ACID FOLIC Acidum folicum C19H19N7O6 P.t.l: 441,4 Acid folic acid (2S)-2-[[4-[[(2-amino-4-oxo-1,4-dihydropteridin-6-yl) methyl] amino] benzoyl] amino]pentandioic, phải chứa từ 96,0 đến 102,0% C19H19N7O6, tính theo chế phẩm khan Tính chất Bột kết tinh mầu vàng nhạt vàng cam Thực tế không tan nước hầu hết dung môi hữu cơ, tan dung dịch acid kiềm loãng Định tính Có thể chọn hai nhóm định tính sau: Nhóm I: A, B Nhóm II: A, C A Góc quay cực riêng (Phụ lục 6.4) Từ + 18o đến + 22o (tính theo chế phẩm khan) Hoà tan 0,25 g chế phẩm dung dịch natri hydroxyd 0,1 M pha loãng thành 25,0 ml với dung môi B Ở phần định lượng, thời gian lưu pic thu sắc ký đồ dung dịch thử phải tương ứng với thời gian lưu pic thu sắc ký đồ dung dịch đối chiếu (1) C Phương pháp sắc ký lớp mỏng (Phụ lục 5.4) Bản mỏng: Silicagel G (TT) Dung môi khai triển: Amoniac đậm đặc - propanol – ethanol 96% (20 : 20 : 60) Dung dịch thử: Hòa tan 50 mg chế phẩm hỗn hợp methanol - amoniac đậm đặc (9 : 2) pha loãng thành 100 ml với hỗn hợp dung môi Dung dịch đối chiếu: Hòa tan 50 mg acid folic chuẩn (ĐC) hỗn hợp gồm thể tích methanol (TT) thể tích amoniac đậm đặc (TT) pha loãng thành 100 ml với hỗn hợp dung môi Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên mỏng µl dung dịch Triển khai sắc ký đến dung môi khoảng 15 cm Để khô mỏng không khí soi ánh sáng tử ngoại bước sóng 365 nm Vết sắc ký đồ thu từ dung dịch thử phải tương ứng vết thu sắc ký đồ từ dung dịch đối chiếu vị trí, kích thước màu sắc Tạp chất liên quan Phương pháp sắc ký lỏng (Phụ lục 5.3) Pha động: Methanol - dung dịch có chứa kali dihydrophosphat 1,116% dikali hydrophosphat 0,550% (12 : 88) Dung dịch thử: Hoà tan 0,100 g chế phẩm ml dung dịch natri carbonat 2,86% pha loãng thành 100,0 ml với pha động Pha loãng 2,0 ml dung dịch với pha động thành 10,0 ml Dung dịch đối chiếu (1): Hoà tan 0,100 g acid folic chuẩn (ĐC) ml dung dịch natri carbonat 2,8,6% pha loãng thành 100,0 ml với pha động Pha loãng 2,0 ml dung dịch với pha động thành 10,0 ml Dung dịch đối chiếu (2): Hoà tan 20 mg acid pteroic (TT) ml dung dịch natri carbonat (TT) 2,86% pha loãng thành 100,0 ml với pha động Trộn 1,0 ml dung dịch với 1,0 ml dung dịch đối chiếu (1) pha loãng thành 100,0 ml với pha động Dung dịch đối chiếu (3): Pha loãng 2,0 ml dung dịch thử với pha động thành 20,0 ml Pha loãng 1,0 ml dung dịch với pha động thành 20,0 ml Dung dịch đối chiếu (4): Hoà tan 10,0 mg acid N-(4-aminobenzoyl)-L-glutamic (TT) ml dung dịch natri carbonat (TT) 2,8,6% pha loãng thành 100,0 ml với pha động Pha loãng 1,0 ml dung dịch với pha động thành 100,0 ml Dung dịch đối chiếu (5): Hoà tan 12,0 mg acid pteroic (TT) ml dung dịch natri carbonat (TT) 2,86% pha loãng thành 100,0 ml với pha động Pha loãng 1,0 ml dung dịch thành 100,0 ml với pha động Điều kiện sắc ký: Cột thép không gỉ (0,25 m x 4,0 mm) nhồi pha tĩnh B (octylsilyl silica gel dùng cho sắc ký lỏng, 5µm) Detector quang phổ hấp thụ tử ngoại bước sóng 280 nm Tốc độ dòng: 0,6 ml/phút Thể tích tiêm : 5µl Cách tiến hành: Tiêm dung dịch đối chiếu (2) Độ phân giải hai pic acid folic acid pteroic (tạp chất D) không nhỏ 4,0 Thời gian lưu tương đối so với acid folic (khoảng 8,5 phút) tạp chất A khoảng 0,5; tạp chất B khoảng 0,6; tạp chất C khoảng 0,9; tạp chất E khoảng 1,27; tạp chất D khoảng 1,33; tạp chất F khoảng 2,2 Tiêm dung dịch thử dung dịch đối chiếu (3), (4), (5) tiếp tục chạy sắc ký khoảng thời gian gấp lần thời gian lưu acid folic Trên sắc ký đồ thu đ ược từ dung dịch thử, diện tích pic phụ tương ứng với tạp chất A không lớn diện tích pic thu sắc ký đồ dung dịch đối chiếu (4) (0,5%), diện tích pic phụ tương ứng với tạp chất D không lớn diện tích pic thu sắc ký đồ dung dịch đối chiếu (5) (0,6%), diện tích pic tạp chất khác pic pic tương ứng với tạp chất A, tạp chất D không lớn diện tích pic thu sắc ký đồ dung dịch đối chiếu (3) (0,5%) Tổng diện tích pic tạp khác pic pic tương ứng với tạp chất A, tạp chất D không lớn hai lần diện tích pic thu sắc ký đồ dung dịch đối chiếu (3) (1,0%) Bỏ qua pic dung môi pic có diện tích nhỏ 0,1 lần diện tích pic thu sắc ký đồ dung dịch đối chiếu (3) (0,05%) Ghi : Tạp chất A: Acid (2S)-2-[(4-aminobenzoyl)amino]pentanedioic (acid N-(4-aminobenzoyl)-Lglutamic) Tạp chất B: 2,5,6-triaminopyrimidin-4(1H)-on, Tạp chất C: Acid (2S)-2-[[4-[[(2-amino-4-oxo-1,4-dihydropteridin-7yl)methyl]amino]benzoyl]amino]pentanedioic (acid isofolic) Tạp chất D: Acid 4-[[(2-amino-4-oxo-1,4-dihydropteridin-6-yl)methyl]amino]benzoic (acid pteroic), Tạp chất E: Acid (2S)-2-[[4-[bis[(2-amino-4-oxo-1,4-dihydropteridin-6yl)methyl]amino]benzoyl]amino]pentanedioic (acid 6-pterinylfolic) Tạp chất F: 2-amino-7-(cloromethyl)pteridin-4(1H)-on Nước Từ 5,0% đến 8,5% (Phụ lục 10.3) Dùng 0,150 g chế phẩm Tro sulfat Không 0,2% (Phụ lục 9.9) Dùng 1,0 g chế phẩm Định lượng Phương pháp sắc ký lỏng (Phụ lục 5.3) Điều kiện sắc ký mô tả phần tạp chất liên quan Tiêm dung dịch thử dung dịch đối chiếu (1) Tính hàm lượng C 19H19N7O6 acid folic dựa diện tích pic acid folic thu sắc ký đồ dung dịch thử dung dịch đối chiếu (1) hàm lượng acid folic chuẩn công bố Bảo quản Bảo quản lọ kín, tránh ánh sáng Nhãn Phải quy định rõ thời hạn sử dụng điều kiện bảo quản Loại thuốc Ngăn ngừa điều trị bệnh thiếu máu Chế phẩm Viên nén