nghiên cứu khả năng cố định nito của một số chủng vi khuẩn phân lập từ rừng ngập mặn rú chá, huế

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN KHOA MƠI TRƯỜNG BÁO CÁO KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP HÀ NỘI - 06/2013 ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG CỐ ĐỊNH NITƠ CỦA MỘT SỐ CHỦNG VI KHUẨN PHÂN LẬP TỪ RỪNG NGẬP MẶN RÚ CHÁ, TT- HUẾ Sinh viên: Tạ Thị Kim Ngân Lớp: K54 - KHMT Khóa: QH.2009.T GVHD:TS Ngơ Thị Tường Châu NỘI DUNG TRÌNH BÀY I MỞ ĐẦU II ĐỐI TƯỢNG & PHƯƠNG PHÁP III KẾT QUẢ & THẢO LUẬN IV KẾT LUẬN & ĐỀ NGHỊ I MỞ ĐẦU VAI TRÒ CỦA RÚ CHÁ Vai trò che chắn, bảo vệ  Hạn chế gió bão, bảo vệ bờ biển, nhà cửa tính mạng người dân Điều hịa khí hậu hạn chế xâm mặn Cung cấp chất đốt  Cung cấp củi làm chất đốt ( 1975- 1980 ) Điểm du lịch tương lai TT-Huế ban hành nhiều chủ trương phát triển du lịch đầm phá Tam Giang – Cầu Hai ( Rú Chá ) Vai trò khác Nơi sống thủy sản, chim di cư theo mùa  Là nơi chăn thả gia súc, gia cầm HIỆN TRẠNG CỦA RÚ CHÁ 2010 30 năm trước Năm 2009 Nguyên nhân  Chuyển đất rừng ngập mặn sang SXNN  Phát triển nuôi trồng thủy sản  Quai đê lấn biển 10 ha TÍNH CẤP THIẾT Bài tốn: Xác định giải pháp phục hồi phát triển rừng ngập mặn Rú Chá Biện pháp Biện pháp trồng rừng có sử dụng chế phẩm VSV Biện pháp trồng gây rừng “cơng nghệ thấp” • Mối quan hệ VSV – Thực vật chế vịng tuần hoàn bảo tồn chất dinh dưỡng hệ sinh thái rừng ngập mặn • Rừng ngập mặn thường xuyên phải chịu thiếu hụt dưỡng chất, đặc biệt N P MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU   Tạo nguồn giống VSV địa có khả cố định nitơ với điều kiện ni cấy thích hợp cho sinh trưởng, phát triển hoạt động cố định nitơ Góp phần thúc đẩy q trình phục hồi phát triển rừng ngập mặn Rú Chá, TT- Huế NỘI DUNG NGHIÊN CỨU Phân lập tuyển chọn số chủng vi khuẩn có khả cố định nitơ từ rừng ngập mặn Rú Chá, TT- Huế Nghiên cứu số đặc điểm hình thái sinh hóa Khảo sát ảnh hưởng số điều kiện nuôi cấy đến sinh trưởng, phát triển cố định nitơ II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP Đặc điểm sinh hóa Thử nghiệm sinh hóa  Sinh H2S  Sinh indole  Phản ứng đỏ với methyl  Phản ứng Voges- Proskauer  Sử dụng citrate  Hoạt tính urease  Catalase  Oixdase  Khử nitrate  Sinh ammonia  Thủy phân tinh bột  Thủy phân lipid  Di động Thử nghiệm sử dụng đường Glucose Lacotose Mannitol Mannose  Sucrose Xylose  Gatactose Phương pháp đánh giá khả sinh trưởng Xác định giá trị OD Turbidity and Microbial Mass Measurement Xác định mật độ tế bào III KẾT QUẢ & THẢO LUẬN 1.Kết phân lập chủng vi khuẩn cố định nitơ Bảng Một số chủng vi khuẩn cố định nitơ phân lập từ mẫu đất rừng ngập mặn Hình Khuẩn lạc vi khuẩn cố định nitơ phân lập từ đất môi trường Ashby Kết phân lập chủng vi khuẩn cố định nitơ (tt) Bảng Các chủng vi khuẩn cố định nitơ từ mẫu rễ ngập mặn Hình Khuẩn lạc vi khuẩn cố định nitơ phân lập từ mẫu rễ Giá môi trường Ashby Kết tuyển chọn chủng vi khuẩn có khả cố định nitơ cao Bảng Hàm lượng N-NH4+ cố định chủng vi khuẩn phân lập STT Ký hiệu chủng Nguồn gốc Hàm lượng N- NH4+ (µg/ml) A1 Mẫu đất Đước 7,90 A2 Mẫu đất Đước 5,20 A3 Mẫu đất Đước 5,82 A4 Mẫu đất Đước 10,98 A6 Mẫu đất Đước 10,43 A8 Mẫu đất Đước 10,08 A13 Mẫu rễ Sú 9,61 A14 Mẫu rễ Ơrơ 8,85 A15 Mẫu rễ Ráng 7,87 10 A16 Mẫu rễ Ráng 7,90 3.Đặc điểm hình thái sinh hóa chủng A4 3.1 Đặc điểm hình thái Hình Khuẩn lạc chủng vi khuẩn A4 môi trường Ashby thạch đĩa Hình Hình ảnh nhuộm Gram (vật kính x 100) chủng vi khuẩn A4 3.Đặc điểm hình thái sinh hóa chủng A4 3.1 Đặc điểm sinh hóa Bảng Các thử nghiệm sinh hóa chủng A4 sau 48 nuôi cấy Thử nghiệm Đáp ứng chủng Sinh H2S - Sinh indole - Phản ứng đỏ với methyl - Phản ứng Voges- Proskauer - Sử dụng citrate - Hoạt tính urease - Catalase + Oixdase ++ Khử nitrate ++ Sinh ammonia ++ Thủy phân tinh bột + Thủy phân lipid + Di động ++ 3.Đặc điểm hình thái sinh hóa chủng A4 3.1 Đặc điểm sinh hóa Bảng Các thử nghiệm sử dụng nguồn carbohydrate chủng A4 sau 48 nuôi cấy Thử nghiệm Đáp ứng chủng Glucose +++ Maltose - Lacotose - Mannitol +++ Mannose - Sucrose ++ Xylose ++ Galactose - Ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy đến khả sinh trưởng, phát triển cố định nitơ chủng A4 4.1 Thời gian nuôi cấy Thời gian ni cấy (ngày) Hình Khả sinh trưởng, phát triển hàm lượng N-NH4+ cố định chủng vi khuẩn A4 thời gian nuôi cấy khác Ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy đến khả sinh trưởng, phát triển cố định nitơ chủng A4 4.2 Nồng độ muối NaCl Nồng độ muối NaCl (‰) Nồng độ muối NaCl Hình Khả sinh trưởng, phát triển cố định nitơ chủng vi khuẩn A4 nồng độ muối NaCl khác IV KẾT LUẬN & ĐỀ NGHỊ KẾT LUẬN Các chủng vi khuẩn có khả cố định nitơ phân lập từ mẫu rễ mẫu đất Đước, Giá, Sú, Ô Rô Ráng Rú Chá, TT Huế Chủng vi khuẩn A4 có khả cố định nitơ mạnh với hàm lượng N-NH4+ cố định 10,98 µg/mL mơi trường Ashby, 350C, sau ngày ni cấy Chủng vi khuẩn A4 có khuẩn lạc dạng trịn, kích thước 3-4 mm, màu trắng sau dần chuyển sang trắng đục, bề mặt lồi, trơn bóng, viền mép có cưa, tế bào có dạng hình que, nằm riêng lẻ, thuộc nhóm Gram âm, lên men đường glucose, manitol, xylose sucrose tạo thành acid, không sử dụng đường lactose, galactose maltose Khả sinh trưởng, phát triển cố định nitơ chủng vi khuẩn A4 môi trường Ashby dịch thể 35ºC đạt tối ưu sau ngày nuôi cấy nồng độ muối NaCl 4‰ 2.ĐỀ NGHỊ Xác định đặc điểm lý hóa sinh học đất vùng ngập mặn Rú Chá, TT Huế Phân lập thêm chủng vi khuẩn cố định nitơ từ rừng ngập mặn Tiếp tục nghiên cứu ảnh hưởng điều kiện ni cấy để tối ưu hóa khả sinh trưởng, phát triển cố định nitơ chủng vi khuẩn A4 Định danh chủng vi khuẩn A4 Cám ơn quý Thầy Cô bạn quan tâm theo dõi ! ... Xác định mật độ tế bào III KẾT QUẢ & THẢO LUẬN 1.Kết phân lập chủng vi khuẩn cố định nitơ Bảng Một số chủng vi khuẩn cố định nitơ phân lập từ mẫu đất rừng ngập mặn Hình Khuẩn lạc vi khuẩn cố định. .. nitơ phân lập từ đất môi trường Ashby Kết phân lập chủng vi khuẩn cố định nitơ (tt) Bảng Các chủng vi khuẩn cố định nitơ từ mẫu rễ ngập mặn Hình Khuẩn lạc vi khuẩn cố định nitơ phân lập từ mẫu... động cố định nitơ Góp phần thúc đẩy q trình phục hồi phát triển rừng ngập mặn Rú Chá, TT- Huế NỘI DUNG NGHIÊN CỨU Phân lập tuyển chọn số chủng vi khuẩn có khả cố định nitơ từ rừng ngập mặn Rú Chá,