Báo cáo thực hành KST SR

Trường ĐH Y tế công cộng Ngô Doãn Tâm _ XNYHDP2 BÁO CÁO THỰC HÀNH MÔN KÝ SINH TRÙNG QUAN SÁT HÌNH THỂ KÝ SINH TRÙNG SỐT RÉT LÀM TIÊU BẢN MÁU NHUỘM GIEMSA  I HÌNH THỂ KÝ SINH TRÙNG SỐT RÉT: Ký sinh trùng sốt rét ký sinh người: – – – – – Plasmodium falciparum Plasmodium vivax Plasmodium malariae Plasmodium ovale Plasmodium knowlesi (mới phát – khỉ) Ở Việt Nam thường gặp: P.vivax P.falciparum Và thực hành chủ yếu soi P.vivax P.falciparum Khi soi tiêu máu nhuộm Giemsa thấy sau: bào tương bắt màu xanh da trời, nhân bắt màu đỏ, hạt sắc tố có màu nâu đen có thể: a Thể tư dưỡng (T): – Thể tư dưỡng non (thể nhẫn): bào tương giống vòng nhẫn, nhân tròn gọn nằm điểm vòng bào tương – Thể tư dưỡng phát triển (thể amip): bào tương phát sinh thành chân giả, ký sinh trùng có amip, chân giả thường nối kiền với tạo thành không bào nhỏ Trong bào tương xuất hạt sắc tố – Thể tư dưỡng già: ký sinh trùng lớn lên, không vào đi, chân giả thu gọn lại bào tương thành khối, hạt sắc tố tập trung lại thành đám bào tương b Thể phân liệt (S): – Thể phân liệt non: sau hình thành thể tư dưỡng già, ký sinh trùng phân chia nhân lúc đầu nhân chia thành sau chia mảnh, bào tương chưa phân chia – Thể phân liệt già: phân chia nhân xong, bào tương phân chia theo số mảnh nhân có, mảnh nhân có mảnh bào tương kèm theo, thành ký sinh trùng non Số lượng ký sinh trùng non từ 8-12-18… tùy theo loại c Thể giao bào (G): – Có giao bào đực giao bào Giao bào đực nhân không gọn, xốp bào tương bắt màu xanh nhạt – Các hồng cầu bị ký sinh tùy loại mà hồng cầu có biến đổi nhiều không – P.falciparum thường thấy nhẫn thể giao bào máu ngoại vi, loại lại có tất thể Báo cáo Kí Sinh Trùng Page Trường ĐH Y tế công cộng Ngô Doãn Tâm _ XNYHDP2 II ĐẶC ĐIỂM LOẠI KÝ SINH TRÙNG SỐT RÉT TRONG TIÊU BẢN GIỌT ĐÀN: Xuất máu ngoại vi P.vivax Tất thể Kích thước 1/3-1/2 đường kính hồng cầu Đôi có 2-3 nhân hồng cầu P.falciparum Thường thấy nhẫn giao bào Nhân tròn, nhỏ, gọn, chắc, bắt màu đỏ, thường có nhân, gặp nhân Nguyên sinh chất mảnh, phân bố đều, bắt màu xanh da trời Có thể nguyên sinh chất hình nhẫn, hình chấm phẩy, hình cánh nhạn… Kích thước 1/5- 1/4 hồng cầu (1,52 mm), gặp 1-4 thể nhẫn ký sinh hồng cầu Hình thể kì dị, chân giả dài, không bào lớn có nhiều không bào nhỏ Hạt sắc tố nhỏ Nhân phát triển kéo dài ra, tách làm đôi Nguyên sinh chất phát triển nhiều lên, thô, xốp, thường đứt đoạn, phân bố không đều, chỗ rộng chỗ hẹp méo mó tạo thành nhiều chân giả ( gọi thể amip), khoảng không bào thường lớn Hạt sắc tố hình chấm nhỏ màu nâu đen màu nâu ánh vàng năm rải rác nguyên sinh chất Nhân phân chia 12 - 24 mảnh xếp không tập trung thành đám Mỗi mảnh nhân kèm theo mảnh nguyên sinh chất Hạt sắc tố mịn, màu nâu đen nâu ánh vàng rải rác xen kẽ Thường không thấy máu ngoại vi Thể nhẫn Thể tư dưỡng (Trophozoite) Thể amip Thể tư dưỡng già Thể phân liệt (Schizonte) Báo cáo Kí Sinh Trùng Page Nhân phát triển kéo dài Nguyên sinh chất nhiều dày Hạt sắc tố hình que, màu nâu ánh vàng rải rác tập trung thành đám nguyên sinh chất Thể tư dưỡng già P.falciparum gặp tiêu máu ngoại vi, gặp bệnh nhân sốt rét ác tính Nhân ký sinh trùng phân chia từ 12-30 mảnh, xếp không nhau, tập trung thành đám Nguyên sinh chất phân chia kèm theo mảnh nhân mảnh nguyên sinh chất Hạt sắc tố hình que màu nâu đen ánh vàng tập Trường ĐH Y tế công cộng Ngô Doãn Tâm _ XNYHDP2 mảnh nhân ký sinh trùng tập trung thành đám Thể giao bào (Gametocyte) Hồng cầu bị ký sinh trung thành đám thành tảng Thể phân liệt gặp tiêu máu ngoại vi, thường gặp trường hợp bệnh nhân sốt rét nặng ác tính Hình tròn bầu dục, khó Giao bào non hình tròn hình phân biệt giao bào non giao bầu dục, giao bào đực hình bào trưởng thành chuối hình liềm Nhân thường nằm lệch bên Nhân tròn bắt màu đỏ nằm nguyên sinh chất Nguyên sinh chất bắt màu xanh da Nguyên sinh chất dày, to trời Hạt sắc tố màu nâu ánh vàng Hạt sắc tố hình que màu nâu ánh rải rác nguyên sinh chất vàng tập trung quanh nhân Giao bào thường to Đôi thấy dây hồng cầu giao bào đực, nhân nhỏ hơn, (rải khăn quàng) giao bào nguyên sinh chất sẫm màu có nhân hạt sắc tố Đôi gặp giao bào có Giao bào nhỏ hơn, hai đầu nhân hạt sắc tố nhọn hơn, nhân nhỏ hơn, hạt sắc tố chụm quanh nhân, nguyên sinh chất sẫm màu Giao bào đực kích thước to hơn, đầu tày hơn, nhân to hơn, nguyên sinh chất sáng màu hơn, hạt sắc tố rải rác nguyên sinh chất Hồng cầu bị trương to, méo mó, hình bầu dục Trong hồng cầu có hạt Schuffner nhỏ, nhiều, lấm bắt mầu đỏ (kích thước khoảng 0,5 mm) Kích thước bình thường, không trương to Có thể gặp hồng cầu có nhiều khía hình cưa Hồng cầu nhạt màu, rìa hồng cầu màu sẫm Trong hồng cầu có hạt Maurer to, thưa thớt, bắt màu đỏ (kích thước khoảng mm) III ĐẶC ĐIỂM KÝ SINH TRÙNG SỐT RÉT TRONG TIÊU BẢN GIỌT ĐẶC: Hình thể ký sinh trùng sốt rét tiêu giọt đặc giống tiêu giọt đàn hồng cầu bị phá vỡ nên hình thể thay đổi đôi chút không đẹp tiêu giọt đàn ký sinh trùng tập trung nhiều IV NHỮNG HÌNH THỂ DỄ NHẦM VỚI KÝ SINH TRÙNG SỐT RÉT: Khi soi kính tìm ký sinh trùng sốt rét gặp số hình ảnh dễ nhầm với ký sinh trùng sốt rét là: - Tiểu cầu đứng riêng lẻ nhầm với thể tư dưỡng trẻ đứng tập trung dễ nhầm với thể phân liệt - Bạch cầu hạt bị nát nhầm với thể tư dưỡng già Báo cáo Kí Sinh Trùng Page Trường ĐH Y tế công cộng Ngô Doãn Tâm _ XNYHDP2 - Hồng cầu lưới dễ nhầm với thể tư dưỡng P.vivax, hồng cầu hạt lưới dễ nhầm với thể phân liệt - Cặn thuốc nhuộm giemsa nhầm với nhân ký sinh trùng - Các loại vi khuẩn hình cầu bầu dục có nhân nhầm với giao bào, trực khuẩn nhầm với thể tư dưỡng P.falciparum - Các loại nấm mốc mọc tiêu sau nhuộm số tế bào thực vật nhầm với giao bào P.falciparum P.vivax VI HÌNH THỂ CÁC LOẠI PLASMODIUM: Plasmodium falciparum: Báo cáo Kí Sinh Trùng Page Trường ĐH Y tế công cộng Ngô Doãn Tâm _ XNYHDP2 Plasmodium vivax: Báo cáo Kí Sinh Trùng Page Trường ĐH Y tế công cộng Ngô Doãn Tâm _ XNYHDP2 VI HÌNH THỂ MỘT SỐ LOẠI KÝ SINH TRÙNG SỐ RÉT TRÊN TIÊU BẢN NHUỘM GIEMSA: Báo cáo Kí Sinh Trùng Page Trường ĐH Y tế công cộng Ngô Doãn Tâm _ XNYHDP2 Plasmodium falciparum: - Giọt đàn: Thể tư dưỡng P.Falciparum (hình nhẫn) Bạch cầu Lympho Hồng cầu Bạch cầiu trung tính Thể giao bào P.Falciparum (hình chuối) - Giọt đặc: Báo cáo Kí Sinh Trùng Page Trường ĐH Y tế công cộng Ngô Doãn Tâm _ XNYHDP2 Hình ảnh chụp qua kính hiển vi (x100) zoom để nhìn rõ thể tư dưỡng giọt đặc P.Falciparum Thể giao bào P.Falciparum (Hình chuối) Thể tư dưỡng P.Falciparum (Hình nhẫn) Bạch cầu trung tính Bạch cầu Lympho Báo cáo Kí Sinh Trùng Page Trường ĐH Y tế công cộng Ngô Doãn Tâm _ XNYHDP2 Thể tư dưỡng P.Falciparum (Thể nhẫn) Bạch cầu Lympho Bạch cầu trung tính Thể giao bào P.Falciparum (Hình chuối) Báo cáo Kí Sinh Trùng Page Trường ĐH Y tế công cộng Ngô Doãn Tâm _ XNYHDP2 Plasmodium vivax: - Giọt đàn: Thể tư dưỡng P.Vivax (Hình nhẫn) Thể tư dưỡng già P.Vivax Báo cáo Kí Sinh Trùng Page 10 Trường ĐH Y tế công cộng - Ngô Doãn Tâm _ XNYHDP2 Giọt đặc: Thể tư dưỡng P.Vivax (Hình nhẫn) Thể phân liệt P.Vivax Bạch cầu trung tính Bạch cầu Lympho VII KỸ THUẬT LÀM TIÊU BẢN MÁU NHUỘM GIEMSA ĐỂ CHẨN ĐOÁN KÝ SINH TRÙNG SỐT RÉT: Dụng cụ: – – Lam kính khô, Lam kéo có cạnh nhẵn Báo cáo Kí Sinh Trùng Page 11 Trường ĐH Y tế công cộng – – – – – – – – – – – – – – – Ngô Doãn Tâm _ XNYHDP2 Kim chích máu vô khuẩn Bông thấm nước vô khuẩn Băng dính cầm máu Khay men Ống đong loại: 10ml, 20ml… Pipette nhỏ giọt Đũa thủy tinh Giá nhuộm, giá cài tiêu Đồng hồ Máy sấy tiêu Dầu soi kính Kính hiển vi Bút viết Bút chì kính mềm Găng tay, trang, trang phục bảo hộ lao động Hóa chất: – – – – – • – – Cồn sát trùng 70º Cồn tuyệt đối 96º Thuốc nhuộm Giemsa mẹ Nước cất dung dịch đệm Các dung dịch điều chỉnh pH: NaHPO4 2%, KH2PO4 2% Cách pha dung dich đệm: KH2PO4: 0.7 NaHPO4: 1.0g Lượng muối loại hòa tan 150ml nước cất, dùng đũa thủy tinh khuấy cho tan hết Trộn loại dung dịch trên, tiếp tục cho vừa đủ 1000ml Khuấy đều, kiểm tra, điều chỉnh pH=7,2 • – – Cách pha dung dịch Giemsa nhuộm: Giemsa mẹ: 0.3 – 0.4ml Dung dịch đệm nước cất: 9.7ml Trộn Giemsa mẹ nước cất ta dung dịch Giemsa – 4% Thời gian nhuộm: 30 – 45 phút * Nhuộm nhanh: Pha dung dịch Giemsa 10% (1ml Giemsa mẹ + 9ml dung dịch đệm) Thời gian nhuộm: 15 – 20 phút Người bệnh: – Nên làm xét nghiệm cho người bệnh trước lên sốt chưa dùng thuốc đặc hiệu, lúc khả tìm thấy KSTSR máu ngoại vi cao Báo cáo Kí Sinh Trùng Page 12 Trường ĐH Y tế công cộng Ngô Doãn Tâm _ XNYHDP2 Các bước tiến hành: – – Trường hợp máu lấy từ tĩnh mạch: Khi tiếp nhận ống máu từ y tá bệnh phòng, tiến hành làm tiêu từ ống máu chống đông EDTA, mà không qua lấy máu mao mạch trực tiếp từ người bệnh trình bày phần tiếp sau đây: Lấy máu làm tiêu trực tiếp (lấy máu mao mạch) + Sát khuẩn ngón tay chích máu cồn 70º, chờ khô + Dùng kim vô khuẩn chích vào vị trí sát khuẩn, sâu khoảng 1mm + Lau bỏ giọt máu đầu khô, + Vuốt nhẹ nhàng ngón tay vừa chích từ xuống + Dùng lam kính áp nhẹ vào giọt máu thứ 2, giọt máu cách đầu lam 2cm + Giọt máu thứ lấy cách áp lam tương tự giọt máu thứ 2, cách giọt máu thứ khoảng 1.5cm + Dùng lam kính khác đặt vào trung tâm giọt máu thứ đánh theo hình xoắn ốc từ từ – vòng để giọt máu đặc có đường kính 0.9 – 1.0cm + Tiếp theo, lấy lam kính kéo đặt lên phía trước giọt máu lại tạo thành góc 30º – 45º, lùi lam kéo phía sau chút để giọt máu lan cạnh lam kéo; đẩy từ từ lam kéo phía trước, ta giọt đàn + Sát khuẩn tay cho người bệnh + Để lam khô tự nhiên Báo cáo Kí Sinh Trùng Page 13 Trường ĐH Y tế công cộng Ngô Doãn Tâm _ XNYHDP2 + Đánh dấu tiêu tên, mã số…theo quy định, tránh sai sót, nhầm lẫn + Cố định giọt đàn cồn tuyệt đối: nghiêng tiêu khoảng 30º, dùng pipette nhỏ giọt lấy cồn phủ lên giọt đàn, cài lên giá, để khô + Giọt đặc không cố định Nhưng trường hợp giọt đặc dầy hay bẩn mốc phải dung giải cách nhỏ nước cất hay Giemsa 1% 1- phút, đổ nước, cắm lên giá, hong khô * Tiến hành nhuộm: – – – Xếp tiêu lên giá nhuộm, nhỏ dung dịch Giemsa phủ kín lên lam (nồng độ Giemsa thời gian nhuộm theo quy định) Rửa tiêu nước Lưu ý đổ nước nhẹ nhàng vào góc lam để nước dần thay Giemsa, tránh rửa mạnh làm trôi bệnh phẩm Hong lam khô tự nhiên * Tiêu chuẩn tiêu nhuộm tốt: Nhân bạch cầu có màu xanh tím, bào tương bạch cầu lympho màu xanh lơ Hạt bạch cầu toan màu hồng đỏ Nhận định kết quả: * Đọc kết quả: Xác định mật độ KSTSR KHV độ phóng đại 10 x 40 (để kiểm tra tiêu bản), sau đọc độ phóng đại 10 x 100 tìm KSTSR theo chiều ngang tiêu bản, tránh bỏ sót, theo chiều dọc, tránh trùng lên Khi xác định mật độ, ta đếm tất thể KSTSR Phương pháp 1: Phương pháp dấu cộng: Đánh sau: – – – – 1-10 KSTSR/100 vi trường: (+) 11-100 KSTSR/100 vi trường: (++) 1-10 KSTSR/1 vi trường: (+++) >10 KSTSR/1 vi trường: (++++) Phương pháp 2: Phương pháp bạch cầu chuẩn: Ở người bình thường có khoảng 8000 bạch cầu/ máu Bước 1: 200 bạch cầu (>10 KST): Báo cáo Kí Sinh Trùng Page 14 Trường ĐH Y tế công cộng Ngô Doãn Tâm _ XNYHDP2 Bước 2: Đếm 200 bạch cầu ( Phải đếm đến 500 bạch cầu: Bước 3: KST nhiều=>Đếm đến 500 KST=> x bạch cầu: * Xác định loại KSTSR dựa hình thái tiêu chuẩn chẩn đoán theo quy định Lưu ý: Xác định KSTSR: - Kháng thuốc: không đếm thể giao bào(G) =>Chỉ đếm thể sinh sản vô tính thể tư dưỡng (T) thể phân liệt (S) - Không kháng thuốc: Đếm thể (tùy loại) T, S, G Những sai xót xử trí: – – – – – Chích đầu ngón tay không bỏ giọt máu đầu Quá trình chích máu nặn bóp nhiều Nhầm bệnh phẩm người sang người khác Quá trình cố định, nhuộm không tốt gây bong tróc, trôi bệnh phẩm Chẩn đoán sai không bám sát tiêu chuẩn chẩn đoán Hình ảnh thu thực hành nhuộm Giemsa: Báo cáo Kí Sinh Trùng Page 15 Trường ĐH Y tế công cộng Ngô Doãn Tâm _ XNYHDP2 Bạch cầu trung tính Bạch cầu Lympho => Kết luận: Sau nhuộm, ta thấy bạch cầu bắt màu tím sẫm (=>bạch cầu bắt chuẩn màu) Nhuộm chưa đẹp, chưa đạt tiêu chuẩn Báo cáo Kí Sinh Trùng Page 16 [...]... mật độ KSTSR dưới KHV độ phóng đại 10 x 40 (để kiểm tra tiêu bản), sau đó đọc dưới độ phóng đại 10 x 100 tìm KSTSR theo chiều ngang tiêu bản, tuần tự tránh bỏ sót, hoặc theo chiều dọc, tránh trùng lên nhau Khi xác định mật độ, ta đếm tất cả các thể của KSTSR Phương pháp 1: Phương pháp dấu cộng: Đánh giá như sau: – – – – 1-10 KSTSR/100 vi trường: (+) 11-100 KSTSR/100 vi trường: (++) 1-10 KSTSR/1 vi... trường: (+++) >10 KSTSR/1 vi trường: (++++) Phương pháp 2: Phương pháp bạch cầu chuẩn: Ở người bình thường có khoảng 8000 bạch cầu/ máu Bước 1: 200 bạch cầu và (>10 KST) : Báo cáo Kí Sinh Trùng Page 14 Trường ĐH Y tế công cộng Ngô Doãn Tâm _ XNYHDP2 Bước 2: Đếm 200 bạch cầu và ( Phải đếm đến 500 bạch cầu: Bước 3: KST quá nhiều=>Đếm đến 500 KST= > được x bạch cầu: * Xác định loại KSTSR dựa trên hình... bệnh trước hoặc trong khi lên cơn sốt và chưa dùng thuốc đặc hiệu, lúc này khả năng tìm thấy KSTSR ở máu ngoại vi cao hơn Báo cáo Kí Sinh Trùng Page 12 Trường ĐH Y tế công cộng Ngô Doãn Tâm _ XNYHDP2 4 Các bước tiến hành: – – Trường hợp máu được lấy từ tĩnh mạch: Khi tiếp nhận ống máu từ y tá bệnh phòng, tiến hành làm tiêu bản từ ống máu được chống đông bằng EDTA, mà không qua lấy máu mao mạch trực tiếp... đoán sai do không bám sát tiêu chuẩn chẩn đoán 7 Hình ảnh thu được khi thực hành nhuộm Giemsa: Báo cáo Kí Sinh Trùng Page 15 Trường ĐH Y tế công cộng Ngô Doãn Tâm _ XNYHDP2 Bạch cầu trung tính Bạch cầu Lympho => Kết luận: Sau khi nhuộm, ta thấy bạch cầu bắt màu tím sẫm (=>bạch cầu bắt chuẩn màu) Nhuộm chưa đẹp, chưa đạt tiêu chuẩn Báo cáo Kí Sinh Trùng Page 16 ... có đường kính 0.9 – 1.0cm + Tiếp theo, lấy lam kính kéo đặt lên phía trước giọt máu còn lại tạo thành góc 30º – 45º, lùi lam kéo về phía sau một chút để giọt máu được lan đều trên cạnh của lam kéo; đẩy từ từ lam kéo về phía trước, ta được giọt đàn + Sát khuẩn tay cho người bệnh + Để lam khô tự nhiên Báo cáo Kí Sinh Trùng Page 13 Trường ĐH Y tế công cộng Ngô Doãn Tâm _ XNYHDP2 + Đánh dấu tiêu bản bằng... cầu và ( Phải đếm đến 500 bạch cầu: Bước 3: KST quá nhiều=>Đếm đến 500 KST= > được x bạch cầu: * Xác định loại KSTSR dựa trên hình thái và tiêu chuẩn chẩn đoán theo quy định Lưu ý: Xác định KSTSR: - Kháng thuốc: không đếm được thể giao bào(G) =>Chỉ đếm được thể sinh sản vô tính là thể tư dưỡng (T) và thể phân liệt (S) - Không kháng thuốc: Đếm được cả 3 thể (tùy loại) T, S, G 6 Những sai xót... nhẫn) Thể phân liệt P.Vivax Bạch cầu trung tính Bạch cầu Lympho VII KỸ THUẬT LÀM TIÊU BẢN MÁU NHUỘM GIEMSA ĐỂ CHẨN ĐOÁN KÝ SINH TRÙNG SỐT RÉT: 1 Dụng cụ: – – Lam kính khô, sạch Lam kéo có cạnh nhẵn Báo cáo Kí Sinh Trùng Page 11 Trường ĐH Y tế công cộng – – – – – – – – – – – – – – – Ngô Doãn Tâm _ XNYHDP2 Kim chích máu vô khuẩn Bông thấm nước vô khuẩn Băng dính cầm máu Khay men Ống đong các loại: 10ml,... + Giọt đặc thì không cố định Nhưng đối với những trường hợp giọt đặc quá dầy hay bẩn mốc thì phải dung giải bằng cách nhỏ nước cất hay Giemsa 1% trong 1- 2 phút, đổ nước, cắm lên giá, hong khô * Tiến hành nhuộm: – – – Xếp tiêu bản lên giá nhuộm, nhỏ dung dịch Giemsa phủ kín lên lam (nồng độ Giemsa và thời gian nhuộm theo quy định) Rửa tiêu bản bằng nước sạch Lưu ý đổ nước nhẹ nhàng vào góc lam để nước