Nghiên cứu nhân nhanh giống cây chùm ngây ( moringa oleifera l) chất lượng cao bằng kỹ thuật nuôi cấy mô

VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT  TRẦN VĂN TIẾN NGHIÊN CỨU NHÂN NHANH GIỐNG CÂY CHÙM NGÂY (MORINGA OLEIFERA L.) CHẤT LƢỢNG CAO BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ LUẬN VĂN THẠC SỸ SINH HỌC Số hóa Trung tâm Học liệu / Hà Nội, Tháng 9-2013 VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT  TRẦN VĂN TIẾN NGHIÊN CỨU NHÂN NHANH GIỐNG CÂY CHÙM NGÂY (MORINGA OLEIFERA L.) CHẤT LƢỢNG CAO BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ NGÀNH: SINH HỌC THỰC NGHIỆM MÃ NGÀNH: 60 42 01 14 LUẬN VĂN THẠC SỸ SINH HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC TS HÀ VĂN HUÂN Hà Nội, Tháng 9-2013 Số hóa Trung tâm Học liệu / LỜI CẢM ƠN Để hoàn thiện đề tài luận văn này, xin bày tỏ lòng biết ơn giúp đỡ nhiệt tình thầy (cô) anh (chị) công tác Viện CNSH Lâm nghiệp - Trường Đại học Lâm nghiệp Với lòng biết ơn sâu sắc xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới Thầy giáo hướng dẫn Tiến sĩ Hà Văn Huân tận tình hướng dẫn, giúp đỡ suốt trình hoàn thành luận văn Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới Thầy, Cô Viện sinh thái Tài nguyên Sinh vật – Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Đặc biệt Thạc sỹ Phạm Thị Đỗ Loan tạo điều kiện cho học tập nghiên cứu thời gian học Viện Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn tới thầy cô Hội đồng chấm luận văn tốt nghiệp Thạc sỹ dành thời gian đọc góp ý cho luận văn Cuối cùng, xin bày tỏ lòng biết ơn đến tất bạn bè đồng nghiệp người thân động viên, giúp đỡ có luận văn Hà Nội, tháng năm 2013 Tác giả Trần Văn Tiến Số hóa Trung tâm Học liệu / LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu tôi, có hỗ trợ từ giáo viên hướng dẫn TS Hà Văn Huân Các nội dung nghiên cứu kết đề tài trung thực chưa công bố công trình nghiên cứu trước Những số liệu bảng biểu phục vụ cho việc phân tích, nhận xét, đánh giá tác giả thu thập từ nguồn khác có ghi phần tài liệu tham khảo Ngoài ra, đề tài sử dụng số nhận xét, đánh số liệu tác giả, quan tổ chức khác thể phần tài liệu tham khảo Nếu phát có gian lận xin hoàn toàn chịu trách nhiệm trước Hội đồng, kết luận văn Hà Nội, tháng 09 năm 2013 Tác giả Trần Văn Tiến Số hóa Trung tâm Học liệu / MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Giới thiệu Chùm Ngây 1.1.1 Vị trí phân loại 1.1.2 Đặc điểm sinh thái học 1.1.3 Giá trị sử dụng Chùm Ngây 1.1.3.1 Giá trị dinh dưỡng 1.1.3.2 Giá trị dược học 10 1.4 Tổng quan nuôi cấy mô tế bào 11 1.4.1 Cơ sở phương pháp nuôi cấy mô – tế bào 11 1.4.2 Quy trình nhân giống in vitro 12 1.4.3 Các điều kiện cần thiết nuôi cấy in vitro 13 1.4.3.1 Môi trường nuôi cấy 13 1.4.3.2 Vật liệu nuôi cấy 17 1.4.3.3 Điều kiện vô trùng 17 1.5 Một số thành tựu nhân giống trồng phương pháp nuôi cấy mô-tế bào Việt Nam 18 CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG – VẬT LIỆU - PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Đối tượng, vật liệu nghiên cứu 20 2.2 Phương pháp nghiên cứu 21 2.2.1 Phương pháp luận 21 Số hóa Trung tâm Học liệu / 2.2.2 Phương pháp thực nghiệm 21 2.2.2.1 Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng loại hóa chất thời gian khử trùng đến khả tạo mẫu in vitro 21 2.2.2.2 Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng môi trường dinh dưỡng đến khả tái sinh chồi Chùm Ngây in vitro 23 2.2.2.3 Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng BAP đến khả tái sinh chồi Chùm Ngây in vitro 24 2.2.2.4 Thí nghiệm 4: Ảnh hưởng tổ hợp BAP Kinetin đến khả tái sinh chồi chùm Ngây in vitro 25 5: Ảnh hưởng môi trường dinh dưỡng đến khả rễ chồi Chùm Ngây in vitro 25 2.2.2.6 Thí nghiệm 6: Ảnh hưởng IBA đến khả rễ chồi 26 2.2.2.7 Thí nghiệm 7: Ảnh hưởng giá thể đến tỷ lệ sống Chùm Ngây in vitro vườn ươm 27 2.2.3 Các tiêu theo dõi thu thập 27 2.2.3.1 Chỉ tiêu thu thập: 27 2.2.3.2 Phương pháp xử lý số liệu: Số liệu xử lý chương trình Excel 28 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29 3.1 Xác định công thức khử trùng thích hợp cho tạo mẫu in vitro 29 3.2 Ảnh hưởng môi trường dinh dưỡng đến khả tái sinh chồi Chùm Ngây in vitro 31 3.3 Ảnh hưởng BAP đến khả tái sinh chồi Chùm Ngây in vitro 32 3.4 Ảnh hưởng tổ hợp BAP Kinetin đến khả nhân nhanh chồi 35 ồi 37 3.5 3.6 Ảnh hưởng nông độ IBA đến khả rễ chồi 40 3.7 Ảnh hưởng giá thể đến tỷ lệ sống Chùm Ngây in vitro vườn ươm 42 CHƢƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 45 4.1 Kết luận 45 4.2 Kiến nghị 45 Số hóa Trung tâm Học liệu / Danh mục bảng Bảng 2.1 Ảnh hưởng loại hóa chất thời gian khử trùng đến khả tạo mẫu in vitro 22 Bảng 2.2 Ảnh hưởng môi trường dinh dưỡng đến khả tái sinh chồi Chùm Ngây in vitro 24 Bảng 2.3 Ảnh hưởng BAP đến khả tái sinh chồi Chùm 25 Ngây in vitro 25 Bảng 2.4 Ảnh hưởng tổ hợp BAP Kinetin đến khả tái sinh chồi chùm Ngây in vitro 25 Bảng 2.5 Ảnh hưởng môi trường dinh dưỡng đến khả rễ 26 Bảng 2.6 Ảnh hưởng IBA đến khả rễ chồi 26 Bảng 2.7 Ảnh hưởng loại giá thể đến tỷ lệ sống Chùm Ngây in vitro trồng vườn ươm 27 Bảng 3.1 Ảnh `hưởng loại hóa chất thời gian khử trùng đến khả tạo mẫu in vitro 29 Bảng 3.2 Ảnh hưởng môi trường dinh dưỡng đến khả tái sinh chồi Chùm Ngây in vitro 31 Bảng 3.3 Ảnh hưởng BAP đến khả tái sinh chồi Chùm Ngây 34 in vitro 34 Bảng 3.4 Ảnh hưởng tổ hợp BAP Kinetin đến khả tái sinh chồi chùm Ngây in vitro 36 Bảng 3.5 Ảnh hưởng môi trường dinh dưỡng đến khả rễ chồi Chùm Ngây in vitro 38 Bảng 3.6 Ảnh hưởng IBA đến khả rễ chồi 40 Số hóa Trung tâm Học liệu / Bảng 3.7 Ảnh hưởng loại giá thể đến tỷ lệ sống Chùm Ngây in vitro trồng vườn ươm 42 Số hóa Trung tâm Học liệu / Danh mục hình ảnh Hình 1.1 Cây Chùm Ngây 1.2 Ngây Hình 2.1 Hạt Chùm Ngây 20 Hình 3.1 Hạt Chùm Ngây nảy mầm môi trường MS 30 Hình 3.2 Chồi Chùm Ngây môi trường CT1 (A) môi trường CT2 (B) 35 Hình 3.3 Chồi Chùm Ngây môi trường CT7 sau tuần (A) tuần (B) nuôi cấy 37 Hình 3.4 Rễ Chùm Ngây môi trường CR6 sau tuần (A) sau tuần (B)39 Hình 3.5 Cây Chùm Ngây in vitro hoàn chỉnh 39 Hình 3.6 Rễ Chùm Ngây môi trường TN2 sau tuần (A) sau tuần (B)41 Hình 3.7 Cây Chùm Ngây in vitro hoàn chỉnh 42 Số hóa Trung tâm Học liệu / Danh mục từ viết tắt WHO : World Health Organization FAO : Food and Agriculture Organization DNA : Deoxyribonucleic acid ĐHST : Điều hòa sinh trưởng MT : Môi trường IAA : Indol acetic acid IBA : Indol butyric acid NAA : 1-Naphthalene acetic acid 2.4-D : 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid BAP : 6-Benzylaminopurine MS : Murashige and Skoog medium WPM : Woody Plant Medium B5 : Gamborg Medium N6 : Chu medium CT : Công thức CTTN : Công thức thí nghiệm CTMT : Công thức môi trường CR : Công thức môi trường rễ GT : Công thức giá thể đưa vườn ươm TDZ : Thidiaruzone TB : Trung bình Số hóa Trung tâm Học liệu / Số hóa Trung tâm Học liệu /