Các xét nghiệm di truyền để chẩn đoán một số bệnh tim mạch

Bộ môn Y sinh học – Di truyền – ĐHYHN Xét nghiệm di truyền phân tử ứng dụng tim mạch Trần Đức Phấn, Lương Thị Lan Anh, Nguyễn Thị Trang Đặt vấn đề Cùng với phát triển xã hội, bệnh lây truyền giảm, bệnh tim mạch, chuyển hóa, di truyền … tăng Bệnh DT tim mạch: 5% bất thường NST, 3% đột biến đơn gen Phần chủ yếu lại bệnh bất thường tim, van tim, mạch vành, cao huyết áp, thấp tim di truyền đa nhân tố Bệnh DT đa nhân tố DT đa nhân tố: nhiều gne + yếu tố môi trường => bệnh = Do nhiều gen nên khó XN - Do phải có nhân tố môi trường biểu nên xác định người mang gen phòng xuất Mục tiêu nghiên cứu Mô tả thực trạng triển khai XNDT phân tử để chẩn đoán số bệnh tim mạch, đề xuất phương hướng Phương pháp NC Chiết tách DNA PCR Giải trình tự gen (ABI 3100 sequencer) Điện di gel agarose Tinh sản phẩm Phương pháp nghiên cứu Phì đại tim (10 mẫu) Nhồi máu tim (5 mẫu)   XN gen MYH7, TNNT2 XN gen FGB, THBD PP nghiên cứu Mô tả thực trạng Tên mồi Độ lớn Tên gen Bệnh FGBf3m- FGBr4m 728 bp THBDf1m- THBDr2m 219 bp GHB, THBD Nhồi máu tim MYH7Ex13f1MYH7Ex14r1 488 bp MYH7, TNNT2 Cơ tim phì đại MYH7Ex19f1m2MYH7Ex20r1 512 bp TNNT2f-TNNT2r 505 bp Kết Bệnh phì đại tim Trình tự Exon 13 gen MYH7: agtcatctct ttaccaactt tgctacttgcc ttttccttcc agaggctga caagtctgcc tacctcatgg ggctgaactca gccgacctgc tcaaggggc tgtgccaccc tcGggtgaaa gtgggcaatga gtacgtcacc aaggggcag aatgtccagc aggtgggtcc atcttcagatg ataat Đột biến: Arg403Gln, G => A Bệnh nhồi máu tim Trình tự promotor gen FGB: 4401 4451 4501 4551 4601 4651 4701 4751 4801 4851 4901 4951 5001 5051 5101 cattttacct aaaaaagggt gttattttgt gatataacat tcattgtcag ttttagtggt tttctcacat gaaacaagat ttgtccaatt caaagaataa tgcttaaatg ttaactaagg agatatatat ggtttcttgg tactattgtg tatgtgaatt ctttctgatg tattttgatt tactattgat aaaacataag tgccttgtga attctttcgg acacatctct aaatgaattg tagttgtatg ataaaatggt aaaggtaacc aggattgaag agcttccaca tgtttttcta aaggacaaaa tgtatttttc aatgtctaaa tttaatgGcc catttatggt gtaggtcaaa agcttgtgta ctttgaggag aagaaattta acaagtaaat tcagccaaca atttctgaag atctctcagt aacttaaaac gttaagtccc tattaaagct atagaatagg acaaaagata ccttttgaaa atatcattaa tttactaagc gtttccacat tgccctaact atgtttctaa aagCtttgct agtgaaccaa tcattcctag taagtctaca catgaaacat aaggtgtcaa attcagcaca gtatgaattt aacacattat tagaattatg tgagtcacga ttagatttgt taatttacca tcccatcatt actagaccaa gggaagatgt aaattaaata cagaggactc tgaaaaggat ctattattgc cgacaatgag Đột biến đồng hợp tử: -455G => A, -148C => T ĐB dị hợp tử mẹ trai BN Các kỹ thuật khác triển khai Tên gen Mục đích xét nghiệm ACE, AGT, NOS3 ITGA2, GP1BA, NOS3, ApoE Xác định nguy tăng huyết áp ACE, AGT, ITGB3, ITGA2 (7231), GP1BA, FGB Bệnh DT mạch vành, nhồi máu tim DT bệnh đột quỵ (thiếu máu cục bộ) Gen apolipoprotein E (ApoE) DT RL mỡ máu gây xơ vữa động mạch F2, F5, MTHFR, MTRR, MTR Gen ITGA2, GP1BA Gen ITGB3 Yếu tố DT gây bệnh huyết khối FGB, THBD Nhồi máu tim MYH7, TNNT2 Phì đại tim SCN5A DT gây bệnh Brugada Bàn luận 4.1 Bệnh phì đại tim - DT đa nhân tố: ĐB chuỗi nặng β-myosin gen MYH7 chi phối, troponin T gen TNNT2 chi phối - Bệnh điểm nóng ĐB ĐB hay gặp là: ĐB exon 8, 9, 13-16, 19, 20, 22-24, 30 gen MYH7 exon 8, 9, 11, 14-16 gen TNNT2 Gen MYH7 phân tích exon 13, 14, 19 20; với gen TNNT2 phân tích exon 8, Đầy đủ cần phân tích tiếp exon khác gen MYH7 TNNT2 Bàn luận Vì bệnh DT đa nhân tố bên số tác giả thấy có số người có gen không biểu triệu chứng dù 50-60 tuổi ĐB gen TNNT2 thường liên quan đến đột tử sớm (ngay tuổi trẻ) phì đại tim mức tối thiểu Theo số tác giả, với người mang gen ĐB gây phì đại tim, đặc biệt ĐB gen TNNT2 cần tránh thể dục nặng, trành thuốc làm tăng nguy bệnh 4.2 Bệnh nhồi máu tim Cơ chế bệnh sinh hình thành huyết khối Gen liên quan: FGB, THBD, FGA, FGG NC XN gen FGB THBD ĐB hay gặ là: Promoter FGB -148 (C=>T) -455 (G=>A) -Gen THBD vị trí -33 (G => A) Do phân tích vùng ĐB cao gen nên tỷ lệ phát chưa cao Đây bệnh DT đa nhân tố nên việc phát người mang gen bệnh giúp phòng ngừa bệnh biểu 4.3 XN di truyền bệnh tim mạch Việc chẩn đoán bệnh tim mạch thường dựa vào triệu chứng lâm sàng Phần lớn bệnh DT đa nhân tố nên XN DT khó khăn, tốn tốn thời gian Việc phát người mang gen bệnh giúp phòng ngừa bệnh biểu Hướng nhà DT: PCR đơn=> multiplex PCR => biochip Một số nhận xét Triển khai XN DT phân tử BM Y sinh học-DT ĐHYHN: - Xác định ĐB Arg453Cys, C=>T exon 13 gen MYH7 BN phì đại tim - Xác định ĐB -455G=>A, -148C=>T promoter gen FGB BN nhồi máu tim - Hoàn chỉnh kỹ thuật để xác định 20 gen liên quan đến số bệnh tim mạch DT thường gặp khác Thank you for your attention [...]... phòng ngừa bệnh biểu hiện 4.3 XN di truyền trong bệnh tim mạch Việc chẩn đoán các bệnh tim mạch thường dựa vào triệu chứng lâm sàng Phần lớn là bệnh DT đa nhân tố nên XN DT khó khăn, tốn kém và tốn thời gian Việc phát hiện người mang gen bệnh giúp phòng ngừa bệnh biểu hiện Hướng của các nhà DT: PCR đơn=> multiplex PCR => biochip Một số nhận xét Triển khai XN DT phân tử ở BM Y sinh học-DT ĐHYHN: - Xác... Vì là bệnh DT đa nhân tố bên một số tác giả thấy có một số người có gen nhưng không biểu hiện triệu chứng dù đã 50-60 tuổi ĐB gen TNNT2 thường liên quan đến đột tử sớm (ngay ở tuổi trẻ) mặc dù chỉ phì đại cơ tim ở mức tối thiểu Theo một số tác giả, với người mang gen ĐB gây phì đại cơ tim, đặc biệt ĐB gen TNNT2 thì cần tránh thể dục nặng, trành thuốc làm tăng nguy cơ bệnh 4.2 Bệnh nhồi máu cơ tim Cơ... bệnh sinh hình thành huyết khối Gen liên quan: FGB, THBD, FGA, FGG NC này mới XN 2 gen FGB và THBD ĐB hay gặ là: Promoter của FGB ở -148 (C=>T) và -455 (G=>A) -Gen THBD ở vị trí -33 (G => A) Do mới phân tích được vùng ĐB cao của 2 gen chính nên tỷ lệ phát hiện chưa cao Đây cũng là bệnh DT đa nhân tố nên việc phát hiện người mang gen bệnh giúp phòng ngừa bệnh biểu hiện 4.3 XN di truyền trong bệnh tim. .. Triển khai XN DT phân tử ở BM Y sinh học-DT ĐHYHN: - Xác định ĐB Arg453Cys, C=>T ở exon 13 của gen MYH7 của 1 BN phì đại cơ tim - Xác định ĐB -455G=>A, -148C=>T ở promoter của gen FGB của 1 BN nhồi máu cơ tim - Hoàn chỉnh kỹ thuật để xác định hơn 20 gen liên quan đến một số bệnh tim mạch DT thường gặp khác Thank you for your attention ...4 Bàn luận 4.1 Bệnh phì đại cơ tim - DT đa nhân tố: ĐB chuỗi nặng β-myosin do gen MYH7 chi phối, troponin T do gen TNNT2 chi phối - Bệnh không có điểm nóng ĐB ĐB hay gặp là: ĐB ở exon 8, 9, 13-16, 19, 20, 22-24, 30 của gen MYH7 và exon 8, 9, 11, 14-16 của gen TNNT2 Gen MYH7 chúng tôi mới phân tích exon 13, 14, 19 20; với gen TNNT2 mới phân tích exon 8, 9 Đầy đủ cần phân tích tiếp các exon khác của