Nghiên cứu khả chống ung thư hoạt chất phân lập từ Vông nem (Erythrina orientalis (L.) Murr., Fabaceae) Hậu phác (Magnolia officinalis Rehd Et wils, Magnoliaceae)

Nghiên cứu khả chống ung thư hoạt chất phân lập từ Vông nem (Erythrina orientalis (L.) Murr., Fabaceae) Hậu phác (Magnolia officinalis Rehd Et wils, Magnoliaceae) Nguyễn Thị Ngọc Ánh Trường Đại học Khoa học Tự nhiên Luận văn Thạc sĩ ngành: Sinh học thực nghiệm; Mã số: 60 42 30 Người hướng dẫn: TS Hoàng Thị Mỹ Nhung Năm bảo vệ: 2012 Abstract: Tổng quan ung thư , mơ hình sàng lọc thuốc chống ung thư , số dòng tế bào ung thư , chế phẩm Honokiol , Magnolol, Derrone thuốc Taxol Khảo sát ảnh hưởng ba chất Honokiol , Magnolol Derrone lên tăng trưởng số dịng tế bào ung thư ni cấy đơn lớp 2D Nghiên cứu ảnh hưởng Honokiol lên mơ hình 3D khối cầu đa bào tế bào ung thư Bước đầu nghiên cứu chế tác động Honokiol lên hệ thống vi sợi tác động ba chất lên hoạt động enzyme Aurora kinaza tế bào ung thư Keywords: Cây vông nem; Cây hậu phác; Hoạt chất phân lập; Khả chống ung thư; Sinh học thực nghiệm; Hóa sinh học Content MỞ ĐẦU Theo Tổ chức Y tế giới – WHO, có khoảng 12.7 triệu ca ung thư 7,6 triệu ca tử vong ung thư ghi nhận năm 2008, 56% số ca 64% trường hợp tử vong nước phát triển Cũng theo dự báo WHO, tới năm 2020, số người mắc ung thư tồn cầu tăng lên đến 15 triệu ca năm Tỷ lệ chết ung thư chiếm 25% tổng số ca tử vong Theo số liệu công bố Hội thảo Quốc gia phòng chống ung thư, năm 2010 Việt Nam có 126.300 ca mắc Căn bệnh nan y tăng nhanh so với 10 năm trước [1] Vốn đất nước thiên nhiên ưu đãi, Việt Nam có thảm thực vật vơ phong phú đa dạng với 12.000 loài thực vật bậc cao khác Từ nhiều kỷ nay, thực vật không nguồn cung cấp dinh dưỡng cho người mà phương thuốc chữa bệnh quý giá bao gồ m thuốc chố ng ung thư Bởi vậy, nghiên cứu tìm hợp chất từ nguồn dược liệu thiên nhiên có khả chữa ung thư hướng nghiên cứu nhiều nhà khoa học thầy thuốc đầu tư tập trung nghiên cứu nhiều năm Trong xu hướng này, chúng tơi tiến hành nghiên cứu hoạt tính kháng u ba chất Honokiol, Magnolol tách chiết từ Hậu phác Magnolia officinalis Rehd Et wils, Magnoliaceae Derrone tách chiết từ Vông nem Erythrina orientalis L Murr., Fabaceae Viện Dược liệu Trung ương cung cấp cho nhóm Nghiên cứu Ung thư thực nghiệm, Khoa Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự Nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội nhằm mục đích: Khảo sát ảnh hưởng ba chất Honokiol, Magnolol Derrone lên tăng trưởng số dòng tế bào ung thư nuôi cấy đơn lớp 2D Nghiên cứu ảnh hưởng Honokiol lên mơ hình 3D khối cầu đa bào tế bào ung thư Bước đầu nghiên cứu chế tác động Honokiol lên hệ thống vi sợi tác động ba chất lên hoạt động enzyme Aurora kinaza tế bào ung thư CHƢƠNG – TỔNG QUAN 1.1 Mô hin ̀ h 2D và 3D các tế bào ung thƣ 1.1.1 Nuôi cấy tế bào Như ta biết, thử nghiệm độc tính ban đầu tiến hành sinh thiết khối u ni cấy nhân tạo mơi trường có thành phần khơng xác định, q trình định lượng khó khăn Năm 1950, nhờ phát triển công nghệ nuôi cấy tế bào thành dạng đơn lớp 2D đĩa Petri thủy tinh nhựa, kết hợp với phát triển mơi trường có thành phần xác định mặt hóa học nên quy trình sàng lọc thuốc tiến hành đơn giản tế bào nuôi cấy 2D Sử dụng loại thuốc nhuộm protein cho phép xác định mối quan hệ đáp ứng liều dòng tế bào khác với nồng độ thuốc thử khác [9] Các tế bào phân lập đem nuôi cấy in vitro thường phát triển thành dạng trơi nổi, bám dính, hỗn hợp loại [4, 8, 9] Sử dụng mơ hình tế bào 2D có nhiều ưu điểm thời gian sàng lọc ngắn, cho phép thao tác với nhiều dòng tế bào, nhiều hợp chất khác dải nồng độ rộng lúc Tuy nhiên, mơ hình có nhược điểm tương tác TBUT với hợp chất theo chiều, thiếu tương tác TBUT với hệ miễn dịch hệ miễn dịch với hợp chất Như mơ hình khơng mô điều kiện in vivo thể [9] 1.1.2 Nuôi cấy khối cầu đa bào ung thƣ Mơ hình ni cấy khối cầu đa bào ung thư, gọi tắt mơ hình spheroid, khối hình cầu tạo nên từ TBUT Để tạo mô hình người ta tiến hành ni cấy giọt treo TBUT Dưới tác dụng trọng lực với liên kết tế bào, TBUT tập trung lại liên kết với tạo nên khối cầu nhỏ Sau khối cầu nhỏ đưa vào đĩa nuôi cấy chứa môi trường nuôi cấy tương ứng, phủ lớp giá đỡ bên [4, 9] So với mơ hình ni cấy tế bào đơn lớp cấu trúc spheroid gần giống với hệ thống in vivo Các nghiên cứu gần cho thấy tế bào nuôi cấy mơ hình 3D biểu đặc tính khác so với nuôi cấy 2D Những khác biệt coi yếu tố giúp mơ hình 3D phản ánh tốt tương tác TBUT với môi trường in vivo 1.2 Chế phẩ m Honokiol, Magnolol, Derrone 1.2.1 Honokiol (H) Magnolol (M) Vỏ rễ loài thuộc họ Ngọc lan Magnoliaceae sử dụng phương thuốc cổ truyền Hàn Quốc, Trung Quốc Nhật Trong số hợp chất tách chiết từ loài này, nhà khoa học đặc biệt ý đến hai chất Honokiol Magnolol Đây hai đồng phân hợp chất chứa gốc phenol tách chiết từ vỏ Hậu phác Magnolia officinalis Rehd Et wils, gọi Hậu phác bắc Honokiol (3,5'diallyl-4,2'-dihydroxybiphenyl) chiếm khoảng 1-5% trọng lượng vỏ Magnolol (5,5'- diallyl-2,2'-dihydroxybiphenyl) chiếm khoảng 2-10% có cơng thức cấu tạo C18H18O2 với trọng lượng phân tử M = 266,33 1.2.2 Derrone (D) Derrone (5,4-dihydroxy-7,8-(2,2-di- methylpyrano) isoflavone) có cơng thức hóa học C20H16O5, M = 336,1 hợp chất tách chiết từ Vông nem Erythrina orientalis (L.) Murr., Trong cơng trình nghiên cứu cơng bố vào tháng năm 2012, Hayet Edziri cộng chứng minh Derrone có tác động kháng khuẩn với vi khuẩn Pseudomonas aeruginosa Escherichia coli với nồng độ khoảng từ 7,81 – 15,62 µg/mL Ngồi ra, Derrone thể tính kháng nấm mạnh với lồi thuộc họ Candida nồng độ 7,81 µg/mL có tính độc với dòng tế bào ung thư gan HepG2 Tuy nhiên, chế chuyên sâu tác động Derrone lên tế bào chưa biết rõ [3, 5] CHƢƠNG – PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu - Các dòng TBUT HCT116, Hela, MCF7 KPL4 Nhóm nghiên cứu Ung thư thực nghiệm – Bộ môn Tế bào, Mô, Phôi Lý sinh – Khoa Sinh học – Trường Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội cung cấp - Mẫu Honokiol (H), Magnolol (M) Derrone (D) Viện Dược liệu Trung ương cung cấp, dạng dung dịch đồng lưu trữ nồng độ 20.000µg/mL dung mơi DMSO đ ối chứng dương Taxol, dạng thương phẩm 30mg/5mL, tương đương 6.000µg/mL 2.2 Phƣơng pháp thử độc tính MTS MTS (3 - (4,5-dimethylthiazol-2-yl) – - (3-carboxymethoxyphenyl) – - (4-sulfophenyl) - 2H - tetrazolium) có mặt PMS (phenazine methosulfate) tế bào chuyển hóa, tạo sản phẩm formazan tan môi trường nuôi cấy tế bào, hấp thụ ánh sáng tối đa bước sóng 490-500 nm đệm PBS Lượng formazan tạo định lượng lượng ánh sáng bước sóng 490nm bị hấp thụ tỷ lệ thuận với lượng tế bào sống mơi trường ni cấy Phương pháp MTS thường coi phương pháp MTT bước, có tính tiện lợi cao cần bổ sung thẳng chất vào môi trường nuôi cấy tế bào mà không cần bước rửa hay chuẩn bị khác 2.3 Phƣơng pháp thử độc tính mơ hình spheroid  Tạo giá thể cho khối spheroid  Tạo khố i spheroid bằ ng phương pháp gio ̣t treo hạ giọt treo  Với thí nghiệm theo dõi tốc độ sinh trưởng khối spheroid: Theo dõi hàng ngày thay môi trường, chụp ảnh ngày/lần khối spheroid phân rã Đo kích thước khối spheroid tính thể tích khốidựng đường cong sinh trưởng để biết quy luật tăng trưởng khối spheroid  Với thí nghiệm kiểm tra tác động H lên khả tạo khối spheroid: Sau tạo giá thể, tiến hành tạo giọt treo mơi trường có chứa H nồng độ (NĐ) 5µg/mL mơi trường có chứa H NĐ 10µg/mL Hạ giọt treo xuống giếng chứa môi trường môi trường chứa H với nồng độ tương ứng Theo dõi tính thể tích khối, dựng đường cong sinh trưởng khối spheroid ba mẫu khác so sánh khác biệt xem liệu H có ảnh hưởng đến q trình tạo khối hay khơng  Với thí nghiệm theo dõi tác động H lên trình tăng trưởng khối spheroid: Sau tạo giá thể, tạo giọt treo hạ giọt treo, tiến hành chia giếng có chứa khối spheroid đồng đều, phát triển khỏe mạnh thành ba nhóm mẫu: Đối chứng sinh học (ĐCSH), mẫu ủ H NĐ 10µg/mL, mẫu ủ H NĐ 20µg/mL Theo dõi tính thể tích khối, dựng đường cong sinh trưởng khối spheroid xem H có tác động lên q trình sinh trưởng khối spheroid hay không 2.4 Phƣơng pháp nhuộm miễn dịch huỳnh quang Nồng độ thuốc thử:  H: 10 µg/mL 20 µg/mL (với thí nghiệm kiểm tra tác động lên actin)  H, M, D: 10 µg/mL (với thí nghiệm kiểm tra tác động lên Aurora kinaza)  Nhuộm mẫu theo bước sau: o Cố định mẫu PFA 4% nhiệt độ phòng 10 phút o Đục màng tế bào TrytonX 0,5% nhiệt độ phòng 10 phút o Block liên kết không đặc hiệu bộc lộ liên kết đặc hiệu cách ủ mẫu với BSA 5% nhiệt độ phịng 30 phút o Nh ̣m kháng thể 1, nhân với thuốc nhuộm tương ứng CHƢƠNG – KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Kế t quả khảo sát ̣c tính mơ hình 2D 3.1.1 Với dòng HCT116 Sau 48h ủ, nồng độ thứ (5µg/mL) H có tác dụng rõ rệt: 80% tế bào co tròn lại Ở nồng độ thứ hai (10µg/mL) tế bào cịn chấm trịn nhỏ khơng cịn khác biệt rõ rệt hình thái với nồng độ 20µg/mL, 40µg/mL 50µg/mL cịn lại Magnolol (M) tác động rõ rệt đến tế bào HCT116 theo xu hướng tương tự từ nồng độ 5µg/mL khơng có khác biệt rõ rệt hình thái nồng độ 10 µg/mL, 20µg/mL, 40µg/mL 50µg/mL cịn lại Với Taxol, sau 48h ủ, nồng độ thứ 0,003µg/mL tế bào có xu hướng co lại so với mẫu ĐCSH Xu hướng tăng rõ rệt theo chiều tăng nồng độ, tế bào co lại thành dạng trịn nhỏ dần từ nồng độ 0,03µg/mL, 0,3µg/mL, 3µg/mL đến 30µg/mL 3.1.2 Với dịng Hela Quan sát KHV cho thấy mức độ ảnh hưởng H lên dòng Hela xuất rõ rệt nồng độ thứ ba (20µg/mL) sau tăng dần ảnh hưởng nồng độ thứ năm (50µg/mL) Với mẫu Hela ủ Taxol, tế bào có xu hướng co dần lại tăng dần nồng độ thuốc thử Tác động Taxol thấy rõ rệt từ nồng độ thứ (0,003µg/mL) đến nồng độ cuối (30µg/mL) tế bào thành dạng chấm trịn nhỏ 3.1.3 Với dịng MCF7 Tế bào MCF7 có kích thước lớn, trạng thái khỏe mạnh mật độ vừa phải Với dịng MCF7, H có tác dụng nồng độ cao, nồng độ thứ ba (20µg/mL) trở Tại nồng độ này, sau 48h ủ với mẫu, tế bào không trải rộng bề mặt ni cấy mà bị co trịn lại, liên kết lỏng lẻo, số trôi môi trường ni cấy Nhiều tế bào khơng cịn sáng màu mà nhăn nheo trở nên đậm màu Đây tế bào chết Số lượng tế bào nồng độ thứ năm (50µg/mL) chiếm tỷ lệ lớn so với nồng độ lại Với mẫu ủ Taxol, biến đổi hình dạng tế bào quan sát rõ ràng từ nồng độ (0,003µg/mL), tiếp khác biệt hình thái quan sát khơng lớn với nồng độ sau (0,03µg/mL, 0,3µg/mL, 3µg/mL) đến nồng độ thứ năm (30µg/mL), tế bào hầu hết khơng cịn độ bóng, dạng trịn ép dẹt vào bề mặt đĩa ni cấy 3.1.4 Với dịng KPL4 Cả ba chất Honokiol, Magnolol Derrone có xu hướng tác động làm ức chế tăng sinh mạnh mẽ dòng KPL4 nồng độ thứ ba (20 µg/mL) Ở nồng độ này, hình thái tế bào ba mẫu thay đổi giống so với mẫu ĐCSH mẫu ủ với nồng độ thấp Với Taxol, KPL4 bị tác động làm biến đổi hình thái rõ rệt từ nồng độ (0,003 µg/mL) Mức độ biến đổi trì ba nồng độ kế tiếp, đến nồng độ thứ năm (30 µg/mL) hình thái tế bào thay đổi rõ rệt lần Các tế bào lúc có kích thước nhỏ, hẳn độ sáng bóng bình thường Kết đo số hấp thụ ánh sáng bước sóng 490 nm cho kết tương đồng Bảng 1: Tổng hợp giá trị IC50 số tương quan R2 Honokiol, Magnolol, Derrone Taxol Chất H M D Taxol HCT116 IC50 (µg/mL) 0,2 0,4 R2 0,93 0,97 0,95 Hela IC50 (µg/mL) 31,63 R2 0,94 MCF7 IC50 (µg/mL) 17,8 R2 4,3 0,99 5,6 0,97 0,93 KPL4 IC50 (µg/mL) 8,3 14,8 17,8 8,9 R2 0,91 0,96 0,93 0,93 Tất giá trị IC50 có số tương quan R2 >0,9, đảm bảo đủ độ tin cậy Honokiol, Magnolol Derrone thử dòng tế bào cho giá trị IC 50 cao so với Taxol ngoại trừ với dòng KPL4, Honokiol cho giá trị IC 50 tương đương với Taxol Với Honokiol, số IC50 giảm dần dòng Hela, MCF7, KPL4 HCT116, bước đầu cho thấy độc tính tăng dần tương ứng Chỉ số IC50 thu với Hela cao hơn, số với MCF7 nằm khoảng, với KPL4, HCT116 thấp giá trị IC50 công bố [2, 6, 7] Với Magnolol Derrone, giá trị IC50 thu nằm khoảng giá trị IC50 công bố [3] 3.2 Kế t quả nghiên cƣ́u tác đô ̣ng của Honokiol mô hinh ̀ 3D 3.2.1 Kết theo dõi tăng trƣởng khối spheroid MCF7 Kết ghi nhận cho thấy khối spheroid MCF7 có xu hướng phát triển mạnh kích thước từ ngày thứ sau hạ giọt treo tăng tiếp ngày thứ 17, sau giảm dần với tốc độ chậm Trong khoảng thời gian này, cấu trúc khối spheroid ổn định dần, viền đậm rõ nét hơn, spheroid tròn hơn; cấu trúc lõi hoại tử xuất từ ngày thứ sau hạ giọt treo Viền phân cách lõi hoại tử với phần tế bào tăng sinh bên khối rõ dần, lõi hoại tử tăng dần diện tích cách tương quan với tăng thể tích khối Sau ngày thứ 17, với suy giảm kích thước cấu trúc khối spheroid trở nên bất ổn: viền khơng cịn rõ nét, khối trịn dần, cấu trúc liên kết tế bào khối trở nên lỏng lẻo dần tế bào bong dần khối spheroid 3.2.2 Kết kiểm tra tác động Honokiol lên trình tạo khối spheroid MCF7 Sau hai ngày tạo giọt treo với môi trường chứa H nồng độ 5µg/mL 10µg/mL, quan sát KHV nhận thấy: tất giọt treo tạo mơi trường chứa 10µg/mL H khơng tạo thành khối spheroid, tế bào đưa vào tạo khối chết nằm phân tán giọt treo Điều cho thấy H tác động mạnh đến tế bào MCF7 trạng thái huyền phù, so với kết kiểm tra tác động mơ hình 2D nồng độ 10µg/mL, số tăng sinh tế bào MCF7 hồn tồn khơng bị suy giảm Với giọt treo lại mẫu ĐCSH H nồng độ 5µg/mL hình thành giọt treo chưa thấy có khác biệt rõ rệt hai mẫu Ở ngày thứ 5, khối spheroid ủ H có kích thước tương đương với mẫu ĐCSH lõi hoại tử xuất rõ rệt hơn, chưa có viền phân định rõ ràng với lớp tế bào tăng sinh bên Đến ngày thứ 7, tế bào khối lớp vỏ spheroid tách khỏi cấu trúc khối, toàn khối thu hẹp lại kích thước khối spheroid mẫu ĐCSH tiếp tục tăng trưởng bình thường 3.2.3 Kết kiểm tra tác động Honokiol lên tăng trƣởng khối spheroid MCF7 Với mẫu ủ H NĐ 10µg/mL, đến ngày thứ khối spheroid có khác biệt rõ rệt với mẫu ĐCSH Lõi hoại tử khối spheroid với mẫu lớn dần lên viền phân cách với lớp tăng sinh bên mờ dần khối gần sẫm đồng màu vào ngày thứ 15 Trong lớp tăng sinh bên thể bất ổn viền xù xì, màu khơng cịn sáng giữ độ “đặc” định khối Sau tồn khối hoại tử tế bào bắt đầu bong thành mảng Với mẫu ủ H nồng độ 20µg/mL, tồn khối spheroid thể rõ rệt bất ổn lớp lõi hoại tử gần khơng tăng lên kích thước lớp tế bào tăng sinh bên trở nên lỏng lẻo dẫn đến tăng kích thước khối Tuy nhiên, lớp tế bào tác động H ức chế tăng sinh nên lớp tăng sinh chuyển màu xám dần gần ngừng tăng kích thước từ ngày thứ 13 Sau ngày thứ 15, khối bị phân rã 3.3 Kết nghiên cứu ảnh hƣởng Honokiol lên hệ vi sợi actin Kết cho thấy, quần thể tế bào HeLa sau ủ với Honokiol nồng độ 10 µg/mL có thay đổi rõ rệt Từ lượng tế bào ban đầu, sau 48h xử lý với chất, tế bào phân bố thưa thớt rời rạc so với đối chứng (do không tăng lên số lượng, đồng thời xuất tế bào chết) Các tế bào phần lớn có dạng sợi khơng trải rộng hình sao, chiều ngang bị thu hẹp nhiều so với đối chứng Khoảng cách tế bào lớn, đặc biệt tế bào cách xa nối với sợi actin kéo dài Sự tồn dạng cấu trúc ảnh hưởng chất lên trình phân chia tế bào chất dẫn đến phân tách hai tế bào sau q trình ngun phân diễn khơng hồn tồn, hai tế bào cịn dính sợi actin Sự biểu F-actin tế bào thay đổi: Trong tế bào đối chứng, hệ sợi actin phân bố toàn tế bào chất màng tế bào, quan sát cấu trúc dạng sợi nhiều tế bào HeLa xử lý với Honokiol, dễ dàng nhận thấy hệ thống sợi actin biểu (tín hiệu huỳnh yếu so với đối chứng), vùng tế bào chất tối màu, không quan sát actin tồn dạng sợi căng Một số tế bào biểu nhiều F-actin, nhiên sợi actin tế bào lại tập trung nhiều màng tế bào thành cụm không phân bố thành dạng sợi liên kết thành mạng lưới đối chứng Như thấy Honokiol ảnh hưởng rõ rệt lên biểu cách xếp, phân bố actin Đồng thời tổ chức actin bị rối loạn, không tồn thành dạng mạng lưới sợi mà co cụm thành tứng đám màng tế bào tế bào chất Đây nguyên nhân dẫn đến biến đổi hình dạng thu nhỏ kích thước tế bào 3.4 Kết nghiên cứu ảnh hƣởng Derrone lên phosphoryl hóa Histon H3 vị trí Serine 10 Ở tế bào đối chứng, toàn tế bào phân chia kỳ trước, giữa, sau cuối pha M cho kết dương tính với kháng thể H3PS10, nghĩa phosphoryl hố H3 diễn bình thường Chúng tơi quan sát thấy số tế bào không phân chia biểu huỳnh quang, tế bào pha G2 chuẩn bị bước vào giai đoạn M Ta biết tất trình chuẩn bị cho phân chia diễn G2, có q trình khởi động cuộn xoắn nhiễm sắc thể, lúc histone H3 bắt đầu photphoryl hóa Các tế bào phân chia co trịn lại, màng nhân tiêu biến Các NST cuộn xoắn biểu mạnh H3PS10 Các tế bào kỳ trung gian trải rộng ni cấy, có dạng hình sao, khơng biểu photphoryl hóa Histon H3 Một số tế bào biểu tế bào pha G2 chuẩn bị bước vào phân bào Trong số 03 mẫu chất thử nồng độ 10 µg/mL, chúng tơi nhận thấy có Derrone có biểu rõ rệt ức chế H3P mức độ tế bào Các tế bào phân chia dù pha lại có biểu huỳnh quang khác biệt Một số tế bào có tín hiệu mạnh, tương đương với đối chứng, số biểu yếu gần không biểu Đặc biệt mẫu Derrone có giảm sút đáng kể tín hiệu huỳnh quang tế bào ba kỳ: đầu (prophase), đầu-giữa (prometaphase) kỳ (metaphase) Chúng đếm số lượng tế bào âm tính với tín hiệu huỳnh quang, tín hiệu yếu thu tỷ lệ 42% tổng số tế bào phân chia Đối với mẫu Honokiol Magnonol, tế bào phần lớn biểu mạnh H3PS10 tất kỳ phân bào Tỷ lệ tế bào biểu yếu H3PS10 1,2 % mẫu Honokiol 1,5 % mẫu Magnonol Derrone thuộc nhóm chất flavonoid, nhóm chất có nhiều hoạt tính sinh học Rất nhiều chất thuộc nhóm ứng dụng điều trị ung thư Kết nghiên cứu chúng tơi cho thấy Derrone có ảnh hưởng ức chế phosphoryl hóa histon H3 serine 10 Đây chất chứng minh enzyme Aurora B 10 KẾT LUẬN Từ kết thí nghiệm phân tích đây, chúng tơi rút số kết luận sau:  Honokiol có độc tính với dịng tế bào ung thư biểu mơ ruột kết HCT 116, ung thư cổ tử cung Hela, ung thư vú MCF7 KPL4 với số IC50 tương ứng 2; 31,63; 17,8 8,3 µg/mL (R2 >0,9) Magnolol có độc tính với dịng tế bào ung thư biểu mô ruột kết HCT116 ung thư vú KPL4 với số IC50 tương ứng 0,2 14,8 µg/mL (R2 >0,9) Derrone có độc tính với dịng tế bào ung thư vú KPL4 với số IC50 17,8 µg/mL (R2 >0,9)  Honokiol có tác động ngăn cản trình tạo khối spheroid tế bào MCF7 nồng độ 10µg/mL ức chế tăng trưởng khối nồng độ 10 20 µg/mL  Honokiol tác động đến biểu xếp, phân bố hệ thống vi sợi actin, làm tổ chức actin bị rối loạn, không tồn dạng mạng lưới sợi mà co cụm thành đám màng tế bào tế bào chất Derrone có khả ức chế hoạt tính enzyme Aurora kinaza KIẾN NGHỊ  Nghiên cứu thêm chế tác động Honokiol, Magnolol Derrone lên tế bào  Tiếp tục kiểm tra tác động Honokiol, Magnolol Derrone lên mơ hình 2D, 3D dịng tế bào ung thư khác xem xét thử nghiệm mô hình in vivo References Ahmedin Jemal, D., Phd, Freddie Bray P., Melissa M Center M., Jacques Ferlay M., Elizabeth Ward P., and David Forman P (2011), “Global Cancer Statistics”, CA: A Cancer Journal for Clinicians, 61, pp 69–90 Ahn, K.S., Sethi G., Shishodia S., Sung B., Arbiser J.L., and Aggarwal B.B (2006), “Honokiol Potentiates Apoptosis, Suppresses Osteoclastogenesis, and Inhibits Invasion through Modulation of Nuclear Factor-κB Activation Pathway”, Molecular Cancer Research, (9), pp 621-633 Bai, X., Cerimele F., et al (2003), “Honokiol, a Small Molecular Weight Natural Product, Inhibits Angiogenesis in Vitro and Tumor Growth in Vivo”, Journal of Biological Chemistry, 278 (37), pp 35501-35507 4 Chakraborty, B.S (2001), “7 - Cancer drug development - Key regulatory considerations”, Health Administrator, 20, pp 29-36 Chen, Y., Wu C., et al (2010), “Honokiol induces cell apoptosis in human chondrosarcoma cells through mitochondrial dysfunction and endoplasmic reticulum stress”, Cancer Letters, 291 (1), pp 20-30 Chiang, C.-K., Sheu M.-L., et al (2011), “Honokiol ameliorates renal fibrosis by inhibiting extracellular matrix and pro-inflammatory factors in vivo and in vitro”, British Journal of Pharmacology, 163 (3), pp 586-597 Chiang, C., Sheu M., et al (2011), “Honokiol ameliorates renal fibrosis by inhibiting extracellular matrix and pro-inflammatory factors in vivo and in vitro”, British Journal of Pharmacology, 163 (3), pp 586-597 Dikalov, S., Losik T., and Arbiser J.L (2008), “Honokiol is a potent scavenger of superoxide and peroxyl radicals”, Biochemical Pharmacology, 76 (5), pp 589-596 F, G., Ke G., and Eyers Pa E.A (2006), “Validating Aurora B as an anti-cancer drug target”, Journal of Cell Science, 119 (36), pp 64-75 10 Fedoreyev, S.A., Bulgakov V.P., et al (2008), “Isoflavonoid Composition of a Callus Culture of the Relict Tree Maackia amurensis Rupr et Maxim”, Journal of Agricultural and Food Chemistry, 56 (16), pp 7023-7031 11 Freshney, R.I (2005), Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique, 5thth edition, Willey Blackwell 12 Garcia, A., Zheng Y., et al (2008), “Honokiol Suppresses Survival Signals Mediated by Ras-Dependent Phospholipase D Activity in Human Cancer Cells”, Clinical Cancer Research, 14 (13), pp 4267-4274 13 Giet, R., Petretti C., and Prigent C (2005), “Aurora kinases, aneuploidy and cancer, a coincidence or a real link? ”, Trends in Cell Biololy, 15, pp 241-250 14 Hanahan, D and Weinberg Robert a (2011), “Hallmarks of Cancer: The Next Generation”, Cell, 144 (5), pp 646-674 15 Hu, L., Hofmann J., Lu Y., Mills G.B., and Jaffe R.B (2002), “Inhibition of Phosphatidylinositol 3′-Kinase Increases Efficacy of Paclitaxel in in Vitro and in Vivo Ovarian Cancer Models”, Cancer Research, 62 (4), pp 1087-1092 16 Ja, P.F., D R., S R., E R.-B., and A C (2009), “Aurora kinase inhibitors: a new class of drugs targeting the regulatory mitotic system”, Clinical & Translational Oncology, 11 (12), pp 787-798 12 17 Kim, S.C., Kim D.W., et al (2001), “In vivo evaluation of polymeric micellar paclitaxel formulation: toxicity and efficacy”, Journal of controlled release : official journal of the Controlled Release Society, 72 (1-3), pp 191-202 18 Kurebayashi, J., Otsuki T., et al (1999), “Isolation and characterization of a new human breast cancer cell line, KPL-4, expressing the Erb B family receptors and interleukin-6”, British journal of cancer, 79 (5-6), pp 707-717 19 Leeman-Neill, R.J., Cai Q., et al (2010), “Honokiol Inhibits Epidermal Growth Factor Receptor Signaling and Enhances the Antitumor Effects of Epidermal Growth Factor Receptor Inhibitors”, Clinical Cancer Research, 16 (9), pp 2571-2579 20 Leeman-Neill, R.J., Cai Q., et al (2010), “Honokiol inhibits epidermal growth factor receptor signaling and enhances the antitumor effects of epidermal growth factor receptor inhibitors”, Clinical Cancer Research, 291 (1), pp 20-30 21 Li, Z., Liu Y., et al (2008), “Honokiol, a natural therapeutic candidate, induces apoptosis and inhibits angiogenesis of ovarian tumor cells”, European journal of obstetrics, gynecology, and reproductive biology, 140 (1), pp 95-102 22 Lin, Y., Chen H., Ko C., and Chan M (2007), “Effects of honokiol and magnolol on acute and inflammatory pain models in mice”, Life Science, 81 (13) 23 Lin, Y., Chen H., Ko C., and Chan M (2007), “Effects of honokiol and magnolol on acute and inflammatory pain models in mice”, Life Science, 81, pp 1071 - 1078 24 Lisa A Gurski, B., Nicholas J Petrelli M., Xinqiao Jia P., and Mary C Farach-Carson P (2010), “3D matrices for anti-cancer Drug testing and Development”, Oncology Issues, January/February 25 Liu, S.H., Shen C.C., et al (2010), “Honokiol inhibits gastric tumourigenesis by activation of 15-lipoxygenase-1 and consequent inhibition of peroxisome proliferatoractivated receptor-gamma and COX-2-dependent signals”, British Journal of Pharmacology, 160 (8), pp 1963-1972 26 Liu, Y., Chen L., et al (2008), “Enhancement of therapeutic effectiveness by combining liposomal honokiol with cisplatin in ovarian carcinoma”, International Journal of Gynecological Cancer, 18 (4), pp 652-659 27 Masters, J.R.W (2002), Cancer cell lines, Vol I, II, III, Kluwer Academic Publishers 28 Mayer, B., Klement G., et al (2001), “Multicellular gastric cancer spheroids recapitulate growth pattern and differentiation phenotype of human gastric carcinomas”, Gastroenterology, 121 (4), pp 839-852 13 29 Miller, K., Wang M., et al (2007), “Paclitaxel plus Bevacizumab versus Paclitaxel Alone for Metastatic Breast Cancer”, New England Journal of Medicine, 357 (26), pp 2666-2676 30 Minchinton, A.I and Tannock I.F (2006), “Drug penetration in solid tumours”, Nature Reviews Cancer, (8), pp 583-592 31 Ota, T., Suto S., et al (2002), “Increased mitotic phosphorylation of histone H3 attributable to AIM-1/Aurora-B overexpression contributes to chromosome number instability”, The Journal of Cancer Research, 62, pp 5168-5177 32 Panno, J (2005), Cancer: The Role of Genes, Lifestyle, and Enviroment, Facts on File 33 Ponnurangam, S., Mammen J.M.V., et al (2012), “Honokiol in combination with radiation targets notch signaling to inhibit colon cancer stem cells”, Molecule Cancer Therapy, 11 (4), pp 963-972 34 Rolf Bjerkvig, P.D (1992), Spheroid culture in cancer research, 1th edition, Informa Healthcare 35 Rowinsky, E.K and Donehower R.C (1995), “Paclitaxel (Taxol)”, New England Journal of Medicine, 332 (15), pp 1004-1014 36 Ruddon, R.W (2007), Cancer Biology, 4thth edition, Oxford University Press 37 S., R., M C., and Wc E (2007), “Chromosomal passengers conducting cell division”, Nature Reviews Molecular Cell Biology, (8), pp 798-812 38 Shen, J.-L., Man K.-M., et al (2010), “Honokiol and Magnolol as Multifunctional Antioxidative Molecules for Dermatologic Disorders”, Molecules, 15 (9), pp 64526465 39 Teicher, B.A (1997), Anticancer Drug Development Guide 40 Teicher, B.A (2001), Tumour Models in Cancer Research, Cancer Drug Discovery and Deverlopment, ed B.A Teicher, Human Press, New Jersey 41 Vader G., L.S (2008), “The aurora kinase family in cell division and cancer”, Biochimica et Biophysica Acta, 1786, pp 60-72 42 Vavilala, D.T., Ponnaluri V.K.C., Vadlapatla R.K., Pal D., Mitra A.K., and Mukherji M (2012), “Honokiol inhibits HIF pathway and hypoxia-induced expression of histone lysine demethylases”, Biochemical and Biophysical Research Communications, 422 (3), pp 369-374 43 Wang, T.-H., Wang H.-S., and Soong Y.-K (2000), “Paclitaxel-induced cell death”, Cancer, 88 (11), pp 2619-2628 14 44 Wu, S.-N., Yeh C.-C., Huang H.-C., and Yang W.-H (2011), “Effects of Honokiol on Membrane Electroporation-Induced Inward Current in Pituitary Tumor (GH3) Cells ”, Journal of Natural Products, 4, pp 115-124 45 Wu, X., Chen X., and Hu Z (2003), “High-performance liquid chromatographic method for simultaneous determination of honokiol and magnolol in rat plasma”, Talanta, 59 (1), pp 115-121 46 Xu, H., Tang W., Du G., and Kokudo N (2011), “Targeting apoptosis pathways in cancer with magnolol and honokiol, bioactive constituents of the bark of Magnolia officinalis”, Drug Discoveries & Therapeutics, (5), pp 202-210 47 Zang, R., Li D., Tang I.-C., Wang J., and Yang S.-T (2012), “Cell-Based Assays in High-Throughput Screening for Drug Discovery”, International Journal of Biotechnologyfor WellnessIndustries, 1, pp 31-51 15