Ảnh hưởng của nhóm chất điều hòa sinh trưởng riêng rẽ và phối hợp đến sự phát sinh chồi và hệ số nhân từ vảy củ đôi .... Ảnh hưởng của 2,4-D tới khả năng phát sinh hình thái từ đế củErr
Trang 1ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI
TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN
-
Nguyễn Thị Thu Thủy
NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG IN VITRO MỘT SỐ DÒNG
LAN HUỆ (Hippeastrum equestre)
LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC
Hà Nội – 2014
Trang 2ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI
TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN
-
Nguyễn Thị Thu Thủy
NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG IN VITRO MỘT SỐ DÒNG
LAN HUỆ (Hippeastrum equestre)
Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm
LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC
NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC:
PGS TS Nguyễn Trung Thành
Hà Nội – 2014
Trang 3LỜI CẢM ƠN
Lời đầu tiên, em xin bày tỏ sự kính trọng và lòng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Nguyễn Trung Thành, thầy đã luôn tận tình hướng dẫn, giúp đỡ em trong suốt quá trình thực hiện và hoàn thành luận văn này
Đặc biệt, em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới GS.TS Nguyễn Quang Thạch, TS Nguyễn Hạnh Hoa và toàn thể tập thể cán bộ, nhân viên trong Viện Sinh học Nông nghiệp, Học viện Nông nghiệp Việt Nam đã nhiệt tình chỉ bảo, giúp đỡ, tạo điều kiện về cơ sở vật chất, chia sẻ kinh nghiệm quý báu để em hoàn thành tốt đề tài này
Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc nhất tới gia đình, người thân và bạn bè, những người luôn chia sẻ, động viên, giúp đỡ và góp ý cho
em trong suốt quá trình học tập và thực hiện đề tài
Em xin chân thành cảm ơn!
Hà Nội, ngày 05 tháng 12 năm 2014
Học viên
Nguyễn Thị Thu Thủy
Trang 4DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT
Trang 5MỤC LỤC
Trang
LỜI CẢM ƠN i
DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ii
MỤC LỤC iii
DANH MỤC BẢNG vi
DANH MỤC HÌNH vii
MỞ ĐẦU 8
Chương 1 - TỔNG QUAN Error! Bookmark not defined.
1.1 Giới thiệu chung về cây Lan huệ Error! Bookmark not defined.
1.1.1 Đặc điểm thực vật học và phân bố của cây Lan huệError! Bookmark not defined 1.1.2 Giá trị kinh tế và sử dụng Error! Bookmark not defined.
1.2 Một số phương pháp nhân giống vô tính cây Lan huệError! Bookmark not defined.
1.2.1 Phương pháp tách củ con Error! Bookmark not defined.
1.2.2 Phương pháp cắt lát Error! Bookmark not defined.
1.2.3 Phương pháp nhân giống in vitro Error! Bookmark not defined.
1.3 Quy trình sản xuất cây nuôi cấy mô Error! Bookmark not defined.
1.3.1 Lấy mẫu và xử lý mẫu Error! Bookmark not defined.
1.3.2 Tái sinh mẫu nuôi cấy Error! Bookmark not defined.
1.3.3 Nhân nhanh chồi Error! Bookmark not defined.
1.3.4 Tái sinh rễ Error! Bookmark not defined.
1.3.5 Chuyển cây ra vườn ươm Error! Bookmark not defined.
1.4 Tình hình nghiên cứu về cây Lan huệ Error! Bookmark not defined.
1.4.1 Tình hình nghiên cứu cây Lan huệ trên thế giớiError! Bookmark not defined.
1.4.2 Tình hình nghiên cứu cây Lan huệ ở Việt NamError! Bookmark not defined.
Chương 2 – VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨUError! Bookmark not defined.
2.1 Đối tượng, vật liệu, địa điểm và thời gian nghiên cứuError! Bookmark not defined.
2.1.1 Đối tượng Error! Bookmark not defined.
2.1.2 Vật liệu Error! Bookmark not defined.
Trang 62.1.3 Điều kiện nuôi cấy Error! Bookmark not defined.
2.1.4 Địa điểm và thời gian nghiên cứu Error! Bookmark not defined.
2.2 Phương pháp bố trí thí nghiệm Error! Bookmark not defined.
2.2.1 Giai đoạn nuôi cấy khởi động Error! Bookmark not defined.
2.2.2 Giai đoạn nhân nhanh Error! Bookmark not defined.
2.2.3 Giai đoạn tạo cây hoàn chỉnh Error! Bookmark not defined.
2.2.4 Giai đoạn vườn ươm Error! Bookmark not defined.
2.3 Các chỉ tiêu theo dõi Error! Bookmark not defined.
2.4 Phương pháp tiến hành Error! Bookmark not defined.
2.5 Phương pháp xử lý số liệu Error! Bookmark not defined.
Chương 3 - KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Error! Bookmark not defined.
3.1 Nghiên cứu phương pháp khử trùng mẫu tạo nguồn vật liệu nuôi cấy cho
nhân giống in vitro các dòng Lan huệ Error! Bookmark not defined.
Xác định thời gian khử trùng thích hợp Error! Bookmark not defined.
3.2 Ảnh hưởng của nhóm chất điều hòa sinh trưởng riêng rẽ và phối hợp đến
sự phát sinh chồi và hệ số nhân từ vảy củ đôi Error! Bookmark not defined.
3.2.1 Ảnh hưởng của BA tới sự phát sinh chồi của mẫu nuôi cấyError! Bookmark not defined.
3.2.2 Ảnh hưởng của sự phối hợp BA và Kinetin đến khả năng phát sinh chồi từ
vảy củ đôi Error! Bookmark not defined.
3.3 Nghiên cứu khả năng phát sinh hình thái và nhân nhanh từ đế củError! Bookmark not defined.
3.3.1 Ảnh hưởng của 2,4-D tới khả năng phát sinh hình thái từ đế củError! Bookmark not defined.
3.3.2 Ảnh hưởng của α-NAA tới sự phát sinh hình thái từ đế củError! Bookmark not defined.
3.3.3 Nghiên cứu ảnh hưởng của BA và α-NAA đến khả năng phát sinh hình thái
từ đế củ Error! Bookmark not defined.
3.4 Nghiên cứu ảnh hưởng của thành phần môi trường tới chất lượng chồi in
vitro của 5 dòng Lan huệ Error! Bookmark not defined.
3.4.1 Ảnh hưởng của hàm lượng nước dừa tới chất lượng chồi in vitroError! Bookmark not defined.
3.4.2 Ảnh hưởng của hàm lượng đường tới chất lượng chồi in vitroError! Bookmark not defined.
Trang 73.5 Nghiên cứu ra rễ tạo cây hoàn chỉnh Error! Bookmark not defined.
3.5.1 Ảnh hưởng của IBA tới khả năng ra rễ và chất lượng rễError! Bookmark not defined.
3.5.2 Ảnh hưởng của than hoạt tính tới khả năng ra rễ và chất lượng rễError! Bookmark not defined.
3.6 Nghiên cứu ảnh hưởng của một số loại giá thể đến tỷ lệ sống và sinh
trưởng và phát triển của cây Lan huệ sau in vitro ngoài vườn ươmError! Bookmark not defined.
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Error! Bookmark not defined.
Kết luận Error! Bookmark not defined.
Đề nghị Error! Bookmark not defined.
TÀI LIỆU THAM KHẢO 9
PHỤ LỤC
Trang 8DANH MỤC BẢNG
Trang
Bảng 3.1 Ảnh hưởng của thời gian khử trùng đến khả năng vào mẫu của các dòng
Lan huệ (sau 4 tuần) Error! Bookmark not defined.
Bảng 3.2 Ảnh hưởng của BA đến khả năng phát sinh hình thái của vảy củ đôi (sau
4 tuần) Error! Bookmark not defined.
Bảng 3.3 Ảnh hưởng của sự phối hợp BA và Kinetin đến khả năng phát sinh hình
thái của vảy củ đôi (Sau 4 tuần) Error! Bookmark not defined.
Bảng 3.4 Ảnh hưởng của BA, Kinetin v{ α-NAA đến khả năng nh}n nhanh chồi
in vitro từ vảy củ đôi (Sau 4 tuần) Error! Bookmark not defined.
Bảng 3.5 Ảnh hưởng của 2,4-D tới khả năng phát sinh hình thái từ đế củ (sau 4
tuần) Error! Bookmark not defined.
Bảng 3.6 Ảnh hưởng của α-NAA tới khả năng phát sinh hình thái từ đế củ (sau 4
tuần) Error! Bookmark not defined.
từ đế củ (Sau 4 tuần) Error! Bookmark not defined.
đế củ (Sau 4 tuần) Error! Bookmark not defined.
Bảng 3.9 Ảnh hưởng của hàm lượng nước dừa tới chất lượng chồi in vitro (sau 4
tuần) Error! Bookmark not defined.
Bảng 3.10 Ảnh hưởng của hàm lượng đường tới chất lượng chồi in vitro (sau 4
tuần) Error! Bookmark not defined.
Bảng 3.11 Ảnh hưởng của IBA tới khả năng ra rễ và chất lượng rễ của 5 dòng Lan
huệ (sau 4 tuần) Error! Bookmark not defined.
Bảng 3.12 Ảnh hưởng của than hoạt tính tới khả năng ra rễ và chất lượng rễ của 5
dòng Lan huệ (sau 4 tuần) Error! Bookmark not defined.
Bảng 3.13 Ảnh hưởng của các loại giá thể đến tỷ lệ sống, sinh trưởng và phát triển
Trang 9DANH MỤC HÌNH
Trang
Hình 1.1 Hoa Lan huệ (Hippeastrum equestre) 5
Hình 1.2 Phương pháp cắt lát củ của cây Lan huệ Error! Bookmark not defined.
Hình 3.1 Ảnh hưởng của BA đến khả năng phát sinh hình thái của vảy củ đôi (Sau
4 tuần) Error! Bookmark not defined.
Hình 3.3 Ảnh hưởng của sự phối hợp BA, Kinetin và α-NAA đến khả năng nhân
nhanh chồi in vitro từ vảy củ đôi (sau 4 tuần)Error! Bookmark not defined.
Hình 3.4 Ảnh hưởng của α-NAA đến khả năng tạo mô sẹo từ đế củ (sau 4 tuần)Error! Bookmark not defined.
Hình 3.5 Ảnh hưởng của BA và α-NAA đến khả năng tạo mô sẹo từ đế củ (sau 4
tuần) Error! Bookmark not defined.
Hình 3.6 So sánh ảnh hưởng của BA và α-NAA đến khả năng tạo mô sẹo từ đế củ
(sau 4 tuần ) Error! Bookmark not defined.
Hình 3.7 Ảnh hưởng của BA, Kinetin đến khả năng phát sinh ch ồi từ mô sẹo của
dòng Lan huệ H10 và H18 (sau 4 tuần) Error! Bookmark not defined.
Hình 3.8 Ảnh hưởng của nước dừa tới chất lượng chồi in vitro (sau 4 tuần)Error! Bookmark not defined.
Hình 3.9 Ảnh hưởng của IBA tới khả năng ra rễ và chất lượng rễ của 5 dòng Lan
huệ nuôi cấy in vitro (sau 4 tuần) Error! Bookmark not defined.
Hình 3.10 Ảnh hưởng của một số loại giá thể đến tỷ lệ sống và sinh trưởng và phát
triển của cây Lan huệ sau in vitro ngoài vườn ươmError! Bookmark not defined
Hình 3.11 Ảnh hưởng của một số loại giá thể tới số lượng rễ mới và chiều dài rễ
Trang 10MỞ ĐẦU
Lan huệ (Hippeastrum equestre) l{ một trong những lo{i hoa được yêu thích
v{ rất có tiềm năng ph|t triển trong những năm gần đ}y Lan huệ được trồng kh| phổ biến để l{m cảnh do m{u sắc đa dạng, khả năng thương mại cao khi l{ hoa cắt c{nh hoặc được trồng trong chậu cảnh hay v{o c|c dịp lễ, tết Bên cạnh đó, đ}y còn l{ c}y thuốc chữa bệnh vì theo đông y trong củ của nó có chứa c|c th{nh phần biệt dược có gi| trị như c|c ankaloids [21], c|c lectins có khả năng chống ung thư, cầm m|u, chữa l{nh vết thương…
Lan huệ ở Việt Nam hiện nay còn nghèo n{n về m{u sắc (chủ yếu là màu đỏ), thời gian ra hoa của chúng lại kh| muộn (khoảng từ giữa tháng 3 đến cuối tháng 5) nên khả năng ph|t triển lo{i hoa n{y còn rất nhiều hạn chế Bằng con đường thu
thập nguồn gen, lai hữu tính v{ chọn lọc có thể l{m phong phú bộ giống hoa Lan huệ
ở nước ta Năm 2009 – 2010, Nguyễn Hạnh Hoa v{ cộng sự đ~ chọn tạo ra h{ng loạt con lai có m{u sắc lạ, đẹp, đa dạng, hoa có độ bền l}u v{ có thời gian ra hoa đ|p ứng đúng thị trường, điển hình l{ c|c dòng H2, H4, H9, H10, H18 Tuy nhiên, c|c dòng Lan huệ n{y lại có nhược điểm l{ sinh sản vô tính kém (trong điều kiện tự nhiên), đặc biệt l{ c|c dòng Lan huệ H2, H4 v{ H18 Do vậy, những c| thể lai có đặc điểm ưu
tú được chọn lọc cần phải nh}n giống vô tính nhằm duy trì được tính trạng ban đầu
Từ nhiều năm nay, để nh}n giống vô tính c}y Lan huệ có thể sử dụng c|c phương ph|p: T|ch chồi hoặc củ nhỏ từ cụm c}y mẹ; kỹ thuật cắt l|t (Chipping); nh}n giống
bằng hạt; sử dụng phương ph|p nh}n giống in vitro Mặc dù đơn giản nhưng hiệu
quả khi nh}n giống bằng phương ph|p truyền thống không cao do thời gian nh}n giống d{i, hệ số nh}n thấp, c}y không đồng nhất cũng như không tạo được c}y sạch
bệnh Phương ph|p nh}n giống in vitro đ~ khắc phục được những nhược điểm đó
tạo được c}y con sạch bệnh, thời gian nh}n giống ngắn, hệ số nh}n giống cao, c}y đồng nhất, do vậy đ|p ứng được nhu cầu về số lượng giống có chất lượng cao v{ tính
Trang 11giống vô tính c|c dòng Lan huệ trên l{ rất cần thiết Năm 2009 – 2010, một số t|c giả
trong nước đ~ bước đầu x|c định kết quả để x}y dựng quy trình nh}n nhanh in vitro hoa Loa kèn đỏ nhung (H equestre Herb.) v{ c}y Lan huệ mạng (H reticulatum var striatifolium) [10,11] Bên cạnh việc kế thừa một số kết quả trên cần phải có những nghiên cứu tiếp theo nhằm bổ sung v{ ho{n thiện quy trình nh}n giống in vitro c}y
hoa Lan huệ để nh}n nhanh nguồn gen ưu tú phục vụ cho công t|c chọn tạo giống
Xuất ph|t từ những yêu cầu đó, chúng tôi tiến h{nh đề t{i: “Nghiên cứu nhân giống
in vitro một số dòng Lan huệ (Hippeastrum equestre)”
Mục tiêu nghiên cứu
vitro của một số dòng Lan huệ từ c|c nguồn vật liệu nuôi cấy kh|c nhau
nhanh một số dòng Lan huệ
Ý nghĩa khoa học và thực tiễn
phương ph|p nuôi cấy mô tế b{o, góp phần l{m phong phú cơ sở dữ liệu về kỹ thuật nuôi cấy mô c}y hoa
nh}n giống Lan huệ thương mại có thương hiệu riêng v{ hiệu quả kinh tế cao
được những hạn chế của nh}n giống truyền thống, duy trì v{ nh}n nhanh kiểu gen được chọn lọc
-
TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt
Trang 122 Nguyễn Tiến B}n (1997), Cẩm nang tra cứu và nhận biết các họ thực vật hạt kín ở Việt Nam, NXB Nông nghiệp, H{ Nội
Nội
(Flora of Viet Nam), NXB Khoa học v{ Kĩ thuật, H{ Nội
hoa cây cảnh họ Hành (Liliaceae) Bước đầu tạo vật liệu khởi đầu cho chọn và nhân giống một số loài bằng kĩ thuật nuôi cấy mô và gây đột biến, B|o c|o tổng
kết đề t{i cấp Bộ m~ số B2008 - 11- 80
Quốc Gia Th{nh phố Hồ Chí Minh
(2004), Giáo trình công nghệ sinh học Nông nghiệp, NXB Nông nghiệp, H{ Nội
Kèn, Luận văn Thạc sĩ Nông nghiệp, Trường Đại học Nông nghiệp H{ Nội
cứu quy trình nh}n nhanh in vitro c}y Lan huệ mạng”, Tạp chí Khoa học và Phát triển, Tập 8, số 3: 426 – 432, Trường Đại học Nông nghiệp H{ Nội
(2009), “Bước đầu nghiên cứu quy trình nh}n nhanh in vitro c}y hoa loa kèn đỏ nhung (Hippeastrum equestre Herb.)”, Tạp chí Khoa học và Phát triển, Tập 7, số 4,
tr.453- 459, Trường Đại học Nông nghiệp H{ Nội
sự tăng trưởng của một số cây thân gỗ nhiệt đới và cận nhiệt đới trong điều kiện nuôi cấy in vitro, Hội nghị tổng kết NCCB trong KHTN, tr 42-44
Trang 1313 Vũ Văn Vụ, Vũ Thanh T}m, Ho{ng Minh Tấn (2007), Sinh lý học thực vật, NXB
Gi|o dục H{ Nội
Tài liệu Tiếng Anh
Tissues of Amaryllis in Culture”, Bulletin of the Torrey Botany Club, 103 (2), pp
53-56
cytokinin on the multiplication rate and growth of Amaryllis (Hippeastrum johnsonii) bulbs in vitro”, Propagation of Ornamental Plants, 13(2), pp 78-85
revised edition Elsevier Science B.V The Netherlands, p.113
morphogenesis from ovaries of Hippeastrum x Hybridum”, J Fac Agr Kyushu Univ., 50 (1), pp 19 – 25
propagation of Amaryllis belladonna”, Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 31,
pp.179-184
application”, Kluwer Academic Publishers, Dordrecht, the Netherlnds, pp.1-13
(2001), “Various cutting methods for the propagation of Hippeastrum bulbs”, Biotronics, 30, pp 75-83
Vol XV: The Alkaloids, pp 83- 164
2nd Edn Exegetics, Edington, UK., pp 337 – 356
Trang 1423 Hussey G (1975), “Totipotency in tissue explants and callus of some members of
the Liliaceae, Iridaceae and Amaryllidaceae”, J Exp Rot, 26, pp 253-262
Plant Physiol, 12, p.395
Plant Physiol., Volume 25, pp 135-166
bioassays with tobacco tissue cultures”, Plant Physiol., 15, pp 473-497
New dehli, India, pp.22-49
30 Nhut D T., Le B V., Fukai S., Tanaka M., Van T T (2001), “Effects of activated charcoal, explant size, explant position and sucrose concentration on plant and
shoot regeneration of Lilium longiflorum via young stem culture”, Plant Growth Reg, 33, pp 59-65
several tissue culture procedures”, Horticultural Science, 25, pp 800-802
Hippeastrum bulblets by in vitro culture”, Herbertia, 47(1), pp 54-55
culture media on sucrose hydrolysis”, Plant Growth Regulation, 29, pp 135-141
Amaryllis (Hippeastrum johnsonii), a bulbous plant, via NAA and 2-iP”, Annals of Biological Research, 4 (2), pp 69-71
Trang 1535 Seabrook J.E.A., Cumming B.G (1977), “The in-vitro propagation of Amaryllis
adventitious shoot and root apices on Narcissus (daffodil and narcissus) cultivar tissue”, Can J Bot, 54, pp 814 - 819
organ culture, 33 (2), pp 133-141
(2010), “In vitro Bulb production in Hippeastrum (Hipp hybridum)”, Journal of Central European Agriculture, Volume 11, No.4, pp 469-474
elimination of Viruses by Bulb-scale Cultures of Hippeastrum hybridum Bulbs”, Plant Tissue Culture Letters, 13(2), pp 147-152
exercise, CRC Press Florida, America
Activated Carbon on the elemental composition of plant tissue culture media”,
IPST Technical Paper, Series Number 992
Tài liệu từ internet
snews&mid=792&mcid=256&pid=&menuid