NGHIÊN CỨU ĐA HÌNH PROTEIN HUYẾT THANH VÀ TRÌNH TỰ VÙNG ĐIỀU KHIỂN D-LOOP TY THỂ CỦA BA GIỐNG GÀ RI, MÔNG VÀ ĐA CỰA

Header Page of 16 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM ––––––––––––––––––––––––– HỨA THỊ NGA NGHIÊN CỨU ĐA HÌNH PROTEIN HUYẾT THANH VÀ TRÌNH TỰ VÙNG ĐIỀU KHIỂN D-LOOP TY THỂ CỦA BA GIỐNG GÀ: RI, MÔNG VÀ ĐA CỰA LUẬN VĂN THẠC SỸ SINH HỌC THÁI NGUYÊN - 2009 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 16 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM ––––––––––––––––––––––––– HỨA THỊ NGA NGHIÊN CỨU ĐA HÌNH PROTEIN HUYẾT THANH VÀ TRÌNH TỰ VÙNG ĐIỀU KHIỂN D-LOOP TY THỂ CỦA BA GIỐNG GÀ: RI, MÔNG VÀ ĐA CỰA Chuyên ngành: Di truyền học Mã số: 60.42.70 LUẬN VĂN THẠC SỸ SINH HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học:PGS.TS NGUYỄN TRỌNG LẠNG THÁI NGUYÊN - 2009 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 16 LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Trọng Lạng Bộ môn Di truyền học, khoa Sinh học, Trƣờng Đại học Sƣ phạm, Đại học Thái Nguyên hƣớng dẫn tận tình, chu đáo trình học tập nghiên cứu Tôi xin chân thành cảm ơn tập thể cán Phòng Công nghệ DNA ứng dụng Viện Công nghệ Sinh học đặc biệt PGS.TS Nông Văn Hải tận tình giúp đỡ, hƣớng dẫn tạo điều kiện tốt để hoàn thành khóa luận Trong suốt trình học tập nghiên cứu đƣợc anh chị NCS Nguyễn Đăng Tôn, CN Địch Thị Kim Hƣơng, CN Vũ Hải Chi - cán nghiên cứu phòng quan tâm, hƣớng dẫn cho lời khuyên quý báu Tôi trân trọng biết ơn giúp đỡ Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cô cán sở Đào Tạo thuộc Khoa Sinh - KTNN, Trƣờng Đại học Sƣ phạm, Đại học Thái Nguyên Cuối cùng, xin cảm ơn gia đình bạn bè động viên, giúp đỡ suốt trình học tập nghiên cứu Tác giả luận văn Hứa Thị Nga Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 16 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chƣa đƣợc công bố công trình khác Tác giả luận văn Hứa Thị Nga Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 16 CÁC CHỮ VIẾT TẮT A Adenin bp Base pair (cặp bazơ) cs Cộng C Cytozin ddNTP Dideoxynucleside triphosphate dNTP Deoxynucleside triphosphate DNA Deoxyribonucleic acid D-Loop Displacement loop - đoạn điều khiển ty thể EDTA Ethylene Diamine Tetraacetic Acid EtBr Ethidium brommide EtOH Ethanol Epp Eppendorf G Guamin Kb kilo base kDa kilo Dalton mtDNA DNA ty thể (mitochondrial DNA) NXB Nhà xuất NADH Nicotinamide adenine dinucleotide PBS Phosphate - buffer saline PCR Polymerase Chain Reaction RNA Ribonucleic Acid RNase Ribonuclease SDS Sodium Doecyl Sulphate T Timin TAE Tris - Acetate - EDTA Tm Melting Temperature (Nhiệt độ nóng chảy) Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 16 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Thành phần phản ứng khuếch đại gen 28 Bảng 2.2 Chu trình nhiệt 29 Bảng 2.3 Chu trình nhiệt cho PCR máy luân nhiệt GenAmp PCR System 9700 30 Bảng 3.1 Thống kê điểm đa hình hai mẫu nghiên cứu so với trình tự chuẩn 41 Bảng 3.2 So sánh mức độ sai khác trình tự nucleotide 42 Bảng 3.3 Thống kê xuất băng điện di protein huyết gà thí nghiệm 45 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 16 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Sơ đồ tổ chức DNA ty thể Gà 16 Hình 3.1 Ảnh điện di DNA tổng số 33 Hình 3.2 Ảnh chụp kết điện di sản phẩm PCR 36 Hình 3.3 So sánh trình tự D-Loop hai mẫu gà nghiên cứu Ri (RI) Đa cựa (Da) với trình tự tham khảo mã số AB114078 40 Hình 3.4 Quan hệ di truyền số giống gà 42 Hình 3.5: Phổ điện di SDS – PAGE protein huyết 43 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 16 MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục tiêu nghiên cứu đề tài Nội dung nghiên cứu Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 SƠ LƢỢC VỀ HỆ THỐNG PHÂN LOẠI GÀ VÀ MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM CỦA CÁC GIỐNG GÀ NGHIÊN CỨU 1.1.1 Sơ lƣợc nguồn gốc vị trí phân loại gà nhà 1.1.2 Một số đặc điểm ba giống gà nghiên cứu 1.2 ĐẠI CƢƠNG VỀ SINH HỌC PHÂN TỬ 1.3 CƠ SỞ KHOA HỌC CỦA ĐỀ TÀI 1.3.1 Cơ sở khoa học việc nghiên cứu tiêu sinh lý, hóa sinh máu gia cầm 1.3.2 Cơ sở khoa học việc nghiên cứu tính đa hình protein huyết máu 10 1.3.3 Thành phần protein huyết gia súc số động vật 11 1.4 GIỚI THIỆU CHUNG VỀ TY THỂ GÀ 12 1.4.1 Cấu trúc chức ty thể 12 1.4.2 Sự tổng hợp protein ty thể 13 1.4.3 Chủng loại phát sinh ty thể 14 1.4.4 MtDNA động vật có xƣơng sống mtDNA gà 14 1.4.5 Tình hình nghiên cứu DNA ty thể gà giới 17 1.4.6 Tình hình nghiên cứu DNA ty thể gà Việt Nam 20 Chƣơng VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1 VẬT LIỆU 22 2.2 HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ 22 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 16 2.2.1 Hóa chất 22 2.2.2 Thiết bị 23 2.3 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.3.1 Tách chiết tinh DNA tổng số từ máu động vật 23 2.3.2 Kĩ thuật điện di DNA gel agarose 24 2.3.3 Phƣơng pháp điện di SDS-PAGE 25 2.3.4 Nhân vùng điều khiển D-Loop kĩ thuật PCR 27 2.3.5 Tinh sản phẩm DNA 29 2.3.6 Phƣơng pháp xác định trình tự 30 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 31 3.1 ĐÁNH GIÁ ĐA DẠNG DI TRUYỀN CỦA BA MẪU GIỐNG GÀ 31 3.1.1 Tách chiết tinh DNA tổng số từ máu gà 31 3.1.2 Nhân vùng điều khiển D-Loop DNA ty thể 33 3.1.3 Xác định trình tự vùng điều khiển DNA ty thể 37 3.2 THÀNH PHẦN ĐIỆN DI PROTEIN HUYẾT THANH GÀ THÍ NGHIỆM 43 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO 47 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 10 of 16 MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Gần kỉ qua ngành chăn nuôi gia cầm đƣợc giới quan tâm phát triển mạnh số lƣợng chất lƣợng Chăn nuôi gia cầm chiếm vị trí quan trọng chƣơng trình cung cấp protein động vật cho ngƣời Gia cầm chiếm 20-25% tổng sản phẩm thịt, nƣớc phát triển thịt gà chiếm tới 30% Ở nƣớc ta ngành chăn nuôi gia cầm nghề sản xuất truyền thống, giữ vị trí quan trọng thứ hai tổng giá trị sản xuất Đàn gia cầm nƣớc ta phân bố không đều, đàn gà tập trung chủ yếu tỉnh phía Bắc (66%), tỉnh phía Nam chiếm 34% Đàn vịt ngƣợc lại phân bố chủ yếu tỉnh phía Nam (60%) miền Bắc đàn vịt chiếm khoảng 40% Theo số liệu Tổng cục thống kê, số lƣợng đàn gia cầm nƣớc ta đến ngày 1/8/2004 218,15 triệu con, tƣơng đƣơng với số đầu năm 2001 (218,1 triệu con) thấp năm 2002 ( 233,3 triệu con) năm 2003 (254,06 triệu) Sản lƣợng thịt 316,41 ngàn tấn, thấp năm 2001 (322,6 ngàn tấn), năm 2002 (338,4 ngàn tấn) 2003 (372,72 ngàn tấn) Sản lƣợng trứng 3,94 tỷ quả, thấp năm 2001 (4,16 tỷ quả), 2002 (4,85 tỷ quả) 2003 (4,85 tỷ) Nguyên nhân ảnh hƣởng dịch cúm gia cầm [10].Năm 2005, Bộ nông nghiệp phát triển nông thôn hoàn thành việc xây dựng đề án đổi hệ thống chăn nuôi gia cầm nƣớc ta Theo đề án, ngành chăn nuôi gia cầm phải chuyển đổi mạnh từ chăn nuôi phân tán, quy mô nhỏ sang sản xuất hàng hóa lớn theo hƣớng công nghiệp hóa bán công nghiệp sở có quy hoạch vùng chăn nuôi hàng hóa tập trung địa phƣơng; mục tiêu đến năm 2015, tổng đàn gia cầm đạt 560-580 triệu con, khối lƣợng thịt 1000 nghìn , sản lƣợng trứng 11,0 tỷ tổng giá trị sản xuất chăn nuôi gia cầm đạt xấp xỉ 20000 tỷ đồng [10] Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page 10 of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 47 of 16 38 190 200 210 220 230 240 | | | | | | | | | | | | AB114078 ttctcccaat gtccattcta tgcatgatcc aggacatact catttaccct ccccatagac DA .A C RI 250 260 270 280 290 300 | | | | | | | | | | | | AB114078 agttccaaac cactatcaag ccacctaact atgaatggtt acaggacata aatctcactc DA .T RI 310 320 330 340 350 360 | | | | | | | | | | | | AB114078 tcatgttctc cccccaacaa gtcacctaac tatgaatggt tacaggacat acatctaact DA T T RI T 370 380 390 400 410 420 | | | | | | | | | | | | AB114078 accatgttct aacccatttg gttatgctcg ccgtatcaga tggatttatt gatcgtccac DA RI 430 440 450 460 470 480 | | | | | | | | | | | | AB114078 ctcacgagag atcagcaacc cctgcctgta atgtacttca tgaccagtct caggcccatt DA RI 490 500 510 520 530 540 | | | | | | | | | | | | AB114078 ctttccccct acacccctcg cccaacttgc cttccaccgt acctctggtt cctcggtcag DA .T RI .T 550 560 570 580 590 600 | | | | | | | | | | | | AB114078 gcacatccca tgcataactc ctgaactttc tcacttttca cgaagtcatc tgtggattat DA RI 610 620 630 640 650 660 | | | | | | | | | | | | AB114078 cttcccctct ttagtccgtg atcgcggcat cttctctctt ctattgctgt tggttccttc DA RI Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page 47 of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 48 of 16 39 670 680 690 700 710 720 | | | | | | | | | | | | AB114078 tctttttggg gcttcttcac aggttgccct tcacagtgcg ggtgcggagt gctattcaag DA RI 730 740 750 760 770 780 | | | | | | | | | | | | AB114078 tgaagcctgg actacacctg cgttgcgtcc tatcctagtc ctctcgtgtc cctcgatgag DA RI 790 800 810 820 830 840 | | | | | | | | | | | | AB114078 acggtttgcg tgtatgggga atcatcttga cactgatgca ctttggatcg catttggtta DA .A RI1 850 860 870 880 890 900 | | | | | | | | | | | | AB114078 tggttcttcc accccccc-g gtaaatggtg ctatttagtg aatgcttgtc ggacatattt DA - RI - 910 920 930 940 950 960 | | | | | | | | | | | | AB114078 ttatcaattt tcacttcctc tattttcttc acaaaactag gaaattcacc acaatttttt DA RI 970 980 990 1000 1010 1020 | | | | | | | | | | | | AB114078 c-tttgttat tttttaattt tttttttatt tattaaaaac attttttaaa aaactaaatt DA - T RI - T 1030 1040 1050 1060 1070 1080 | | | | | | | | | | | | AB114078 DA RI acatacaaac taccgcataa aatccctcaa actatacaaa cgtttatcgt ataatatata 1090 1100 1110 1120 1130 1140 | | | | | | | | | | | | AB114078 tacattattg tttattctat cattattaga gaaactccac taccaaaacc atcattaaaa DA RI Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page 48 of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 49 of 16 40 1150 1160 1170 1180 1190 1200 | | | | | | | | | | | | AB114078 caaaaattta catgccactt aactcccctc acaaacaatc gttatttata ttgttaatta DA A RI 1210 1220 | | | | AB114078 gcaaacacaa aacccgcctt DA A RI Hình 3.3 So sánh trình tự D-Loop hai mẫu gà nghiên cứu Ri (RI) Đa cựa (Da) với trình tự tham khảo mã số AB114078 So sánh hai mẫu Ri (RI) Đa cựa (Da) với trình tự chuẩn thấy có 16 điểm đa hình/ đột biến (khác biệt nucleotide) Mẫu gà Da có 15 điểm (chiếm 1,23%) RI có điểm (chiếm 0.33%) khác với trình tự chuẩn Cả hai giống thuộc mẫu gà Da RI có khác biệt nucleotide so với trình tự chuẩn AB114078 đột biến: Thay C T vị trí 355, thay A T vị trí 504 vị trí 992 Ngoài hai giống thuộc mẫu gà Da RI có khác biệt với 14 điểm đa hình vị trí: Mẫu Da đột biến thay A thành G vị trí 1; đột biến thay G thành A vị trí 212, 792, 1193,1216; đột biến thay A thành T vị trí 7, 14; đột biến thay T thành A vị trí 9; đột biến thay T thành C vị trí 3, 225; đột biến C thành T vị trí 246, 315; Mẫu RI đột biến thay A thành C vị trí Các sai khác mẫu đột biến kiểu đồng hoán, dị hoán đƣợc thống kê bảng 3.1 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page 49 of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 50 of 16 41 Bảng 3.1 Thống kê điểm đa hình hai mẫu nghiên cứu so với trình tự chuẩn STT Mẫu Da, RI Thay đổi Vị trí ty thể Kiểu biến dị C thành T 335 Đồng hoán Da, RI A thành T 504 Dị hoán Da, RI A thànhT 992 Dị hoán Da A thành G Đồng hoán Da G thành A 212 Đồng hoán Da G thành A 792 Đồng hoán Da G thành A 1193 Đồng hoán Da G thành A 1216 Đồng hoán Da A thành T Dị hoán 10 Da A thành T 14 Dị hoán 11 Da T thành A Dị hoán 12 Da T thành C Đồng hoán 13 Da T thành C 225 Đồng hoán 14 Da C thành T 246 Đồng hoán 15 Da C thành T 315 Đồng hoán 16 RI A thành C Dị hoán nucleotide Chúng so sánh trình tự vùng D-Loop mẫu gà nghiên cứu với số trình tự chủng gà đƣợc công bố: Giống Galuss galuss Murghi gốc Ấn Độ lấy trình tự ngân hàng gen mã số GQ293096, giống gốc Mỹ lấy trình tự ngân hàng gen mã số AY235570 AY235571 để so sánh mức độ sai khác trình tự nucleotide xác định mối quan hệ di truyền chúng kết so sánh bảng 3.2 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page 50 of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 51 of 16 42 Bảng 3.2 So sánh mức độ sai khác trình tự nucleotide AB114078 RI DA GQ293096 AY235570 AY235571 AB114078 0.0000 0.0033 0.0123 0.8156 0.1844 0.1329 RI 0.0033 0.0000 0.0115 0.8156 0.1819 0.1312 DA 0.0123 0.0115 0.0000 0.8164 0.1803 0.1296 GQ293096 0.8156 0.8156 0.8164 0.0000 0.7713 0.7705 AY235570 0.1844 0.1819 0.1803 0.7713 0.0000 0.1803 AY235571 0.1329 0.1312 0.1296 0.7705 0.1803 0.0000 Qua bảng 3.2 so sánh sai khác trình tự gen cho thấy sai khác trình tự nucleotide giống gà DA với giống gà Gallus galuss Murghi gốc Ấn Độ cao 81,64% (996 điểm đa hình), gà DA với giống gà Gallus galuss gốc Nhật 15 điểm đa hình chiếm 1,23% , gà RI gà DA 14 điểm đa hình chiếm 1,15%, sai khác trình tự nucleotide gà RI với giống gà Gallus galuss gốc Nhật thấp 0,33% (4 điểm đa hình) Mối quan hệ di truyền giống gà đƣợc thể hình 3.4 AB114078 RI DA GQ293096 AY235570 AY235571 Hình 3.4 Quan hệ di truyền số giống gà Kết thu đƣợc hình 3.4 cho thấy giống gà đƣợc chia thành nhánh : Nhánh gồm giống Gallus gallus gốc Nhật đƣợc đăng kí với mã số Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page 51 of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 52 of 16 43 AB114078 có quan hệ gần với giống gà RI, mức độ đồng thành phần nucleotide chúng 99,67% Nhánh gồm giống Gallus galuss Murghi gốc Ấn Độ, giống gà gốc Mỹ đƣợc đăng kí với mã số AY235570 AY235571, giống gà đƣợc đăng kí với mã số AY235570 có quan hệ gần với giống gà đƣợc đăng kí với mã số AY235571, mức đồng thành phần nucleotide 99,82% 3.2 THÀNH PHẦN ĐIỆN DI PROTEIN HUYẾT THANH GÀ THÍ NGHIỆM Nghiên cứu xác định tính đa hình protein huyết đƣợc tiến hành mẫu huyết giống gà: Ri, Mông Đa cựa theo phƣơng pháp điện di SDS-PAGE, SDS-PAGE theo LaemLi, nguyên tắc phƣơng pháp trình bày mục 2.3.3 Phổ điện di huyết giống gà đặc trƣng cho loài Giữa cá thể loài có phổ điện di có độ đậm nhạt khác Vì để nghiên cứu sâu thành phần protein mức độ tiểu đơn vị cấu thành đại phân tử protein máu gà đánh giá chất lƣợng thịt nhƣ phát sai khác protein máu dòng gà tiến hành phân tích thành phần điện di protein máu giống gà thí nghiệm, kết đƣợc thể hình 3.3 Hình 3.5: Phổ điện di SDS – PAGE protein huyết Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page 52 of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 53 of 16 44 Đƣờng chạy M: Thang protein marker chuẩn; Đƣờng chạy đến 3: Dung dịch huyết pha loãng ba đại diện giống gà Ri Mông Đa cựa Kết điện di cho thấy hệ protein huyết gà tƣơng đối phức tạp thành phần hàm lƣợng: số lƣợng băng – vạch thu đƣợc nhiều nhƣng đa dạng hàm lƣợng Trong đa số băng protein nhỏ có hàm lƣợng thấp protein có hàm lƣợng lớn huyết Albumin (chiếm từ 50 – 75%) IgG (khoảng 10%) lại băng lớn Số băng điện di protein huyết gà thí nghiệm dao động từ đến 10 băng Trong gà Ri có 10 băng, gà Mông có băng, gà Đa cựa có băng Trong gà Ri xuất thêm băng kích thƣớc: 15.4 KDa; 16.4Kda ; 32Kda ; 36KDa Gà Mông xuất băng 16.4 Kda, 32Kda; băng 14.4 Kda, 15.4KDa; Gà Đa cựa xuất băng 15.4Kda; 16.4Kda ;32Kda ;mất băng 14.4 Quan sát hình ta thấy băng Albumin gà Đa cựa lớn nhất, băng lớn thứ gà Mông, băng nhỏ băng gà Ri Hàm lƣợng IgG (protein miễn dịch) gà Đa cựa lớn biểu băng ta thấy đậm lớn so với băng gà Mông gà Ri Điều có khả gà Đa cựa có hệ thống miễn dịch tốt so với gà Mông gà Ri, có tác dụng chống chịu với điều kiện khí hậu khắc nghiệt, chống lại kháng nguyên lạ xâm nhập vào thể có vai trò quan trọng bảo tồn nòi giống Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page 53 of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 54 of 16 45 Bảng 3.3 Thống kê xuất băng điện di protein huyết gà thí nghiệm Kích thƣớc KDa Số lƣợng băng điện di huyết gà thí nghiệm RI Mo Da 14.4 0 15.4 1 16.4 1 18.4 1 25.0 1 32.0 1 36.0 1 45.0 1 66.2 1 116 1 Tổng 10 Nhƣ mẫu gà thí nghiệm có khác số lƣợng, vị trí độ đậm nhạt băng điện di chứng tỏ protein huyết gà thí nghiệm biểu tính đa hình Mặt khác, protein huyết có tính bảo thủ di truyền cao nên khác cấu trúc gen mã hóa protein huyết biểu gen khác giống Đây sở để giải thích khác chất lƣợng giống gà thí nghiệm Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page 54 of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 55 of 16 46 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ KẾT LUẬN Đã tách chiết tinh đƣợc DNA tổng số từ mẫu gà thuộc ba giống Ri, H'Mông Đa cựa Đã nhân thành công đoạn điều khiển (Vùng D-Loop) DNA ty thể ba giống gà với kích thƣớc khoảng 1,3 kb ba mẫu kĩ thuật PCR nhờ cặp mồi H1255 L16725 Đã xác định đƣợc trình tự vùng D-Loop gồm 1220 nucleotit vùng D-Loop hai ba mẫu gà nghiên cứu phát đƣợc 16 điểm đa hình/ đột biến nucleotit đại diện hai mẫu giống gà nghiên cứu với trình tự chuẩn Kết phân tích thành phần điện di protein huyết ba mẫu gà thí nghiệm cho thấy khác số lƣợng, độ đậm nhạt vị trí số băng điện di giống gà Protein huyết máu gà thể tính đa hình ĐỀ NGHỊ Trong phạm vi nghiên cứu này, với số lƣợng lấy từ cá thể thuộc giống, đƣa đƣợc số liệu ban đầu đặc điểm đa hình vùng D-Loop ty thể hai giống gà Ri Đa cựa thuộc loài Gallus gallus domesticus Để đánh giá đƣợc toàn diện ý nghĩa vị trí đa hình/ đột biến vùng D-Loop đƣa đƣợc kết luận đày đủ đa dạng DNA giống gà cần phải tiến hành nghiên cứu phân tích số lƣợng mẫu lớn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page 55 of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 56 of 16 47 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Nguyễn Ân (1983), Di truyền học động vật, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội Trịnh Đình Đạt (2003), Di truyền chọn giống động vật, Nxb Đại Học Quốc Gia Hà Nội Nguyễn Hải Hà (2000), Tạo dòng phân tử đoạn gen điều khiển ADN ty thể hai loài gà Lôi đặc hữu Việt Nam, khóa luận tốt nghiệp nghành công nghệ sinh học, ĐHQG Hà Nội, Trƣờng ĐHKHTN Trịnh Hữu Hằng, Trần Công Yên (1998), Sinh học thể động vật, NXB Đại Học Quốc Gia Hà Nội Nguyễn Trƣờng Huy (2008), Nghiên cứu đa hình trình tự đoạn D-Loop hệ gen ty thể số giống gà Việt Nam, khóa luận tốt nghiệp, Trƣờng ĐHKH tự nhiên, Hà Nội Địch Thị Kim Hƣơng (2006), phân định số chủng gà nhà (Gallus gallus domesticus) qua ADN ty thể , khóa luận tốt nghiệp, Trƣờng ĐHKH tự nhiên, Hà Nội Nguyễn Hoan (1999), Chăn nuôi gia cầm (giáo trình dùng cho cao học nghiên cứu sinh), NXB Nông Nghiệp Hà Nội Nguyễn Trọng Lạng, Chu Hoàng Mậu, Nguyễn Thị Tâm (2005), Sinh học tế bào, NXB Nông Nghiệp Dƣơng Văn lộc (2004), Nghiên cứu khả sinh trưởng, suất thịt số tiêu hóa sinh gà lai F1 Lương Phượng - Ri Ai Cập - Ri nuôi bán chăn thả Thái Nguyên, Luận văn thạc sĩ, Trƣờng Đại Học Sƣ Phạm, Đại Học Thái Nguyên 10 Nguyễn Thị Mai (2007), chăn nuôi gia cầm, Nxb Hà Nội Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page 56 of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 57 of 16 48 11 Lê Minh (2002), Ảnh hưởng thuốc Avicoc Rigecocsin đến khả sản xuất gà thịt Lương Phượng Sasso nuôi bán chăn thả Thái Nguyên, Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp, Trƣờng Đại Học Nông Lâm, Đại Học Thái Nguyên 12 Trần Thanh Vân, Hoàng Văn Tiêu, Nguyễn Khánh Quắc (1997), Kết nghiên cứu số tiêu sinh lý, sinh hóa máu vịt Khakicampbell, vịt cỏ lai F1 chúng nuôi chăn thả Thái Nguyên, Báo cáo khoa học NCTY, hội nghị khoa học Bộ nông nghiệp phát triển nông thôn 8/1997 Nha Trang, Khánh Hòa 13 Kim Thị Phƣơng oanh (1999), Ứng dụng phương pháp sinh học phân tử nghiên cứu khác biệt di truyền số loài gà lôi Việt Nam, luận án Thạc sĩ Sinh học, trƣờng Đại Học Sƣ Phạm, ĐHQG Hà Nội TÀI LIỆU TIẾNG ANH 14 Baker A J., Marshall H D (1997), "Mitochondrial control region sequences astools of understanding evolution of avian taxa", In "Avian Molecular Systematics and Evolution" (Mindell D P., Ed), 51-80, Academic Press, San Diego 15 Chinnery P F., Schon E A (2003), "Mitochondria", J neurol Neurosurg Psychiatry, 74: 1188-1199 16 Desjadins P., Morais R (1990), "Sequence DNA gene organisation of the chicken mitochondrial genome, A novel gene order in higher vertebrates", J.Mol.Biol.,212,pp.599-635) 17 Ingman M.,(2001), "Mitochondrial DNA Clarifies Human Evolution", http://www.uu.se/findperson.php?uid=N99-1523 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page 57 of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 58 of 16 49 18 Ingman M.,(2003), "Mitochondrial and Clarifies Human Evolution", summaries of Uppsala Dissertations from the Faculty of Medicine 1288 50, Acta University, Uppsala 19 Gilbert, A.B (1971), "The egg, ist physical and biochemical aspectc", In:domestic fowl, Bd.3, Academic press, London/ NewYork,1971) 20 Hillis D M., Moritz C., Mable B K., 1996 Molecular Systematics Sinamer Associates, Inc., second edition 21 Kimball R.T.,Braun E.L., Zwarrtjes P.W., Crowe T.M.(1999),and ligon J.D.A Molecula phylogeny of the pheasants and partridges suggests that these lineages are not monophyletic Mol Phylogenet Evol., 11(1)tr.38-54) 22 Komiyama T., Ikeo K., Tateno Y., Gojobori T (2004), "Japanese domesticated chickens have been derived from Shamo traditional fighting cocks", Mol Phylogenet Evol., 33(1):16-21) 23 Komiyama T., Ikeo K., Gojobori T (2004)," The evolutionary origin of long-crowing chicken: its evolutionary relationship with fighting cocks disclose by the mtDNA sequence analysis", Gene,333: 91-99)) 24 krist L.(2000), Phylogeny DNA phylogeography of European parids, Oulu university, Oulu) 25 Kris L (2002) "Phylogeny and phylogeography of Euro pean Parids", chapter Introduction: Evolution and mitochondrial DNA in birds Department of Biology, Oulu Universsity library 26 Laemli U.K(1970), Cleava of structural proteins during the assembly of head of baterio phage T4, Nature, 277, pp.680.685 27 Lander E S., Botstein D (1989), "Mapping Mendelian factors underlying quantitive traits using RFLP linkege maps", Genet 121: 185-199 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page 58 of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 59 of 16 50 28 Litti M., Luty J A (1989), "A hypervariable microsatellite revealed by in vitro amplification of dinucleotide repeat winthin the cardiac muscle actin gene", Am J hum Genet 44:397-401 29 Moulin S., Randi E., Tabarroni C., Hennache A.(2003),"Mitochondrial DNA diversification among the subspecies of the Silver and Kalij pheasants, Lophura nycthemera and L leucomelanos, phasinidae", Ibis, 145(online), E1-E11.) 30 Mindell D P, Sorenson M D., Dimcheff D E (1998), "Multi endependent origins of mitochondrial gene order in birds", Mol Biol Evol., 95, pp 10693-10697 31 Niu D., Fu Y., Luo., Ruan H., Yu X., Chen G., Zhang Y (2002),"The origin and genetic diversity of Chinese native chicken breeds",Biochem Genet., 40:5-6.) 32 Niu D., Fu Y., Luo J., Ruan H., Yu X.P., Chen G., Zang Y P (2002),"The origin DNA genetic diversity of Chinese native chicken breeds", Biochem Gene., 40(5),pp 163-174)) 33 Fuhimito A., Miyake T.,Takada M., Shinggu R., Endo T., Gojobori T., Kondo N., Ohno S.(1996), "Monophyletic origin DNA unique dispersal patterns of domestic fowls", Pro Natl Acad Sci USA, 93(13),pp.6792-6795) 34 Pereira S L., Bakern A J (2004),"Low number of mitochondrial pseudogenes in the chiken (GALLUS GALLUS) nuclear genome: implications for molecular inference of population history DNA phylogenetics", BMC Evol Biol., 4(17).) 35 SambrookJ., Russell D.W, (2001), Moleular Cloning: Alabroratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory press, NewYork Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page 59 of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 60 of 16 51 36 Wang J., He X., Ruan J., Dai M., Chen J.,Zhang Y., Hu C., Cong L., Fang L., Liu B., Li S., Wang L., Burt D W., Ka G., Wong S., Yu J., Yang H., Wang J.(2005)"Chick VD: A sequence variation database for the chicken genome", Nucle Acids Res., 33(5),pp.438-441 37 http://www.geneticorigins.org/geneticorigins/mito/mitoframeset.htm 38 http://www ncbi.nlm.nih.gov Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page 60 of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 61 of 16 Phô lôc Ảnh 1: Gà Ri (RI) nuôi Bắc Kạn Ảnh 2a: Gà Đa Cựa (Da) nuôi Bắc Kạn Ảnh 2b: Gà Đa Cựa (Da) nuôi Bắc Kạn Ảnh 3: Gà Mông (Mo) nuôi Bắc Kạn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page 61 of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn ... ––––––––––––––––––––––––– HỨA THỊ NGA NGHIÊN CỨU ĐA HÌNH PROTEIN HUYẾT THANH VÀ TRÌNH TỰ VÙNG ĐIỀU KHIỂN D-LOOP TY THỂ CỦA BA GIỐNG GÀ: RI, MÔNG VÀ ĐA CỰA Chuyên ngành: Di truyền học Mã số: 60.42.70... chọn giống, tạo sở cho việc lai tạo giống đáp ứng đƣợc nhu cầu thị trƣờng Vì lựa chọn đề tài: "Nghiên cứu đa hình protein huyết trình tự vùng điều khiển D-loop ty thể ba giống gà: Ri, Mông Đa cựa" ... tiêu nghiên cứu đề tài - So sánh trình tự đoạn điều khiển DNA ty thể giống gà - Xác định mối quan hệ di truyền ba đại diện ba giống gà - Phân tích đa hình protein huyết ba đại diện ba giống gà