Nghiên cứu khả năng tái sinh in vitro của một số giống đậu dải phục vụ cho tạo giống mới

§¹i häc Th¸i Nguyªn TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGUYỄN VĂN CHIỂN Tên đề tài: ″NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG TÁI SINH IN VITRO CỦA MỘT SỐ GIỐNG ĐẬU DẢI (Cowpea - Vigna unguiculata (L.)) PHỤC VỤ CHO TẠO GIỐNG MỚI″ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành : Công nghệ sinh học Khoa : CNSH - CNTP Khóa học : 2010 – 2014 Thái Nguyên - 2014 §¹i häc Th¸i Nguyªn TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGUYỄN VĂN CHIỂN Tên đề tài: ″NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG TÁI SINH IN VITRO CỦA MỘT SỐ GIỐNG ĐẬU DẢI (Cowpea - Vigna unguiculata (L.)) PHỤC VỤ CHO TẠO GIỐNG MỚI″ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo Chuyên ngành Khoa Khóa học : Chính quy : Công nghệ sinh học : CNSH - CNTP : 2010 – 2014 Giáo viên hướng dẫn: TS Hà Thị Thúy Viện Di truyền nông nghiệp Việt Nam Th.S Lương Thị Thu Hường Khoa CNSH – CNTP – Trường ĐH Nông Lâm Thái Nguyên Thái Nguyên - 2014 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành khóa luận tốt nghiệp trước hết xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới TS Hà Thị Thúy, phó Viện trưởng Viện Di Truyền Nông Nghiệp Cô tạo điều kiện thuận lợi tận tình hướng dẫn toàn trình thực tập hoàn thành khóa luận Tôi xin gửi lời cảm ơn tới cô ThS Lương Thị Thu Hường khoa CNSHCNTP, trường ĐH Nông Lâm Thái Nguyên hướng dẫn, giúp thực tập hoàn thành khóa luận Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới TS Hoàng Thị Giang, ThS Nguyễn Thị Huế tận tình bảo suốt thời gian thực tập khóa luân phòng thí nghiệm trọng điểm quốc gia Công nghệ tế bào thực vật – Viện Di Truyền Nông Nghiệp Tôi xin chân thành cảm ơn toàn thể anh chị làm việc phòng thí nghiệm trọng điểm quốc gia Công nghệ tế bào thực vật – Viện Di Truyền Nông Nghiệp, giúp đỡ tạo điều kiện tối đa cho toàn trình thực tập Tôi xin gửi lời cảm ơn biết ơn sâu sắc tới tập thể thầy cô giảng dạy khoa CNSH – CNTP, Trường ĐH Nông Lâm Thái Nguyên hướng dẫn, giảng dạy suốt trình học tập trường Cuối xin cảm ơn gia đình, bạn bè bên động viên tạo điều kiện giúp hoàn thành khóa luận Thái Nguyên, ngày 01 tháng 06 năm 2014 Sinh viên Nguyễn Văn Chiển DANH MỤC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT ADN : Acid deoxyribonucleic BAP : 6-Benzylaminopurine B5 : Gamborg and Miller , 1968 CT : Công thức cs : Cộng CV : Coefficient of Variation Đậu đen : Đậu đen quốc phòng Cao Bằng Đậu thúa đắm : Đậu Thúa đắm Nghệ An IAA : Indol axetic acid IM : Môi trường LSD : Least Significant Difference Test MS : Murashige and Skoog’s, 1962 MSB NAA : MS salts + B5 vitamins : α - Naphlene axetic acid USDA : United States Department of Agriculture DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 4.1 Kết so sánh hiệu khử trùng hóa chất khác với thời gian xử lý khác 16 Bảng 4.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng số môi trường tới khả tái sinh đậu dải 18 Bảng 4.3 Kết đánh giá ảnh hưởng BAP đến khả tái sinh in vitro nhân nhanh từ nốt mầm không kèm mầm 20 Bảng 4.4 Kết đánh giá ảnh hưởng Kinetin đến khả tái sinh in vitro nhân nhanh từ nốt mầm không kèm mầm 22 Bảng 4.5 Kết đánh giá ảnh hưởng BAP đến khả tái sinh in vitro nhân nhanh từ nốt mầm kèm mầm 24 Bảng 4.6 Kết đánh giá ảnh hưởng Kinetin đến khả tái sinh in vitro nhân nhanh từ nốt mầm kèm mầm 26 Bảng 4.7 Kết đánh giá ảnh hưởng BAP đến khả tái sinh in vitro nhân nhanh từ lát cắt nốt mầm 27 Bảng 4.8 Kết đánh giá ảnh hưởng Kinetin đến khả tái sinh in vitro nhân nhanh từ lát cắt nốt mầm 28 Bảng 4.9 Đánh giá ảnh hưởng loại mô cấy đến khả tái sinh nhân nhanh đậu dải 29 MỤC LỤC Trang PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục đích nghiên cứu 1.3 Yêu cầu đề tài 1.4 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 1.4.1 Ý nghĩa khoa học 1.4.2 Ý nghĩa thực tiễn PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu chung đậu dải (Vigna unguiculata (L.)) 2.1.1 Nguồn gốc phân bố 2.1.2 Phân loại 2.1.3 Đặc điểm thực vật học đậu dải (Vigna unguiculata (L.)) 2.1.4 Giá trị đậu dải (đậu đũa) (Vigna unguiculata (L.)) 2.1.5 Tình hình nghiên cứu tái sinh in vitro đậu dải 2.2 Cơ sở khoa học nhân giống trồng nuôi cấy mô tế bào 2.2.1 Tính toàn tế bào thực vật 2.2.2 Sự phân hóa phản phân hóa 2.3 Một số chất điều hòa sinh trưởng nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.3.1 Auxin 2.3.2 Cytokinin 10 PHẦN 3: ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 11 3.1 Đối tượng (vật liệu) phạm vi nghiên cứu 11 3.1.1 Vật liệu nghiên cứu 11 3.1.2 Hóa chất sử dụng phạm vi nghiên cứu 11 3.1.3 Thiết bị sử dụng 11 3.2 Địa điểm thời gian tiến hành nghiên cứu 11 3.3 Nội dung nghiên cứu 11 3.4 Phương pháp nghiên cứu 12 3.4.1 Nghiên cứu ảnh hưởng phương pháp khử trùng mẫu đến khả nảy mầm số giống đậu dải (Vigna unguiculata (L.)) 12 3.4.2 Nghiên cứu ảnh hưởng số môi trường tới khả tái sinh in vitro số giống đậu dải 13 3.4.3 Nghiên cứu đánh giá ảnh hưởng loại mô cấy chất điều hòa sinh trưởng đến tái sinh in vitro 14 PHẦM 4: KẾT QUẢ, NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 16 4.1 Kết thí nghiệm xác định phương pháp khử trùng mẫu 16 4.2 Kết thí nghiệm nghiên cứu ảnh hưởng mốt số môi trường đến khả tái sinh in vitro 17 4.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng loại mô cấy chất điều hòa sinh trưởng đến khả tái sinh, nhân chồi 20 4.3.1 Kết đánh giá ảnh hưởng BAP Kinetin đến khả tái sinh in vitro nhân nhanh từ nốt mầm không kèm mầm 20 4.3.2 Kết đánh giá ảnh hưởng BAP Kinetin đến khả tái sinh in vitro nhân nhanh từ nốt mầm kèm mầm 23 4.3.3 Kết đánh giá ảnh hưởng BAP Kinetin đến khả tái sinh in vitro nhân nhanh từ lát cắt nốt mầm 27 4.3.4 Kết đánh giá ảnh hưởng loại mô cấy đến khả tái sinh nhân nhanh đậu dải 29 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 31 5.1 Kết luận 31 5.2 Kiến nghị 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO 33 PHỤ LỤC PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Tính cấp thiết đề tài Cây đậu dải (Vigna unguiculata) biết đến trồng từ lâu đời Đậu dải hay gọi đậu cowpea, lương thực có tiềm việc cung cấp nguồn protein cho người gia súc Hạt đậu chứa khoảng 2030% protein gần 60% carbohydrate (Aurora, 1995) [6]; (Aguirre cs, 1998) [5]; (Castro cs, 2002) [11] Đậu dải nguồn thức ăn quan trọng cho phụ nữ mang thai hạt đậu giàu axit folic dinh dưỡng cần thiết cho phát triển thai nhi Lá đậu dải non dùng làm rau ăn ngon bổ Thân đậu sau thu hoạch sử dụng để ủ làm thức ăn cho gia súc Đậu dải bao gồm có ba loài phụ: đậu đen (Vigna unguiculata subsp cylindrica), đậu đũa (Vigna unguiculata subsp sesquipedalis) đậu dải trắng rốn nâu (Vigna unguiculata subsp unguiculata) Đậu đũa loại rau phổ biến thị trường châu Á Đậu dải trồng phổ biến vùng khí hậu nóng ấm, nửa khô hạn nước châu Phi, Ấn Độ, Mexico, miền Nam nước Mỹ Việt Nam thuộc vùng sinh thái thích hợp cho nhóm đậu này, nhiên lâu phải nhập thêm đậu từ nước Nghiên cứu giải pháp gia tăng sản lượng đậu dải nước mang lại ích lợi kinh tế cho đất nước, cải thiện sức khỏe cộng đồng Đậu dải có khả chịu hạn, cải tạo đất tốt đậu cô ve (Phaseolus vulgaris) có rễ ăn sâu cố định đạm mạnh Tuy nhiên theo nghiên cứu nước ngoài, suất canh tác (trọng lượng thu hoạch đơn vị diện tích) giống đậu dải đạt 20-30% so với suất thực thụ Nguyên nhân gây giảm suất sâu bệnh tuyến trùng, bệnh thối rễ, nấm hại lá, côn trùng (bọ xít, rệp, sâu ăn ), thời tiết bất thường v.v (Duke , 1990) [14] Việt Nam không nằm yếu tố bất thuận Việc chọn tạo giống đậu có khả chống chịu giúp cải thiện suất đồng thời giảm thiểu sử dụng thuốc trừ sâu, phân bón, góp phần tăng hiệu canh tác, bảo vệ môi trường Để phục vụ cho công tác chọn tạo giống công nghệ tế bào đặc biệt chọn giống thông qua chuyển gen đột biến tế bào sôma, tạo giống có khả chống chịu, kháng bệnh, kháng sâu, kháng thuốc diệt cỏ tiến hành nghiên cứu đề tài ″Nghiên cứu khả tái sinh in vitro số giống đậu dải (Cowpea - Vigna unguiculata (L.)) phục vụ cho tạo giống mới″ 1.2 Mục đích nghiên cứu Xác định điều kiện nuôi cấy in vitro phù hợp cho tái sinh số giống đậu dải 1.3 Yêu cầu đề tài - Xác định phương pháp khử trùng cho tỉ lệ nảy mầm cao - Xác định môi trường nuôi cấy phù hợp với số giống đậu dải nghiên cứu - Xác định ảnh hưởng loại mô cấy chất điều hòa sinh trưởng đến tái sinh, tạo đa chồi 1.4 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 1.4.1 Ý nghĩa khoa học - Bổ sung thêm vào phương pháp khử trùng cho tỉ lệ nảy mầm cao số giống đậu dải - Đưa môi trường nuôi cấy phù hợp với số giống đậu dải nghiên cứu - Góp phần xây dựng quy trình nuôi cấy in vitro phù hợp với số giống đậu dải 1.4.2 Ý nghĩa thực tiễn - Kết nghiên cứu đánh giá khả tái sinh in vitro giống đậu dải có giá trị Việt Nam Qua chọn giống có khả tái sinh cao, phục vụ công tác chọn tạo giống, đặc biệt chuyển gen PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu chung đậu dải (Vigna unguiculata (L.)) 2.1.1 Nguồn gốc phân bố - Loài đậu đũa hay đậu dải - cowpea (Vigna unguiculata) có nguồn gốc Châu Phi, loài đậu có dài, hạt to, có nhiều phân loài khác với dạng hạt có nhiều kích cỡ màu sắc khác (Rachie cs, 1985) [24] - Phân loài Đậu đũa (Vigna unguiculata subsp Sesquipedalis) trồng phổ biến khắp giới như: nhiều nước Châu Phi, Châu Âu, Châu Mỹ, Châu Á nhiệt đới (Ấn Độ, Bangladesh, Thái Lan, Việt Nam, Indonesia, Malaysia, Philippines) Châu Á ôn đới (Trung Quốc, Đài Loan) (Rachie cs, 1985) [24] Đậu đũa bắt nguồn từ bốn loài phụ đậu cowpea (Vigna unquiculata) trồng nhiều Trung Quốc; vùng Đông Nam Châu Á Thái Lan, Philippines; Nam Châu Á Bangladesh, Ấn Độ, Pakistan, Indonesia mở rộng sang Châu Phi (Rachie cs, 1985) [24] Đậu đũa loại rau phổ biến thị trường Châu Á, nhu cầu thị trường nước năm gần tiêu thụ tươi đông lạnh Phẩm chất dựa màu sắc chiều dài Tuy nhiên, yêu cầu nhập đậu đũa thay đổi tùy thị trường (Rachie cs, 1985) [24] 2.1.2.Phân loại Phân loại khoa học (Rachie cs, 1985) [24]: Giới (regnum) Plantae Bộ (ordo) Đậu (Fabales) Họ (familia) Đậu (Fabaceae) Chi (genus) Vigna Loài (species) V unguiculata Phân loài (subspecies) Vigna unguiculata subsp Sesquipedalis Trong Hệ thống Cronquist năm 1981 số hệ thống phân loại thực vật khác, Đậu (Fabales) chứa họ Đậu (Fabaceae) Giống đậu thúa đắm Nghệ An BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE BANG3 13/ 6/14 0:23 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong Kinetin toi kha nang nhan nhanh choi tu not la VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 7.39284 2.46428 153.74 0.000 * RESIDUAL 128231 160288E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 7.52107 683734 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BANG3 13/ 6/14 0:23 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong Kinetin toi kha nang nhan nhanh choi tu not la MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 HSN 3.93333 5.30000 3.61481 3.21111 SE(N= 3) 0.730955E-01 5%LSD 8DF 0.238357 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BANG3 13/ 6/14 0:23 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong Kinetin toi kha nang nhan nhanh choi tu not la F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSN GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 4.0148 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.82688 0.12661 3.2 0.0000 | | | | Giống đậu IT95M-190 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE BANG3 13/ 6/14 0:29 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong Kinetin toi kha nang nhan nhanh choi tu not la VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 5.38016 1.79339 70.86 0.000 * RESIDUAL 202464 253080E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 5.58263 507512 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BANG3 13/ 6/14 0:29 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong Kinetin toi kha nang nhan nhanh choi tu not la MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 HSN 3.14815 3.65926 2.72222 1.83333 SE(N= 3) 0.918477E-01 5%LSD 8DF 0.299506 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BANG3 13/ 6/14 0:29 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong Kinetin toi kha nang nhan nhanh choi tu not la F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSN GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 2.8407 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.71240 0.15908 5.6 0.0000 | | | | 4.3.3 Kết đánh giá ảnh hưởng BAP Kinetin đến khả tái sinh in vitro nhân nhanh từ lát cắt nốt mầm 4.3.3.1 Kết đánh giá ảnh hưởng BAP đến khả tái sinh in vitro nhân nhanh từ lát cắt nốt mầm Giống đậu thúa đắm Nghệ An BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE BANG3 12/ 6/14 23:58 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong BAP toi kha nang nhan nhanh choi tu not la mam VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 6.29571 1.57393 14.41 0.000 * RESIDUAL 10 1.09229 109229 * TOTAL (CORRECTED) 14 7.38799 527714 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BANG3 12/ 6/14 23:58 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong BAP toi kha nang nhan nhanh choi tu not la mam MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 HSN 3.32143 3.48148 2.48148 2.08929 1.86667 SE(N= 3) 0.190813 5%LSD 10DF 0.301258 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BANG3 12/ 6/14 23:58 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong BAP toi kha nang nhan nhanh choi tu not la mam F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSN GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 2.6481 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.72644 0.33050 8.5 0.0005 | | | | Giống đậu đen quốc phòng Cao Bằng BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE BANG3 13/ 6/14 0: :PAGE nghien cuu anh huong cua nong BAP toi kha nang nhan nhanh choi tu lat cat not VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 4.04896 1.01224 18.75 0.000 * RESIDUAL 10 539976 539976E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 4.58894 327781 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BANG3 13/ 6/14 0: :PAGE nghien cuu anh huong cua nong BAP toi kha nang nhan nhanh choi tu lat cat not MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 HSN 2.72685 3.58889 3.20370 2.44048 2.14286 SE(N= 3) 0.134161 5%LSD 10DF 0.352746 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BANG3 13/ 6/14 0: :PAGE nghien cuu anh huong cua nong BAP toi kha nang nhan nhanh choi tu lat cat not F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSN GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 2.8206 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.57252 0.23237 8.2 0.0002 | | | | Giống đậu IT95M-190 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE BANG3 13/ 6/14 0: :PAGE nghien cuu anh huong cua nong BAP toi kha nang nhan nhanh choi tu lat cat not VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 6.93882 1.73471 17.88 0.000 * RESIDUAL 10 970254 970254E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 7.90907 564934 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BANG3 13/ 6/14 0: :PAGE nghien cuu anh huong cua nong BAP toi kha nang nhan nhanh choi tu lat cat not MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 HSN 2.42130 3.93704 3.41667 2.77116 2.04762 SE(N= 3) 0.179838 5%LSD 10DF 0.41177 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BANG3 13/ 6/14 0: :PAGE nghien cuu anh huong cua nong BAP toi kha nang nhan nhanh choi tu lat cat not F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSN GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 2.9188 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.75162 0.31149 7.7 0.0002 | | | | 4.3.3.2 Ảnh hưởng nồng độ Kinetin tới khả tái sinh, nhân nhanh từ nốt mầm không kèm mầm Giống đậu đen quốc phòng Cao Bằng BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE BANG3 13/ 6/14 0:42 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong Kinetin toi kha nang nhan nhanh choi tu lat cat VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 3.32444 1.10815 11.24 0.003 * RESIDUAL 788868 986086E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 4.11331 373937 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BANG3 13/ 6/14 0:42 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong Kinetin toi kha nang nhan nhanh choi tu lat cat MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 HSN 3.25926 4.07037 3.59722 2.62500 SE(N= 3) 0.181300 5%LSD 8DF 0.391199 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BANG3 13/ 6/14 0:42 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong Kinetin toi kha nang nhan nhanh choi tu lat cat F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSN GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 3.3880 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.61150 0.31402 9.3 0.0034 | | | | Giống đậu thúa đắm Nghệ An BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE BANG3 13/ 6/14 0:36 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong Kinetin toi kha nang nhan nhanh choi tu lat cat VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 7.18181 2.39394 28.09 0.000 * RESIDUAL 681684 852105E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 7.86349 714863 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BANG3 13/ 6/14 0:36 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong Kinetin toi kha nang nhan nhanh choi tu lat cat MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 HSN 3.30159 4.49444 3.17460 2.32341 SE(N= 3) 0.168533 5%LSD 8DF 0.549570 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BANG3 13/ 6/14 0:36 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong Kinetin toi kha nang nhan nhanh choi tu lat cat F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSN GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 3.3235 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.84550 0.29191 8.8 0.0002 | | | | Giống đậu IT95M-190 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE BANG3 13/ 6/14 0:49 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong Kinetin toi kha nang nhan nhanh choi tu lat cat VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 6.93066 2.31022 56.16 0.000 * RESIDUAL 329095 411369E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 7.25975 659977 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BANG3 13/ 6/14 0:49 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong Kinetin toi kha nang nhan nhanh choi tu lat cat MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 HSN 2.92593 4.25926 3.00000 2.13690 SE(N= 3) 0.117100 5%LSD 8DF 0.381850 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BANG3 13/ 6/14 0:49 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong Kinetin toi kha nang nhan nhanh choi tu lat cat F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSN GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 3.0805 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.81239 0.20282 6.6 0.0000 | | | | 4.3.4 Ảnh hưởng loại mô cấy đến khả tái sinh nhân nhanh đậu dải Giống đậu đen quốc phòng Cao Bằng BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE BANG3 13/ 6/14 2: :PAGE nghien cuu anh huong cua loai mo cay toi kha nang tai sinh va nhan nhanh cay dau VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 700274 350137 20.84 0.002 * RESIDUAL 100823 168038E-01 * TOTAL (CORRECTED) 801097 100137 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BANG3 13/ 6/14 2: :PAGE nghien cuu anh huong cua loai mo cay toi kha nang tai sinh va nhan nhanh cay dau MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 HSN 3.86667 4.53333 4.07037 SE(N= 3) 0.748417E-01 5%LSD 6DF 0.258889 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BANG3 13/ 6/14 2: :PAGE nghien cuu anh huong cua loai mo cay toi kha nang tai sinh va nhan nhanh cay dau F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSN GRAND MEAN (N= 9) NO OBS 4.1568 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.31644 0.12963 3.1 0.0024 | | | | Giống đậu thúa đắm Nghệ An BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE BANG3 13/ 6/14 1:54 :PAGE nghien cuu anh huong cua loai mo cay toi kha nang tai sinh va nhan nhanh cay dau VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 3.09747 1.54873 55.69 0.000 * RESIDUAL 166852 278086E-01 * TOTAL (CORRECTED) 3.26432 408040 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BANG3 13/ 6/14 1:54 :PAGE nghien cuu anh huong cua loai mo cay toi kha nang tai sinh va nhan nhanh cay dau MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 HSN 3.86667 5.30000 4.49444 SE(N= 3) 0.962785E-01 5%LSD 6DF 0.333043 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BANG3 13/ 6/14 1:54 :PAGE nghien cuu anh huong cua loai mo cay toi kha nang tai sinh va nhan nhanh cay dau F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSN GRAND MEAN (N= 9) NO OBS 4.5537 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.63878 0.16676 3.7 0.0003 | | | | Giống đậu IT95M-190 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE BANG3 13/ 6/14 2:13 :PAGE nghien cuu anh huong cua loai mo cay toi kha nang tai sinh va nhan nhanh cay dau VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1.27789 638944 17.81 0.004 * RESIDUAL 215309 358848E-01 * TOTAL (CORRECTED) 1.49320 186650 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BANG3 13/ 6/14 2:13 :PAGE nghien cuu anh huong cua loai mo cay toi kha nang tai sinh va nhan nhanh cay dau MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 HSN 3.35185 3.65926 4.25926 SE(N= 3) 0.109369 5%LSD 6DF 0.158325 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BANG3 13/ 6/14 2:13 :PAGE nghien cuu anh huong cua loai mo cay toi kha nang tai sinh va nhan nhanh cay dau F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSN GRAND MEAN (N= 9) NO OBS 3.7568 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.43203 0.18943 5.0 0.0035 | | | | PHỤ LỤC MÔI TRƯỜNG THÀNH PHẦN DUNG DỊCH MẸ Môi trường MS Macro MS (stock 20X) g/L NH4NO3 33 g KNO3 38 g MgSO4,7H2O 7,4 g KH2PO4 3,4 g Micro MS (stock 1000X) g/L MnSO4,H2O 16,7 g ZnSO4,7H2O 8,6 g H3BO3 6,2 g CuSO4,5H2O 0,025 g Na2MoO4,2H2O 0,25 g CoCl2,6H2O 0,025 g KI 0,83 g CaCl₂ (stock 100X) g/L CaCl₂.2H2O 44 g MS FeEDTA (stock 100X) g/L Na₂EDTA.2H₂O 3,73 g FeSO₄.7H₂O 2,78 g Vitamins MS (stock 100X) g/L Acide Nicotinique 50 mg Pyridoxine-HCl 100 mg Thiamine-HCl 100 mg Glycine 200 mg Môi trường B5 Macro B5 (stock 20X) g/L (NH4)2SO4 2,68 g KNO3 50 g MgSO4,7H2O 5g NaH2PO4 3g CaCl₂.2H2O 3g Micro B5 (stock 100X) g/L MnSO4.H2O 1g ZnSO4,7H2O 0,2 g H3BO3 0,3 g CuSO4,5H2O 0,0025 g CoCl2,6H2O 0,0025 g Na2MoO4,2H2O 0,025 g KI 0,075 g B5 FeEDTA (stock 100X) = MS FeEDTA (stock 100X) Na₂EDTA.2H₂O 3,36 g/L FeSO₄.7H₂O 2,78 g/L Vitamins B5 (stock 100X) g/L Acide Nicotinique 100 mg Pyridoxine-HCl 100 mg Thiamine-HCl 1000 mg MỘT SỐ MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY ĐƯỢC SỬ DỤNG TRONG THÍ NGHIỆM Môi trường nảy mầm hạt 1L Macro MS (stock 20X) 50 ml Micro MS (stock 1000X) ml CaCl2 (stock 100X) 10 ml MS FeEDTA (stock 100X) 10 ml Vitamins MS (stock 100X) 10 ml Sucrose 30 g Phytagel 2,5 g pH 5,6 – 5,8 IM (môi trường tạo chồi) MS + 0,5 BAP 1L Macro MS (stock 20X) 50 ml Micro MS (stock 1000X) ml CaCl2 (stock 100X) 10 ml MS FeEDTA (stock 100X) 10 ml Vitamins MS (stock 100X) 10 ml Myo-inositol 100 mg BAP 0,5 mg Sucrose 30 g Phytagel 4g pH 5,6 – 5,8 B5 + 0,5 BAP 1L Macro B5 (stock 20X) 50 ml Micro B5 (stock 100X) 10 ml MS FeEDTA (stock 100X) 10 ml Vitamins B5 (stock 100X) 10 ml Myo-inositol 100 mg BAP 0,5 mg Sucrose 20 g Phytagel 4g pH 5,6 – 5,8 MSB + 0,5 BAP 1L Macro MS (stock 20X) 50 ml Micro MS (stock 1000X) ml CaCl2 (stock 100X) 10 ml MS FeEDTA (stock 100X) 10 ml Vitamins B5 (stock 100X) 10 ml Myo-inositol 100 mg BAP 0,5 mg Sucrose 30 g Phytagel 4g pH 5,6 – 5,8 Môi trường kéo dài chồi 1L Macro MS (stock 20X) 50 ml Micro MS (stock 1000X) ml CaCl2 (stock 100X) 10 ml MS FeEDTA (stock 100X) 10 ml Vitamins MS (stock 100X) 10 ml Myo-inositol 100 mg BAP 0,1 mg Sucrose 30 g Phytagel 4g pH 5,6 – 5,8 ½ MS (môi trường rễ) 1L Macro MS (stock 20X) 25 ml Micro MS (stock 1000X) 0,5 ml CaCl2 (stock 100X) ml MS FeEDTA (stock 100X) ml Vitamins MS (stock 100X) 10 ml Myo-inositol 100 mg Sucrose 30 g Phytagel 2,5 g pH 5,6 – 5,8 [...]... thích hợp cho tái sinh và nhân nhanh từ mẫu lát cắt nốt lá mầm của một số giống đậu dải nghiên cứu 4.3.3.2 Kết quả đánh giá ảnh hưởng của Kinetin đến khả năng tái sinh in vitro và nhân nhanh từ lát cắt nốt lá mầm Bảng 4.8 Kết quả đánh giá ảnh hưởng của Kinetin đến khả năng tái sinh in vitro và nhân nhanh từ lát cắt nốt lá mầm Giống Đậu đen Đậu thúa đắm IT95M-190 Tổng số mẫu cấy (mẫu) 30 Tỷ lệ tái sinh (%)... mẫu/công thức - Các chỉ tiêu đánh giá: Σ số mẫu tái sinh Tỷ lệ tái sinh( %) = x 100% Σ số mẫu cấy Hệ số nhân chồi = Σ số chồi Σ số mẫu cấy 3.4.3 Nghiên cứu đánh giá ảnh hưởng của loại mô cấy và chất điều hòa sinh trưởng đến tái sinh in vitro 3.4.3.1 Nghiên cứu ảnh hưởng của BAP và Kinetin tới khả năng tái sinh in vitro từ nốt lá mầm không kèm lá mầm a Nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ BAP - Công thức 1: MSB... ảnh hưởng của các phương pháp khử trùng mẫu đến khả năng nảy mầm của một số giống đậu dải 12 Nội dung 2: Đánh giá ảnh hưởng của một số môi trường cơ bản tới khả năng tái sinh in vitro của một số nguồn gen đậu dải đại diện Nội dung 3: Nghiên cứu ảnh hưởng của loại mô cấy (nốt lá mầm không kèm lá mầm, nốt lá mầm kèm 1 lá mầm, lát cắt nốt lá mầm), chất điều hòa sinh trưởng đến sự tái sinh in vitro 3.4... 0,1; 0,5; 1; 2 3.4.3.2 Nghiên cứu ảnh hưởng của BAP và Kinetin tới khả năng tái sinh in vitro từ nốt lá mầm kèm 1 lá mầm Các công thức thí nghiệm và tiến hành tương tự như nghiên cứu khả năng tái sinh in vitro từ nốt lá mầm không kèm lá mầm Chỉ khác là thực hiện trên đối tượng mẫu là nốt lá mầm kèm 1 lá mầm 3.4.3.3 Nghiên cứu ảnh hưởng của BAP và Kinetin tới khả năng tái sinh in vitro từ lát cắt nốt... chồi/mẫu CT4 cho kém nhất với 76,67% và 2,13 chồi/mẫu Vậy kết luận với nồng độ Kinetin 0,5 mg/l thích hợp cho tái sinh và nhân nhanh từ mẫu lát cắt nốt lá mầm của một số giống đậu dải nghiên cứu 4.3.4 Kết quả đánh giá ảnh hưởng của loại mô cấy đến khả năng tái sinh và nhân nhanh cây đậu dải Bảng 4.9 Đánh giá ảnh hưởng của loại mô cấy đến khả năng tái sinh và nhân nhanh cây đậu dải Giống Đậu đen Loại... phút là phương pháp phù hợp nhất cho khử trùng một số giống đậu dải nghiên cứu 4.2 Kết quả thí nghiệm 2 nghiên cứu ảnh hưởng của mốt số môi trường cơ bản đến khả năng tái sinh in vitro Kết quả nghiên cứu cho thấy đối với tất cả các nguồn gen nghiên cứu tỷ lệ tái sinh trên cả ba nền môi trường đều rất cao (bảng 4.2) Tỷ lệ tái sinh đạt 100% ở cả 3 công thức đối với giống Đậu đen quốc phòng Cao Bằng Trên... kèm lá mầm của một số giống đậu dải nghiên cứu 4.3.2 Kết quả đánh giá ảnh hưởng của BAP và Kinetin đến khả năng tái sinh in vitro và nhân nhanh từ nốt lá mầm kèm 1 lá mầm 4.3.2.1 Kết quả đánh giá ảnh hưởng của BAP đến khả năng tái sinh in vitro và nhân nhanh từ nốt lá mầm kèm 1 lá mầm Kết quả nghiên cứu cho thấy Tỉ lệ tái sinh ở giống đậu đen cao nhất là 100% (CT2), ở giống đậu thúa đắm thì cả 3 công... lệ tái sinh của các giống gần như không có khác biệt Nghiên cứu ở giống Đậu thúa đắm Nghệ An kết quả cho thấy khả năng tái sinh của nốt lá mầm trên môi trường B5 thấp hơn đáng kể so với môi trường MS và MSB, với tỷ lệ tái sinh tương ứng là 86,67% (CT2) Ở giống IT95M-190, cả 3 công thức đều cho tỉ lệ tái sinh là 93,33% 18 Bảng 4 2 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của một số môi trường cơ bản tới khả năng. .. đậu chứa 20-30% protein và gần 60% carbohydrate (Aguirre và cs, 1998) [5] Trong nghiên cứu của Castro và cs, (2002) [11] cho thấy trong hạt đậu có nhiều sinh tố nhóm B, nhiều sắt và kali 2.1.5 Tình hình nghiên cứu tái sinh in vitro cây đậu dải Trong các nghiên cứu trên câu đậu dải thường sử dụng hạt đậu dải làm nguồn vật liệu nghiên cứu Trong nghiên cứu Bao và cs, (2006) [7] sử dụng cồn 70o NaClO cho. .. Kết quả đánh giá ảnh hưởng BAP và Kinetin đến khả năng tái sinh in vitro và nhân nhanh từ nốt lá mầm không kèm lá mầm 4.3.1.1 Kết quả đánh giá ảnh hưởng của BAP đến khả năng tái sinh in vitro và nhân nhanh từ nốt lá mầm không kèm lá mầm Bảng 4.3 Kết quả đánh giá ảnh hưởng của BAP đến khả năng tái sinh in vitro và nhân nhanh từ nốt lá mầm không kèm lá mầm Giống Đậu đen Đậu thúa đắm IT95M-190 Công thức