Slide thuyết trình chiết xuất và phân lập CAPSAICIN từ cây ớt

Phương pháp 1: Chiết xuất capsaicinoid toàn phần, sau đó phân lập và tinh khiết hóa capsacin... • Chiết xuất bằng Soxhlet cho việc thu hồi tỷ lệ capsaicinoid cao nhất , vì quá trình c

Trang 2

1.1 Định danh dược liệu

Tên khoa học: Capsicum frutescens (L.) Bail

Họ: Cà (Solanaceae)

Tên thường gọi: Ớt

Tên khác: Lạt tiêu, Ớt tàu, Ớt chỉ thiên, Ớt chỉ địa

1 ĐẠI CƯƠNG VỀ THỰC VẬT

Trang 3

1.2 Mô tả cây

Cây ớt thuộc loại thân thảo, mọc hàng năm ở các nước ôn đới, sống lâu năm và thân phía dưới hóa gỗ ở các nước nhiệt đới

Trang 5

• Hoa màu trắng, mọc đơn mộc ở kẽ lá, mùa hoa gần như quanh năm nhưng nhiều nhất vào tháng 5-6.

Trang 6

• Quả mọc rủ xuống hay quay lên trời (chỉ thiên), hình dáng quả thay đổi, có thứ tròn, có thứ dài, khi chín có màu đỏ, vàng hay tím Trong chứa nhiều hạt dẹt trắng.

Trang 8

1.3 Thành phần hóa học

Ngoài ra còn có:

•Các chất carotenoid: chất chính là capsaithin có màu đỏ

Trang 9

1.3 Thành phần hóa học

•Capsaicin là một alcaloid, phần lớn tập trung ở biểu bì giá noãn, vị rất cay, gây nóng đỏ Nếu bị oxy hóa bởi Kali bicromat hoặc Kali permanganat thì tính cay sẽ bị mất đi Trong đó tính chất cay do gốc –CO-NH-CH-CH2- quyết định

Trang 10

3 4

5

6

7 8

9 10

5

6

7 8

9 10

11 12 13 14 15 16 17

18

Dihydrocapsaicin

Trang 11

1.4 Phân bố và sinh thái

•Cây ớt có nguồn gốc Nam Mĩ , bắt nguồn từ

một số loài hoang dại, được thuần hóa và

trồng ở Châu Âu, Ấn Độ cách đây hơn 500

năm

•Tuy nhiên ở nước ta chưa phát triển lắm

•Hiện nay, Ấn Độ là nước sản xuất ớt lớn nhất thế giới với khoảng 1 triệu tấn mỗi năm.

Trang 12

Trang 13

Điều kiện trồng:

• Nhiệt độ: sinh trưởng và phát triển tốt ở 20-30 0 C

• Ánh sáng: không bị ảnh hưởng bởi thời gian chiếu sáng

• Độ ẩm: 70-80%

• Đất trồng: đất phù sa hoặc đất thịt nhẹ có độ màu mỡ,

thoát nước, có pH=5,5-7

• Chăm sóc: Tưới giữ ẩm cho cây sau khi trồng, nên bón

thúc đạm vào giai đoạn quả bắt đầu phát triển.

• Tỉa cành: 3-4 cành/ cây, thường xuyên tỉa bỏ lá già.

• Tưới tiêu: tưới vào buổi trưa khi cây bắt đầu héo, đặc biệt cần tháo kiệt nước sau khi trời mưa.

Trang 14

•Nhân dân thường dùng để chữa đau bụng do lạnh, tiêu hóa kém, đau khớp, dùng ngoài chữa rắn rết cắn

Trang 15

• Một số bài thuốc Nam thông dụng có ớt:

-Chữa rụng tóc do hóa trị liệu: Ớt trái 100g, ngâm với rượu trắng trong 10-20 ngày Dùng rượu này bôi lên da đầu có tác dụng kích thích mọc tóc

-Giảm đau do ung thư, đau khớp: ăn 5-10g ớt mỗi ngày

Trang 17

- Chữa đau dạ dày do lạnh: ớt trái 1-2 quả, Nghệ vàng 20g, tán bột uống ngày 2-3 lần

Trang 18

- Chữa viêm khớp mãn tính: ớt trái 1-2 quả; Dây đau xương, thổ phục linh (củ khúc khắc) mỗi vị 30g Sắc uống ngày 1 thang

Trang 19

- Chữa bệnh chàm (eczema): lá ớt tươi 1 nắm, mẻ chua 1 thìa Hai thứ giã nhỏ, lấy vải sạch gói lại, đắp lên nơi bị chàm đã rửa sạch bằng nước

muối

Trang 21

- Chữa rắn rết cắn: lá ớt giã nhỏ, đắp vào nơi bị

thương, băng lại Ngày làm 1-2 lần cho đến khi hết đau, 2-3 giờ là khỏi

Trang 22

- Chữa bệnh vẩy nến: Lá ớt cay 1 nắm to (1 nắm chặt tay và đem sao chín nhưng không cháy), tinh tre đằng ngà cạo lấy 1 bát, lá sống đời (lá thuốc bỏng) 7-9 lá, thiên niên kiện khoảng 300g Tất cả cho vào nồi với 2 lít nước, đun sôi kỹ, uống dần thay nước chè, uống chừng 3 ấm là khỏi

Trang 23

- Đau bụng kinh niên: Rễ cây

ớt, rễ chanh, rễ hoàng lực, mỗi

thứ khoảng 10g Sao vàng,

sắc uống ngày 1 thang.

- Chữa đau lưng, đau khớp:

Ớt chín 15 quả, lá đu đủ 3 cái,

rễ chỉ thiên 80g Tất cả đem

giã nhỏ ngâm cồn với tỷ lệ 1/2,

dùng để xoa bóp sẽ mau khỏi.

Trang 24

- Chữa mụn nhọt: Lá ớt giã nát với ít muối, dùng

đắp vào nhọt đang mưng mủ sẽ bớt đau nhức, dễ

vỡ mủ, mau lành

- Chữa khản cổ: Dùng ớt làm thuốc súc miệng (dưới dạng cồn thuốc)

Trang 25

Trang 26

• Ngoài ra, ớt còn giúp

 Ngăn ngừa bệnh tim  tránh được tình trạng đông vón tiểu cầu dễ gây tai biến tim mạch.

 Ngăn ngừa tình trạng huyết áp tăng cao

Trang 27

2 PHẦN THỰC NGHIỆM

2.1 Phương pháp 1:

Chiết xuất capsaicinoid toàn phần, sau

đó phân lập và tinh khiết hóa capsacin.

Trang 28

2.1.1 Chiết xuất capsacinoid toàn phần

• Chuẩn bị: Ớt khô Dược liệu được đóng gói trong túi nhựa đã được tẩy với nitơ, và được lưu trữ ở 40C trước khi sử dụng

Trang 30

2.1.1.2 Chiết bằng Soxhlet

Trang 32

• Thu dịch chiết.

Trang 33

Trang 34

Duy trì nhiệt độ 450C trong 3h

Erlen 250ml gồm: 25g dược liệu (3mm), dung môi ethanol 95%

 Kích cỡ dược liệu cần được kiểm soát

Trang 35

Trang 36

2.1.1.5 Kết quả và bàn luận:

Hiệu quả và thời gian chiết bằng siêu âm

Trang 37

• Phần trăm thu hồi capsaicinoid tương ứng bởi ngâm ,

Soxhlet và UAE là 79,4 , 92,0 và 87,4

• Chiết xuất bằng Soxhlet cho việc thu hồi tỷ lệ

capsaicinoid cao nhất , vì quá trình chiết xuất được thực hiện tại nhiệt độ sôi (78.1 0 C) và dung môi luôn được làm mới.

Trang 38

• Hiệu quả của nhiệt độ chiết xuất

Khi dùng ethanol 95% làm dung môi, sự gia tăng nhiệt độ

từ 30 0 C đến 45 0 C tăng cường việc thu hồi capsaicinoid

Trang 39

 Việc thu hồi capsacinoid tại 450C là có hiệu quả nhất

Khi dùng ethanol 95% làm dung môi, sự gia tăng nhiệt độ từ 45 0 C đến 60 0 C không làm tăng cường việc thu hồi

capsaicinoid.

Trang 40

Dùng aceton làm dung môi, không nâng cao đáng kể hiệu quả khi nhiệt độ được nâng lên từ 30 0 C đến 45 0 C

Trang 41

• Hiệu lực của tỷ lệ của nước trong ethanol

• Tỷ lệ nước trong dung môi ethanol có một ảnh hưởng quan trọng trong chiết xuất capsaicinoid

Trang 42

2.1.2 Phân lập capsaicin từ capsaicinoid

• Lượng mẫu sử dụng: 5g dược liệu khô

• Nhồi cột với 300g silicagel

• Rửa giải với 3 dung môi có độ phân cực tăng dần: hexane, EtOH và MeOH

Trang 43

2.1.2 Phân lập capsaicin từ capsaicinoid

• Dung môi rửa giải được thu lại và xác định sơ

bộ bằng sắc ký lớp mỏng gồm 11 phân đoạn

• Phân đoạn 5 và 6 tiếp tục chạy sắc ký cột lần lượt với 60g và 50g silicagel, rửa giải với hỗn hợp dung môi EtOH/CH2Cl2 (5:95) thu được hỗn hợp capsaicin và dihydrocapsaicin (1)

Trang 45

Trang 47

2.2.1 Dụng cụ

Trang 48

Mẫu thô (7,6g)

Dịch chiết cồn (1)

( 1) Làm giàu mẫu bằng cách cho đi qua cột nhựa HPD- 100A resin(400g, polystyrene resin) với nước, ethanol 25% và ethanol 60%

Trang 49

2.2.3 Lựa chọn hệ thống 2 dung môi

- Trong HSCCC, việc lựa chọn 2 pha dung môi là việc làm đầu tiên và then chốt Một hệ dung môi tốt phải đưa ra được hệ số phân bố K của chất mục tiêu Mẫu phải tan tốt, và phải đảm bảo được hệ số phân bố K của chất mục tiêu gần với 1

Trang 50

Tetrachlorometan-2 PHẦN THỰC NGHIỆM



Trang 51

2.2.4 Chuẩn bị dung môi và mẫu

• Hệ dung môi sau khi đã đạt trạng thái cân bằng hoàn toàn sẽ được lắc mạnh lần nữa ở nhiệt độ phòng.

• Khi 2 pha đã được tách sẽ được dùng để chạy sắc kí Nước là pha động, dung môi hữu cơ là pha tĩnh

• Dung dịch mẫu được chuẩn bị bằng cách hòa tan mẫu thô có chứa hoạt chất trong hỗn

hợp nước và dung môi hữu cơ (1:1, v/v ) của

hệ thống dung môi dùng cho HSCCC.

Trang 52

mẫu thô được tiêm vào

- Kết quả sẽ được ghi lại bằng detector UV ở bước sóng 254nm

Trang 53

2.2.6 Phân tích HPLC và xác định cấu trúc các phân đoạn của HSCCC

• Từng phân đoạn sau khi tách bằng HSCCC được phân tích bằng HPLC với cột Shim-pack VP-ODS (250mm x 4.6mm, I.D.) ở bước sóng 254nm, nhiệt độ 250C Pha động, dung dịch

methanol và acid phosphoric (70:30,v/v), rửa giải với tốc độ dòng 0.8ml/phút Kết quả được ghi lại bằng dectector quang kế

• Quá trình xác định các phân đoạn từ HSCCC đã được tiến hành lần lượt bằng EI-MS, sắc kí lỏng hiệu năng cao và phổ NMR với dung môi là

chloroform và chất chuẩn nội là

tetramethylsilane

Trang 54

2.2.7 Kết quả

• Từ 150mg mẫu thô được hòa tan trong 6ml gồm 2 pha Dung dịch mẫu đã được tách và tinh khiết hóa bằng HSCCC.

• Pha phía trên là pha tĩnh, pha nằm dưới

là pha động

• Độ lưu giữ của pha tĩnh là 65% và tổng

phân đoạn của HSCCC được phân tích bằng HPLC, đo ở bước sóng 254nm.

Trang 55

Sắc ký đồ HPLC của quá trình chiết thô từ Capsicum

frutescens

Trang 56

• Các peak 1, 2, 3 là dihydrocapsaicin, capsaicin, nordihydrocapsaicin đã lần lượt được xác định bằng 1H NMR, 13C NMR và DEPT-NMR, ESI-MS, EI-MS.

• Chỉ duy nhất một bước HSCCC, ta thu được 33mg dihydrocapsaicin, 68mg capsaicin, 4mg nordihydrocapsaicin với độ tinh khiết lần lượt là 97.4%, 99% và 94.5%.

Trang 57

Sắc kí đồ của quá trình chiết bằng HSCCC

•

Trang 58

• Điều kiện của thử nghiệm:

+ Cột Shim-pack VP-ODS (250mm x 4.6mm,I.D) + Nhiệt độ cột: 250C

+ Pha động: methanol-acid phosphoric 0.1% (70:30, v/v)

+ Tốc độ dòng: 0.8ml/phút

+ Phát hiện: 254nm

+ Thể tích tiêm: 10µl

Trang 59

• Từ cây ớt Capsicum frutescens (L) Bail:

Bằng thực nghiệm capsaicinoid đã được chiết xuất bằng các phương pháp ngâm, Soxhlet, UAE Kết quả thu được như sau:

Phương

pháp

Thời gian

Trang 60

• Bằng HSCCC: từ 150g mẫu bột ớt thô đã phân lập được 33mg dihydrocapsaicin,

68mg capsaicin, 4mg nordihydrocapsaicin với mức độ tinh khiết tương ứng là 97.4%, 99% và 94.5%.

Trang 61

3 Các chế phẩm có chứa capsaicin

Trang 62

3 Các chế phẩm có chứa capsaicin

Trang 63

Tài liệu tham khảo

1 Sumate Boonkird, Chada Phisalaphong, Muenduen

Phisalaphong (2008),“Ultrasound-assisted extraction of

capsaicinoids from Capsicum frutescens on a lab- and pilot-plantscale”, Ultrasonics Sonochemistry 15, p.1075–

1079.

• 2 Santamarıa et al (2000), “Selective Enzyme-Mediated

Extraction of Capsaicinoids and Carotenoids from Chili Guajillo Puya (Capsicum annuum L.) Using Ethanol as Solvent”, J.Agric.FoodChem., vol 48, p 3063−3067.

• 3 Pakit Kumboonma et al., “Isolation and structural

modification of Capsaicin and Dihydrocapsaicin from Capsicum annuum sp.”.

Trang 64

Tài liệu tham khảo

4 F.Lietal (2009), “Preparative isolation and puriﬁcation of

capsaicinoids from Capsicum frutescens Using high-speed counter-current chromatography”, Separation and Puriﬁcation

Technology, Vol 64, p 304–308.

5 F Nazari et al (2007), “Multivariate Optimisation of

Microwave-assisted Extraction of Capsaicin from Capsicum frutescens L and Quantitative Analysis by H-NMR”,

Phytochemical Analysis, vol 18, p 333–340.

6 “Bài giảng dược liệu”, Bộ môn Dược Liệu, Trường Đại Học Y

Trang 65

6 Mai Trần Quế Phương

7 Tô Minh Phong

Trang 66

www.trungtamtinhoc.edu.vn

Định dạng
Số trang	66
Dung lượng	3,89 MB