including Powder Milk with Live Lactic Acid Bacteria, Cordoba, Argentina 16 Gandhi, A.B., (1998), Lactobacillus sporogenes, an advancement in Lactobacillus therapy The Eastern Pharmacist, 41-43.
 17 Johansson et al., (1993) Administration of different Lactobacillus strains in fermented oatmeal soup: in vivo colonisation of human intestinal mucosa and effect on the indigenous flora Applied and Environmental Microbiology, 59: 15 – 20 18 L Drago, E De Vecchi (2006), “Lactobacillus sporogenes or Bacillus coagulans: Misidentification or mislabeling?”, International Journal of Probiotic and Prebiotics Vol 1, No 1, -10.
 19 Mcfarlane G., Cummings J H (1999), "Probiotic and prebiotics: can regulating the activities of intestinal bacteria benefit health?”, pp 999– 1003 20 Mohan, J.C et al., 1990 Preliminary observations on effect of L sporogenes on serum lipid levels in hypercholesterolemic patients Indian J Med Res [B] 92, 431-432 21 Majeed M, Prakash L (1998), "Lactospore®: The Effective Probiotic", 
Piscataway, NJ: NutriScience Publishers, Inc 22 Rani and Khetarpaul, (1998), Probiotic fermented food mixture: possible applications in clinial anti – diarrhoea usage Nutrition Health, 12: 97 – 105 23 Thorne Research, Inc ll Right Reserved (2002), “Lactobacillus sporogenes Monograph”, Alternative Medicine Review, Vol 7, No 4, 340 – 342 24 Saxelim, (1997), Lactobacillus GG – a human probiotic strain with thorough clinical documentation Food Review International 13 (2): 293 – 313 25 Saarela et al, (2000) Probiotic bacteria: safety, functional and technology properties Journal of Biotechnology, 84: 197 – 215 26 Vivek K B (2013), "Use of encapsulated Probiotic in dairy based foods", International Journal of Food, Agriculture and Veterinary Sciences ISSN: 2277-209X, (1), pp 188-199.
 27 Wood, B.J.B, (1992), The Lactic Acid Bacteria in Health and Disease, Vol 1, p 394., Elsevier Applied Science 28 World Gastroenterology Organisation Food and Agriculture Orgarnization Of The United Nations (2006), "Probiotic in food: Health and nutritional properties and guidelines for eveluation" 29 http://www.lactospore.com/about/ PHỤC LỤC Hình ảnh thử hoạt tính enzym cellulase ngoại bào L.sporogenes sau nuôi cấy 48 Hình ảnh thử hoạt tính enzym protease ngoại bào L.sporogenes sau nuôi cấy 48 Hình ảnh thử hoạt tính enzym amylase ngoại bào L.sporogenes sau nuôi cấy 48 ... 2.2.1 Khảo sát ảnh hưởng điều kiện hô hấp đến khả sinh enzym ngoại bào Lactobacillus sporogenes nhiệt độ 37 0C.
 • Khảo sát khả sinh enzym protease • Khảo sát khả sinh enzym amylase • Khảo sát khả. .. khả sinh enzym cellulose 2.2.2 Khảo sát ảnh hưởng điều kiện hô hấp đến khả sinh enzym ngoại bào Lactobacillus sporogenes nhiệt độ 50 0C.
 • Khảo sát khả sinh enzym protease • Khảo sát khả sinh enzym. .. Lactobacillus sporogenes thực với mục tiêu: Khảo sát ảnh hưởng điều kiện hô hấp đến khả sinh enzym ngoại bào Lactobacillus sporogenes nhiệt độ 37 0C.
 Khảo sát ảnh hưởng điều kiện hô hấp đến khả sinh enzym