Nghiên cứu kỹ thuật tái sinh giống rau Sắng (Melientha suavis) chất lượng cao bằng kỹ thuật in vitro

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM - NGUYỄN VIỆT ĐỨC Tên đề tài: NGHIÊN CỨU TÁI SINH GIỐNG RAU SẮNG (Melientha suavis) CHẤT LƢỢNG CAO BẰNG KỸ THUẬT IN VITRO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành : Công nghệ sinh học Khoa : CNSH - CNTP Khoá học : 2011 - 2015 Giảng viên hƣớng dẫn: ThS Vi Đại Lâm Khoa CNSH - CNTP, Trƣờng ĐHNL Thái Nguyên ThS Đào Duy Hƣng Viện Khoa học Sự Sống - Trƣờng ĐHNL Thái Nguyên Thái Nguyên, 2015 i LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành khoa luận tốt nghiệp em xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu nhà trƣờng Trƣờng Đại Học Nông Lâm Thái Nguyên, Ban chủ nhiệm khoa CNSH CNTP thầy cô giáo môn Công nghệ tế bào tạo điều kiện giúp đỡ em suốt thời gian qua Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy giáo ThS Vi Đại Lâm ThS Đào Duy Hƣng tận tình bảo, hƣớng dẫn em thời gian thực đề tài Em xin đƣợc gửi lời cảm ơn đến gia đình, đến ngƣời thân động viên giúp đỡ tạo điều kiện cho em vật chất lẫn tinh thần suốt thời gian học tập nghiên cứu Do thời gian thực đề tài có hạn nên nhiều thiếu sót, em mong nhận đƣợc đóng góp ý kiến chân thành từ thầy cô bạn để đề tài đƣợc hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, ngày tháng năm 2015 Sinh viên Nguyễn Việt Đức ii DANH MỤC CÁC CỤM TỪ VIẾT TẮT 2,4 D : 2,4 Diclorophenoxy acetic acid Cs : Cộng BA : 6-Benzylaminopurine CT : Công thức CV : Coeficient of Variation ĐC : Đối chứng GA3 : Gibberellic acid IAA : Indole-3-acetic acid IBA : Indole butyric acid BAP : Bezylamino purine Kinetin : 6-Furfurylaminopurine LSD : Least Singnificant Difference Test MS : Murashige & Skoog (1962) MT : Môi trƣờng W/v : Khối lƣợng/ thể tích V/v : Thể tích/thể tích iii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 4.1 Kết nghiên cứu ảnh hƣởng thời gian khử trùng dung dịch H2O2 nồng độ 5% đến khả vô trùng mẫu 31 Bảng 4.2 Kết nghiên cứu ảnh hƣởng thời gian khử trùng viên khử trùng Johnson (2,5 mg/l) đến hiệu khử trùng mẫu cấy 33 Bảng 4.3 Kết nghiên cứu ảnh hƣởng thời gian khử trùng dung dịch HgCl2 nồng độ 0,1% đến hiệu khử trùng mẫu 34 Bảng 4.4 Kết nghiên cứu ảnh hƣởng kinetin đến khả tái sinh chồi rau Sắng 36 Bảng 4.5 Kết nghiên cứu ảnh hƣởng BAP đến khả tái sinh chồi rau Sắng 38 Bảng 4.6 Kết nghiên cứu ảnh hƣởng kết hợp kinetinvà IAA đến hiệu tái sinh chồi 40 Bảng 4.7 Kết nghiên cứu ảnh hƣởng kết hợp kinetin IBA đến hiệu tái sinh chồi 42 iv DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 4.1 Ảnh hƣởng dung dịch H2O2 (5%) đến khả vô trùng mẫu rau Sắng 32 Hình 4.2 Ảnh hƣởng viên khử trùng johnson (2,5 mg/l) đến khả vô trùng mẫu rau Sắng 33 Hình 4.3 Ảnh hƣởng dung dịch HgCl2 nồng độ 0,1% đến khả vô trùng mẫu rau Sắng 35 Hình 4.4 Biểu đồ thể ảnh hƣởng nồng độ kinetin đến khả tái sinh chồi rau Sắng (sau 60 ngày nuôi cấy) 37 Hình 4.5 Biểu đồ thể ảnh hƣởng nồng độ BAP đến khả tái sinh chồi rau Sắng (sau 60 ngày nuôi cấy) 39 Hình 4.6 Biểu đồ thể ảnh hƣởng kết hợp nồng độ kinetin IAA đến hiệu tái sinh chồi rau Sắng (sau 60 ngày nuôi cấy) 41 Hình 4.7 Biểu đồ thể ảnh hƣởng kết hợp nồng độ kinetin IBA đến hiệu tái sinh chồi rau Sắng (sau 60 ngày nuôi cấy) 43 v MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i DANH MỤC CÁC CỤM TỪ VIẾT TẮT ii DANH MỤC CÁC BẢNG iii DANH MỤC CÁC HÌNH iv MỤC LỤC v PHẦN 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích nghiên cứu 1.3 Yêu cầu đề tài 1.4 Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiến đề tài 1.4.1 Ý nghĩa khoa học 1.4.2 Ý nghĩa thực tiễn PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu chung rau Sắng 2.1.1 Đặc điểm rau Sắng 2.1.2 Phân bố 2.1.3 Phân loại 2.1.4 Giá trị rau Sắng 2.1.4.1 Giá trị dinh dƣỡng 2.1.4.2 Giá trị kinh tế 2.1.4.3 Giá trị dƣợc liệu 2.2 Tình hình nghiên cứu rau Sắng nƣớc giới 2.2.1 Tình hình nghiên cứu nƣớc 2.2.2 Tình hình nghiên cứu giới 2.3 Khái niệm sở khoa học nuôi cấy mô tế bào thực vật vi 2.3.1 Khái niệm 2.3.2 Cơ sở khoa học nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.3.2.1 Tính toàn tế bào thực vật 2.3.2.2 Sự phân hóa tế bào 2.3.2.3 Sự phản phân hóa tế bào 2.4 Một số yếu tố ảnh hƣởng đến nuôi cấy mô tế bào thực vật 10 2.4.1 Vật liệu nuôi cấy 10 2.4.2 Điều kiện vô trùng 11 2.4.3 Môi trƣờng hóa học 12 2.4.4 Môi trƣờng vật lý 22 2.5 Những vấn đề nhân giống in vitro 23 2.5.1 Tính bất định mặt di truyền 23 2.5.2 Sự nhiễm mẫu 23 2.5.3 Sự hoá thuỷ tinh thể 24 2.5.4 Kiểu gen 24 PHẦN 3: VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 3.1 Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu 25 3.2 Hóa chất 25 3.3 Thiết bị 25 3.4 Địa điểm thời gian nghiên cứu 25 3.4.1 Địa điểm nghiên cứu 25 3.4.2 Thời gian nghiên cứu 26 3.5 Nội dung nghiên cứu 26 3.6 Phƣơng pháp nghiên cứu 26 3.6.1 Nội dung 1: Nghiên cứu ảnh hƣởng số chất khử trùng đến khả vô trùng mẫu rau Sắng 26 vii 3.6.2 Nội dung 2: Nghiên cứu ảnh hƣởng số chất điều tiết sinh trƣởng đến khả tái sinh chồi rau Sắng 28 3.7 Xử lý số liệu 30 PHẦN 4: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 31 4.1 Kết nghiên cứu ảnh hƣởng số chất khử trùng đến khả vô trùng mẫu rau Sắng 31 4.2 Kết nghiên cứu ảnh hƣởng số chất điều hòa sinh trƣởng đến khả tái sinh chồi rau Sắng 36 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 44 5.1 Kết luận 44 5.2 Kiến nghị 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu tiếng việt II Tài liệu tiếng Anh PHỤ LỤC PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Rau Sắng hay gọi rau Ngót Rừng có tên khoa học Melientha suavis thuộc Đàm Hƣơng hai loài chi Melientha có phân bố không rộng Đông Dƣơng Thái Lan Rau Sắng thuộc loại gỗ nhỏ, cao - m, nhẵn tất phần Vỏ dày, màu xám nhạt hoá bẩn, mềm, nứt dọc thành sâu Gỗ trắng cành non màu lục, rũ xuống, mềm, dễ nứt, có vị mì Cây mọc nhiều khu rừng thƣa, thung lũng, chân đất núi đá vôi, có ven suối Ở Việt Nam rau Sắng mọc nhiều Lài Cai, Cao Bằng, Lạng Sơn (Hữu Lũng), Quảng Ninh, Bắc Thái, Hà Bắc, Vĩnh Phú, Hà Tây (Mỹ Đức: Chùa Hƣơng), Ninh Bình (Cúc Phƣơng), Thanh Hóa, Nghệ An, Quảng Nam-Đà Nẵng, Kontum, Gia Lai, Lâm Đồng, Sông Bé, Bà Rịa Vũng Tàu (núi Đinh Gân Bà Rịa (Sách đỏ Việt nam, 2007) [18] Rau Sắng có nhiều công dụng: Giải nhiệt, giải độc, lợi tiểu, nhuận tràng, bổ huyết… Lá, chồi non Sắng có hàm lƣợng protit acid amin cao hẳn loại rau khác Trong 100g rau Sắng có khoảng 6,5 8,2g protit, 0,23g lysin, 0,19g methionin, 0,08g tryptophan, 0,25g phenylanalin, 0,45g treonin, 0,22g valin, 0,26g leucin 0,23g isoleucin, 11,5 mg vitamin C, 0,6mg caroten, gấp nhiều lần rau ngót thƣờng đậu ván Bởi vậy, loại rau nấu canh ăn nƣớc Vì dinh dƣỡng cao, ngon đậm đà, rau Sắng ăn bổ cho phụ nữ sinh ngƣời ốm dậy, đƣợc coi vị thuốc chữa bệnh đƣờng ruột tốt rau Sắng có chứa nhiều chất xơ ngăn ngừa táo bón, tăng khẳ hấp thụ chất béo thải giúp đào thải mỡ thừa, giúp bạn giảm cân hiệu lại an toàn cho sức khỏe, đặc biệt phụ nữ cho bú (Đỗ Tất Lợi, 2004) [6] Trƣớc rau Sắng mọc hoang dã bị ngƣời dân khai thác kiểu tận thu mà bảo tồn, chăm sóc, phát triển nên loại có nguy tuyệt chủng cao, đƣợc đƣa vào Sách đỏ Việt Nam Để khôi phục phát triển rau Sắng, năm 2011, Sở Nông nghiệp Phát triển Nông thôn Hà Nội phê duyệt dự án "Khôi phục, cải tạo phát triển số đặc sản quý hiếm, đặc hữu rừng đặc dụng Hƣơng Sơn" có rau Sắng, đƣợc triển khai ba năm (Sách đỏ Việt Nam, 2007) [18] Do đặc thù thân gỗ nên thời gian sinh trƣởng phát triển rau Sắng dài chậm Với cách làm nhân giống thông thƣờng sử dụng hạt chín đem ƣơm nảy mầm bầu xuống đất thời gian lâu Không ta cần phải chờ thu hạt chín, đồng thời hạt cho Mặt khác, lên không đảm bảo đƣợc tính đồng Vì muốn có số lƣợng nhiều thời gian ngắn phƣơng pháp ƣơm truyền thống khó Bên cạnh nhân giống phƣơng pháp nuôi cấy mô thành công, cho kết cao số lƣợng, chất lƣợng hiệu kinh tế, làm bệnh virut để phục tráng giống thoái hóa góp phần làm phong phú vật liệu di truyền cho công tác chọn tạo giống Sản phẩm cho giống khỏe mạnh, đồng chất lƣợng mang nhƣng đặc tính mong muốn (Trần Thị Lệ cs, 2008) [4] Qua phân tích đánh giá từ thực tế để đáp ứng nhu cầu từ thị trƣờng tiến hành thực đề tài: “Nghiên cứu kỹ thuật tái sinh giống rau Sắng (Melientha suavis) chất lượng cao kỹ thuật in vitro” Phụ lục 2: Môi trƣờng MS - Murashige and Skoog’s Nhóm I II III IV V Vitamins Thành phần Hàm lƣợng (mg/l) NH4NO3 1650 KNO3 1900 KH2PO4 170 MgSO4 7H2O 370 MnSO4 H2O 22.3 ZnSO4 7H2O 10.6 CuSO4 H2O 0.25 CaCl2 2H2O 440 KI 0.83 CoCl2 6H2O 0.025 H3BO3 6.2 Na2MoO4 2H2O 0.25 FeSO4 7H2O 27.85 Na2EDTA 2H2O 37.25 Nicotinic acid 0.5 Glycine Thiamine HCl 0.1 Pyridoxine HCl 0.5 Kết thí nghiệm khử trùng dung dịch H2O2 nồng độ 5% đến khả tạo mẫu rau Sắng BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMS FILE KHANG123 28/ 5/15 14:23 :PAGE VARIATE V003 TLMS LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= 1T 5300.00 1325.00 353.33 0.000 2R 3.33333 1.66667 0.44 0.660 * RESIDUAL 30.0007 3.75009 * TOTAL (CORRECTED) 14 5333.33 380.952 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMN FILE KHANG123 28/ 5/15 14:23 :PAGE VARIATE V004 TLMN LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= 1T 15476.7 3869.17 714.30 0.000 2R 23.3333 11.6667 2.15 0.178 * RESIDUAL 43.3335 5.41669 * TOTAL (CORRECTED) 14 15543.3 1110.24 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMC FILE KHANG123 28/ 5/15 14:23 :PAGE VARIATE V005 TLMC LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= 1T 3760.00 940.000 188.00 0.000 2R 10.0000 5.00000 1.00 0.412 * RESIDUAL 39.9998 4.99998 * TOTAL (CORRECTED) 14 3810.00 272.143 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE KHANG123 28/ 5/15 14:23 :PAGE MEANS FOR EFFECT T - T NOS TLMS TLMN TLMC 3 15.0000 0.000000 100.000 71.6667 13.3333 3 33.3333 46.6667 20.0000 53.3333 23.3333 23.3333 40.0000 11.6667 48.3333 SE(N= 3) 1.11805 5%LSD 8DF 0.000000 1.34371 3.64584 1.29099 4.38171 4.20979 - MEANS FOR EFFECT R - R NOS TLMS TLMN TLMC 28.0000 52.0000 20.0000 29.0000 49.0000 22.0000 28.0000 51.0000 21.0000 SE(N= 5) 0.866036 5%LSD 8DF 2.82405 1.04084 3.39406 0.999998 3.26089 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE KHANG123 28/ 5/15 14:23 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T (N= 15) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS TLMS 15 28.333 19.518 1.9365 | | | | | | | 6.8 0.0000 0.6598 TLMN 15 50.667 33.320 2.3274 4.6 0.0000 0.1777 TLMC 15 21.000 16.497 2.2361 10.6 0.0000 0.4115 |R | Kết thí nghiệm khử trùng viên khử trùng johnson (2,5 mg/l) đến khả tạo mẫu rau Sắng BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMS FILE KHANG123 28/ 5/15 14:27 :PAGE VARIATE V003 TLMS LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= 1T 1776.67 444.167 152.29 0.000 2R 43.3333 21.6667 7.43 0.015 * RESIDUAL 23.3334 2.91667 * TOTAL (CORRECTED) 14 1843.33 131.667 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMN FILE KHANG123 28/ 5/15 14:27 :PAGE VARIATE V004 TLMN LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= 1T 8643.33 2160.83 305.06 0.000 2R 10.0000 5.00000 0.71 0.525 * RESIDUAL 56.6661 7.08326 * TOTAL (CORRECTED) 14 8710.00 622.143 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMC FILE KHANG123 28/ 5/15 14:27 :PAGE VARIATE V005 TLMC LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= 1T 2983.33 745.833 55.94 0.000 2R 93.3333 46.6667 3.50 0.080 * RESIDUAL 106.667 13.3334 * TOTAL (CORRECTED) 14 3183.33 227.381 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE KHANG123 28/ 5/15 14:27 :PAGE MEANS FOR EFFECT T - T NOS TLMS TLMN TLMC 3 11.6667 0.000000 100.000 71.6667 16.6667 3 23.3333 48.3333 28.3333 31.6667 38.3333 30.0000 21.6667 36.6667 41.6667 SE(N= 3) 0.986014 5%LSD 8DF 3.21529 0.000000 1.53658 5.01064 2.10819 6.87458 - MEANS FOR EFFECT R - R NOS TLMS TLMN TLMC 20.0000 60.0000 20.0000 17.0000 59.0000 24.0000 16.0000 58.0000 26.0000 SE(N= 5) 0.763763 5%LSD 8DF 2.49055 1.19023 3.88123 1.63299 5.32503 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE KHANG123 28/ 5/15 14:27 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T (N= 15) SD/MEAN | NO OBS TLMS | BASED ON BASED ON % TOTAL SS RESID SS 15 17.667 11.475 1.7078 | | | | | | | 9.7 0.0000 0.0152 TLMN 15 59.000 24.943 2.6614 4.5 0.0000 0.5254 TLMC 15 23.333 15.079 3.6515 15.6 0.0000 0.0803 |R | Kết thí nghiệm khử trùng dung dịch HgCl2 0,1% đến khả tạo mẫu rau Sắng BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMS FILE KHANG123 28/ 5/15 14:29 :PAGE VARIATE V003 TLMS LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= 1T 6883.33 1720.83 516.24 0.000 2R 23.3333 11.6667 3.50 0.080 * RESIDUAL 26.6673 3.33341 * TOTAL (CORRECTED) 14 6933.33 495.238 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMN FILE KHANG123 28/ 5/15 14:29 :PAGE VARIATE V004 TLMN LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= 1T 13333.3 3333.33 470.60 0.000 2R 43.3333 21.6667 3.06 0.102 * RESIDUAL 56.6658 7.08322 * TOTAL (CORRECTED) 14 13433.3 959.524 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMC FILE KHANG123 28/ 5/15 14:29 :PAGE VARIATE V005 TLMC LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= 1T 4716.67 1179.17 148.95 0.000 2R 3.33333 1.66667 0.21 0.816 * RESIDUAL 63.3332 7.91664 * TOTAL (CORRECTED) 14 4783.33 341.667 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE KHANG123 28/ 5/15 14:29 :PAGE MEANS FOR EFFECT T - T NOS TLMS TLMN TLMC 3 23.3333 0.000000 100.000 73.3333 3.33333 3 65.0000 30.0000 5.00000 41.6667 28.3333 30.0000 28.3333 26.6667 45.0000 SE(N= 3) 1.05410 5%LSD 8DF 0.000000 1.53658 3.43733 1.62446 5.01063 5.29721 - MEANS FOR EFFECT R - R NOS TLMS TLMN TLMC 30.0000 54.0000 16.0000 32.0000 51.0000 17.0000 33.0000 50.0000 17.0000 SE(N= 5) 0.816506 5%LSD 8DF 2.66254 1.19023 3.88121 1.25830 4.10320 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE KHANG123 28/ 5/15 14:29 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T (N= 15) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS | | | | | | | TLMS 15 31.667 22.254 1.8258 TLMN 15 51.667 30.976 2.6614 5.8 0.0000 0.0803 5.2 0.0000 0.1023 TLMC 15 16.667 18.484 2.8137 16.9 0.0000 0.8156 |R | Kết thí nghiệm ảnh hƣởng kinetin đến khả tái sinh chồi rau Sắng BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMBC FILE CONCHO 28/ 5/15 14:34 :PAGE VARIATE V003 TLMBC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= 1T 5433.55 1358.39 141.00 0.000 2R 41.4785 20.7393 2.15 0.178 * RESIDUAL 77.0699 9.63374 * TOTAL (CORRECTED) 14 5552.10 396.579 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSBC FILE CONCHO 28/ 5/15 14:34 :PAGE VARIATE V004 HSBC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= 1T 8.01091 2R 804001E-02 402001E-02 0.97 0.421 * RESIDUAL 2.00273 484.13 0.000 330939E-01 413674E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 8.05204 575146 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE CONCHO 28/ 5/15 14:34 :PAGE MEANS FOR EFFECT T - T NOS TLMBC HSBC 42.2233 0.776667 82.2233 1.40000 3 93.3300 3.00000 88.8900 1.80000 62.2233 1.53333 SE(N= 3) 5%LSD 8DF 1.79199 5.84351 0.371337E-01 0.121089 - MEANS FOR EFFECT R - R NOS TLMBC HSBC 73.3340 1.73400 76.0000 1.69200 72.0000 1.68000 SE(N= 5) 1.38807 5%LSD 8DF 0.287636E-01 4.52637 0.937953E-01 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE CONCHO 28/ 5/15 14:34 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T (N= 15) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS TLMBC HSBC 15 73.778 19.914 3.1038 | | | | | | | 4.2 0.0000 0.1778 15 1.7020 0.75838 0.64317E-01 3.8 0.0000 0.4210 |R | Kết thí nghiệm ảnh hƣởng BAP đến khả tái sinh chồi rau Sắng BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMBC FILE CONCHO 28/ 5/15 14:36 :PAGE VARIATE V003 TLMBC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= 1T 4189.57 1047.39 108.76 0.000 2R 71.0756 35.5378 3.69 0.073 * RESIDUAL 77.0429 9.63037 * TOTAL (CORRECTED) 14 4337.69 309.835 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSBC FILE CONCHO 28/ 5/15 14:36 :PAGE VARIATE V004 HSBC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= 1T 2.10671 2R 231600E-01 115800E-01 4.33 0.053 * RESIDUAL 526677 197.14 0.000 213732E-01 267165E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 2.15124 153660 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE CONCHO 28/ 5/15 14:36 :PAGE MEANS FOR EFFECT T - T NOS TLMBC HSBC 42.2233 0.910000 62.2233 1.40000 3 75.5533 1.53333 88.8900 2.02000 51.1100 1.77667 SE(N= 3) 5%LSD 8DF 1.79168 5.84249 0.298421E-01 0.973120E-01 - MEANS FOR EFFECT R - R NOS TLMBC HSBC 64.0000 1.57400 66.6660 1.53200 61.3340 1.47800 SE(N= 5) 1.38783 5%LSD 8DF 0.231156E-01 4.52557 0.753776E-01 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE CONCHO 28/ 5/15 14:36 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T (N= 15) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS TLMBC HSBC 15 64.000 17.602 3.1033 | | | | | | | 4.8 0.0000 0.0726 15 1.5280 0.39199 0.51688E-01 3.4 0.0000 0.0527 |R | Kết thí nghiệm ảnh hƣởng kết hợp kinetin với IAA đến khả tái sinh chồi rau Sắng BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMBC FILE CONCHO 28/ 5/15 14:38 :PAGE VARIATE V003 TLMBC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= 1T 6832.12 1708.03 137.53 0.000 2R 17.6893 8.84466 0.71 0.523 * RESIDUAL 99.3573 12.4197 * TOTAL (CORRECTED) 14 6949.17 496.369 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSBC FILE CONCHO 28/ 5/15 14:38 :PAGE VARIATE V004 HSBC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= 1T 6.05623 2R 831998E-02 415999E-02 1.65 0.252 * RESIDUAL 1.51406 599.23 0.000 202134E-01 252668E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 6.08476 434626 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE CONCHO 28/ 5/15 14:38 :PAGE MEANS FOR EFFECT T - T NOS TLMBC HSBC 93.3000 3.00000 88.9000 1.84667 3 68.9000 1.40000 51.1000 1.51000 37.7667 1.22333 SE(N= 3) 5%LSD 8DF 2.03467 6.63486 0.290211E-01 0.946350E-01 - MEANS FOR EFFECT R - R NOS TLMBC HSBC 68.0000 1.77200 69.3200 1.82800 66.6600 1.78800 SE(N= 5) 1.57605 5%LSD 8DF 0.224797E-01 5.13934 0.733040E-01 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE CONCHO 28/ 5/15 14:38 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T (N= 15) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS TLMBC HSBC 15 67.993 22.279 3.5242 | | | | | | | 5.2 0.0000 0.5226 15 1.7960 0.65926 0.50266E-01 2.8 0.0000 0.2516 |R | Kết thí nghiệm ảnh hƣởng kết hợp kinetin với IBA đến khả tái sinh chồi rau Sắng BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMBC FILE CONCHO 28/ 5/15 14:39 :PAGE VARIATE V003 TLMBC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= 1T 5015.41 1253.85 99.19 0.000 2R 17.6893 8.84467 0.70 0.528 * RESIDUAL 101.131 12.6413 * TOTAL (CORRECTED) 14 5134.23 366.731 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSBC FILE CONCHO 28/ 5/15 14:39 :PAGE VARIATE V004 HSBC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= 1T 6.47913 2R 729332E-02 364666E-02 0.77 0.496 * RESIDUAL 1.61978 343.66 0.000 377068E-01 471335E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 6.52413 466010 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE CONCHO 28/ 5/15 14:39 :PAGE MEANS FOR EFFECT T - T NOS TLMBC HSBC 93.3000 3.00000 84.4667 2.04667 3 68.9000 1.71000 57.7667 1.44333 42.2333 1.06667 SE(N= 3) 5%LSD 8DF 2.05275 6.69381 0.396373E-01 0.129253 - MEANS FOR EFFECT R - R NOS TLMBC HSBC 70.6600 1.82600 68.0000 1.88000 69.3400 1.85400 SE(N= 5) 1.59005 5%LSD 8DF 0.307029E-01 5.18500 0.100119 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE CONCHO 28/ 5/15 14:39 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T (N= 15) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS TLMBC HSBC 15 69.333 19.150 3.5555 | | | | | | | 5.1 0.0000 0.5282 15 1.8533 0.68265 0.68654E-01 3.7 0.0000 0.4960 |R | [...]... trình nghiên cứu sẽ đƣa ra đƣợc một số kĩ thuật góp phần xây dựng và hoàn thiện tái sinh giống rau Sắng bằng kĩ thuật in vitro Từ đó đánh giá đƣợc ảnh hƣởng của một số chất điều tiết sinh trƣởng đến kĩ thuật tái sinh giống rau Sắng bằng phƣơng pháp in vitro Kết quả nghiên cứu góp phần phát triển việc nghiên cứu kĩ thuật nhân giống in vitro cây dƣợc liệu nói chung 1.4.2 Ý nghĩa thực tiễn Từ các kết quả nghiên. ..3 1.2 Mục đích nghiên cứu Nghiên cứu ảnh hƣởng của một số chất khử trùng đến khả năng vô trùng mẫu và tái sinh cây rau Sắng chất lƣợng cao bằng kĩ thuật in vitro 1.3 Yêu cầu đề tài - Xác định ảnh hƣởng của một số chất khử trùng đến khả năng vô trùng mẫu rau Sắng - Xác định đƣợc ảnh hƣởng của một số chất điều tiết sinh trƣởng đến khả năng tái sinh chồi rau Sắng 1.4 Ý nghĩa khoa học và... Đối tƣợng và phạm vi nghiên cứu - Đối tƣợng nghiên cứu: Giống cây rau Sắng đƣợc thu thập từ tỉnh Thái Nguyên - Phạm vi nghiên cứu: Nghiên cứu ảnh hƣởng của một số chất khử trùng đến khả năng vô trùng mẫu rau Sắng và ảnh hƣởng của một số chất điều hòa sinh trƣởng đến khả năng tái sinh chồi rau Sắng 3.2 Hóa chất - Hóa chất khử trùng - Môi trƣờng MS - Một số chất điều hòa sinh trƣởng 3.3 Thiết bị - Cân... nghiên cứu bổ sung nguồn tài liệu tham khảo phục vụ cho các nghiên cứu, giảng dạy và kĩ thuật tái sinh giống rau Sắng có chất lƣợng cao bằng phƣơng pháp in vitro Góp phần bảo tồn và nhân giống rau Sắng, tạo ra một số lƣợng cây giống lớn, đồng đều có chất lƣợng cao cung cấp cho sản xuất và thị trƣờng tiêu dùng 4 PHẦN 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu chung về cây rau Sắng 2.1.1 Đặc điểm của cây rau Sắng. .. Đã phát hiện cytokinin ở vi sinh vật, tảo silic, rêu, dƣơng xỉ, cây lá kim Zeatin có nhiều trong thực vật bậc cao và trong một số vi khuẩn Trong thực vật, cytokinin có nhiều trong hạt, quả đang lớn, mô phân sinh Cytokinin kích thích hoặc ức chế nhiều quá trình sinh lý, trao đổi 21 chất Cùng với auxin, cytokinin điều khiển sự phát sinh hình thái trong nuôi cấy mô Tỷ lệ auxin/cytokinin cao sẽ kích thích... mẫu rau Sắng - Nội dung 2: Nghiên cứu ảnh hƣởng của một số chất điều tiết sinh trƣởng đến khả năng tái sinh chồi rau Sắng 3.6 Phƣơng pháp nghiên cứu 3.6.1 Nội dung 1: Nghiên cứu ảnh hưởng của một số chất khử trùng đến khả năng vô trùng mẫu rau Sắng - Vật liệu vô trùng: Mẫu lấy là các mầm ngủ của thân, cành cây rau Sắng - Phƣơng pháp xử lý mẫu:  Cành cây rau Sắng non lấy về thì cắt bỏ lá  Rửa sạch bằng. .. Các chất điều hòa sinh trưởng Các chất điều hòa sinh trƣởng là thành phần không thể thiếu trong môi trƣờng nuôi cấy, có vai trò quan trọng trong quá trình phát sinh hình thái thực vật Hiệu quả của chất điều hòa sinh trƣởng phụ thuộc vào: Nồng độ, hoạt tính của chất điều hòa sinh trƣởng và yếu tố nội sinh của mẫu cấy (Vũ Văn Vụ và cs, 2009) [15] Dựa vào hoạt tính sinh lý phân chia chất điều hòa sinh. .. 100%  Tỷ lệ mẫu chết do hóa chất Tỷ lệ mẫu chết (%) = Tổng số mẫu chết do hóa chất Tổng số mẫu nuôi cấy × 100% 3.6.2 Nội dung 2: Nghiên cứu ảnh hưởng của một số chất điều tiết sinh trưởng đến khả năng tái sinh chồi rau Sắng Mẫu nuôi cấy đƣợc sử dụng là các mắt ngủ của đỉnh sinh trƣởng rau Sắng đã đƣợc vô trùng thành công ở nội dung 1 Cấy các chồi này vào trong môi trƣờng tái sinh có môi trƣờng cơ sở là... Trong 100g rau Sắng có khoảng 6,5 - 8,2g protit, 0,23g lysin, 0,19g methionin, 0,08g tryptophan, 0,25g phenylanalin, 0,45g treonin, 0,22g valin, 0,26g leucin và 0,23g isoleucin, 11,5 mg vitamin C, 0,6 mg caroten v.v…gấp nhiều lần rau ngót thƣờng và đậu ván Bởi vậy, đây là loại rau nấu canh ăn rất ngọt nƣớc Vì dinh dƣỡng rất cao, ngon ngọt đậm đà, rau Sắng ăn rất bổ cho những phụ nữ mới sinh và ngƣời... Văn Trung nghiên cứu phát triển cây rau Sắng thân leo tại Kim Bảng, tỉnh Hà Nam Luận văn đã đƣa ra đƣợc kết luận cây rau Sắng nhân giống bằng hom xử lí chất kích thích GA3 hoàn toàn có thể nhân giống tốt bằng phƣơng pháp vô tính với mức tỉ xuất vƣờn 73,67% ở mức nồng độ GA3 100 ppm (Vũ Văn Trung, 2013) [13] 2.2.2 Tình hình nghiên cứu trên thế giới Trên thế giới có rất ít nghiên cứu về cây rau Sắng, chỉ