Giai đoạn tái sinh là giai đoạn quan trọng của kĩ thuật nuôi cấy in vitro.
Sự thành công trong quá trình nghiên cứu tái sinh thực vật in vitro có được nhờ tìm ra các điều kiện nuôi cấy thích hợp cho sự phát triển của tế bào và mô thực vật. Các yếu tố đóng vai trò quan trọng như môi trường, nhiệt độ, pH, độ ẩm và thành phần khí đã được nghiên cứu chi tiết [31]. Trong giai đoạn này, môi trường nhân giống thường là môi trường MS có bổ sung các chất điều hoà sinh trưởng (auxin, cytokinin…) với tỷ lệ phù hợp tùy loài nhằm tạo điều kiện cho quá trình nhân chồi, trong đó, BAP thuộc nhóm cytokinin, nhóm này có ảnh hưởng rõ rệt và rất đặc trưng lên sự phân hoá cơ quan của thực vật, đặc biệt là sự phân hoá chồi [10], do vậy, trong nuôi cấy in vitro, được sử dụng phổ biến để tạo đa chồi ở nhiều loài cây. Dựa trên nghiên cứu trước đây của La Việt Hồng và cs (2014), chúng tôi tiến hành nghiên cứu sự ảnh hưởng BAP nồng độ 0,7 mg/l bổ sung vào MS đến sự tạo chồi cúc, kết quả như sau:
3.2.1. Số chồi/mẫu
Bảng 3.2: Ảnh hưởng của BAP đến số chồi/mẫu ở một số giống cúc
Giống Số chồi/mẫu
3 tuần 4 tuần 5 tuần 6 tuần
Đỏ cờ 2,13c 2,88d 3,88c 4,38c
Chi đỏ 3,69ab 4,63b 5,63a 7,20a
Kim cương 2,81bc 3,63c 4,00c 4,60c
Thạch bích 3,63ab 4,38b 4,56b 6,00b
Vàng hè 4,50a 5,25a 6,00a 7,25a
Những chữ cái khác nhau (a, b…) trong cột thể hiện sự sai khác với mức ý nghĩa α = 0,05.
Từ kết quả trên ta thấy, môi trường MS + 30 g/l saccarozơ + 7 g agar + 0,7 mg/l BAP là môi trường thích hợp cho sự tái sinh chồi của cây hoa cúc nói chung. Tuy nhiên, với mỗi giống cúc khác nhau thì sự phát sinh chồi lại không giống nhau. Cụ thể, sau 6 tuần, giống cúc vàng hè và giống cúc chi đỏ cho số chồi/mẫu là lớn nhất (lần lượt là 7,25 và 7,2 chồi/mẫu) và thấp nhất là giống đỏ cờ (đạt 4,38 chồi/mẫu).
Hình 3.2. Sự sinh trưởng của giống cúc vàng hè sau 6 tuần
Hình 3.3. Sự sinh trưởng của giống cúc chi đỏ sau 6 tuần 3.2.2. Chiều cao chồi
Bảng 3.3: Ảnh hưởng của BAP đến chiều cao chồi ở một số giống cúc
Giống Chiều cao chồi (cm)
3 tuần 4 tuần 5 tuần 6 tuần
Đỏ cờ 1,33a 2,04a 3,25a 4,78a
Chi đỏ 0,83bc 1,13c 1,96bc 2,44c
Kim cương 1,04abc 1,46bc 2,21bc 2,65c
Thạch bích 0,75bc 1,42bc 2,38bc 2,83c
Vàng hè 1,09ab 1,67ab 2,42b 3,78b
Những chữ cái khác nhau (a, b…) trong cột thể hiện sự sai khác với mức ý nghĩa α = 0,05.
Từ kết quả trên ta thấy, môi trường MS cơ bản + BAP 0,7 mg/l ảnh hưởng đến sự sinh trưởng về chiều cao của các giống cúc này. Cụ thể, sau 6 tuần, giống cúc đỏ cờ và vàng hè có sự tăng trưởng mạnh về chiều cao: giống đỏ cờ tăng 3,45 cm (với tuần 6 đạt 4,78 cm); giống vàng hè tăng 2,69 cm (tuần 6 đạt 3,78 cm).
Ở các giống kim cương, thạch bích, chi đỏ thì 5 tuần đầu tăng trưởng khá mạnh (từ tuần 4 đến tuần 5: giống kim cương tăng 0,75 cm còn giống thạch bích: tăng 0,96 cm, giống chi đỏ tăng 0,83 cm) nhưng đến tuần thứ 6 thì
tăng chậm (giống kim cương tăng 0,44 cm; giống thạch bích tăng 0,45 cm, giống chi đỏ tăng 0,48 cm). Kết quả là sau 6 tuần, trong 5 giống này thì giống chi đỏ và kim cương có chiều cao trung bình thấp nhất (lần lượt là 2,44 cm và 2,65 cm).
Hình 3.4. Sự sinh trưởng của giống cúc đỏ cờ sau 6 tuần
Hình 3.5. Sự sinh trưởng của giống cúc kim cương sau 6 tuần
3.2.3. Số lá/chồi
Bảng 3.4: Ảnh hưởng của BAP đến số lá/chồi ở một số giống cúc
Giống Số lá/chồi
3 tuần 4 tuần 5 tuần 6 tuần
Đỏ cờ 3,5bc 4,62c 5,83bc 6,89c
Chi đỏ 3,58b 5,08bc 6,17bc 7,22c
Kim cương 5,08a 6,15ab 6,50b 8,28b
Thạch bích 2,75bc 4,15c 6,33bc 7,11c
Vàng hè 5,00a 7,38a 8,83a 10,22a
Những chữ cái khác nhau (a, b…) trong cột thể hiện sự sai khác với mức ý nghĩa α = 0,05.
Từ kết quả trên ta thấy, môi trường MS cơ bản có bổ sung BAP 0,7 mg/l có ảnh hưởng tốt đến sự phát sinh lá/chồi ở các giống nghiên cứu. Cụ thể, sau 6 tuần, giống vàng hè có số lá/chồi là cao nhất (đạt 10,22 lá/chồi), giống đỏ cờ có số lá/chồi là thấp nhất (đạt 6,89 lá/chồi).