NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ MỘT SỐ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA CÂY ĐƠN KIM

B GIÁO D C & B YT O ==oo0oo== BIDENS PILOSA ASTERACEAE) - 2014 B GIÁO D C & B YT O ==oo0oo== BIDENS PILOSA L., ASTERACEAE) : 62.72.04.06 GS.TS PGS TS - 2014 L Lu n án công trình khoa h c c a riêng is ng d n c a GS.TS Ph m Thanh K PGS.TS Nguy n Th Bích Thu Các s li u, k t qu trình bày Lu n án trung th c, khách quan c công b b t k m t công trình khác Tác gi lu n án NCS Ph ng L IC Trong trình nghiên c u hoàn thành lu c r t nhi u s n quí báu c a các t p th , th y cô giáo, nhà khoa h c thu c nhi ng nghi p, b n bè v c h t, xin bày t lòng bi c t i GS.TS Ph m Thanh K , PGS.TS Nguy n Th Bích Thu, nh ng d n, h t lòng ch b o t o m i th u ki ng su t trình h c t p, nghiên c u, hoàn thành lu n án Tôi xin trân tr ng c o - Vi t c li u; o, Phòng Qu n lý Khoa h c ng y, Ban giám c B nh vi u ki n thu n l i cho th i gian h c t p và nghiên c u lòng bi i: ng Trung tâm Nghiên c u ng d ng Sinh Y c H c vi n Quân Y nh Hùng th y cô giáo, anh ch k thu t viên B c lý, H c vi n Quân Y m cán b nghiên c u - Vi n Hóa Sinh Bi n, Vi n Hàn lâm Khoa h c Công ngh Vi t Nam B môn Vi sinh Sinh v ih c c Hà N i om u ki n quí báu cho hoàn thi n lu n án Cu i cho g i l i c n nh i thân ng h t o m u ki n t t nh t cho trình h c t p hoàn thành lu n án M t l n n a xin chân thành c t c nh NCS Ph ng DANH M C CÁC KÝ HI U, CH 13 C-NMR H-NMR Abs ABTS ALT APPH AST BHT br CAT CK-MB COX CS CTCT CTC50 CTPT d dd dt DC (D/C) DL DEPT DMSO DPPH EC50 EI ELISA ESI - MS GC-MS GGT GPx VI T T T : Ph c ng t h t nhân carbon 13 (Carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance Spectrometry) : Ph c ng t h t nhân proton (Proton Nuclear Magnetic Resonance Spectrometry) : h p th : 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid) : Alanin aminotransferase -azobis-[2-amidinopropan]-dihydroclorid : Aspartate aminotransferase : Butylat hydoxytoluen : R ng (broad) : Catalase : Là m t ba isoenzym c c tìm th y ch y : cyclooxygenase : C ng s : Công th c c u t o : Concentration of the sample tolerated by 50% of the cultures exposed : Công th c phân t : doublet : doublet of doublet : doublet of triplet : D ch chi t : n Vi t Nam : c li u : Distortionless enhancement by polarisation transfer : Dimethylsulfoxyd : 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl :N ng 50% : n t (Electro Ionization) : Enzyme-linked immunosorbent assay : Ph kh n t (Electron Spray Ionization Mass Spectrometry ) : S c ký khí - kh i ph : Gamma-glutamyltransferase (Gamma-glutamyl transpeptidase) : Glutathione peroxidase GSH GTD HE HMBC HR HPLC HSQC IC50 IL INF iNOS J KL LPS m MDA MIC MS MTT mult m/z Na.CMC NFNMR NOS NRU OD PG RPMI RT-PCR SKLM SOD TBA TCA TFB TKH TNF- : Glutathione : G c t : Henatoxylin-Eosin : Heteronuclear Multiple Bond Coherence : High Resolution (Phân gi i cao) : S c ký l ng hi -performance liquid chromatography) : Heteronuclear Single Quantum Coherence :N c ch 50% : Interleukin : interferon : inducible nitric oxyd synthetase : H ng s : Kh ng : Lipopolysarcharid : u (multiple) : Malonyldialdehyd : Minimum Inhibitory Concentration (N c ch t i thi u) : Ph kh i : 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromid : multiplicity b i tín hi u) : Kh n tích ion : Natri carboxy methyl cellulose : Nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells : Ph c ng t h t nhân (Nuclear Magnetic Resonance Spectrometry) : nitric oxyd synthetase : Neutral red uptake : Optical density : Prostaglandin : Ph n m t : Rothwell Park Memorial Instiue : Reverse transcription polymerase chain reaction : S c ký l p m ng : Superoxyd dismutase : Thiobarbituric acid : Tricloroacetic acid : Total flavonoid Bidens bipinnata L : Tên khoa h c : Tumor necrosis factor alpha M CL C L L IC DANH M C CÁC KÝ HI U, CH VI T T T DANH M C CÁC B NG DANH M C CÁC HÌNH TV T NG QUAN 1.1 Vài nét v m th c v t chi Song nha (Bidens L.) 1.2 Công d ng c a m t s loài thu c Song nha (Bidens L.) 1.3 Thành ph n hóa h c chi Song nha (Bidens L.) 1.3 1.3.2 1.3.3 Nhóm phenylpropanoid 1.3.4 Nhóm terpenoid 1.3.5 Nhóm ch t khác 1.4 Tác d ng c a m t s loài chi Song nha (Bidens L.) 1.4.1 Tác d ng ch 1.4.2 Tác d ng c ch ung 1.4.3 Tác d ng ch ng oxi hoá 1.4.4 Tác d ng b o v gan 1.4.5 Tác d ng kháng khu n, kháng n m kháng virus 1.4.6 Tác d ng kháng ký sinh trùng 1.4.7 Tác d ng ch ng ti ng 1.4.8 Tác d ng ch ng viêm loét d dày 1.4.9 Tác d ng ch ng tiêu ch 1.5 Nh ng nghiên c u v loài Bidens pilosa L 1.5.1 Trên th gi i 1.5.2 Vi t Nam T LI C 3 7 17 21 22 24 26 26 28 29 31 32 35 36 37 37 38 38 39 43 2.1 Nguyên v t li u nghiên c 2.1.1 Nguyên li u nghiên c u ng v t, vi sinh v t, dòng t bào thí nghi m 2.1.3 Dung môi, hóa ch t 2.14 Thi t b d ng c dùng nghiên c u 2.2 u 2.2.2 Nghiên c u tác d ng sinh h c 2.2.2.1 Th c tính c p 2.2.2.2 Th tác d ng kháng khu n, kháng n m tinh d u 2.2.2.3 Th tác d ng gi m 2.2.2.4 Th tác d ng ch ng viêm 2.2.2.5 Th tác d ng b o v gan 2.2.2.6 Th tác d ct 2.2.3 X lý s li u T QU NGHIÊN C 3.1 K t qu nghiên c u v thành ph n hóa h nh tính nhóm ch t h kim 3.1.1.1 Ph n m t 3.1.1.2 R 3.1.2 X nh nguyên t 3.1.3 Nghiên c u v tinh d u chi t xu t t 3.1.3.1 X ng tinh d u 3.1.3.2 Phân tích thành ph n tinh d u 3.1.4 Chi t xu t phân l p h p ch t t 3.1.4.1 Chi t phân l p ch t t r 3.1.4.2 Chi t phân l p ch t t ph n m t nh c u trúc hóa h c c a h p ch t phân l c 3.1.5.1 H p ch t BP1 3.1.5.2 H p ch t BP2 3.1.5.3 H p ch t BP3 3.1.5.4 H p ch t BP4 43 43 44 45 45 46 46 47 47 47 49 40 52 54 55 56 56 56 56 57 59 60 60 61 63 63 66 68 68 70 72 74 3.1.5.5 H p ch t BP5 3.1.5.6 H p ch t BP6 3.1.5.7 H p ch t BP7 3.1.5.8 H p ch t BP8 3.1.5.9 H p ch t BP11 3.1.5.10 H p ch t BP13 3.1.5.11 H p ch t BP15 3.1.5.12 H p ch t BP17 3.1.5.13 H p ch t BP18 3.1.5.14 H p ch t BP19 3.1.5.15 H p ch t BP20 3.1.5.16 H p ch t BP22 3.1.5.17 H p ch t BP23 3.2 K t qu nghiên c u v c tính tác d ng sinh h c 3.2.1 Th c tính c 3.2.2 Th tác d ng kháng khu n, kháng n m 3.2.3 Th tác d ng ch ng 3.2.4 Th tác d ng gi 3.2.5 Th tác d ng b o v 3.2.6 Th tác d ct 4.1 V ng nghiên c 4.2 V thành ph n hóa h 4.3 V tác d ng sinh h K T LU KI N NGH DANH M TÀI LI U THAM KH O PH L C 76 78 79 82 84 86 88 90 91 93 98 103 106 108 108 109 109 114 115 118 121 121 122 129 145 147 DANH M C B NG B B B B B B B B B B B B B B B B B B B B B B B B B B B B ng 1.1 ng 1.2 ng 1.3 ng 1.4 ng 1.5 ng 1.6 ng 1.7 ng 1.8 ng 1.9 ng 1.10 ng 3.1 ng 3.2 ng 3.3 ng 3.4 ng 3.5 ng 3.6 ng 3.7 ng 3.8 ng 3.9 ng 3.10 ng 3.11 ng 3.12 ng 3.13 ng 3.14 ng 3.15 ng 3.16 ng 3.17 ng 3.18 Công d ng c a m t s loài thu c chi Song nha (Bidens L.) Các h p ch t auron auron glycosid phân l p t chi Các h p ch t chalcon chalcon glycosid phân l p t chi Bidens Các h p ch t flavon flavon glycosid phân l p t chi Các h p ch t flavanon flavanon glycosid phân l p t chi Bidens Các h p ch t flavonol flavonol glycosid phân l p t chi Bidens Các h p ch t acetylenic phân l p t chi Các h p ch t nhóm phenylpropanoid phân l p t chi Bidens Các h p ch t nhóm terpenoid phân l p t chi Bidens Các h p ch t khác phân l p t chi Bidens K t qu nh tính nhóm ch t h c K t qu nh tính nhóm ch t h r ng nguyên t r kim ng tinh d Thành ph n hóa h c c a tinh d u D li BP1 D li BP2 D li BP3 D li BP4 D li BP5 D li BP6 D li BP7 D li BP8 D li BP11 D li BP13 D li BP15 D li BP17 D li BP18 12 13 13 17 21 22 24 56 57 59 60 61 69 72 73 75 76 78 80 83 85 86 89 90 92 BP20−MeOD−HMBC ppm 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 ppm BP20−MeOD−HMBC ppm 80 85 90 95 100 105 110 115 120 125 130 135 140 145 150 7.05 7.00 6.95 6.90 6.85 6.80 6.75 ppm BP20−MeOD−HSQC ppm 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100 105 110 115 120 125 ppm BP20−MeOD−HSQC ppm 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 7.05 7.00 6.95 6.90 6.85 6.80 122 ppm PHỤ LỤC 18 PHỔ CỦA HỢP CHẤT BP22 - - 13 H-NMR C-NMR - DEPT - HMBC - HSQC Daucosterol 4.207 3.656 3.646 3.633 3.624 3.480 3.466 3.458 3.449 3.434 3.421 3.409 3.398 3.386 3.334 3.163 3.119 3.109 3.101 3.080 3.061 3.053 3.042 3.032 3.025 3.015 2.916 2.907 2.899 2.891 2.874 2.503 2.500 2.497 2.370 2.349 2.146 2.123 1.968 1.943 1.902 1.802 1.781 1.775 1.645 1.631 1.621 1.608 1.526 1.505 1.492 1.468 1.440 1.431 1.408 1.399 1.387 BP22−DMSO−1H Current Data Parameters NAME 11K_BP22 EXPNO PROCNO F2 − Acquisition Parameters Date_ 201109 Time 17.14 17 INSTRUM spect PROBHD mm Multinucl PULPROG zg30 TD 65536 SOLVENT DMSO NS 16 DS SWH 10000.000 Hz FIDRES 0.152588 Hz AQ 3.2769001 sec RG 71.8 DW 50.000 usec DE 6.00 usec TE 297.4 K D1 1.00000000 sec MCREST 0.00000000 sec MCWRK 0.01500000 sec ======== CHANNEL f1 ======== NUC1 1H P1 10.30 usec PL1 0.00 dB SFO1 500.1335009 MHz F2 − Processing parameters SI 32768 SF 500.1300042 MHz WDW EM SSB LB 0.30 Hz GB PC 1.00 1.0 0.5 7.583 7.049 5.154 9.693 3.221 1.5 2.166 3.182 0.912 4.290 4.164 2.0 1.060 2.5 1.068 3.0 1.258 2.309 1.133 2.080 3.5 1.019 4.0 1.035 4.5 0.925 2.799 5.0 1.000 5.5 ppm 100.790 76.940 76.672 73.422 70.079 61.069 56.142 55.416 49.581 45.132 41.811 39.999 39.832 39.665 39.499 39.331 39.165 38.998 38.287 36.792 36.165 35.433 33.332 31.756 31.383 31.329 29.222 28.703 27.726 25.467 23.804 22.587 20.553 20.284 121.106 140.423 BP22−DMSO−C13CPD Current Data Parameters NAME 11K_BP22 EXPNO PROCNO F2 − Acquisition Parameters Date_ 20110919 Time 11.50 INSTRUM spect PROBHD mm Multinucl PULPROG zgpg30 TD 65536 SOLVENT DMSO NS 512 DS SWH 31446.541 Hz FIDRES 0.479836 Hz AQ 1.0420883 sec RG 8192 DW 15.900 usec DE 6.00 usec TE 299.4 K D1 2.00000000 sec d11 0.03000000 sec DELTA 1.89999998 sec MCREST 0.00000000 sec MCWRK 0.01500000 sec ======== CHANNEL f1 ======== NUC1 13C P1 5.80 usec PL1 −1.00 dB SFO1 125.7716224 MHz ======== CHANNEL f2 ======== CPDPRG2 waltz16 NUC2 1H PCPD2 80.00 usec PL2 0.00 dB PL12 17.47 dB PL13 22.00 dB SFO2 500.1320005 MHz F2 − Processing parameters SI 32768 SF 125.7578557 MHz WDW EM SSB LB 1.00 Hz GB PC 1.40 180 160 140 120 100 80 60 40 20 ppm BP22−DMSO−C13CPD&DEPT DEPT90 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 ppm 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 ppm 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 ppm DEPT135 CH&CH3 CH2 180 170 C13CPD 180 170 BP22−DMSO−HMBC ppm 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 ppm BP22−DMSO−HSQC ppm 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100 105 110 115 120 125 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 ppm PHỤ LỤC 19 PHỔ CỦA HỢP CHẤT BP23 - - 13 H-NMR C-NMR - DEPT Stigmasterol 5.155 5.142 5.125 5.037 5.019 5.007 4.989 3.554 3.545 3.532 3.523 3.513 3.500 3.491 2.310 2.303 2.284 2.277 2.257 2.253 2.231 2.209 2.043 2.023 1.996 1.977 1.953 1.860 1.853 1.833 1.722 1.710 1.703 1.694 1.682 1.667 1.658 1.644 1.599 1.562 1.549 1.528 1.516 1.505 1.494 1.467 1.445 1.424 1.416 1.397 1.390 1.348 1.331 1.320 1.306 1.292 1.277 BP23−CDCl3−1H Current Data Parameters NAME 11K_BP23 EXPNO PROCNO F2 − Acquisition Parameters Date_ 20120215 Time 10.43 INSTRUM spect PROBHD mm Multinucl PULPROG zg30 TD 65536 SOLVENT CDCl3 NS 16 DS SWH 10000.000 Hz FIDRES 0.152588 Hz AQ 3.2769001 sec RG 114 DW 50.000 usec DE 6.00 usec TE 0.0 K D1 1.00000000 sec MCREST 0.00000000 sec MCWRK 0.01500000 sec ======== CHANNEL f1 ======== NUC1 1H P1 9.60 usec PL1 0.00 dB SFO1 500.1335009 MHz F2 − Processing parameters SI 32768 SF 500.1300131 MHz WDW EM SSB LB 0.30 Hz GB PC 1.00 1.980 2.734 2.708 12.254 3.961 2.940 2.243 6.215 3.530 9.353 3.049 1.094 1.000 0.545 0.499 ppm 77.276 77.021 76.767 71.817 56.870 56.770 56.053 55.951 51.244 50.156 50.131 45.833 42.300 42.221 40.510 39.778 39.682 37.256 36.518 36.154 33.944 33.718 31.904 31.661 29.713 29.144 28.934 28.256 26.061 25.419 24.372 24.311 23.067 121.732 129.273 140.757 138.331 BP23−CDCl3−C13CPD Current Data Parameters NAME 11K_BP23 EXPNO PROCNO F2 − Acquisition Parameters Date_ 20120215 Time 11.26 INSTRUM spect PROBHD mm Multinucl PULPROG zgpg30 TD 65536 SOLVENT CDCl3 NS 256 DS SWH 31446.541 Hz FIDRES 0.479836 Hz AQ 1.0420883 sec RG 32768 DW 15.900 usec DE 6.00 usec TE 0.0 K D1 2.00000000 sec d11 0.03000000 sec DELTA 1.89999998 sec MCREST 0.00000000 sec MCWRK 0.01500000 sec ======== CHANNEL f1 ======== NUC1 13C P1 12.60 usec PL1 −3.00 dB SFO1 125.7716224 MHz ======== CHANNEL f2 ======== CPDPRG2 waltz16 NUC2 1H PCPD2 80.00 usec PL2 0.00 dB PL12 23.25 dB PL13 30.00 dB SFO2 500.1320005 MHz F2 − Processing parameters SI 32768 SF 125.7577897 MHz WDW EM SSB LB 1.00 Hz GB PC 1.00 180 160 140 120 100 80 60 40 20 ppm BP23−CDCl3−C13CPD &DEPT DEPT90 210 200 190 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 ppm 200 190 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 ppm 200 190 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 ppm DEPT135 CH&CH3 CH2 210 C13CPD 210 PHỤ LỤC 20 HÌNH ẢNH VI THỂ GAN CHUỘT (Nhuộm HE, Độ phóng đại 100 lần) Lô chứng sinh lý Lô chứng bệnh lý Lô silymarin Liều FLTP 60 mg Lô FLTP 120 mg