Nghiên cứu tái sinh giống cây chùm ngây (moringa oleifera l ) chất lượng cao bằng kỹ thuật in vitro

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM o0o LĂNG VĂN HOÀNG Tên đề tài: NGHIÊN CỨU TÁI SINH GIỐNG CÂY CHÙM NGÂY (Moringa oleifera L.) CHẤT LƢỢNG CAO BẰNG KỸ THUẬT IN VITRO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo Chuyên ngành Lớp Khoa Khóa học : : : : : Chính quy Công nghệ sinh học K43 - CNSH CNSH – CNTP 2011 - 2015 Thái Nguyên, năm 2015 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM o0o LĂNG VĂN HOÀNG Tên đề tài: NGHIÊN CỨU TÁI SINH GIỐNG CÂY CHÙM NGÂY (Moringa oleifera L.) CHẤT LƢỢNG CAO BẰNG KỸ THUẬT IN VITRO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành : Công nghệ sinh học Lớp : K43 - CNSH Khoa : CNSH – CNTP Khóa học : 2011 – 2015 Giảng viên HD : ThS Dƣơng Mạnh Cƣờng Khoa CNSH – CNTP, Trƣờng ĐHNL Thái Nguyên ThS Lê Thị Hảo Viện Khoa học Sự sống – Trƣờng ĐHNL Thái Nguyên Thái Nguyên, năm 2015 i LỜI CẢM ƠN Để hoàn thiện đề tài khóa luận em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến thầy giáo Dương Mạnh Cường khoa CNSH CNTP tất thầy cô giáo khoa tận tình bảo, giúp đỡ hướng dẫn em thời gian thực đề tài Em xin cảm ơn Ths Lê Thị Hảo anh chị khu công nghệ tế bào, Viện Khoa học Sự Sống tạo điều kiện, giúp đỡ, bảo cho em Cuối cùng, em xin cảm ơn gia đình, bạn bè động viên, giúp đỡ tạo điều kiện vật chất tinh thần cho em trình học tập nghiên cứu Em xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, tháng năm 2015 Sinh viên Lăng văn Hoàng ii DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 2.1 phân tích hàm lượng dinh dưỡng Chùm Ngây Bảng 4.1: Kết nghiên cứu ảnh hưởng dung dịch H2O2 (20%) đến khả vô trùng mẫu Chùm Ngây (sau 15 ngày nuôi cấy) 27 Bảng 4.2: Kết ảnh hưởng HgCl2 (0,1%) đến khả vô trùng mẫu Chùm Ngây (sau 15 ngày nuôi cấy) 29 Bảng 4.3: Kết nghiên cứu ảnh hưởng thời gian khử trùng kép sử dụng kết hợp dung dịch H2O2 (20%) viên khử trùng Johnson (2,5 mg/l) đến khả vô trùng mẫu Chùm Ngây (sau 15 ngầy nuôi cấy) 31 Bảng 4.4: Kết ảnh hưởng nồng độ kinetin đến khả tái sinh chồi Chùm Ngây (sau 20 ngày nuôi cấy) 33 Bảng 4.5: Kết ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả tái sinh chồi Chùm Ngây (sau 20 ngày nuôi cấy) 35 Bảng 4.6: Kết ảnh hưởng kết hợp nồng độ BAP IAA đến hiệu tái sinh chồi Chùm Ngây (sau 20 ngày nôi cấy) 37 Bảng 4.7: Kết ảnh hưởng kết hợp BAP IBA đến hiệu tái sinh chồi Chùm Ngây (sau 20 ngày nuôi cấy) 39 iii DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 2a: Hoa Chùm Ngây Hình 2b: Quả Chùm Ngây Hình 2c: Hạt Chùm Ngây Hình 2d: Cây Chùm Ngây Hình 2e Sơ đồ giai đoạn phân hóa tế bào 11 Hình 4.1: Biểu đồ thể ảnh hưởng dung dịch H2O2 (20%) đến khả vô trùng mẫu Chùm Ngây (sau 15 ngày nuôi cấy) 28 Hình 4.2: Biểu đồ thể ảnh hưởng HgCl2 (0,1%) đến khả vô trùng mẫu Chùm Ngây (sau 15 ngày nuôi cấy) .30 Hình 4.3: Biểu đồ thể ảnh hưởng thời gian khử trùng kép sử dụng kết hợp dung dịch H2O2 (20%) viên khử trùng Johnson (2,5 mg/l) đến khả vô trùng mẫu Chùm Ngây (sau 15 ngày nuôi cấy) .32 Hình 4.4a: Biểu đồ thể ảnh hưởng nồng độ kinetin đến khả tái sinh chồi Chùm Ngây (Sau 20 ngày nuôi cấy) .34 Hình 4.4b: Hình ảnh thể ảnh hưởng nồng độ kinetin đến khả tái sinh chồi Chùm Ngây (sau 20 ngày nuôi cấy) 34 Hình 4.5a: Biểu đồ thể ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả tái sinh hồi Chùm Ngây (sau 20 ngày nuôi cấy) 36 Hình 4.5b: Hình ảnh thể ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả tái sinh chồi Chùm Ngây (sau 20 ngày nuôi cấy) 36 Hình 4.6a: Biểu đồ thể ảnh hưởng kết hợp nồng độ BAP IAA đến hiệu tái sinh chồi Chùm Ngây (sau 20 ngày nuôi cấy) 38 Hình 4.6b: Hình ảnh thể ảnh hưởng kết hợp nồng độ BAP IAA đến hiệu tái sinh chồi Chùm Ngây (sau 20 ngày nuôi cấy) 38 iv Hình 4.7a: Biểu đồ thể ảnh hưởng kết hợp BAP IBA đến hiệu tái sinh chồi Chùm Ngây (sau 20 ngày nuôi cấy) 40 Hình 4.7b: Hình ảnh thể ảnh hưởng kết hợp BAP IBA đến hiệu tái sinh chồi Chùm Ngây (sau 20 ngày nuôi cấy) 40 v DANH MỤC CÁC CỤM TỪ VIẾT TẮT 2,4 D : 2,4 Diclorophenoxy acetic acid BA : 6-Benzylaminopurine Cs : Cộng CT : Công thức CV : Coeficient of Variation Đ/c : Đối chứng GA3 : Gibberellic acid IAA : Indole-3-acetic acid IBA : Indole butyric acid Kinetin : 6-Furfurylaminopurine LSD : Least Singnificant Difference Test MS : Murashige & Skoog (1962) MT : Môi trường NAA : α-naphthlene acetic acid TDZ : Thidiazuron vi MỤC LỤC Trang PHẦN 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích đề tài 1.3 Yêu cầu đề tài 1.4 Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn đề tài 1.4.1 Ý nghĩa khoa học 1.4.2 Ý nghĩa thực tiễn PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu chung Chùm Ngây 2.1.1 Đặc điểm thực vật học Chùm Ngây 2.1.2 Phân bố 2.1.3 Phân loại 2.1.4 Giá trị Chùm Ngây 2.2 Khái quát nuôi cấy mô tế bào thực vật 10 2.2.1 Khái niệm nuôi cấy mô tế bào thực vật .10 2.2.2 Cơ sở khoa học phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật 10 2.3 Một số yếu tố ảnh hưởng đến trình nuôi cấy mô tế bào thực vật 12 2.3.1 Vật liệu nuôi cấy .12 2.3.2 Điều kiện vô trùng 12 2.3.3 Môi trường hóa học 12 2.3.4 Môi trường vật lý .16 2.4 Các giai đoạn nuôi cấy mô tế bào thực vật 17 2.4.1 Giai đoạn chuẩn bị 17 2.4.2 Tái sinh mẫu nuôi cấy 18 2.4.3 Giai đoạn nhân nhanh chồi 18 vii 2.4.4 Tạo hoàn chỉnh 18 2.4.5 Chuyển in vitro vườn ươm 18 2.5 Tình hình nghiên cứu Chùm Ngây nước giới 19 2.5.1 Tình hình nghiên cứu Chùm Ngây giới 19 2.5.2 Tình hình nghiên cứu nước 20 PHẦN 3: VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 3.1 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 21 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu 21 3.1.2 Phạm vi nghiên cứu 21 3.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 21 3.2.1.Địa điểm nghiên cứu 21 3.2.2 Thời gian nghiên cứu 21 3.3 Nội dung nghiên cứu .21 3.4 Phương pháp nghiên cứu 22 3.4.1 Nghiên cứu ảnh hưởng số chất khử trùng (H202, HgCl2) đến khả vô trùng mẫu Chùm Ngây .22 3.4.2 Nội dung 2: Nghiên cứu ảnh hưởng số chất điều tiết sinh trưởng đến khả tái sinh chồi Chùm Ngây 24 3.5 Xử lý số liệu 26 PHẦN 4: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 27 4.1 Kết ảnh hưởng hóa chất khử trùng đến khả vô trùng mẫu Chùm Ngây .27 4.1.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng HgCl2 (0,1%) đến khả vô trùng mẫu Chùm Ngây 29 4.1.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng kết hợp dung dịch H2O2 (20%) viên khử trùng Johnson (2,5 mg/l) đến khả vô trùng mẫu Chùm Ngây 31 viii 4.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng đến khả tái sinh chồi Chùm Ngây 33 4.2.1 Kết ảnh hưởng nồng độ kinetin đến khả tái sinh chồi Chùm Ngây .33 4.2.2 Kết ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả tái sinh chồi Chùm Ngây 35 4.2.3 Kết ảnh hưởng kết hợp nồng độ BAP IAA đến hiệu tái sinh chồi Chùm Ngây 37 4.2.4 Kết ảnh hưởng kết hợp BAP IBA đến hiệu tái sinh chồi Chùm Ngây 39 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 42 5.1 Kết luận 42 5.2 Kiến nghị 42 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC 42 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Công thức khử trùng vật liệu mẫu cấy tốt sử dụng dung dịch H2O2 20 % 17 phút kết hợp với viên khử trùng Johnson (2,5 mg/l) 10 phút cho tỷ lệ mẫu đạt 75,56% Với môi trường môi trường MS + 30g/l sucrose + 6g/l agar + 0,1mg/l myo inositol nồng độ chất điều tiết sinh trưởng phù hợp cho tái sinh chồi BAP 1,0 mg/l kết hợp với IAA 0,4 mg/l cho tỷ lệ bật chồi 93,33%, hệ số bật chồi 5,57 lần, chất lượng chồi tốt, chồi mập, xanh, cao, 5.2 Kiến nghị - Tiếp tục nghiên cứu ảnh hưởng chất khử trùng đến khả vô trùng mẫu Chùm Ngây - Tiếp tục nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng khác tới khả năng, nhân nhanh rễ Chùm Ngây (moringa oleifera), hoàn thiện quy trình nhân giống Chùm Ngây - Tách chiết nghiên cứu tác dụng hợp chất Chùm Ngây (moringa oleifera) - Đưa quy trình nhân giống Chùm Ngây vào thực tế sản xuất quy mô công nghiệp cung cấp giống với số lượng lớn cho thị trường nước TÀI LIỆU THAM KHẢO I TIẾNG VIỆT Nguyễn Tiến Bân (2003) Danh mục loài thực vật Việt Nam Tập II Hà Nội: Nxb Nông nghiệp tr 425 Ngô Xuân Bình, Bùi Bảo Hoàn, Nguyễn Thúy Hà (2003) Giáo trình công nghệ sinh học Nxb Nông nghiệp Hà Nội Lê Trần Bình, Hồ Hữu Nhi, Lê Thị Muội (1997) Công nghệ sinh học thực vật cải tiến giống rừng Nxb Nông nghiệp Lê Văn Chi (1992) Cách sử dụng chất điều hòa sinh trưởng vi lượng hiệu cao Nxb Khoa học- Kĩ thuật, Hà Nội Võ Văn Chi (1999) Tự điển thuốc Việt Nam, Nxb Y Học, trang 248 Trịnh Đình Đạt (2009) công nghệ sinh học (công nghệ di truyền) tập 4, Nxb Giáo dục Dương Mậu Hùng, Lê Đình Khả (2003) Giáo trình giống rừng Nxb Nông nghiệp Nguyễn Như Khanh, Nguyễn Văn Đính (2011) Giáo trình chất điều hòa sinh trưởng thực vật Nxb Giáo dục Việt Nam Nguyễn Hoàng Lộc(2006) giáo trình công nghệ tế bào Nxb đại học Huế, Tp.Huế 10 Đỗ Tất Lợi (2014) Những thuốc vị thuốc Việt Nam Nxb Y học, Hà Nội 11 Trần Thị Lệ, Trương Thị Bích Phượng, Trần Thị Hà (2008) Giáo trình Công nghệ sinh học thực vật Nxb Nông nghiệp, Hà Nội 12 Đoàn thị mai cộng (2000) Kết bước đầu nhân giống Bạch đàn lai phương pháp nuôi cấy mô phân sinh Tr 46-47 13 Nguyễn Huy Sơn, Nguyễn Tuấn Hưng (2006) Kết bước đầu chọn giống nhân giống vô tính Hồi (Illicium verum Hook.F) Trung tâm nghiên cứu Lâm đặc sản - viện khoa học Lâm nghiệp Việt Nam 14 Hoàng Thị Sản (2009) Phân loại thực vật Nxb Giáo dục 15 Nguyễn Kim Thanh, Nguyễn Thuận Châu (2005) Giáo trình sinh lý học thực vật Nxb Giáo dục, Hà Nội 16 Trần văn Tiến (2013) Nghiên cứu nhân nhanh giống chùm ngây (Moringa Oleifera) chất lượng cao kĩ thuật nuôi cấy mô, luận văn thạc sĩ, trường đại học Sư Phạm Thái Nguyên 17 Vũ Văn Vụ, Nguyễn Mộng Hùng, Lê Hồng Điệp (2009) Công nghệ sinh học tập 2-Công nghệ sinh học tế bào Nxb Giáo dục 18 Vũ Văn Vụ, Vũ Thanh Tâm, Hoàng Minh Tấn (2005) Sinh lý học thực vật Nxb Giáo Dục II TIẾNG ANH 19 Chuang B H., Lee C W., Chou J Y., Murugan M., Shieh B J., Chen H M (2007) Anti-fungal activity of crude extracts and essential oil of Moringa oleifera Lam Bioresource Technology 98 (1) 232-236 20 Eufrocinio C, Marfori (2010) Clonal micropropagation of Moringa oleifera L Philipp Agric scientist Vol 93(4): 454-457 21 Hatwll, J L (1967-1971) Plants used against cancer A survey Lloydia 22 Jed w.Fahey (2005) “Moriga oleifera: A Review of the Medical Evidence for Its Nutrtional Therapeutic, and prophylactic properties Part 1” Trees for life Journal 23 L J Fuglie (1999) Moringa: Natural Nutrition for the tropics Dakar: Church wold service 24 R Brossa, I Casals, M Pinto Marijuan (2008) Leaf flavonoid content in Quercus ilex L resprouts and its seasonal variation Tr 23 25 Rubeena saleem (1995) Study in the Chemical constituents of Moringa oieifera Lam, and prepaparation of potential biologically significant derivatives of 8-hydroxyquinoline H E J Research institute of chemistry university of Karachi Pakistan 26 Roland A Jansen (2012) Second Generation biojuels and biomass: Essential Guide for Investors, Scientists and Decision Makers John Wiley – sons Tr 95 27 Mehta K, Balaraman R, Amin A H, Bafna P A, Gulati O D (2003) Effect fryits of moringa oleifera on thr lipid profile of normal and hypercholesterolaemic rabbits 28 Manohar S.K, Gabertan H A (2008) In vitro Micropropagation of malunggay (moringa oleifera L.: a preliminary report Philippine Journal of crop Science 103 29 Wang hongfeng, Wei Qiang (2008) Establishment of regeneration system in vitro for Moringa oleifera with stem Journal of Zhejiang forestry science and technology PHỤ LỤC Phụ lục 1: kết xử lý số liệu Bảng 4.1: Kết ảnh hưởng dung dịch H2O2 (20%) đến khả vô trùng mẫu Chùm Ngây BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMS FILE H2O21 23/ 5/** 5:51 PAGE VARIATE V003 TLMS LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= T$ 7094.01 * RESIDUAL 1418.80 12 88.8007 191.73 0.000 7.40006 * TOTAL (CORRECTED) 17 7182.81 422.518 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE H2O21 23/ 5/** 5:51 PAGE MEANS FOR EFFECT T$ T$ NOS TLMS 3 28.8900 3 40.0000 51.1100 62.2233 46.6700 SE(N= 3) 0.000000 1.57057 5%LSD 12DF 4.83946 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE H2O21 23/ 5/** 5:51 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T$ (N= 18) SD/MEAN | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS | TLMS 18 38.149 20.555 2.7203 | | | | 7.1 0.0000 | Bảng 4.2: Kết ảnh hưởng Hgcl2 (0,1%) đến khả vô trùng mẫu Chùm Ngây BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMS FILE HGCL3 23/ 5/** 6:31 PAGE VARIATE V003 TLMS LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= T$ 4819.15 * RESIDUAL 963.830 12 29.6592 389.96 0.000 2.47160 * TOTAL (CORRECTED) 17 4848.81 285.224 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE HGCL3 23/ 5/** 6:31 PAGE MEANS FOR EFFECT T$ - T$ NOS TLMS 3 33.3300 3 40.0000 53.3300 37.7767 26.6700 SE(N= 3) 0.000000 0.907670 5%LSD 12DF 2.79684 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE HGCL3 23/ 5/** 6:31 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T$ (N= 18) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS | TLMS 18 31.851 16.889 1.5721 | | | 4.9 0.0000 | Bảng 4.3: Kết ảnh hưởng thời gian khử trùng kép sử dụng kết hợp dung dịch H2O2 (20%) viên khử trùng Johnson (2,5 mg/l) đến khả vô trùng mẫu Chùm Ngây BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMS FILE BAPJS 23/ 5/** 6:52 PAGE VARIATE V003 TLMS LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= T$ 753.114 * RESIDUAL 150.623 12 118.548 15.25 0.000 9.87902 * TOTAL (CORRECTED) 17 871.662 51.2742 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BAPJS 23/ 5/** 6:52 PAGE MEANS FOR EFFECT T$ - T$ NOS TLMS 62.2233 66.6700 3 68.8900 75.5533 60.0000 55.5533 SE(N= 3) 1.81466 5%LSD 12DF 5.59160 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BAPJS 23/ 5/** 6:52 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T$ (N= 18) SD/MEAN | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS | TLMS 18 64.815 7.1606 3.1431 | | | | 4.8 0.0001 | Bảng 4.4: Kết ảnh hưởng nồng độ kinetin đến khả tái sinh chồi Chùm Ngây BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMBC FILE L3KNT 23/ 5/** 15:23 PAGE VARIATE V003 TLMBC LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= T$ 10666.7 * RESIDUAL 2133.33 12 133.334 192.00 0.000 11.1112 * TOTAL (CORRECTED) 17 10800.0 635.294 - BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSBC FILE L3KNT 23/ 5/** 15:23 PAGE VARIATE V004 HSBC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= T$ 23.8894 * RESIDUAL 4.77789 ****** 0.000 12 199984E-01 166654E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 23.9094 1.40644 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE L3KNT 23/ 5/** 15:23 PAGE MEANS FOR EFFECT T$ - T$ NOS TLMBC 0.000000 HSBC 3 20.0000 0.833333 3 36.6667 1.53333 50.0000 2.20000 70.0000 3.16667 63.3333 3.10000 SE(N= 3) 1.92451 5%LSD 12DF 0.000000 0.235693E-01 5.93007 0.726250E-01 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE L3KNT 23/ 5/** 15:23 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T$ (N= 18) SD/MEAN | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS | TLMBC HSBC 18 40.000 18 1.8056 25.205 1.1859 3.3333 | | | | 8.3 0.0000 0.40823E-01 2.3 0.0000 | Bảng 4.5: Kết ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả tái sinh chồi Chùm Ngây BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMBC FILE L3BAP 23/ 5/** 15: PAGE VARIATE V003 TLMBC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= T$ 13294.4 2658.89 299.11 0.000 2R 44.4445 22.2222 2.50 0.131 * RESIDUAL 10 88.8920 8.88920 * TOTAL (CORRECTED) 17 13427.8 789.869 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSBC FILE L3BAP 23/ 5/** 15: PAGE VARIATE V004 HSBC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= T$ 50.6561 2R 444444E-02 222222E-02 1.43 0.285 * RESIDUAL 10.1312 ****** 0.000 10 155541E-01 155541E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 50.6761 2.98095 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE L3BAP 23/ 5/** 15: PAGE MEANS FOR EFFECT T$ - T$ NOS TLMBC 3 30.0000 1.06667 3 40.0000 2.06667 53.3333 3.00000 70.0000 4.43333 83.3333 4.60000 SE(N= 3) 5%LSD 10DF 0.000000 HSBC 1.72136 0.000000 0.227699E-01 5.42406 0.717489E-01 - MEANS FOR EFFECT R - R NOS TLMBC HSBC 45.0000 2.51667 45.0000 2.55000 48.3333 2.51667 SE(N= 6) 1.21718 5%LSD 10DF 0.161008E-01 3.83539 0.507341E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE L3BAP 23/ 5/** 15: PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T$ (N= 18) SD/MEAN | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS | TLMBC HSBC 18 46.111 18 2.5278 28.105 1.7265 2.9815 | | | | | | | 6.5 0.0000 0.1306 0.39439E-01 1.6 0.0000 0.2847 |R | Bảng 4.6: Kết ảnh hưởng kết hợp nồng độ BAP IAA đến hiệu tái sinh chồi Chùm Ngây BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLBC FILE 12 28/ 5/** 15:57 PAGE VARIATE V003 TLBC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= T$ 1027.78 * RESIDUAL 205.556 12 200.000 12.33 0.000 16.6667 * TOTAL (CORRECTED) 17 1227.78 72.2222 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSBC FILE 12 28/ 5/** 15:57 PAGE VARIATE V004 HSBC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= T$ 7.25111 * RESIDUAL 1.45022 237.31 0.000 12 733335E-01 611112E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 7.32444 430850 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 12 28/ 5/** 15:57 PAGE MEANS FOR EFFECT T$ - T$ NOS TLBC HSBC 83.3333 4.60000 70.0000 3.63333 3 80.0000 3.96667 86.6667 4.83333 93.3333 5.56667 90.0000 4.13333 SE(N= 3) 5%LSD 12DF 2.35702 0.451336E-01 7.26279 0.139072 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 12 28/ 5/** 15:57 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T$ (N= 18) SD/MEAN | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS | TLBC 18 83.889 8.4984 HSBC 18 4.4556 0.65639 4.0825 | | | | 4.9 0.0003 0.78174E-01 1.8 0.0000 | Bảng 4.7: Kết ảnh hưởng kết hợp nồng độ BAP IBA đến hiệu tái sinh chồi Chùm Ngây BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLBC FILE BB 28/ 5/** 16:34 PAGE VARIATE V003 TLBC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T$ 1161.11 232.222 13.93 0.000 * RESIDUAL 12 200.000 16.6667 * TOTAL (CORRECTED) 17 1361.11 80.0654 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSBC FILE BB 28/ 5/** 16:34 PAGE VARIATE V004 HSBC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T$ 6.65111 1.33022 21.19 0.000 * RESIDUAL 12 753334 627778E-01 * TOTAL (CORRECTED) 17 7.40444 435556 - TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BB 28/ 5/** 16:34 PAGE MEANS FOR EFFECT T$ T$ NOS 3 3 3 TLBC 83.3333 73.3333 80.0000 90.0000 70.0000 66.6667 HSBC 4.60000 3.53333 3.76667 5.33333 4.73333 4.16667 SE(N= 3) 2.35702 0.144658 5%LSD 12DF 7.26279 0.445740 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BB 28/ 5/** 16:34 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T$ (N= 18) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | TLBC 18 77.222 8.9479 4.0825 5.3 0.0002 HSBC 18 4.3556 0.65997 0.25055 5.8 0.0000 | Phụ lục 2: Môi trƣờng Bảng 1.1: Môi trƣờng MS Nhóm I II III IV V Thành phần NH4NO3 1650 KNO3 1900 KH2PO4 170 MgSO4 7H2O 370 MnSO4 H2O 22.3 ZnSO4 7H2O 10.6 CuSO4 H2O 0.025 CaCl2 2H2O 440 KI 0.83 CoCl2 6H2O 0.025 H3BO3 6.2 Na2MoO4 2H2O 0,25 FeSO4 7H2O 27.85 Na2EDTA 2H2O 37.25 Nicotinic acid Vitamins Hàm lƣợng (mg/l) Glycine 0,5 Thiamine HCl 0,1 Pyridoxine HCl 0,5 [...]... không cao, chất l ợng giống không ổn định Nhằm tạo ra nguồn giống chất l ợng cao với số l ợng l n phục vụ gây trồng vùng nguyên liệu trên quy mô l n nhằm đáp ứng nhu cầu của thị trường Xuất phát từ thực tiễn trên Chúng tôi tiến hành đề tài Nghiên cứu tái sinh giống cây Chùm Ngây (Moringa oleifera L. ) chất l ợng cao bằng kỹ thuật in vitro 1.2 Mục đích của đề tài - Nghiên cứu ảnh hưởng của một số chất. .. Zeatin, quercetin, alpha-sitosterol, caffeoylquinic acid, kaempferol,… Trong cây Chùm Ngây có hơn 90 chất dinh dưỡng tổng hợp và các chất khoáng đa dạng không kém các sản phẩm từ động vật Đặc biệt, trong l Chùm Ngây rất giàu dinh dưỡng, hàm l ợng Vitamin C cao hơn 7 l n so với vitamin C trong quả cam, hàm l ợng Vitamin A cao hơn 4 l n so với vitamin A trong củ cà rốt, hàm l ợng Canxi cao hơn 4 l n... nhân giống cây Chùm Ngây bằng phương pháp in vitro, l cơ sở cho những nghiên cứu về sau - Góp phần bảo tồn và nhân giống Chùm Ngây, tạo ra một số l ợng cây giống l n, đồng đều có chất l ợng cao cung cấp cho sản xuất và thị trường tiêu dùng 4 PHẦN 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu chung về cây Chùm Ngây 2.1.1 Đặc điểm thực vật học cây Chùm Ngây Chùm Ngây thuộc nhóm cây thân gỗ, có thể mọc cao từ... 1.4.1 Ý nghĩa khoa học - Quá trình nghiên cứu sẽ đánh giá được ảnh hưởng của một số chất khử trùng, chất điều tiết sinh trưởng đến khả năng vô trùng, tái sinh, cây Chùm Ngây bằng phương pháp in vitro 3 - Nghiên cứu góp phần phát triển việc nghiên cứu kỹ thuật nhân giống in vitro cây dược liệu nói chung và cây Chùm Ngây nói riêng 1.4.2 Ý nghĩa thực tiễn - Kết quả nghiên cứu sẽ giúp xác định ảnh hưởng của... vấn đề Chùm Ngây hay còn gọi l cây thần Diệu, cây vạn Năng, cây kỳ Quan, cây cải Ngựa, cây độ Sinh ., có tên khoa học l Moringa oleifera L Là thực vật thân gỗ phổ biến nhất trong chi Chùm Ngây (Moringa) được xuất xứ từ vùng nam Á, phổ biến ở cả châu Á và châu phi [5] Giá trị sử dụng của cây Chùm Ngây được chia l m hai nhóm chính: Sử dụng l m thuốc chữa bệnh và l m nguồn l ơng thực giàu chất dinh dưỡng... của cây Chùm Ngây 2.1.4.1 Giá trị dinh dưỡng Trong Chùm Ngây có chứa hơn 90 chất dinh dưỡng tổng hợp (7 loại vitamin, 6 loại khoáng chất, 18 loại axit amin và 46 chất chống oxi hóa), các bộ phận của cây chứa nhiều khoáng chất quan trọng và l nguồn cung cấp chất đạm, vitamin, B-carote, axit amin và nhiều hợp chất phenolic Cây Chùm Ngây cung cấp hỗn hợp phối trộn nhiều hợp chất như: zeatin, quercetin,... nhắc l i 10 mẫu/công thức Sử dụng môi trường nền l : MS + 30g /l sucrose + 6g /l agar + 0,1 mg /l myo inositol - Các thí nghiệm tiến hành: 25 Thí nghiệm 4: Nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ Kinetin (mg /l) đến khả năng tái sinh chồi Chùm Ngây Công thức thí nghiệm Nồng độ kinetin (mg /l) 1 (ĐC) 0,0 2 0,2 3 0,4 4 0,6 5 0,8 6 1,0 Thí nghiệm 5: Nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ BAP (mg /l) đến khả năng tái sinh. .. một số chất khử trùng đến khả năng vô trùng mẫu Chùm Ngây - Nội dung 2: Nghiên cứu ảnh hưởng của một số chất điều tiết sinh trưởng đến khả năng tái sinh chồi Chùm Ngây 22 3.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 3.4.1 Nghiên cứu ảnh hưởng của một số chất khử trùng (H202, HgCl 2) đến khả năng vô trùng mẫu Chùm Ngây - Phƣơng pháp khử trùng: Phương pháp xử l mẫu: + Ngọn cây Chùm Ngây được cắt bỏ l , rửa sạch bằng xà... nhân giống cây Chùm Ngây chất l ợng cao bằng kĩ thuật nuôi cấy mô Kết quả thu được cho thấy công thức khử trùng tốt nhất l sử dụng dung dịch Javen 60% (NaCLO) trong 12 Phút, công thức môi trường dinh dưỡng thích hợp nhất để tái sinh chồi l môi trường: MS + 0,4mg /l BAP + 0,2mg /l Kinetin + 8g /l agar + 30g /l sucrose, công thức môi trường ra rễ tốt nhất l : 1/2MS + 8 g /l agar +14g /l sucrose + 0,4 mg /l IBA,... 2.5.1 Tình hình nghiên cứu về cây Chùm Ngây trên thế giới Do tầm quan trọng của loài cây Chùm Ngây, cho đến nay trên thế giới đã có rất nhiều công trình khoa học nghiên cứu về nhân giống cây Chùm Ngây, tập trung chủ yếu ở các nước Châu Á đặc biệt l Philipine, dưới đây l một số công trình nghiên cứu nổi bật Eufrocinio CM (201 0) ở phòng thí nghiệm nuôi cấy mô, viện nghiên cứu quốc gia về sinh học phân