Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của lá schefflera sessiliflora de p v thuộc họ ngũ gia bì (araliaceae) ở việt nam (TT)

1 VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ …… ….***………… NGUYỄN TẤN PHÁT NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA LÁ SCHEFFLERA SESSILIFLORA DE P V THUỘC HỌ NGŨ GIA BÌ (ARALIACEAE) Ở VIỆT NAM Chuyên ngành: HÓA HỌC CÁC HỢP CHẤT THIÊN NHIÊN Mã số: 62.44.01.17 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC TP HỒ CHÍ MINH - 2016 Công trình hoàn thành tại: Viện Công nghệ Hóa học - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Người hướng dẫn khoa học 1: TS MAI ĐÌNH TRỊ Người hướng dẫn khoa học 2: TS LÊ TIẾN DŨNG Phản biện 1: Phản biện 2: Phản biện 3: Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án tiến sĩ, họp Học viện Khoa học Công nghệ - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam vào hồi … ’, ngày … tháng … năm 201… Có thể tìm hiểu luận án tại: - Thư viện Học viện Khoa học Công nghệ - Thư viện Quốc gia Việt Nam I GIỚI THIỆU LUẬN ÁN Mở đầu Việt Nam nước nhiệt đới gió mùa nên có nguồn thực vật vô đa dạng phong phú Từ lâu, ông cha ta biết sử dụng nhiều cỏ để chữa bệnh cách hiệu việc sử dụng dựa vào kinh nghiệm dân gian Ngày với phát triển khoa học-kỹ thuật nói chung ngành Hóa-Thực vật nói riêng đòi hỏi không sử dụng hiệu mà phải tìm hiểu thành phần hóa học thuốc để tìm hợp chất có hoạt tính sinh học cao tìm hoạt tính giúp nâng cao giá trị thuốc Việt Nam Xu hướng nhà khoa học không quan tâm tới thuốc khả chữa bệnh mà có khả bồi bổ thể, tăng lực, ngăn lão hóa tế bào, phòng chống ung thư họ Nhân sâm (Araliaceae) tiêu biểu sâm Triều Tiên (Panax ginseng C.A Mey.), sâm Việt Nam (Panax vietnamensis Ha et Grushv.), ngũ gia bì (Schefflera octophylla (Lour.) Harms)… Trong trình tìm hiểu loài thuộc họ Ngũ gia bì, nhận thấy loài Schefflera sessiliflora De P V phát vào năm 2004 nghiên cứu bước đầu tác dụng dược lý cho kết tốt chống stress, chống oxy hóa, tăng lực, Tuy nhiên thành phần hóa học chưa nghiên cứu sâu sở đó, tiến hành nghiên cứu thành phần hóa học Schefflera sessiliflora De P V với việc thử hoạt tính ức chế enzyme glucosidase thử nghiệm gây độc tế bào hoạt chất phân lập làm sở khoa học cho việc sử dụng gợi mở hướng tác dụng dược lý dược liệu phát hoạt chất Qua đó, góp phần nâng cao giá trị loại dược liệu Việt Nam Đối tượng nội dung nghiên cứu luận án Đối tượng nghiên cứu là: chân chim không cuống Schefflera sessiliflora De P V trồng Đà Lạt Nội dung luận án: Nghiên cứu thành phần hóa học chân chim không cuống Schefflera sessiliflora De P V Xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập Thử hoạt tính ức chế enzyme -glucosidase hoạt chất phân lập Những đóng góp luận án Từ chân chim không cuống Schefflera sessiliflora De P V trồng Đà Lạt, phương pháp sắc ký, phân lập 20 hợp chất hỗn hợp, có hợp chất mới, hợp chất tự nhiên, 10 hợp chất hỗn hợp chưa phát trước từ chi Schefflera, hợp chất lần phân lập từ loài S sessiliflora hợp chất biết + chất là: 3-O- -D-(6-O-methyl)glucuronopyranosyloleanolic 28-O-[α-Lrhamnopyranosyl-(14)]--D-glucopyranosyl ester (Scheffleraside C, SS16), 3O-[α-L-rhamnopyranosyl-(13)]- -D-(6-O-methyl)glucuronopyranosyloleanolic 28-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(14)]- -D-glucopyranosyl ester (Scheffleraside B, SS20), 3-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(13)]- -D-glucuronopyranosyloleanolic 28-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(14)]- -D-glucopyranosyl ester (Scheffleraside A, SS21), 3-O- -D-glucopyranosyl-6α-hydroxybetulin (Scheffleraside D, SS11), 2β,12β-dihydroxygibberellin (SS01) + hợp chất tự nhiên là: 3-O- -D-glucopyranosylbetulin (SS10) + 10 hợp chất hỗn hợp chưa phát trước từ chi Schefflera là: acid 3-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(13)]- -D-glucuronopyranosyloleanolic (SS17), 3-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(13)]- -D-glucuronopyranosylhederagenin (SS18), Chikusetsusaponin IVa (SS19), Chikusetsusaponin IVa methyl ester (SS14), Pseudoginsenoside RT1 methyl ester (SS15), trans-Tiliroside (SS02), 3-Oβ-D-glucuronopyranosylkaempferol (SS03), Acid 5-p-trans-coumaroylquinic (SS04), Muối natri (2S)-1,2-di-O-palmitoyl-3-O-α-D-(6sulfo)quinovopyranosylglycerol (SS09), sn-1-monoacylglycerol sn-1,2diacylglycerol (SS05), 1-O-β-D-glucopyranosyl-(2S,3S,4R,8E)-2-[(2R)-2hydroxypalmitoylamino]-octadec-8-en-1,3,4-triol 1-O-β-D-glucopyranosyl(2S,3S,4R,8Z)-2-[(2R)-2-hydroxypalmitoylamino]-octadec-8-en-1,3,4-triol (SS08) + hợp chất lần phân lập từ loài S sessiliflora là: Scheffleraside I (SS12), Copteroside B (SS13), 3-O- -D-glucopyranosylstigmasterol (SS07) + hợp chất biết: Acid oleanolic (SS06) Lần phát chi Schefflera có nhóm triterpenoid saponin có phần aglycon betulin 6α-hydroxybetulin (SS10, SS11), loài khác acid 3-epibetulinic, acid betulinic, 6α,20-dihydroxybetulin 29hydroxybetulin Lần phát chi Schefflera có nhóm hợp chất diterpenoid có khung gibberellin (SS01) Lần phát chi Schefflera có nhóm hợp chất glycolipid dạng dẫn xuất glycerol phytosphingolipid (SS05, SS08, SS09), loài S heptaphylla lipid dạng dẫn xuất acid 3α-hydroxylup20(29)-en-23,28-dioic Đã thử nghiệm hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase 18 hợp chất Kết cho thấy 11 hợp chất có hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase hợp chất 3-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(13)]- -D-glucuronopyranosylhederagenin (SS18) có hoạt tính mạnh (IC50 = 5,99 µM) Đã thử nghiệm hoạt tính gây độc tế bào hợp chất dòng tế bào ung thư vú (MCF-7) tế bào ung thư gan (HepG2) Kết cho thấy hợp chất Scheffleraside B (SS20), Scheffleraside C (SS16), Scheffleraside D (SS11) có hoạt tính gây độc dòng tế bào ung thư vú MCF-7 nồng độ 100 µg/mL (phần trăm gây độc tế bào 53,95, 67,92 63,83 %) Bố cục luận án Luận án gồm 102 trang với bảng số liệu, 31 hình sơ đồ 101 tài liệu tham khảo Bố cục luận án gồm: Mở đầu (1 trang), Chương 1: Tổng quan tài liệu (36 trang), Chương 2: Phương pháp nghiên cứu (2 trang), Chương 3: Thực nghiệm (16 trang), Chương 4: Kết thảo luận (35 trang), Kết luận kiến nghị (2 trang), Danh mục công trình công bố (1 trang), Tài liệu tham khảo (9 trang) II NỘI DUNG CỦA LUẬN ÁN MỞ ĐẦU Phần đề cập đến ý nghĩa khoa học, tính thực tiễn, đối tượng, mục tiêu nhiệm vụ nghiên cứu luận án CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU Phần tổng quan tài liệu tập hợp nghiên cứu nước quốc tế vấn đề: 1.1 Giới thiệu chung loài Schefflera sessiliflora De P V 1.2 Giới thiệu chung chi Schefflera 1.3 Giới thiệu chung hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase CHƯƠNG 2: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Mẫu nguyên liệu Lá chân chim không cuống Schefflera sessiliflora De P V cung cấp Trung tâm trồng chế biến thuốc Đà Lạt, số 18 Hoàng Văn Thụ, TP Đà Lạt định danh DS Phan Văn Đệ - Bộ môn Tài nguyên Dược liệu, Trung tâm Sâm Dược liệu Tp HCM 2.2 Phương pháp phân lập Phần trình bày phương pháp phân lập hợp chất tinh khiết: sắc ký lớp mỏng (TLC) sắc ký cột 2.3 Phương pháp xác định cấu trúc Phần trình bày phương pháp xác định cấu trúc: Độ quay cực [α]D, phổ tử ngoại (UV), phổ hồng ngoại (IR), phổ khối lượng phun mù điện tử phân giải cao lần (HR-ESI-MS) hai lần (HR-ESI-MS/MS), phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR), sắc ký khí ghép khối phổ (GC-MS) 2.4 Phương pháp thử hoạt tính sinh học Phần trình bày hóa chất, thiết bị phương pháp thử hoạt tính sinh học CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM 3.1 Điều chế cao chiết Từ mẫu khô trích kiệt ethanol sau phân bố lại với n-hexan, EtOAc nước thu cao tương ứng 3.2 Phân lập hợp chất Phần trình bày cụ thể trình phân lập hợp chất từ cao chiết Từ cao EtOAc phân lập hợp chất Từ dịch nước phân lập 17 hợp chất Quy trình phân lập hợp chất tóm tắt sơ đồ 4.1 4.2 Sơ đồ 4.1: Sơ đồ phân lập hợp chất từ cao SSE Cao SSE (15 g) CC silica gel n-hexane-EtOAc-MeOH E.I (2 g) E.II (3 g) E.III (6 g) E.IV (2 g) E.V (1 g) CC silica gel CHCl3-MeOH 95/5, 90/10, 85/15, 80/20, 75/25 E.III.1 (0,5 g) E.III.2 (1,5 g) E.III.3 (2,5 g) CC silica gel CC silica gel CHCl3-MeOH 95/5 CHCl3-MeOH 90/10 SS01(12 mg, 0,00027%) SS02 (30 mg, 0,00068%) SS03 (20 mg, 0,00045%) SS04 (42 mg, 0,00095%) E.III.4 (0,5 g) E.III.5 (0,5 g) Sơ đồ 4.2: Sơ đồ phân lập hợp chất từ dịch nước SSW SSW (600 g) Dianion HP-20 MeOH-W thu phân đoạn W.IV (80 g) IV.1 (15g) IV.1.2 (5 g) -CC silica gel CHCl3-MeOHW 90/10/1 -CC Rp18 6/1 CC silica gel CHCl3-MeOH-W thu phân đoạn IV.1.3 (5 g) -CC silica gel CHCl3-MeOH-W 85/15/1 -CC Rp18 6/1 SS10 (10 mg, 0,00023%) SS12 (12 mg, 0,00027%) SS11 (15 mg, 0,00034%) SS13 (13 mg, 0,00030%) IV.2.1 (3 g) -CC silica gel CHCl3-MeOHW 90/10/1 -CC Rp18 5/1 SS14 (8 mg, 0,00018%) CC silica gel EtOAc-MeOH thu phân đoạn W.IV.2 (15 g) CC silica gel CHCl3MeOH-W, thu phân đoạn W.IV.3 (20 g) IV.2.2 (4 g) IV.2.3 (4 g) IV.3.2 (7 g) -CC silica gel CHCl3-MeOH-W 85/15/1 -CC Rp18 4/1 SS15 (17 mg, 0,00039%) SS16 (13 mg, 0,00030%) -CC silica gel CHCl3-MeOH-W 75/25/1 -CC Rp18 3/1 SS17 (8 mg, 0,00018%) SS18 (8 mg, 0,00018%) SS19 (15 mg, 0,00034%) -CC silica gel CHCl3-MeOH-W 75/25/2 -CC Rp18 1/1 W.V (85 g) CC silica gel nhexane-EtOAcMeOH, thu phân đoạn V.2 (24 g) CC silica gel CHCl3-MeOH, thu phân đoạn V.2.1 (8 g) -CC silica gel CHCl3 100% SS20 (16 mg, 0,00036%) SS05 (11 mg, 0,00025%) SS21 (12 mg, 0,00027%) SS06 (8 mg, 0,00018%) V.2.2 (7 g) -CC silica gel CHCl3-MeOH 20/1 SS07 (40 mg, 0,00091%) SS08 (11 mg, 0,00025%) SS09 (12 mg, 0,00027%) 3.3 Hằng số vật lý kiện phổ hợp chất phân lập 3.3.1 Acid oleanolic (SS06) Dạng bột, màu trắng Phổ HR-ESI-MS: negative m/z: 455,3512 Phổ 13C NMR (125 MHz, pyridine-d5,  ppm): 38,4 (C-1), 27,0 (C-2), 77,9 (C-3), 38,7 (C4), 55,3 (C-5), 18,2 (C-6), 32,7 (C-7), 39,2 (C-8), 47,6 (C-9), 36,8 (C-10), 23,1 (C11), 122,1 (C-12), 144,3 (C-13), 41,6 (C-14), 27,7 (C-15), 23,1 (C-16), 46,3 (C17), 41,4 (C-18), 46,0 (C-19), 30,4 (C-20), 33,6 (C-21), 32,6 (C-22), 28,2 (C-23), 16,0 (C-24), 15,0 (C-25), 16,9 (C-26), 25,7 (C-27), 180,4 (C-28), 32,8 (C-29), 23,3 (C-30) Phổ 1H NMR (500 MHz, pyridine-d5,  ppm): 3,53 (1H, dd, J = 6,0 10,0 Hz, H-3), 5,57 (1H, br s, H-12), 3,33 (1H, dd, J = 4,0 14,0 Hz, H-18), 1,29 (3H, s, H-23), 1,09 (3H, s, H-24), 0,93 (3H, s, H-25), 1,05 (3H, s, H-26), 1,34 (3H, s, H-27), 1,05 (3H, s, H-29), 1,09 (3H, s, H-30) 3.3.2 Scheffleraside I (SS12) Dạng bột, màu trắng Phổ HR-ESI-MS: negative m/z: 631,3851 Phổ 13C NMR (125 MHz, pyridine-d5,  ppm): 38,3 (C-1), 26,0 (C-2), 89,0 (C-3), 39,0 (C4), 55,4 (C-5), 18,0 (C-6), 32,8 (C-7), 39,3 (C-8), 47,5 (C-9), 36,5 (C-10), 23,4 (C11), 122,2 (C-12), 144,3 (C-13), 41,7 (C-14), 27,9 (C-15), 23,2 (C-16), 46,3 (C17), 41,5 (C-18), 46,1 (C-19), 30,5 (C-20), 33,7 (C-21), 32,7 (C-22), 27,9 (C-23), 16,6 (C-24), 15,0 (C-25), 17,0 (C-26), 25,8 (C-27), 180,3 (C-28), 32,9 (C-29), 23,4 (C-30), 106,2 (C-1), 74,8 (C-2), 77,5 (C-3), 73,1 (C-4), 77,5 (C-5) Phổ 1H NMR (500 MHz, pyridine-d5,  ppm): 3,31 (1H, dd, J = 4,5 12,0 Hz, H-3), 5,37 (1H, br s, H-12), 3,15 (1H, dd, J = 3,5 13,0 Hz, H-18), 1,20 (3H, s, H-23), 0,89 (3H, s, H-24), 0,69 (3H, s, H-25), 0,85 (3H, s, H-26), 1,20 (3H, s, H-27), 0,87 (3H, s, H-29), 0,91 (3H, s, H-30), 4,82 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-1), 4,00 (1H, t, J = 8,5 Hz, H-2), 4,18-4,30 (1H, m, H-3), 4,18-4,30 (1H, m, H-4), 4,18-4,30 (1H, m, H5) 3.3.3 Copteroside B (SS13) Dạng bột, màu trắng Phổ HR-ESI-MS: negative m/z: 647,3809 Phổ 13C NMR (125 MHz, pyridine-d5,  ppm): 38,6 (C-1), 25,8 (C-2), 80,3 (C-3), 43,4 (C4), 47,4 (C-5), 18,2 (C-6), 32,8 (C-7), 39,7 (C-8), 48,0 (C-9), 36,8 (C-10), 23,6 (C11), 122,5 (C-12), 144,8 (C-13), 42,1 (C-14), 28,3 (C-15), 23,8 (C-16), 46,6 (C17), 41,9 (C-18), 46,4 (C-19), 30,9 (C-20), 34,2 (C-21), 33,2 (C-22), 64,4 (C-23), 13,6 (C-24), 16,0 (C-25), 17,4 (C-26), 26,2 (C-27), 180,2 (C-28), 33,2 (C-29), 23,7 (C-30), 104,8 (C-1), 74,7 (C-2), 78,2 (C-3), 73,5 (C-4), 76,6 (C-5) Phổ 1H NMR (500 MHz, pyridine-d5,  ppm): 4,25-4,34 (1H, m, H-3), 5,43 (1H, br s, H12), 3,25 (1H, br d, J = 13,5 Hz, H-18), 4,25-4,34 (H, m, H-23a), 3,63 (1H, d, J = 11,0 Hz, H23b), 0,90 (3H, s, H-24), 0,87 (3H, s, H-25), 0,98 (3H, s, H-26), 1,23 (3H, s, H-27), 0,90 (3H, s, H-29), 0,97 (3H, s, H-30), 5,10 (1H, d, J = 7,0 Hz, H1), 4,05 (1H, t, J = 8,0 Hz, H-2), 4,15 (1H, t, J = 8,5 Hz, H-3), 4,25-4,34 (1H, m, H-4), 4,25-4,34 (1H, m, H-5) 3.3.4 Acid 3-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(13)]- -Dglucuronopyranosyloleanolic (SS17) Dạng bột, màu trắng Phổ HR-ESI-MS: negative m/z: 777,4443 Phổ 13C NMR (125 MHz, pyridine-d5,  ppm): 38,4 (C-1), 25,9 (C-2), 89,2 (C-3), 39,0 (C4), 55,4 (C-5), 18,0 (C-6), 32,7 (C-7), 39,2 (C-8), 47,5 (C-9), 36,4 (C-10), 23,4 (C11), 122,1 (C-12), 144,4 (C-13), 41,7 (C-14), 27,8 (C-15), 23,2 (C-16), 46,4 (C17), 41,5 (C-18), 46,4 (C-19), 30,5 (C-20), 33,7 (C-21), 32,7 (C-22), 27,8 (C-23), 16,6 (C-24), 15,0 (C-25), 17,0 (C-26), 25,8 (C-27), 180,5 (C-28), 32,9 (C-29), 23,4 (C-30), 106,0 (C-1), 75,3 (C-2), 81,9 (C-3), 71,8 (C-4), 76,0 (C-5), 101,8 (C-1), 71,6 (C-2), 71,9 (C-3), 73,5 (C-4), 69,2 (C-5), 18,0 (C-6) Phổ 1H NMR (500 MHz, pyridine-d5,  ppm): 3,25 (1H, dd, J = 3,5 12,0 Hz, H-3), 5,37 (1H, br s, H-12), 3,15 (1H, br d, J = 9,5 Hz, H-18), 1,16 (3H, s, H-23), 0,87 (3H, s, H-24), 0,67 (3H, s, H-25), 0,84 (3H, s, H-26), 1,19 (3H, s, H-27), 0,87 (3H, s, H-29), 0,93 (3H, s, H-30), 4,72 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-1), 3,92 (1H, t, J = 8,5 Hz, H-2), 4,18-4,28 (1H, t, J = 8,5 Hz, H-3), 4,06-4,10 (1H, m, H-4), 4,21 (1H, d, J = 9,5 Hz, H-5), 6,12 (1H, br s, H-1), 4,62 (1H, dd, J = 1,5 3,0 Hz, H-2), 4,46 (1H, dd, J = 3,5 9,5 Hz, H-3), 4,21 (1H, t, J = 9,5 Hz, H-4), 4,89 (1H, dd, J = 9,5 6,0 Hz, H-5), 1,60 (1H, d, J = 6,0 Hz, H-6) 3.3.5 3-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(13)]--Dglucuronopyranosylhederagenin (SS18) Dạng bột, màu trắng Phổ HR-ESI-MS: negative m/z: 793,4368 Phổ 13C NMR (125 MHz, pyridine-d5,  ppm): 38,5 (C-1), 26,0 (C-2), 81,0 (C-3), 43,3 (C4), 47,3 (C-5), 18,1 (C-6), 32,8 (C-7), 39,7 (C-8), 48,0 (C-9), 36,7 (C-10), 23,6 (C11), 122,4 (C-12), 144,9 (C-13), 42,0 (C-14), 28,2 (C-15), 23,7 (C-16), 46,6 (C17), 41,9 (C-18), 46,4 (C-19), 30,9 (C-20), 34,1 (C-21), 33,2 (C-22), 64,0 (C-23), 13,5 (C-24), 15,9 (C-25), 17,4 (C-26), 26,1 (C-27), 180,0 (C-28), 33,2 (C-29), 23,7 (C-30), 105,3 (C-1), 75,0 (C-2), 82,0 (C-3), 71,9 (C-4), 77,0 (C-5), 102,5 14 Hz, H-7α), 1,62-1,68 (1H, m, H-7β), 1,38 (3H, s, H-23), 1,05 (3H, s, H-24), 0,94 (3H, s, H-25), 1,16 (3H, s, H-26), 1,06 (3H, s, H-27), 3,75 (1H, d, J = 11,5 Hz, H28a), 3,29-3,31 (1H, m, H-28b), 4,70 (1H, br s, H-29a), 4,59 (1H, br s, H-29b), 1,71 (3H, s, H-30), 4,33 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-1), 3,22 (1H, t, J = 8,5 Hz, H-2), 3,56 (1H, t, J = 8,5 Hz, H-3), 3,29-3,31 (1H, m, H-4), 3,27 (1H, m, H-5), 3,85 (1H, dd, J = 2,0 12,0 Hz, H-6a), 3,67 (1H, dd, J = 5,5 12,0 Hz, H-6b) 3.3.14 2β,12β-dihydroxygibberellin (SS01, chất mới) Tinh thể hình kim, màu vàng nhạt [α]25 D +141 (c 0,35, MeOH) Phổ HR-ESIMS: negative m/z: 363,1818 Phổ UV (MeOH), λmax, nm: 204 Phổ IR (MeOH), νmax, cm-1: 3434,2921,1714, 1660,1025 Phổ 13C NMR (125 MHz, CD3OD,  ppm): 49,0 (C-1), 66,0 (C-2), 48,0 (C-3), 45,0 (C-4), 59,8 (C-5), 50,5 (C-6), 179,8 (C-7), 52,0 (C-8), 58,8 (C-9), 45,9 (C-10), 27,9 (C-11), 73,4 (C-12), 49,0 (C-13), 43,7 (C-14), 47,0 (C-15), 149,4 (C-16), 109,5 (C-17), 28,5 (C-18), 180,2 (C-19), 16,3 (C-20) Phổ 1H NMR (500 MHz, CD3OD,  ppm): 1,99 (1H, dd, J = 4,0 13,0 Hz, H-1α), 0,87 (1H, t, J = 11,5 Hz, H-1β), 4,19 (1H, m, H-2), 2,45 (1H, dd, J = 4,0 13,0 Hz, H-3α), 1,04 (1H, t, J = 12,0 Hz, H-3β), 2,01 (1H, d, J = 12,0 Hz, H-5), 3,43 (1H, d, J = 11,5 Hz, H-6), 1,61 (1H, d, J = 10,5 Hz, H-9), 1,77-1,83 (1H, m, H-11α), 1,50 (1H, m, H-11β), 3,80 (1H, ddd, J = 3,5, 7,5 10,5 Hz, H12), 2,60 (1H, br s, H-13), 1,77-1,83 (2H, m, H-14), 2,24 (1H, d, J = 15,5 Hz, H15a), 2,18 (1H, d, J = 15,5 Hz, H-15b), 5,04 (1H, s, H-17a), 5,00 (1H, br s, H17b), 1,20 (3H, br s, H-18), 0,91 (3H, s, H-20) 3.3.15 3-O-β-D-glucuronopyranosylkaempferol (SS03) Dạng bột, màu vàng Phổ HR-ESI-MS: positive m/z: 463,0871, 485,0697, 507,0505 Phổ 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6,  ppm): 156,3 (C-2), 133,2 (C-3), 177,4 (C-4), 161,1 (C-5), 98,8 (C-6), 164,4 (C-7), 93,7 (C-8), 156,4 (C-9), 103,8 (C-10), 120,6 (C-1), 131,0 (C-2, C-6), 115,1 (C-3, C-5), 160,1 (C-4), 101,2 (C1), 73,9 (C-2), 76,1 (C-3), 71,7 (C-4), 75,1 (C-5), 171,0 (C-6) Phổ 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6,  ppm): 12,48 (1H, s, OH-5), 6,18 (1H, d, J = 1,5 Hz, H-6), 6,40 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-8), 8,03 (2H, d, J = 9,0 Hz, H-2, H-6), 6,87 (2H, d, J = 8,5 Hz, H-3, H-5), 5,40 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-1), 3,20-3,26 (2H, m, H-2, H-3), 3,25-3,30 (1H, m, H-4), 3,38-3,42 (1H, m, H-5) 3.3.16 trans-Tiliroside (SS02) Dạng bột, màu vàng Phổ HR-ESI-MS: positive m/z: 617,1289 Phổ 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6,  ppm): 156,4 (C-2), 133,1 (C-3), 177,4 (C-4), 161,3 (C-5), 15 98,8 (C-6), 164,2 (C-7), 93,7 (C-8), 156,4 (C-9), 103,9 (C-10), 120,8 (C-1), 130,8 (C-2, C-6), 115,1 (C-3, C-5), 160,0 (C-4), 101,0 (C-1), 74,1 (C-2), 76,2 (C3), 70,0 (C-4), 74,2 (C-5), 63,0 (C-6), 124,9 (C-1), 130,1 (C-2, C-6), 115,7 (C-3, C-5), 159,8 (C-4), 144,6 (C-7), 113,6 (C-8), 166,1 (C-9) Phổ 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6,  ppm): 12,56 (1H, s, OH-5), 6,14 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6), 6,38 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-8), 7,98 (2H, d, J = 8,5 Hz, H-2, H-6), 6,85 (2H, d, J = 9,0 Hz, H-3, H-5), 5,44 (1H, d, J = 7,0 Hz, H-1), 3,17-3,29 (3H, m, H-2, H-3, H-4), 3,36 (1H, m, H-5), 4,26 (1H, dd, J = 1,5 11,5 Hz, H-6a), 4,03 (1H, dd, J = 6,5 12,0 Hz, H-6b), 7,36 (2H, d, J = 8,5 Hz, H-2, H-6), 6,78 (2H, d, J = 8,5 Hz, H-3, H-5), 7,34 (1H, d, J = 16,0 Hz, H-7), 6,10 (1H, d, J = 16,0 Hz, H-8) 3.3.17 Acid 5-p-trans-coumaroylquinic (SS04) Dạng bột, màu trắng Phổ HR-ESI-MS: positive m/z: 361,0891 Phổ 13C NMR (125 MHz, CD3OD,  ppm): 76,1 (C-1), 38,8 (C-2), 71,3 (C-3), 73,5 (C-4), 72,0 (C-5), 38,2 (C-6), 177,0 (C-7), 127,3 (C-1), 131,2 (C-2,C-6), 116,8 (C-3,C-5), 161,3 (C-4), 146,7 (C-7), 115,4 (C-8), 168,6 (C-9) Phổ 1H NMR (500 MHz, CD3OD,  ppm): 7,48 (2H, d, J = 8,5 Hz, H-2, H-6), 6,83 (2H, d, J = 8,5 Hz, H3, H-5), 7,64 (1H, d, J = 16,0 Hz, H-7), 6,33 (1H, d, J = 16,0 Hz, H-8), 5,36 (1H, td, J = 4,5 9,5 Hz, H-5), 4,19 (1H, td, J = 3,0 5,5 Hz, H-3), 3,75 (1H, dd, J = 3,5 8,5 Hz, H-4), 2,25 (1H, ddd, J = 2,0, 4,5 13,5 Hz, H-2a), 2,22 (1H, dd, J = 3,5 14,0 Hz, H-6a), 2,05-2,09 (1H, m, H-6b), 2,10-2,13 (1H, m, H2b) 3.3.18 3-O- -D-glucopyranosylstigmasterol (SS07) Dạng bột, màu trắng Phổ HR-ESI-MS: positive m/z: 597,4117 Phổ 13C NMR (125 MHz, CDCl3 & CD3OD,  ppm): 37,5 (C-1), 29,8 (C-2), 79,4 (C-3), 39,9 (C4), 140,6 (C-5), 122,3 (C-6), 32,1 (C-7), 32,1 (C-8), 50,5 (C-9), 37,0 (C-10), 21,3 (C-11), 38,9 (C-12), 42,4 (C-13), 57,1 (C-14), 24,5 (C-15), 29,1 (C-16), 56,2 (C17), 12,3 (C-18), 19,5 (C-19), 40,7 (C-20), 21,3 (C-21), 138,6 (C-22), 129,5 (C23), 51,5 (C-24), 32,1 (C-25), 21,2 (C-26), 19,1 (C-27), 25,6 (C-28), 12,3 (C-29), 101,4 (C-1), 73,8 (C-2), 76,7 (C-3), 70,5 (C-4), 76,4 (C-5), 62,1 (C-6) Phổ 1H NMR (500 MHz, CDCl3 & CD3OD,  ppm): 3,57-3,61 (1H, m, H-3), 5,36 (1H, br d, J = 5,0 Hz, H-6), 0,71 (3H, s, H-18), 1,02 (3H, s, H-19), 1,02 (3H, d, J = 7,5 Hz, H-21), 5,16 (1H, dd, J = 8,5 15,0 Hz, H-22), 5,02 (1H, dd, J = 8,5 15,0 16 Hz, H-23), 0,85 (3H, d, J = 6,5 Hz, H-26), 0,80 (3H, d, J = 7,0 Hz, H-27), 0,81 (3H, d, J = 7,5 Hz, H-29), 4,40 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-1), 3,23 (1H, t, J = 8,5 Hz, H-2), 3,30 (1H, m, H-3), 3,40-3,44 (1H, m, H-4, H-5), 3,84 (1H, dd, J = 2,5 12,0 Hz, H-6a), 3,75 (1H, dd, J = 5,0 12,0 Hz, H-6b) 3.3.19 Muối natri (2S)-1,2-di-O-palmitoyl-3-O-α-D-(6sulfo)quinovopyranosylglycerol (SS09) o Dạng bột, màu trắng [α]25 D +9,0 (c 0,20, MeOH) Phổ HR-ESI-MS: positive m/z: 817,5118, 839,4950 Phổ HR-ESI-MS/MS: positive m/z: 239,2358, 313,2704, 551,4974, 591,4894 Phổ GC-MS (MW, RT, %): 270 (19,747, 85,76%), 256 (20,155, 1,77%), 284 (20,761, 3,20%), 296 (21,525, 1,00%), 298 (21,765, 8,27%) Phổ 13C NMR (125 MHz, CD3OD,  ppm): 64,3 (C-1), 71,7 (C-2), 67,1 (C-3), 100,0 (C-1), 73,5 (C-2), 74,9 (C-3), 75,0 (C-4), 69,9 (C-5), 54,3 (C6),175,0 (C-1), 175,2 (C-1), 35,0 (C-2), 35,2 (C-2), 26,0 (C-3, C-3), 30,2-30,8 (C-4C-13, C-4C-13), 33,1 (C-14, C-14), 23,7 (C-15, C15), 14,4 (C-16, C-16) Phổ 1H NMR (500 MHz, CD3OD,  ppm): 4,54 (1H, dd, J = 3,0 12,0 Hz, H-1a), 4,20 (1H, dd, J = 7,0 12,0 Hz, H-1b), 5,34 (1H, m, H-2), 4,13 (1H, dd, J = 5,5 11,0 Hz, H-3a), 3,59 (1H, dd, J = 6,0 10,5 Hz, H-3b), 4,78 (1H, d, J = 3,5 Hz, H-1), 3,42 (1H, dd, J = 3,5 9,5 Hz, H-2), 3,65 (1H, t, J = 9,5 Hz, H-3), 3,10 (1H, t, J = 9,5 Hz, H-4), 4,09 (1H, t, J = 9,5 Hz, H5), 3,36 (1H, dd, J = 2,0 14,5 Hz, H-6a), 2,94 (1H, dd, J = 9,5 14,5 Hz, H6b), 2,32-2,39 (4H, m, H-2, H-2), 1,60-1,63 (4H, m, H-3, H-3), 1,22-1,38 (48H, br s, H-4H-15, H-4H-15), 0,92 (6H, t, J = 7,0 Hz, H-16, H16) 3.3.20 sn-1-monoacylglycerol sn-1,2-diacylglycerol (SS05) Dạng bột, màu trắng Phổ GC-MS (MW, RT, %): 268 (22,696, 13,53%), 270 (22,800, 76,40%), 296 (26,251, 4,83%), 298 (26,742, 5,24%) Phổ 13C-NMR (125 MHz, CDCl3,  ppm): 174,1, 173,8, 135,5, 130,0, 121,2, 67,0 (C-1), 71,3 (C-2), 62,8 (C-3), 63,0 (C-1), 70,8 (C-2), 64,2 (C-3), 34,5 (C-α), 34,4 (C-α), 25,2 (Cβ), 25,1 (C-β), 32,1 (C-ω3), 22,8 (C-ω2), 14,1 (C-ω1) Phổ 1H-NMR (500 MHz, CDCl3,  ppm): 3,99 (2H, m, H-1), 3,85 (1H, m, H-2), 3,65 (2H, m, H-3), 4,374,39 (1H, m, H-1a’), 4,15-4,18 (1H, m, H-1b’), 5,22 (1H, m, H-2’), 3,99 (2H, m, H-3’), 2,28-2,33 (4H, m, H-α), 1,60-1,61 (4H, m, H-β), 1,27 (50H, br s), 0,88 (6H, t, J = 6,5 Hz, H-ω1) 17 3.3.21 1-O-β-D-glucopyranosyl-(2S,3S,4R,8E)-2-[(2’R)-2hydroxypalmitoylamino]-octadec-8-en-1,3,4-triol 1-O-β-Dglucopyranosyl-(2S,3S,4R,8Z)-2-[(2’R)-2-hydroxypalmitoylamino]octadec-8-en-1,3,4-triol (SS08) o Dạng bột, màu trắng [α]25 D +11,0 (c 0,20, MeOH) Phổ HR-ESI-MS: positive m/z: 570,5067, 732,5595, 754,5417 Phổ HR-ESI-MS/MS: positive m/z: 280,2626, 455,3090, 552,4967 Phổ 13C-NMR (125 MHz, pyridine-d5,  ppm): 70,4 (C-1), 51,7 (C-2), 75,9 (C-3), 72,4 (C-4), 27,6 (C-7Z), 32,1 (C-7E), 130,4 (C8Z), 130,8 (C-8E), 130,2 (C-9Z), 130,6 (C-9E), 27,9 (C-10Z), 33,0 (C-10E), 22,9 (C17), 14,3 (C-18), 175,7 (C-1), 72,4 (C-2), 35,6 (C-3), 32,1 (C-14), 22,9 (C15), 14,3 (C-16), 105,6 (C-1), 75,1 (C-2), 78,4 (C-3), 71,5 (C-4), 78,5 (C5), 62,6 (C-6) Phổ 1H-NMR (500 MHz, pyridine-d5,  ppm): 8,53 (1H, d, J = 9,5 Hz, NH), 4,69 (1H, dd, J = 6,5 10,5 Hz, H-1a), 4,50 (1H, dd, J = 4,0 10,5 Hz, H-1b), 5,26 (1H, m, H-2), 4,26-4,29 (1H, m, H-3), 4,15-4,21 (1H, m, H4), 5,43-5,54 (2H, m, H-8,H-9), 0,85 (3H, t, J = 6,5 Hz, H-18), 4,55-4,57 (1H, m, H-2), 0,85 (3H, t, J = 6,5 Hz, H-16), 4,93 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-1), 4,00 (1H, t, J = 8,0 Hz, H-2), 4,15-4,21 (2H, m, H-3, H-4), 3,85 (1H, m, H-5), 4,56 (1H, dd, J = 2,0 11,5 Hz, H-6a), 4,32 (1H, dd, J = 5,0 11,5 Hz, H-6b) 3.4 Hoạt tính sinh học hợp chất phân lập Phần trình bày phương pháp thử hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase thử hoạt tính độc tế bào dòng tế bào ung thư vú MCF-7 dòng tế bào ung thư gan HepG2 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Xác định cấu trúc hoá học hợp chất phân lập Phần trình bày chi tiết kết phân tích phổ xác định cấu trúc 21 hợp chất Dưới trình bày phần xác định cấu trúc hợp chất SS01 SS11 số hợp chất Hợp chất SS01 Phổ IR (MeOH), νmax, cm-1 (phụ lục 14a): cho mũi hấp thụ nhóm hydroxyl 3434; nhóm C=O 1714; nhóm C-O 1025 Phổ HR-ESI-MS (phụ lục 14b) cho mũi ion phân tử giả với m/z: [M-H]- = 363,1818 ứng với C20H27O6 (lý thuyết 363,1808, sai lệch 1,0 mmass), giúp xác định CTPT SS01 C20H28O6 18 Phổ 1H SS01 (phụ lục 14c) cho tín hiệu proton: olefin δH 5,04 (br s, H-17a) 5,00 (br s, H-17b) đặc trưng cho nhóm exo-methylen; nhóm methyl bậc ba δH 1,20 (s, H-18), 0,91 (s, H-20) proton mũi đôi δH 2,01 (d, J = 12,0 Hz, H-5) 3,43 (d, J = 11,5 Hz, H-6) đặc trưng cho proton ghép trans H-5 H-6 khung gibberellin[27] Ngoài ra, có proton oxymethin δH 4,19 (1H, m, H-2) 3,80 (1H, ddd, J = 3,5, 7,5 10,5 Hz, H-12) Phổ 13C kết hợp với DEPT (phụ lục 14d, 14e) cho thấy SS01 có 20 carbon: carbon carbonyl, carbon bậc bốn mang nối đôi, carbon methylen mang nối đôi, carbon oxymethin, carbon methin, carbon bậc bốn, carbon methylen carbon methyl Sự diện carbon carbonyl δC 179,8 (C-7), 180,2 (C-19) carbon methyl bậc ba δC 28,5 (C-18), 16,3 (C-20) carbon oxymethin giúp xác định SS01 diterpen C20-gibberellin mang nhóm hydroxy[48,56] Phổ COSY SS01 (phụ lục 14f) cho thấy tương quan proton H1α (δH 1,99), H-1β (δH 0,87), H-2 (δH 4,19), H-3α (δH 2,45) H-3β (δH 1,04); proton H-9 (δH 1,61), H-11α (δH 1,77-1,83), H-11β (δH 1,50), H-12 (δH 3,80), H-13 (δH 2,60) H-14 (δH 1,77-1,83), chứng tỏ nhóm hydroxy gắn vào aglycon vị trí C-2 C12 Phổ HMBC (phụ lục 14g) chứng minh lại thông qua tương tác proton H-1α, H-1β, H-3α H-3β với C-2 (δC 66,0); proton H-9 H-14 với C-12 (δC 73,4) Phổ ROESY (phụ lục 14h) cho thấy tương quan proton H-20 với H-2 H-12 giúp xác định cấu hình H-2 H-12 α đó, nhóm hydroxyl gắn vào carbon OH-2, OH-12 β Từ liệu phổ IR, HR-ESI-MS, NMR so sánh với tài liệu[48,56]; khẳng định SS01 2β,12β-dihydroxygibberellin Hình 4.18: Các tương tác COSY, HMBC, ROESY hợp chất SS01 19 Hình 4.19: Cấu trúc hợp chất SS01 Hợp chất SS11 Phổ IR (MeOH), νmax, cm-1 (phụ lục 13a): cho mũi hấp thụ nhóm hydroxyl 3450; nhóm C=C 1641; nhóm C-O 1078, 1040 Phổ HR-ESI-MS (phụ lục 13b) cho mũi ion phân tử giả với m/z: [M+Na]+ = 643,4160 ứng với C36H60O8Na (lý thuyết 643,4186, sai lệch 2,6 mmass), giúp xác định CTPT SS11 C36H60O8 Phổ 13C 1H SS11 (phụ lục 13c, 13d, 13e) gần giống với SS10 có 36 carbon, gồm phần glycosid carbon đường β-glucose (Glc) phần aglycon 30 carbon, nhiên SS11 bị carbon methylen thay vào carbon oxymethin δC 69,0 tương ứng với proton δH 3,99 (1H, ddd, J = 4,0, 10,5 11,0 Hz) cho thấy SS11 có aglycon betulin có nhóm hydroxy khung Phổ COSY SS11 (phụ lục 13f) cho thấy tương quan proton δH 3,99 với proton δH 0,91 (1H, d, J = 11,0 Hz, H-5), 1,62-1,68 (1H, m, H-7β) 1,57 (1H, dd, J = 11,5 12,0 Hz, H-7α) Thêm nữa, phổ HMBC (phụ lục 4.11) cho thấy proton δH 0,91 (H-5), 1,62-1,68 (H-7β) 1,57 (H-7α) tương tác với carbon δC 69,0 nên carbon C-6 proton δH 3,99 H-6, nhóm hydroxy gắn vào aglycon vị trí C-6 Với số ghép cặp Jaa = 10,5 11,0 Hz Jae = 4,0 Hz proton oxymethin δH 3,99 (H-6) giúp xác định cấu hình H-6 axial (hay β) Hơn nữa, phổ ROESY SS11 (phụ lục 13g) cho thấy tương quan H-24 (δH 1,05), H-25 (δH 0,94), H-26 (δH 1,16) tương quan với H-6 (δH 3,99) chứng minh lại cấu hình H-6 β đó, nhóm hydroxy gắn vào carbon C-6 α Ngoài ra, phổ ROESY cho thấy proton H-3 (δH 3,13) với H-5 (δH 0,91) H-23 (δH 1,38), proton H-19 (δH 2,43-2,44) với H-28 (δH 3,75, H-28a 3,29-3,31, H-28b), xác nhận cấu hình H-3 α H-19 β với cấu hình aglycon betulin 20 Phổ HMBC (phụ lục 13h) cho thấy proton anomer δH 4,33 (H-1) tương tác với carbon oxymethin δC 90,9 (C-3); chứng tỏ đường Glc gắn vào aglycon vị trí C-3 giống SS10 Từ liệu phổ IR, HR-ESI-MS, NMR so sánh với tài liệu[96]; khẳng định SS11 3-O--D-glucopyranosyl-6α-hydroxybetulin, đặt tên Scheffleraside D Hình 4.16: Các tương tác COSY, HMBC, ROESY hợp chất SS11 Hình 4.17: Cấu trúc hợp chất SS11 Tổng hợp hợp chất phân lập được: R1=R2=R3=H R1=GlcA R2=R3=H R1=GlcA R2=H R3=OH R1=[Rha(13)]GlcA R2=H R3= H Acid oleanolic (SS06) Scheffleraside I (SS12) loài S sessiliflora Copteroside B (SS13) loài S sessiliflora Acid 3-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(13)]--Dglucuronopyranosyloleanolic (SS17) chi Schefflera 21 R1=[Rha(13)]GlcA R2=H R3= CH2OH R1=GlcA R2=Glc R3=H R1=6-O-MeGlcA R2=Glc R3=H R1=[Xyl(12)]-6-OMeGlcA R2=Glc R3=H R1=6-O-MeGlcA R2=[Rha(14)]Glc R3=H R1=[Rha(13)]-6-OMeGlcA R2=[Rha(14)]Glc R3=H R1=[Rha(13)]GlcA R2=[Rha(14)]Glc R3=H 3-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(13)]- -Dglucuronopyranosylhederagenin (SS18) chi Schefflera Chikusetsusaponin IVa (SS19) chi Schefflera Chikusetsusaponin IVa methyl ester (SS14) chi Schefflera Pseudoginsenoside RT1 methyl ester (SS15) chi Schefflera 3-O--D-(6-O-methyl)glucuronopyranosyloleanolic 28-O-[α-Lrhamnopyranosyl-(14)]--D-glucopyranosyl ester (Scheffleraside C, SS16) chất 3-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(13)]- -D-(6-Omethyl)glucuronopyranosyloleanolic 28-O-[α-Lrhamnopyranosyl-(14)]--D-glucopyranosyl ester (Scheffleraside B, SS20) chất 3-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(13)]- -Dglucuronopyranosyloleanolic 28-O-[α-L-rhamnopyranosyl(14)]--D-glucopyranosyl ester (Scheffleraside A, SS21) chất R=H 3-O--D-glucopyranosylbetulin (SS10) tự nhiên R=OH 3-O--D-glucopyranosyl-6α-hydroxybetulin (Scheffleraside D, SS11) chất R=COOH 3-O-β-D-glucuronopyranosylkaempferol Schefflera (SS03) R= CH2O-(p-transtrans-tiliroside (SS02) chi Schefflera coumaroyl) chi 22 2β,12β-dihydroxygibberellin (SS01) chất Acid 5-p-trans-coumaroylquinic (SS04) chi Schefflera (SS05) chi Schefflera -D-glucopyranosylstigmasterol (SS07) 3-O- loài S sessiliflora 1-O-β-D-glucopyranosyl-(2S,3S,4R,8E)-2-[(2R)-2-hydroxypalmitoylamino]octadec-8-en-1,3,4-triol 1-O-β-D-glucopyranosyl-(2S,3S,4R,8Z)-2-[(2R)-2hydroxypalmitoylamino]-octadec-8-en-1,3,4-triol (SS08) chi Schefflera muối natri (2S)-1,2-di-O-palmitoyl-3-O-α-D-(6sulfo)quinovopyranosylglycerol (SS09) chi Schefflera 4.2 Hoạt tính sinh học hợp chất phân lập Hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase Kết thử hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase hợp chất phân lập từ chân chim không cuống trình bày Bảng 4.2 23 Bảng 4.2: Tóm tắt kết hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase hợp chất STT Mẫu 10 11 12 13 14 SS01 SS02 SS03 SS04 SS06 SS07 SS10 SS11 SS12 SS13 SS14 SS15 SS16 SS17 15 SS19 16 17 SS20 SS21 18 SS18 19 Acarbose 250 µM 41,5 ± 2,2 76,40 ± 0,82 96,88 ± 0,74 31,33 ± 0,90 63,4 ± 1,8 Phần trăm ức chế (%) IC50(µM) 100 µM 50 µM 25 µM 10 µM 13,81 ± 0,94 > 250 42,1 ± 1,9 10,53 ± 0,53 134,6 28,6 ± 1,2 147,1 18,3 ± 1,9 9,6 ± 1,6 > 250 11,2 ± 1,6 > 250 89,3 ± 1,7 83,27 ± 0,74 21,6 ± 1,7 7,2 ± 1,9 33,15 94,46 ± 0,74 40,7 ± 1,8 56,35 > 250 91,8 ± 1,4 72,7 ± 1,8 50,4± 1,5 31,1 ±1,9 21,74 98,09 ± 0,56 89,1 ± 1,0 46,95 ± 0,48 9,80 > 250 11,24 ± 0,64 > 250 58,6 ± 2,0 36,7 ± 1,3 7,7 ± 1,7 76,58 86,7 ± 0,7 60,3 ± 1,5 39,2 ± 1,6 17,81 41,3 ± 1,5 20,80 ± 0,96 15,4 ± 1,1 - 159,1 91,24 ± 0,74 73,5 ±1,4 18,2 ±2,1 Phần trăm ức chế (%) 10 (µM) ( µM) 2,5 ( µM) 18,17 ± 73,68 ± 0,20 36,5 ± 1,2 0,96 - > 250 40,60 ( µM) - IC50(µM) 5,99 214.50 Đã thử nghiệm tất 18 hợp chất có đến 11 hợp chất có hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase hợp chất SS18 (3-O-[α-L-rhamnopyranosyl(13)]- -D-glucuronopyranosylhederagenin) có hoạt tính ức chế enzyme αglucosidase mạnh với IC50 = 5,99 µM mạnh gấp 35 lần so với đôi chứng dương acarbose với IC50 = 214,50 µM Hoạt tính gây độc tế bào Kết thử hoạt tính gây độc tế bào hợp chất phân lập từ chân chim không cuống nồng độ 100 µg/mL dòng tế bào ung thư 24 vú (MCF-7) tế bào ung thư gan (HepG2) (phụ lục 22) trình bày Bảng 4.3 Bảng 4.3: Kết hoạt tính gây độc tế bào hợp chất Mẫu SS01 SS11 SS16 SS20 SS21 Camptothecin* Phần trăm gây độc tế bào (%) tế bào MCF-7 tế bào HepG2 -5,32 ± 1,73 3,49 ± 4,78 -8,59 ± 5,57 63,83 ± 2,04 -19,54 ± 5,15 67,92 ± 0,82 -17,67 ± 1,67 53,95 ± 0,80 -4,08 ±14,99 -13,04 ± 2,25 47,56 ± 0,65 56,96 ± 1,61 *nồng độ thử 0,01 µg/mL dòng MCF-7 0,07 µg/mL dòng HepG2 Kết cho thấy hợp chất SS11 (scheffleraside D), SS16 (scheffleraside C) SS20 (scheffleraside B) có hoạt tính gây độc dòng tế bào ung thư vú MCF-7 nồng độ 100 µg/mL với phần trăm gây độc tế bào 63,83, 67,92 53,95 % 4.3 Nhận xét chung Về thành phần hóa học chân chim không cuống S sessiflora chủ yếu triterpenoid saponin có khung aglycon acid oleanolic hederagenin phổ biến loài khác chi Schefflera Tuy nhiên triterpenoid saponin loài S sessiflora có phần glycosid đường L-rhamnose gắn vị trí C-4 đường D-glucose đem lại mẻ cấu trúc so với triterpenoid saponin phân lập loài khác chi Schefflera Ngoài ra, lần phát nhóm triterpenoid saponin có aglycon betulin 6α-hydroxybetulin chi Schefflera loài khác như: S divaricata, S leucantha, S octophylla, S venulosa S rotundifolia aglycon thường gặp acid 3epibetulinic acid betulinic; loài S arboricola lại có aglycon 6α,20dihydroxybetulin 29-hydroxybetulin Đây lần phát chi Schefflera nhóm hợp chất diterpenoid với khung sườn gibberellin – phytohormon 2β,12β-dihydroxygibberellin (SS01) Lần phát chi Schefflera nhóm hợp chất glycolipid dạng dẫn xuất glycerol phytosphingolipid loài S octophylla lipid dạng dẫn xuất acid 3α-hydroxylup-20(29)-en-23,28-dioic Về hoạt tính ức chế ức chế enzyme α-glucosidase hợp chất phân lập từ loài S sessiflora cho thấy triterpenoid saponin có khung aglycon hederagenin có hoạt tính ức chế mạnh triterpenoid saponin có khung 25 aglycon acid oleanolic (SS13 > SS12, SS18 > SS17) Ngoài ra, hợp chất triterpenoid saponin có glycosid acid glucuronic dạng tự lại có hoạt tính mạnh triterpenoid saponin có glycosid methyl ester acid glucuronic (SS19 > SS14, SS21 > SS20) Hơn nữa, gắn thêm đơn vị đường rhamnose vị trí C-3 acid glucuronic triterpenoid saponin có glycosid acid glucuronic dạng tự làm cho hoạt tính tăng lên (SS17 > SS12, SS18 > SS13) đó, triterpenoid saponin có glycosid methyl ester acid glucuronic lại làm giảm hoạt tính (SS20 < SS16) Mặt khác, triterpenoid saponin có C-28 dạng acid tự có hoạt tính lớn triterpenoid saponin có gắn thêm đơn vị đường glucose vị trí C-28 (SS12 > SS19) Hình 4.31: Mối quan hệ cấu trúc triterpenoid phân lập từ loài S sessiflora hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase Về hoạt tính gây độc dòng tế bào ung thư vú MCF-7 hợp chất nồng độ 100 µg/mL cho thấy hợp chất triterpenoid saponin có glycosid methyl ester acid glucuronic lại có hoạt tính gây độc tế bào mạnh triterpenoid saponin có glycosid acid glucuronic dạng tự (SS20 > SS21) triterpenoid saponin hoạt tính gây độc dòng tế bào ung thư gan HepG2 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Từ chân chim không cuống Schefflera sessiliflora De P V trồng Đà Lạt, phương pháp sắc ký, phân lập 20 hợp chất hỗn hợp, 26 có hợp chất mới, hợp chất tự nhiên, 10 hợp chất hỗn hợp chưa phát trước từ chi Schefflera, hợp chất lần phân lập từ loài S sessiliflora hợp chất biết + chất là: 3-O- -D-(6-O-methyl)glucuronopyranosyloleanolic 28-O-[α-Lrhamnopyranosyl-(14)]--D-glucopyranosyl ester (Scheffleraside C, SS16), 3O-[α-L-rhamnopyranosyl-(13)]- -D-(6-O-methyl)glucuronopyranosyloleanolic 28-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(14)]- -D-glucopyranosyl ester (Scheffleraside B, SS20), 3-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(13)]- -D-glucuronopyranosyloleanolic 28-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(14)]- -D-glucopyranosyl ester (Scheffleraside A, SS21), 3-O- -D-glucopyranosyl-6α-hydroxybetulin (Scheffleraside D, SS11), 2β,12β-dihydroxygibberellin (SS01) + hợp chất tự nhiên là: 3-O- -D-glucopyranosylbetulin (SS10) + 10 hợp chất hỗn hợp chưa phát trước từ chi Schefflera là: acid 3-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(13)]- -D-glucuronopyranosyloleanolic (SS17), 3-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(13)]- -D-glucuronopyranosylhederagenin (SS18), Chikusetsusaponin IVa (SS19), Chikusetsusaponin IVa methyl ester (SS14), Pseudoginsenoside RT1 methyl ester (SS15), trans-Tiliroside (SS02), 3-Oβ-D-glucuronopyranosylkaempferol (SS03), Acid 5-p-trans-coumaroylquinic (SS04), Muối natri (2S)-1,2-di-O-palmitoyl-3-O-α-D-(6sulfo)quinovopyranosylglycerol (SS09), sn-1-monoacylglycerol sn-1,2diacylglycerol (SS05), 1-O-β-D-glucopyranosyl-(2S,3S,4R,8E)-2-[(2R)-2hydroxypalmitoylamino]-octadec-8-en-1,3,4-triol 1-O-β-D-glucopyranosyl(2S,3S,4R,8Z)-2-[(2R)-2-hydroxypalmitoylamino]-octadec-8-en-1,3,4-triol (SS08) + hợp chất lần phân lập từ loài S sessiliflora là: Scheffleraside I (SS12), Copteroside B (SS13), 3-O- -D-glucopyranosylstigmasterol (SS07) + hợp chất biết: Acid oleanolic (SS06) Lần phát chi Schefflera có nhóm triterpenoid saponin có phần aglycon betulin 6α-hydroxybetulin (SS10, SS11), loài khác acid 3-epibetulinic, acid betulinic, 6α,20-dihydroxybetulin 29hydroxybetulin Lần phát chi Schefflera có nhóm hợp chất diterpenoid có khung gibberellin (SS01) 27 Lần phát chi Schefflera có nhóm hợp chất glycolipid dạng dẫn xuất glycerol phytosphingolipid (SS05, SS08, SS09), loài S heptaphylla lipid dạng dẫn xuất acid 3α-hydroxylup20(29)-en-23,28-dioic Đã thử nghiệm hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase 18 hợp chất Kết cho thấy 11 hợp chất có hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase hợp chất 3-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(13)]- -D-glucuronopyranosylhederagenin (SS18) có hoạt tính mạnh (IC50 = 5,99 µM) Đã thử nghiệm hoạt tính gây độc tế bào hợp chất dòng tế bào ung thư vú (MCF-7) tế bào ung thư gan (HepG2) Kết cho thấy hợp chất Scheffleraside B (SS20), Scheffleraside C (SS16), Scheffleraside D (SS11) có hoạt tính gây độc dòng tế bào ung thư vú MCF-7 nồng độ 100 µg/mL (phần trăm gây độc tế bào 53,95, 67,92 63,83 %) Kiến nghị Tiếp tục nghiên cứu thành phần hóa học phận khác chân chim không cuống thử nghiệm thêm số hoạt tính sinh học khác DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ Trong nước Nguyễn Tấn Phát, Lê Thị Việt Hoa, Mai Đình Trị, Lê Tiến Dũng, Phan Nhật Minh, Bùi Trọng Đạt (2014), Scheffleraside A, triterpen saponin từ chân chim không cuống Schefflera sessiliflora De P V., Tạp chí Khoa học & Công nghệ, 52(5A), 191-196 Nguyễn Tấn Phát, Lê Thị Việt Hoa, Mai Đình Trị, Lê Tiến Dũng, Phan Nhật Minh, Bùi Trọng Đạt (2015), Các glucuronid triterpen saponin từ chân chim không cuống Schefflera sessiliflora De P V hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase, Hội thảo khoa học kỷ niệm 40 năm thành lập Viện Hàn lâm KH&CN Việt Nam, 275-279 Nguyễn Tấn Phát Nguyễn Đức Hưng, Phan Nhật Minh, Bùi Trọng Đạt, Lê Tiến Dũng, Mai Đình Trị (2015), Các ester acid béo từ chân chim không cuống Schefflera sessiliflora De P V., Tạp chí Hóa học, 53(6e1,2), 241-245 Nguyễn Tấn Phát, Lê Thị Việt Hoa, Mai Đình Trị, Lê Tiến Dũng, Phan Nhật Minh, Bùi Trọng Đạt (2015), Các oleanan lupan triterpen saponin từ chân chim không cuống Schefflera sessiliflora De P V., Tạp chí Hóa học, 53(6e1,2), 401-405 28 Nguyễn Tấn Phát, Lê Thị Việt Hoa, Mai Đình Trị, Lê Tiến Dũng, Phan Nhật Minh, Ngô Trọng Nghĩa, Bùi Trọng Đạt (2016), Các glucuronid triterpen saponin từ chân chim không cuống Schefflera sessiliflora De P V hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase, Tạp chí Hóa học, 54(2e), 96-100 Ngoài nước Nguyen Tan Phat, Le Thi Viet Hoa, Mai Dinh Tri, Le Tien Dung, Phan Nhat Minh, Bui Trong Dat (2015), Two new oleanane-type triterpen saponins from the leaves of Schefflera sessiliflora De P V., Phytochemistry Letters, 11, 102-105 Tan Phat Nguyen, Thi Thao Vy Tran, Dinh Tri Mai, Tien Dung Le, Nhat Minh Phan, Trong Dat Bui (2015), New C20-gibberellin diterpene from the leaves of Schefflera sessiliflora De P V., Natural Product Research, 29(15), 1432-1436 Nguyen Tan Phat , Le Tien Dung, Phan Nhat Minh, Bui Trong Dat, Mai Dinh Tri (2015), Triterpen saponins with α-glucosidase inhibition and cytotoxic activity from the leaves of Schefflera sessiliflora, Journal of Asian Natural Products Research, 18(6), 542-549 [...]... (1H, dd, J = 2,0 v 11,5 Hz, H-6a), 4,32 (1H, dd, J = 5,0 v 11,5 Hz, H-6b) 3.4 Hoạt tính sinh học của các h p chất phân l p được Phần này trình bày phương ph p thử hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase v thử hoạt tính độc tế bào dòng tế bào ung thư v MCF-7 v dòng tế bào ung thư gan HepG2 CHƯƠNG 4 KẾT QUẢ V THẢO LUẬN 4.1 Xác định cấu trúc hoá học các h p chất phân l p được Phần này trình bày... gan HepG2 KẾT LUẬN V KIẾN NGHỊ Kết luận 1 Từ lá chân chim không cuống quả Schefflera sessiliflora De P V được trồng tại Đà Lạt, bằng các phương ph p sắc ký, đã phân l p được 20 h p chất v 1 hỗn h p, 26 trong đó có 5 h p chất mới, 1 h p chất mới trong tự nhiên, 10 h p chất v 1 hỗn h p chưa được phát hiện trước đây từ chi Schefflera, 3 h p chất lần đầu tiên phân l p từ loài S sessiliflora v 1 h p chất... Các ester của acid béo từ lá chân chim không cuống quả Schefflera sessiliflora De P V. , T p chí Hóa học, 53(6e1,2), 241-245 4 Nguyễn Tấn Phát, Lê Thị Việt Hoa, Mai Đình Trị, Lê Tiến Dũng, Phan Nhật Minh, Bùi Trọng Đạt (2015), Các oleanan v lupan triterpen saponin từ lá chân chim không cuống quả Schefflera sessiliflora De P V. , T p chí Hóa học, 53(6e1,2), 401-405 28 5 Nguyễn Tấn Phát, Lê Thị Việt Hoa,... hoạt tính gây độc tế bào của 5 h p chất mới trên 2 dòng tế bào ung thư v (MCF-7) v tế bào ung thư gan (HepG2) Kết quả cho thấy 3 h p chất là Scheffleraside B (SS20), Scheffleraside C (SS16), Scheffleraside D (SS11) có hoạt tính gây độc trên dòng tế bào ung thư v MCF-7 ở nồng độ 100 µg/mL (phần trăm gây độc tế bào lần lượt là 53,95, 67,92 v 63,83 %) Kiến nghị Ti p tục nghiên cứu thành phần hóa học. .. H-13 (δH 2,60) v H-14 (δH 1,77-1,83), chứng tỏ 2 nhóm hydroxy gắn v o aglycon ở v trí C-2 v C12 Phổ HMBC (phụ lục 14g) cũng chứng minh lại thông qua các tương tác giữa 4 proton H-1α, H-1β, H-3α v H-3β v i C-2 (δC 66,0); giữa 4 proton H-9 v H-14 v i C-12 (δC 73,4) Phổ ROESY (phụ lục 14h) cho thấy sự tương quan giữa proton H-20 v i H-2 v H-12 gi p xác định cấu hình của H-2 v H-12 là α v do đó, 2... B) có hoạt tính gây độc trên dòng tế bào ung thư v MCF-7 ở nồng độ 100 µg/mL v i phần trăm gây độc tế bào lần lượt là 63,83, 67,92 v 53,95 % 4.3 Nhận xét chung V thành phần hóa học của cây chân chim không cuống quả S sessiflora chủ yếu là triterpenoid saponin có khung aglycon là acid oleanolic v hederagenin rất phổ biến ở các loài khác trong chi Schefflera Tuy nhiên các triterpenoid saponin của loài... proton ở δH 0,91 (H-5), 1,62-1,68 (H-7β) v 1,57 (H-7α) cùng tương tác v i carbon ở δC 69,0 nên carbon này là C-6 v proton ở δH 3,99 là H-6, v y nhóm hydroxy gắn v o aglycon ở v trí C-6 V i hằng số gh p c p Jaa = 10,5 v 11,0 Hz v Jae = 4,0 Hz của proton oxymethin ở δH 3,99 (H-6) gi p xác định cấu hình của H-6 là axial (hay β) Hơn nữa, phổ ROESY của SS11 (phụ lục 13g) cho thấy sự tương quan giữa... thành phần hóa học ở các bộ phận khác của cây chân chim không cuống quả v thử nghiệm thêm một số hoạt tính sinh học khác DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ Trong nước 1 Nguyễn Tấn Phát, Lê Thị Việt Hoa, Mai Đình Trị, Lê Tiến Dũng, Phan Nhật Minh, Bùi Trọng Đạt (2014), Scheffleraside A, triterpen saponin mới từ lá chân chim không cuống quả Schefflera sessiliflora De P V. , T p chí Khoa học & Công nghệ,... chi tiết kết quả phân tích phổ v xác định cấu trúc của 21 h p chất Dưới đây trình bày phần xác định cấu trúc của 2 h p chất mới là SS01 v SS11 trong số 5 h p chất mới H p chất SS01 Phổ IR (MeOH), νmax, cm-1 (phụ lục 14a): cho các mũi h p thụ của nhóm hydroxyl ở 3434; nhóm C=O ở 1714; nhóm C-O ở 1025 Phổ HR-ESI-MS (phụ lục 14b) cho mũi ion phân tử giả v i m/z: [M-H]- = 363,1818 ứng v i C20H27O6 (lý... 52(5A), 191-196 2 Nguyễn Tấn Phát, Lê Thị Việt Hoa, Mai Đình Trị, Lê Tiến Dũng, Phan Nhật Minh, Bùi Trọng Đạt (2015), Các glucuronid triterpen saponin từ lá chân chim không cuống quả Schefflera sessiliflora De P V v hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase, Hội thảo khoa học kỷ niệm 40 năm thành l p Viện Hàn lâm KH&CN Việt Nam, 275-279 3 Nguyễn Tấn Phát Nguyễn Đức Hưng, Phan Nhật Minh, Bùi Trọng Đạt,